СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ САХАРНОГО ДИАБЕТА

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической эндокринологии и может быть использовано для ранней диагностики степени выраженности различных форм синдрома диабе-тической стопы (СДС), а также контроля эффективности лечения сахарного диабета.
Целью изобретения является своевременная диагностика различных форм СДС путем анализа спектров плазмы крови больных сахарным диабетом на молекулярном уровне, на ранних стадиях заболевания и возможности коррекции клинических проявлений СДС, путем контроля курса лечения методом инфракрасной (ИК) спектроскопии, и разработка более доступного метода для стандартизации.
Для достижения поставленной цели, во время обследования пациентов с диагнозом сахарным диабетом производится забор крови, выделяется плазма и регистрируется ИК-спектры в диапазоне частот 400 - 1800 см-1. Полученный ИК -спектр сопоставляется с эталонным спектром, в качестве которого используется спектры плазмы крови здоровых пациентов. В зависимости от изменения форм и интенсивности ИК полос поглощения «АМИД - 1», и «АМИД - 2», и появление дополнительной полосы при 1720 см-1, определяют различные формы СДС при сахарном диабете.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической эндокринологии и может быть использовано для ранней диагностики степени выраженности различных форм синдрома диабе-тической стопы (СДС), а также контроля эффек-тивности лечения.
Имеется работа [1], в которой исследованы инфракрасные (ИК) спектры плазма кровы и по увеличению интенсивности полосы поглощения глюкозы, с частотой максимумом (VMax) = 1036 см-1 определяют уровень сахара в кровы, который может служить прототипом.
Сущность данной работы заключается в сле-дующем:
С утра натощак у больных СД делается забор крови (1,0÷2,0 мл), из локтевой вены. Затем цен-трифугируют, для исследования ИК спектров ис-пользуются верхний слой. Определенное количе-ство плазмы заливают в специальной жидкостной кювете и устанавливают в приставку полного внутреннего отражения (ППВО), и записывают спектры ИК отражения. Запись ИК спектров осу-ществляется на стандартном Фурье - спектрофото-метре. Таким же способом, выделяют плазму и записывают ИК спектры отражения здорового пациента (донора). Полученные ИК спектры сопо-ставляют между собой и по увеличению интенсив-ности полосы отражения глюкозы, с частотой максимумом (VMax) = 1036 см-1 больных, по срав-нению с интенсивностью тех же полос донора, определяют уровень сахара в крови.
Недостатком прототипа являются:
в - первых, в составе крови очень большое со-держание воды (до 80%) и гидрооксильные груп-пы, которые по частоте отражения лежат в этой же области частот, которые могут вносить искажение в полосе глюкозы;
во вторых - полоса глюкозы (1036 см-1) несет информацию только об уровне сахара в крови, но она не дает информацию относительно степени выраженности различных форм поздних диабети-ческих осложненный, следовательно, она не может служить критерием для диагностики поздних диабетических осложненный, при СДС;
в - третьих, требуется дополнительное при-способление, ППВО.
Таким образом, имеющая работа [1] только констатируют наличие патологического процесса при СД, но не определяет различных форм степень поражения при СДС, тем более, не могут служить объективным критерием для диагностики и эффек-тивности курса проводимой лечение.
Цель настоящего изобретения является ранняя диагностика различных форм и степени наруше-ний поздних диабетических осложнений, а именно СДС, повышение точности диагностики, объек-тивной оценки эффективности курса проводимого лечения на молекулярном уровне.
Способ осуществляется следующим образом.
С утра натощак также у больных СД делается забор крови 1,0÷2,0 мл, из локтевой вены. Затем центрифугируют, для исследования используются верхний слой. Для регистрации ИК спектров до-статочно 0,01 мл плазма крови, который наносятся на заданной поверхности оптический подложки из монокристалла KRS - 5, равномерно распределяют по всей поверхности и высушиваются в термостате, при температуре 40±1°С. После выпаривания воды на поверхности оптической подложки образуется тонкая пленка, затем записываются ИК спектры поглощения образовавшей тонкой пленки в диапазоне частот 1800 - 400 см-1. Время подготовки проб для регистрации спектра занимает около 20 мин, записи спектра около 10 мин. Регистрация ИК спектров проводится на стандартном двухлучевом спектрофотометре. Полное время для получения спектра и установления диагноза составляет около 40 мин.
