Изобретение относится к новым криптофицинам, полученным синтетическим путем.
Криптофициновое соединение представлено формулой:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
КРИПТОФИЦИНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ КЛЕТОК И СПОСОБ СМЯГЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ
(51) МПК: 7 C07D 273/08, С07K 5/12, A61K 31/5395, A61P 35/00
Сведения о документе ▾
- (11) Номер документа
- 347
- (13) Код типа документа
- P
- (51) МПК
- 7 C07D 273/08, С07K 5/12, A61K 31/5395, A61P 35/00
- (45) Дата публикации
- 06.10.2002
- Статус
- Прекратил действие
Заявка ▾
- (21) Рег. номер заявки
- 97000493
- (22) Дата подачи заявки
- 07.03.1996
- (31) Конвенционный приоритет
- 08/400.057
- (32) Дата подачи конв. заявки
- 07.03.1995
- (33) Страна приоритета
- US
PCT ▾
- (86) Дата заявки PCT
- 07.03.1996
- (86) Номер заявки PCT
- PCT/US 96/03246
Лица ▾
- (71) Заявитель(и)
- ЮНИВЕРСИТИ ОФ ХАВАЙИ (US), УЭЙН СТЕЙТ ЮНИВЕРСИТИ (US)
- (72) Автор(ы)
- МУР, Ричард Э. (US), ТАЙУС, Маркус А. (US), БЭР-РОУ, Рассел А. (АU), ЛИАНГ, Джиан (CN), КОР-БЕТТ, Томас Х. (US), ВАЛЕРИОТ, Фредерик А. (СА), ХЕМШАЙДТ Томас К. (DE)
- (73) Патентообладатель(и)
- ЮНИВЕРСИТИ ОФ ХАВАЙИ (US), УЭЙН СТЕЙТ ЮНИВЕРСИТИ (US)
Реферат
Формула изобретения
1. Криптофициновое соединение, представ-ленное формулой:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую простую незамещенную или замещенную аромати-ческую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоген;
R2 представляет ОН или
Rl и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца,
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, гидроксибензильную (оксибензильную), алкоксибензильную, галоидок-сибензильную, дигалоидоксибензильную, галои-далкоксибензильную или дигалоидалкоксибен-зильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и X и Y каждый независимо представляют О, NH или алкиламино, при условии, что соединение криптофицина не является.
2. Соединение по п. 1, где R8 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
3. Соединение по п. 1, где R7 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
4. Соединение по п. 1, где R7 представляет Н, R8 представляет метил, R3 представляет метил, X и Y не являются кислородом.
5. Соединение по п. 1, где R3 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
6. Соединение по п. 1, где R9 представляет ме-тил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
7. Соединение по п. 1, где R10 представляет ме-тил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
8. Соединение по п. 1, где по крайней мере, од-на из групп, присоединенных к С3, С6, C10, С16, С17 и С18 имеет R стереохимию.
9. Соединение по п. 1, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных к С3, С6, C10, С16, C17 и C18 имеет S стереохимию.
10. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду С13 и С14, Re представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет Н и X и Y являются кислородом.
11. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет Н и X и Y являются кисло-родом.
12. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представля-ют метил; R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14; R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил; R10 представляет Н и X и Y являются кислоро-дом.
13. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S-хлор; R2 представляет R-гидроксильную группу; R3, R7 и R8 представляют метил; R4 и R5 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С13 и С14; R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил; R10 представляет водород, и X и Y являются кисло-родом.
14. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксиднoго кольца, R3, R7 представляют метил, R4 и R5 представляют водород, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет водород и X и Y являются кислородом.
15. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 R7 и R8 представляют метил. R4 и R5 представляют водород, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет водород и X и Y являются кислородом.
16. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-метоксифенил, R1 и R2 объединяются вместе с обра-зованием двойной связи между С18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
17. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют во-дород и X и Y являются кислородом.
18. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5, объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
19. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
20. Соединение по п. 1. где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R.R-азиридинового кольца, R3, R7 представляют метил. R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород и X и Y являются кисло-родом.
21. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вмесите с обра-зованием двойной связи между C18 и С19 атомами углерода. R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
22. Соединение по п.1 где Аr представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вмесите с образовани-ем двойной связи между C18 и С19 атомами углеро-да. R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
23. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
24. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y яв-ляются кислородом.
25. Соединение по п. 1, где Ar представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y яв-ляются кислородом.
26. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
27. Соединение по п. 1, где Ак представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S.S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
28. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и Х и Y являются кислородом.
29. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и Х и Y являются кислородом.
30. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кислородом, а Y является азо-том, несущим единичный водород.
31. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
32. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
33. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между C18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
34. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изо-бутил, R9 и R10 представляют водород, X и Y явля-ются кислородом.
35. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород, X и Y явля-ются кислородом.
36. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S- хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-мeтоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
37. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
38. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
39. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
40. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет S-хлор, R2 представля-ет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X и Y являются кислородом.
41. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представ-ляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представля-ют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14, R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являют-ся кислородом.
42. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представ-ляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представля-ют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14, R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являют-ся кислородом.
43. Фармацевтическая композиция для инги-бирования пролиферации гиперпролиферативной клетки млекопитающего, отличающаяся тем, что она включает эффективное количество соединения общей формулы 1 по п. 1 и фармацевтически при-емлемый носитель.
44. Фармацевтическая композиция по п. 43, отличающаяся тем, что она дополнительно содер-жит, по крайней мере, один противоопухолевый агент.
45. Способ ингибирования пролиферации клетки млекопитающего, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1.
46. Способ по п. 45, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1, допол-нительно содержащего, по крайней мере, один про-тивоопухолевый агент.
47. Способ по п. 45, отличающийся тем, что клетка млекопитающего является гиперпролифера-тивной.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что гиперпролиферативная клетка является человече-ской.
49. Способ ингибирования пролиферации ги-перпролиферативной клетки млекопитающего, обладающей фенотипом множественного сопро-тивления лекарству, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с криптофициновым соединени-ем обшей формулы 1 по п. 1 в количестве, эффек-тивном для нарушения динамического состояния полимеризации и деполимеризации микротрубочки с блокированием клеточного митоза.
50. Способ по п. 49, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1, допол-нительно содержащего, по крайней мере, один про-тивоопухолевый агент.
51. Способ по п. 49, отличающийся тем, что гиперпролиферативная клетка является человече-ской.
52. Способ смягчения патологического состо-яния, вызванного гиперпролиферирующими клет-ками млекопитающего, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтиче-ской композиции, отличающийся тем, что субъекту вводят фармацевтическую композицию по п. 43 для ингибирования пролиферации клеток.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что клетки млекопитающих являются человеческими.
54. Способ по п. 52, отличающийся тем, что его осуществляют в комбинации с другим способом той же направленности.
55. Способ по п. 52, отличающийся тем, что патологическое состояние характеризуется обра-зованием опухолей.
56. Способ по п. 55, отличающийся тем, что патологическое состояние обусловлено опухолями молочной железы, мало-камерного легкого, нема-локамерного легкого, калоректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который включает панкреати- ческий гастрит и желудочный гастрит, желудка, миеломы, мочевого пузыря, ренальной нейроэндо-кринии, которая включает щитовидную железу и неоплазмы, не связанные с заболеванием Ходкинса, и неоплазмы, связанные с заболеванием Ходкинса.
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую простую незамещенную или замещенную аромати-ческую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоген;
R2 представляет ОН или
Rl и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца,
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, гидроксибензильную (оксибензильную), алкоксибензильную, галоидок-сибензильную, дигалоидоксибензильную, галои-далкоксибензильную или дигалоидалкоксибен-зильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и X и Y каждый независимо представляют О, NH или алкиламино, при условии, что соединение криптофицина не является.
2. Соединение по п. 1, где R8 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
3. Соединение по п. 1, где R7 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
4. Соединение по п. 1, где R7 представляет Н, R8 представляет метил, R3 представляет метил, X и Y не являются кислородом.
5. Соединение по п. 1, где R3 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
6. Соединение по п. 1, где R9 представляет ме-тил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
7. Соединение по п. 1, где R10 представляет ме-тил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
8. Соединение по п. 1, где по крайней мере, од-на из групп, присоединенных к С3, С6, C10, С16, С17 и С18 имеет R стереохимию.
9. Соединение по п. 1, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных к С3, С6, C10, С16, C17 и C18 имеет S стереохимию.
10. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду С13 и С14, Re представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет Н и X и Y являются кислородом.
11. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет Н и X и Y являются кисло-родом.
12. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представля-ют метил; R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14; R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил; R10 представляет Н и X и Y являются кислоро-дом.
13. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S-хлор; R2 представляет R-гидроксильную группу; R3, R7 и R8 представляют метил; R4 и R5 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С13 и С14; R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил; R10 представляет водород, и X и Y являются кисло-родом.
14. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксиднoго кольца, R3, R7 представляют метил, R4 и R5 представляют водород, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет водород и X и Y являются кислородом.
15. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 R7 и R8 представляют метил. R4 и R5 представляют водород, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R10 представляет водород и X и Y являются кислородом.
16. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-метоксифенил, R1 и R2 объединяются вместе с обра-зованием двойной связи между С18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
17. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют во-дород и X и Y являются кислородом.
18. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5, объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
19. Соединение по п. 1, где Аr представляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
20. Соединение по п. 1. где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R.R-азиридинового кольца, R3, R7 представляют метил. R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород и X и Y являются кисло-родом.
21. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вмесите с обра-зованием двойной связи между C18 и С19 атомами углерода. R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
22. Соединение по п.1 где Аr представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вмесите с образовани-ем двойной связи между C18 и С19 атомами углеро-да. R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
23. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
24. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y яв-ляются кислородом.
25. Соединение по п. 1, где Ar представляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y яв-ляются кислородом.
26. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
27. Соединение по п. 1, где Ак представляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S.S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
28. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и Х и Y являются кислородом.
29. Соединение по п. 1, где Аr представляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и Х и Y являются кислородом.
30. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи между С18 и С19 атомами углеро-да, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кислородом, а Y является азо-том, несущим единичный водород.
31. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
32. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образовани-ем S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
33. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между C18 и С19 атомами углерода, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислоро-дом.
34. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изо-бутил, R9 и R10 представляют водород, X и Y явля-ются кислородом.
35. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образо-ванием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представ-ляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образо-ванием двойной связи между С13 и С14, R6 представ-ляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изо-бутил, R8 и R10 представляют водород, X и Y явля-ются кислородом.
36. Соединение по п. 1, где Аr представляет фенил, R1 представляет S- хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-мeтоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X является кисло-родом, а Y является азотом, несущим единичный водород.
37. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
38. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
39. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют ме-тил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метокси6ензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являются кислородом.
40. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет S-хлор, R2 представля-ет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X и Y являются кислородом.
41. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представ-ляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представля-ют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14, R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являют-ся кислородом.
42. Соединение по п. 1, где Аr представляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представ-ляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представля-ют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между С13 и С14, R6 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобу-тил, R8 и R10 представляют водород и X и Y являют-ся кислородом.
43. Фармацевтическая композиция для инги-бирования пролиферации гиперпролиферативной клетки млекопитающего, отличающаяся тем, что она включает эффективное количество соединения общей формулы 1 по п. 1 и фармацевтически при-емлемый носитель.
44. Фармацевтическая композиция по п. 43, отличающаяся тем, что она дополнительно содер-жит, по крайней мере, один противоопухолевый агент.
45. Способ ингибирования пролиферации клетки млекопитающего, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1.
46. Способ по п. 45, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1, допол-нительно содержащего, по крайней мере, один про-тивоопухолевый агент.
47. Способ по п. 45, отличающийся тем, что клетка млекопитающего является гиперпролифера-тивной.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что гиперпролиферативная клетка является человече-ской.
49. Способ ингибирования пролиферации ги-перпролиферативной клетки млекопитающего, обладающей фенотипом множественного сопро-тивления лекарству, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с криптофициновым соединени-ем обшей формулы 1 по п. 1 в количестве, эффек-тивном для нарушения динамического состояния полимеризации и деполимеризации микротрубочки с блокированием клеточного митоза.
50. Способ по п. 49, отличающийся тем, что клетки приводят в контакт с эффективным количе-ством соединения общей формулы 1 по п. 1, допол-нительно содержащего, по крайней мере, один про-тивоопухолевый агент.
51. Способ по п. 49, отличающийся тем, что гиперпролиферативная клетка является человече-ской.
52. Способ смягчения патологического состо-яния, вызванного гиперпролиферирующими клет-ками млекопитающего, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтиче-ской композиции, отличающийся тем, что субъекту вводят фармацевтическую композицию по п. 43 для ингибирования пролиферации клеток.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что клетки млекопитающих являются человеческими.
54. Способ по п. 52, отличающийся тем, что его осуществляют в комбинации с другим способом той же направленности.
55. Способ по п. 52, отличающийся тем, что патологическое состояние характеризуется обра-зованием опухолей.
56. Способ по п. 55, отличающийся тем, что патологическое состояние обусловлено опухолями молочной железы, мало-камерного легкого, нема-локамерного легкого, калоректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который включает панкреати- ческий гастрит и желудочный гастрит, желудка, миеломы, мочевого пузыря, ренальной нейроэндо-кринии, которая включает щитовидную железу и неоплазмы, не связанные с заболеванием Ходкинса, и неоплазмы, связанные с заболеванием Ходкинса.
