СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЖИРОВОЙ БОЛЕЗНИ ПЕЧЕНИ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики жировой болезни печени.
Сущность заявленного способа заключается в газохроматографическом определении содержания желчных кислот в сыворотке крови и осуществляется путем экстрагирования конъюгированных и свободных желчных кислот с последующим гидролизом и метилированием в среде метанола в присутствии следов концентрированной серной кислоты. Метиловые эфиры желчных кислот экстрагируют дважды эфиром, промывают водой и сушат над сульфатом натрия. Затем фильтруют и перегоняют эфир досуха, остаток подвергают газохроматографическому анализу.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики жировой болезни печени.
На данном этапе развития медицины не существует какоголибо одного лабораторного метода исследования, по отдельности позволяющего достоверно подтвердить или исключить диагноз жировой болезни печени.
Известна диагностика жировой болезни пече-ни [1], включающая определение общего билирубина и его фракций. Определение общего холесте-рола, общего белка, активности ферментов АсАТ, АлАТ, щелочная фосфотаза (ЩФ), гаммаглутаминтранспептидаза (ГГТ), уровня инсулина, ультразвуковое и рентгенологическое исследования не позволяют окончательно ставить диагноз. Например, степень повышения активности фер-ментов АсАТ и АлАТ не является достаточным показателем тяжести процесса и не имеет отчетливой корреляции выраженности стеатоза и фиброза печени. Кроме того, на проведение данной диагностики уходит много время и используются несколько методов.
Известен способ диагностики жировой болезни печени [2], который основывается на изучении эффективности инсулина на синтез липидов печени и даже непосредственно в сосудистой стенке.
Однако использование данных по определе-нию инсулина недостаточно для того, чтобы по-ставить точный диагноз жировой болезни печени.
Прототипом является диагноз жировой болезни печени [3], заключающийся в том, что используют несколько методов исследования содержания в сыворотке крови общего холестерола, липидов и суммы желчных кислот.
Данный подход имеет следующие недостатки:
Во-первых, не определяется содержание каждого по отдельности желчных кислот в сыворотке крови у больных жировой болезни печени.
Во-вторых, не учитывается образование холиеновых кислот и избыточное содержание холестерола из которого синтезируется большое количество первичных желчных кислот в печени.
Целью изобретения является разработка не-трудоемкого способа диагностики более точного и информативного в определении содержания желчных кислот.
Сущность заявленного способа заключается в газохроматографическом определении содержания желчных кислот в сыворотке крови и осуществляется следующим образом: в сыворотку крови в объеме 1мл добавляют 3мг/мл раствора внутреннего стандарта 3α,7α-дигидроокси-12-кетохолевой кислоты и экстрагируют с 15мл хло-роформ-метанольной смесью (2:1) в течение 10 мин. После чего фильтруют и для расслоения фаз в смесь добавляют 3мл бидистиллированной воды и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 10 мин. Верхний водный слой, содержащий желчные кислоты, осторожно отсасывают при помощи водоструйного насоса и выпаривают досуха на песочной бане без доступа влаги. Затем к содержимому колбы добавляют 2мл воды, 1мл этиленгликоля, 1мл 4н. раствора NaOH и гидролизируют в течение 1,5 час при 140-145ºС. После охлаждения удаляют все липиды путем двукратного экстрагирования диэтиловым эфиром. Затем подкисляют водный слой 10% раствором соляной кислоты и дважды экстрагируют желчные кислоты эфиром. Эфирные экстракты объединяют, промывают водой до нейтральной реакции и сушат над сульфатом натрия. После чего полностью отгоняют эфир и для преодоления сильной полярности желчных кислот их метилируют в среде 5мл метилового спирта в присутствии следов концентрированной серной кислоты в течении 1,5 ч. После охлаждения колбы с полученными метиловыми эфирами желчных кислот экстрагируют дважды эфиром. Эфирный экстракт промывают и сушат над сульфатом натрия. После отгонки растворителя метиловые эфиры желчных кислот переносят во флакон путем растворения в 0,3мл этанола с целью введения в хроматограф и определяют содержание желчных кислот.
Пример. Больной Б.С., 49 лет, обратился в клинику с жалобой на боли с правой стороны в подреберной области. При обследовании выявлено, что размер печени увеличен. После исследования с применением заявленного способа поставлен диагноз жировая болезнь печени.
Предлагаемый новый подход к диагностике жировой болезни печени заключается в применении газохроматографического анализа содержания желчных кислот в сыворотке крови у больных жировой болезнью печени, а использование этих результатов в качестве дополнительного теста является точным и эффективным по сравнению с существующими способами. Преимущество способа является доступности реактивов.

1. Lonardo A., Lambardini S., Scaglioni F., Caruli L., Ricchi M., Ganazzi D., Adinolfi L.E., Ruggiero G., Coruli N., Loria P. Hepatic steaosis and insulin resistencl: does etiology make a differences? //J.Hepatol.- 2006, jan.-№44 (1). –р. 190-196.
2. Grempler R., Gunter S., Steffensen K.R., Nilsson M., Barthel A., Schmoll D., Walther R. Evidence for an indirect transcriptional regulation of glucose-6-phosphatas