Для диагностики различных форм поздних диабетических осложненный, при СДС, получен-ные спектры ИК полос поглощения плазмы крови больных, (фиг. 1, кривая 1-3), сопоставляют со спектром эталонного образца (фиг.1, кривая 4). В качестве эталонного образца используются плазмы крови здоровых пациентов (донор). Вышеописанным способом записывают спектры ИК полос поглощения эталонного образца. В зави-симости от изменения форм, соотношения интенсивностей и положения VMax ИК полос поглощения 1650 и 1540 см-1, относительно тех же полос поглощения донора, определяются различные формы СДС.
Для решения поставленных задач было вы-брано 32-больных СД в возрасте от 19 до 81 лет. Среди них 20-женщин (- 62,5 %), 12-мужчин (37,5 %). У 28(87.5%) больных отмечался СД 2 - типа, у 4(12,5%) СД 1 -типа. Уровень гипергликемии в среднем составил 13,1ммоль/л. Длительность за-болевания СД составляет от 1 до 25 лет. Впервые выявленный СД у 6(18,7%) чел. Больные с СДС составили 26(81,3%) чел. Муж- 11(42,3%), жен- 15(57,7%). Среди них больные с ишемической формой СДС-6(23,1 %), нейропэтической формой-8(30,7%) и смешанной формой-12(46,2%) больных, здоровые пациенты (доноры)-5 чел.
Все больные с СДС в комплексном лечении получали антибактериальную, общеукрепляющую, сахарокорригирующую, антикоагулянтную, антиагрегантную и методы гемоквантовой терапии.
Исследуя ИК спектры плазма крови больных с впервые выявленным СД и больных осложненных форм СДС, получавших профилактическое лече-ние, мы обнаружили специфические изменения в полосах поглощения «АМИД - 1» и «АМИД - 2».
Для изучения особенностей клинической кар-тины и достижения поставленной цели, исследованные больные были разделены на 3 группы: 1) больные с СД - впервые выявленный, 2) больные с СДС - осложненных форм (диабетическая стопа 2 - 4 ст.), 3) здоровые люди (доноры). Сравниваемые группы были подобраны адекватно по количеству больных; возрастно-половому составу, по форме тяжести, длительности заболевания, клиническим проявлениям и лабораторным показателям при поступлении больных в стационар.
Пример 1. Больной Н. 72 лет. Жалобы на сильные боли, почернения в области пальцев ле-вой стопы, наличие раны по латеральной поверх-ности стопы со зловонным запахом, гнойное отде-ляемое. Отеки, сухость во рту жажда, утомляе-мость, общая слабость.
Диагноз: Диабетическая стопа 3 ст слева, ишемическая форма. Сахарный диабет 2 тип, тя-желая форма в стадии декомпенсации. Диабетиче-ская макромикроангиопатия.
Длительность СД 20 лет. Гликемия: 10.9-14.2 -18.3 ммоль/л. Пульсация на артериях стопы и голени отсутствует. Болевая, тактильная, вибрационная чувствительность сохранена. УЗДГ - на артериях голени кровоток не регистрируется.
Сделан натощак забор кровы, выделена плаз-ма и записаны ИК спектры плазмы крови, фиг. 1 (крив. 1). Наблюдаются изменения соотношений интенсивностей полос поглощения с VMax 1650 и 1550 см-1, а также увеличена интенсивность поло-сы глюкозы (VMax =1035 см-1 ). В области частот 1720 см-1 наблюдаются следы слабого пика, кото-рая отсутствует в спектрах донора. Проведен пол-ный курс лечения. Полное совпадение со спектром донора не наблюдается.
Пример 2 . Больная Г. 61 лет. Жалобы на боли и наличие раны в области 1-2 пальца правой сто-пы, сухость во рту, жажду, утомляемость, общая слабость.
Диагноз: Диабетическая стопа 2 ст. справа, смешанная форма. Сахарный диабет 2 тип, тяже-лая форма в стадии декомпенсации. Диабетиче-ская макромикроангиопатия, полинейропатия.
Длительность СД 16 лет. Гликемия: 11.2-14.2-18.0 ммоль/л. Пульсация на передней тибиальной артерии отсутствует, на задней тибиальной арте-рии ослаблена. Болевая, тактильная, вибрационная чувствительность снижена. УЗДГ на передней тибиальной артерии кровоток нерегистрируется.