Описание
Это изобретение было осуществлено при ча-стичной поддержке правительства США грантами № СА 12623 и СА53001 из The National Cancer Institute, Department of Health and Human Services. Таким образом, правительство США может иметь определенные права на это изобретение.
Неопластические заболевания, характеризу-ющиеся пролиферацией клеток, не подвергаются нормальному контролю клеточного роста, в боль-шинстве своем вызывают смерть у людей. Клини-ческое испытание по химиотерапии продемонстри-ровало, что для лечения этих заболеваний жела-тельными являются новые и более эффективные лекарства. Такой эксперимент продемонстрировал также , что лекарства, которые разрушают систему микротрубочек цитоскелета, могут быть эффектив-ными в ингибировании пролиферации опухолевых клеток.
Система микротрубочек эукариотических кле-ток составляет основной компонент цитоскелета и находится в динамическом состоянии-упорядоченная структура и разупорядоченная структура; таким образом, что гетеродимеры тубу-лина полимеризуются с образованием микротру-бочек, а микротрубочки деполимеризуются до со-ставляющих их компонентов. Микротрубочки иг-рают ключевую роль в регулировании клеточной архитектуры, метаболизма и деления. Динамиче-ское состояние микротрубочек является критиче-ским для их нормальных функций. Что касается клеточного деления, тубулин полимеризуется в микротрубочки, которые образуют митотическое веретено. Затем микротрубочки деполимеризуются, когда используемое митотическое веретено запол-нится. Таким образом, агенты, которые нарушают полимеризацию или деполимеризацию микротру-бочек, и тем самым ингибируют митоз, включают некоторые наиболее эффективные химиотерапев-тические агенты для клинического применения.
Такие анти-митотические агенты или яды мо-гут быть классифицированы на три группы на ос-новании их молекулярного механизма действия. Первая группа состоит из агентов, включающих колхицин и колцемид, которые ингибируют обра-зование микротрубочек за счет разрушения тубу-лина. Вторая группа состоит из агентов, включаю-щих винбластин и винкристин, которые индуциру-ют образование паракристаллических агрегатов тубулина. Винбластин и винкристин являются хо-рошо известными противораковыми лекарствами. Их действие разрушения микротрубочек митотиче-ского веретена, преимущественно ингибирует ги-перпролиферативные клетки. Третья группа состо-ит из агентов, включающих таксол, который уско-ряет полимеризацию тубулина и таким образом стабилизирует структуру микротрубочек.
Однако, большинство из них, обладающих ак-тивностью в качестве противоопухолевого агента, не гарантирует эффективность против опухолевой клетки и, конечно, не против опухолевой клетки, которая проявляет фенотип сопротивления лекар-ству. Алкалоиды Винка, такие как винбластин и винкристин, являются эффективными против опу-холевых клеток и опухолей, однако, у них отсут-ствует активность против некоторых опухолей и клеток с сопротивлением лекарству. Одной из ос-нов опухолевой клетки, проявляющей сопротивле-ние лекарству (DR) или множественное сопротив-ление лекарству (MDR), является сплошная сверх-экспрессия Р-гликопротеина. Соединения, которые являются плохими субстратами для транспорта Р-гликопротеина, должны быть пригодными для раз-рушения таких DR или MDR фенотипов.
Таким образом, проявление DR или MDR фе-нотипа многими опухолевыми клетками и клиниче-ски доказанная форма действия противо-микротрубочковых агентов против опухолевых клеток делает необходимым развитие анти- микро-трубочковых агентов цитотоксических в отноше-нии опухолевых клеток с отсутствием сопротивле-ния лекарству, а также цитотоксических в отноше-нии к опухолевым клеткам с фенотипом сопротив-ления лекарству. Агенты, которые являются обе-щающими в этом отношении, включают класс со-единений, известных как криптофицины.
Что касается способов получения криптофи-цинов, в настоящее время не известен способ пол-ного синтеза криптофицинов. Криптофициновые соединения в настоящее время получают путем выделения из зелено-голубых водорослей или пу-тем полу-синтетических вариантов способа таких естественно полученных соединений. Отсутствие полного синтетического способа неизбежно делает трудным получение стереоспецифических крипто-фицинов, способа, который может привести к мак-симальной активности и увеличению стабильности соединения. Например, исследование показало, что криптофицины с неактивным макроциклическим кольцом являются более активными. Таким обра-зом, полный синтетический способ, который может давать криптофицины с макроциклическим коль-цом, которое является более стабильным, чем в естественно полученных криптофицинах, будет желательным. Настоящее изобретение решает эти проблемы.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил или фенил, или любую про-стую незамещенную, или замещенную ароматиче-скую, или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
Настоящее изобретение далее обеспечивает общие синтетические способы получения крипто-фицинов. Настоящее изобретение также обеспечи-вает применение криптофицинов в фармацевтиче-ских препаратах для ингибирования пролиферации клеток млекопитающего и для лечения опухоли.
Фигура 1 представляет общую структуру вы-бранных криптофициновых соединений настояще-го изобретения и систему чисел для оксикислотных элементов А и D и аминокислотных элементов В и С в выбранных вариантах;
Фигуры 2А и 2В графически изображают вли-яние криптофициновых соединений и винбластина на клеточную пролиферацию Jurkat и прогрессию клеточного цикла. Клетки Jurkat проинкубированы с указанными концентрациями криптофициновых соединений (А) или винбластина (В) в течение 24 часов. Для каждого образца были определены чис-ло жизнеспособных клеток () и митотический индекс (ђ), как описано в Экспериментальной ча-сти. Величины представляют значение +/- стан-дартное отклонение (sd) для трех образцов в одном из трех подобных экспериментов;
Фигура 3 графически изображает обратимость влияния винбластина, криптофицинов и таксола на клеточный рост. SKOV3 клетки были обработаны 0.1 нМ винбластина (ђ), 0.1 нМ криптофицинов () или 1 нМ таксола (х) в момент времени =0. Эти концентрации ингибировали клеточный рост на 50% для каждого соединения. Через 24 часа клетки промывали и инкубировали в среде, свободной от лекарства, в течение указанного времени. Плот-ность клеток определяли с помощью окрашивания сульфородамином В (SRB), как описано в Экспери-ментальной части, и экспрессировали в виде +/- sd поглощения при 560 нм для тройных образцов в одном из трех экспериментов;
Фигура 4 изображает изоболограммы для комбинационных эффектов винбластина и крипто-фицинов на клеточную пролиферацию. SKOV3 клетки были обработаны винбластином (0-600 пкМ) и/или криптофицинами (1-100 пкМ) в течение 48 часов. Затем количество клеток было определе-но с помощью окрашивания SRB, как описано в Экспериментальной части, и были определены величина IC50s () и линия аддитивности (---) для комбинаций винбластина и криптофициновых со-единений. Величины представляют значения для двух экспериментов каждый содержащий тройные образцы.
Фигура 5 представляет первую схему синтеза криптофицинов в соответствии с настоящим изоб-ретением;
Фигура 6 представляет схему для получения оксикислотного элемента А;
Фигура 7 представляет схему для получения субъединицы криптофицина, включающей окси-кислотный элемент А и аминокислоту В;
Фигура 8 представляет схему для получения субъединицы криптофицина, включающей амино-кислотный элемент С и оксикислоту D;
Фигура 9 представляет первую схему для син-теза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 10 представляет вторую схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 11 представляет схему для синтеза субъединицы криптофицина, включающей окси-кислоту D;
Фигура 12 представляет третью схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 13 представляет четвертую схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением; и
Фигура 14 представляет пятую схему для син-теза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С18 и С18
R3-представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В одном из аспектов настоящего изобретения обеспечиваются новые криптофициновые соедине-ния, имеющие следующую структуру:
где
R1 представляет Н, ОН, галоид, О кетогруппы, NH2, SН, низшую алкокси группу или низшую алкиль-ную группу;
R2 представляет Н, ОН, О кетогруппы, NH2, SH, низшую алкокси группу или низшую алкильную группу; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, или двойной связи между C10 и С11; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием тетрагидрофуранового кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 представляет ОН, низшую алканоильную группу или низшую - оксиалканоилокси группу;
R5 представляют Н или ОН группу;
R6 представляет Н; или
R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и С6;
R7 представляет бензильную, оксибензильную, метоксиксибензильную, галоидоксибензильную, дигалоидоксибензильную, галоидметоксибензиль-ную или дигалоидметоксибензильную группу;
R8 представляет ОН, низшую -аминокислоту, С1 связывается с N - аминокислоты, или этерифици-рованной низшей -аминокислоты, где C1 связыва-ется с N этерифицированной низшей -аминокислотной группы;
R4 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалкановой кислотой; и
R5 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей а-оксиалкановой кислотой; и
со следующими условиями:
R1 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкокси группу только, если R2 представ-ляет ОН, О кетогруппы, NH2, SH;
R2 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкокси группу только, если R1 -представляет ОН, О кетогруппы, NH2, SH;
если R1 представляет ОН, R2 представляет ОН, R3 представляет метил, R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептидной группы со структурой Х:
где O1 указанного X соответствует R4, N8 указанно-го X соответствует R8, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4- метоксибензилом;
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R9 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной свя-зи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом;
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С10 и С11, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом; и
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидной группы, R9 представляет метил, R5 и R9 объединяются вместе с образованием двойной свя-зи между C5 и С6, R4 связывается с концевой кар-боксильной группой лейциновой кислоты и R8 при-соединяется к азоту концевой группы либо 3- ами-но-2-метилпропионовой кислоты, либо метилового эфира 3-амино-2- метилпропионовой кислоты, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных в С2, С8, С9, С10 и С11, обла-дает R стереохимией. В дальнейшем варианте изобретения, по крайней мере, одна из групп, при-соединенных в С2, С8, C9, С10 и С11, обладает S сте-реохимией.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения в соответствии с приведенной выше структурой, где структура дидепсипептида, который образуется, если R4 или R5 объединяется вместе с R8, имеет следующую структуру Х:
где О1 указанного X соответствует R4 или R5, N8 указанного X соответствует R8, R9 представляет Н или низшую алкильную группу и R10 представляет Н или низшую алкильную группу.