Проведено забор крови и записаны ИК спек-тры. Кроме характерного увеличения интенсивно-сти полосы глюкозы 1035 см-1, наблюдается суще-ственное изменение форм и интенсивности полос «АМИДНЫХ» - групп, по сравнению с теми же полосами донора. Вместо дублетной полосы наблюдается полоса с VMax при 1510 см-1, фиг. 2 (крив.1). Полученные ИК спектры и их сопостав-ление показывают, что они по сравнению со спек-тром донора и ишемической формы существенно отличаются.
Проведен полный курс лечения. Полоса 1510
см-1 разделяется на дублет «АМИД - 1» и «АМИД - 2», характерный ИК спектрам плазмы донора, фиг. 2 (крив.2 и 3), однако по соотношению интенсив-ностей полос они отличаются от тех же полос донора. Полное совпадение ИК полос поглощения «АМИД»-ных групп с теми же полосами донора не наблюдаются, хотя уровень сахара в крови снизи-лась до нормы, и по интенсивности пик глюкозы 1035 см совпадает с пиком донора, фиг. 2 (крив. 3).
Пример 3. Больная Т, 46 лет. Жалобы на наличие раны в пяточной области и правой стопы, отеки, сухость кожи, гиперкератозы.
Диагноз: Диабетическая стопа 2 степени справа, нейропатическая форма. Сахарный диабет 2-типа, тяжелая форма в стадии декомпенсации. Диабетическая полинейропатия.
Длительность СД И лет. Гликемия: 7.9-10.4— 13.9 -17.1 ммоль/л. Пульсация на артериях нижних конечностях сохранено. Болевые, тактильные и вибрационная чувствительность снижена. УЗДГ - неизмененный кровоток.
Был произведен натощак забор крови и сняты ИК спектры плазмы фиг. 1 (крив.З). Наблюдается существенное изменение форм и интенсивности полос поглощения, лежащие в области частот 1800 - 400 см от полос донора. Полоса поглощения с VMax 1650 и 1540 с см-1 сильно изменена по сравнению с теми же полосами донора, а также увеличена интенсивность полосы глюкозы 1035 см-1.
Поведен полный курс лечения, ИК полосы по-глощения по форме приближаются к полосам до-нора, уровень сахара в кровы нормализуруется, однако различия в соотношении интенсивностей полос 1650 и 1540 см-1 сохраняются.
Пример 4. Больная - А. 39 лет. Жалобы на жажду, сухость во рту, учащенное мочеиспуска-ние, прибавку веса, утомляемость.
Диагноз: Впервые выявленный сахарный диа-бет 2-тип, легкая форма в стадии компенсации. Сахар крови 7,8 ммоль/л.
Были записаны ИК спектры плазма крови. Интенсивность полосы глюкозы 1035 см-1 увели-чена, по сравнению с полосой донора. Наблюдается также изменение форм и интенсивности ИК полос поглощения с VMax 1650 и 1540 см-1. Проведен полный курс лечения, достигнута стабилизация нормогликемии. Интенсивность полосы 1035 см-1 возвращается в норму, т. е. по интенсивности совпадает с полосой донора. Однако, наблюдаемые изменения ИК полос поглощения «АМИДНЫХ» - групп с VMax 1650 и 1540 см-1, полностью не возвращаются в норму, т. е. по форме и соотношения интенсивности полос не совпадают с теми же по-лосами донора. Сравнительный анализ данных полос могут служить объективным критерием для оценки эффективности курса проводимого лече-ния, которые являются еще одним преимуществом предложенного способа.
Таким образом, полученные результаты из анализа спектров ИК полос поглощения плазма крови больных СД и их сопоставления, показыва-ют о существенном отличие форм и интенсивности ИК полос поглощения «АМИД -1» и «АМИД - 2», от тех же полос поглощения донора. Полученные результаты могут служить диагностическим кри-терием при определении различных форм СДС и определяют критерию «новизны», которое до настоящего времени не использовалось в практи-ческой медицине.
Заявляемый способ диагностики различных форм СДС по сравнению с известными способами является более простым, быстрым, высокоинфор-мативным и дешевым, не требующего химреакти-вов.

Heise H.M. and Krusse - Jarres, J.D. Multivariate determination of sae in whole blood by attenuated total reflection infrared spectroscopy. Anal. Chem. 1989, 61, p.2009-2015