Следующие термины, как они использованы здесь, имеют указанные значения, если не оговоре-но противоположное значение, четко имеются в виду из использования в контексте:
“низшая -аминокислота” подразумевает -аминокислоту, имеющую от трех до восьми атомов углерода, и включает линейные и не-линейные углеводородные цепи; например, 3-амино-2-метилпропионовую кислоту.
“Этерифицированная низшая -аминокислота” подразумевает -аминокислоту, имеющую от трех до восьми атомов углерода, где водород карбоксильной группы замещается ме-тильной группой; например метиловый эфир 3-амино-2-метилпропионовой кислоты.
“Низшая алканоилокси группа” подразумева-ет алканоилокси группу с одним- семью атомами углерода и включает линейные и не-линейные уг-леводородные цепи.
“Низшая -оксиалканоилокси группа” подра-зумевает -оксиалканоилокси группу с двумя- се-мью атомами углерода и включает линейные и не-линейные углеводородные цепи, например, 2-окси-4-метилвалерьяновую кислоту.
“Низшая алкоксильная группа” подразумева-ет любую алкильную группу с одним- пятью ато-мами углерода, связанными с атомом кислорода.
“Низшая алкильная группа” подразумевает алкильную группу с одним- пятью атомами угле-рода и включает линейные и не-линейные углево-дородные цепи, включающие, например, метиль-ные, этильные, пропильные, изопропильные, бу-тильные, изобутильные, трет-бутильные, сескви-бутильные, метилированные бутильные группы, пентильные и трет-пентильные группы.
“Аллильно замещенный алкен” подразумевает алкен, который содержит алкильный заместитель.
“Эпоксидное кольцо” подразумевает трех-членное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома кислорода.
“Азиридиновое кольцо” подразумевает трех-членное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома азота.
“Эписульфидное кольцо” подразумевает трехчленное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома серы.
“Сульфатное кольцо” подразумевает пяти-членное кольцо, состоящее из углерод-углерод-кислород-сера-кислородного скелета с двумя до-полнительными атомами кислорода, связанными с атомом серы.
“Мономалкилфосфатное кольцо” подразуме-вает пятичленное кольцо, состоящее из углерод-углерод-кислород-фосфор-кислородного скелета с двумя дополнительными атомами кислорода, один из которых содержит низшую алкильную груп-пу.соединенную с атомом фосфора.
“Простая незамещенная ароматическая груп-па” относится к обычным ароматическим кольцам, содержащим 4n+2 pi электронов в моноцикличе-ской сопряженной системе (например, фурил, пир-ролил, тиснил, пиридил) или бициклической со-пряженной системе (например, индолил или нафтил).
“Простая замещенная ароматическая группа” относится к фенильной группе, замещенной еди-ничной группой (например, низшей аклкильной группой или галоидом).
“Гетероароматическая группа” относится к ароматическим кольцам, которые содержат один или больше неуглеродных заместителей, таких как кислород, азот или сера.
“Галоид” относится к тем членам группы в пе-риодической таблице элементов, которые известны как галоиды. Способы галоидирования включают, но не ограничиваются ими, присоединение галои-дводородов, замещение при повышенной темпера-туре, фотогалоидирование и т.д. и такие способы известны специалистам в этой области.1,2.
Один из вариантов криптофицинового соеди-нения настоящего изобретения представляет со-единение, где R1 и R2 объединяются вместе с обра-зованием эпоксидной группы, R3 представляет ме-тил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4- метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 2, является следующей:
Криптофицин 2
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого криптофицинового соеди-нения, Криптофицина 4, является следующей:
Криптофицин 4
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 пред-ставляет (2- карбометоксипропил)амино группу. Структура этого соединения, Криптофицина 6, является следующей:
Криптофицин 6
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 и R8 являются ОН группами, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6 таким образом, что представляют двойную связь, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил. Структура этого соединения, Криптофицина 7, является сле-дующей:
Криптофицин 7
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет хлор, R2 представляет ОН группу, R3 пред-ставляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с об-разованием двойной связи между C5 и C6, R7 пред-ставляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объеди-няются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 8, является следующей:
Криптофицин 8
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет метокси группу, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипеп-тида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 9, является следующей:
Криптофицин 9
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет метокси группу, R2 и R4 являются ОН группа-ми, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 представляет (2-карбоксипропил)амино группу. Структура этого соединения, Криптофицина 10, является следующей:
Криптофицин 10
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 пред-ставляет (2- карбоксипропил)амино группу. Струк-тура этого соединения, Криптофицина 12, является следующей:
Криптофицин 12
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R4 представляет ОН группу, R5 и R6 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 представляет (2- карбоксипропил)амино груп-пу. Структура этого соединения, Криптофицина 14, является следующей:
Криптофицин 14
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием ди-депсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 16, является сле-дующей:
Криптофицин 16
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 17, является следующей:
Криптофицин 17
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вме-сте с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет втoр-бутил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 18, является следующей:
Криптофицин 18
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вме-сте с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изопропил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 19, является следующей:
Криптофицин 19
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием ди-депсипептида со структурой X, где R9 представляет водород и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 21, является сле-дующей:
Криптофицин 21
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3,5-дихлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 23, является следующей:
Криптофицин 23
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипеп-тида со структурой X, где R9 представляет водород и R10 представляет изобутил. Структура этого со-единения, Криптофицина 24, является следующей:
Криптофицин 24
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R4 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R5 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 26, является сле-дующей:
Криптофицин 26
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R8 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 28, является следующей:
Криптофицин 28
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R8 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет водород и R10 пред-ставляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 29, является следующей:
Криптофицин 29
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 30, является сле-дующей:
Криптофицин 30
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3,5-дихлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 31, является следующей:
Криптофицин 31
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 35, является следующей:
Криптофицин 35
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет водород, R5 и R6 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 40, является сле-дующей:
Криптофицин 40
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R6 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3,5-дихлор-гидроксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 45, является следующей:
Криптофицин 45
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидеп-сипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет пропил. Структура этого соединения, Криптофицина 49, является следую-щей:
Криптофицин 49
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R6 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет пропил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 50, является следующей:
Криптофицин 50
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидеп-сипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет втор-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 54, является сле-дующей:
Криптофицин 54
Из вышеприведенных соединений, Криптофи-цины 2, 4, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54 являются метаболитами, продуцированны-ми штаммом Nostoc sp. зелено-голубых водорослей (цианобактерий), которые были культивированы этими соединениями, впоследствии выделенными из этой культуры. Криптофицины 6 и 7 являются артефактами, которые продуцируются, если про-цедура выделения использует растворители, со-держащие метанол. Криптофицины 8, 9, 10-12, 14 и 35 являются производными этих естественно про-дуцированных метаболитов, которые были хими-чески модифицированы способами, описанными в Экспериментальной части этой заявки, с альтерна-тивными способами для создания приведенных в качестве примеров соединений, а также не приве-денных в качестве примеров соединений, доступ-ных для специалистов в этой области.
Настоящее изобретение обеспечивает спосо-бы продуцирования вышеприведенных криптофи-циновых соединений за счет культивирования штамма Nostoc sp.. Морфологические характери-стики Nostoc sp. зелено-голубых водорослей (циа-нобактерий), как они раскрыты в патенте США 4946835, являются такими, что они являются ните-видными и состоят из растительных клеток. В бо-лее длинных волокнах гетероцисты периодически наблюдаются в интеркалярном положении; акине-ты не наблюдаются. Репродуцирование происхо-дит за счет гормогоний дополнительно к статисти-ческим трихомным разрывам. Основа для иденти-фикации Nostoc sp. может быть найдена в J.Gen.Micro., 111:1-61 (1979).
Изобретение далее обеспечивает тот вариант, в котором Nostoc sp. могут быть культивированны-ми и новые криптофициновые метаболиты, а также и предварительно описанные криптофициновые метаболиты, могут быть выделены из этой культу-ры. В предпочтительном варианте настоящего изобретения штамм Nostoc sp., обозначенный GSV 224, представляет штамм, который культивируется и из которого выделяются соединения, представ-ленные следующей структурой:
где
R1 представляет Н, ОН, галоид, О кетонной группы, NH2, SH, низшую алкоксильную группу или низ-шую алкильную группу;
R2 представляет Н, ОН, О котонной группы, NH2, SH, низшую алкоксильную группу или низшую алкильную группу; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца или двойной связи между C10 и С11; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием тетрагидрофураногового кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 представляют ОН, низшую алканоилокси группу или низшую -оксиалканоилокси группу;
R5 представляют Н или ОН группу;
R6 представляет Н; или
R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и C6;
R7 представляет бензильную, оксибензильную, метоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидметоксибензильную или дигалоидметоксибензильную группу;
R8 представляют ОН, низшую -аминокислоту, где С1 связывается с N - аминокислоты, или этерифи-цированную низшую -аминокислоту, где С1 связы-вается с N этерифицированной -аминокислотной группы;
R4 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалканоильной кислотой; или
R5 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалканоильной кислотой;
при следующих условиях:
R1 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкоксильную группу только, если R2 представляет ОН, О кетонной группы, NH2, SH.
В предпочтительном варианте изобретения химически модифицированный криптофициновый метаболит, выделенный вышеописанным способом, точно обеспечивает соединение, также имеющее эту структуру. Способы химической модификации криптофициновых соединений с получением до-полнительных соединений в пределах объема настоящего изобретения являются доступными специалистам в этой области. Однако, дополни-тельные способы описываются более детально в Экспериментальной части этой заявки.
Дополнительно к новым криптофициновым со-единениям настоящего изобретения, настоящее изобретение обеспечивает новые способы получе-ния, а также применения вышеприведенных соеди-нений, которые включают следующие ранее рас-крытые криптофициновые соединения, Криптофи-цины 1, 3, 5, 13 и 15. Структуры этих соединений являются следующими:
Криптофицин 1
Криптофицин 3
Криптофицин 5
Криптофицин 13
Криптофицин 15
Изобретение при этом направляется на обес-печение любого штамма Nostoc sp. и, предпочти-тельно на обеспечение штамма Nostoc sp., GSV 224, для продуцирования криптофициновых соедине-ний. С этой целью GSV 224, штамм Nostoc sp., был помещен в банк данных 7 октября 1993 согласно Budapest Treaty Международного банка данных микроорганизмов с целью процедуры патентования с патентной культурой, помещенной в банк данных коллекции American Туре Culture, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 U.S.A. под номером АТСС Acession № 55483. Другие штаммы Nostoc sp., в частности, штамм МБ 5357, ранее помещен-ные в банк данных Merck and Со, под номером АТСС №53789, представляют штаммы, которые могут быть рассмотрены для использования в практике настоящего изобретения.
Как это имеет место с другими организмами, характеристики Nostoc sp., подвергаются измене-ниям. Например, могут быть получены рекомби-нанты, варианты или мутанты специфических штаммов путем обработки различными известными физическими или химическими мутагенами, такими как ультрафиолетовое излучение, радиационное излучение, гамма-излучение или путем обработки N-метил-N’-нитро-N-нитрозогуанидином. Все есте-ственные и индуцированные варианты, мутанты и рекомбинанты специфических штаммов, которые сохраняют характеристики продуцирования крип-тофицинового соединения, включаются в пределы объема заявленного изобретения.
Криптофициновые соединения настоящего изобретения могут быть получены культивирова-нием штамма Nostoc sp. в аэробных условиях, по-груженных в соответствующую культурную среду до продуцирования, в основном, антибиотиковой активности. Другие приемы использования культу-ры, такие как рост на поверхности на отвержден-ной среде также могут быть использованы для про-дуцирования этих соединений. Культурные среды, использованные для роста специфических штам-мов, могут включать любую среду из многих азот-ных и углеродных источников и неорганических солей, которые известны специалистам в этой об-ласти. Экономия в процессе продуцирования, оп-тимальные выходы и легкость выделения продукта являются теми факторами, которые принимаются в расчет при выборе углеродных источников и ис-точников азота, которые используются. Среди пи-тальных неорганических солей, которые могут быть введены в культурные среды, используются обычные растворимые соли, способные давать ионы железа, калия, натрия, магния, кальция, ам-мония, хлорида, карбоната, фосфата, сульфата, нитрата и им подобные ионы.
Следы ценных элементов, которые являются необходимыми для роста и развития организмов, должны быть также включены в культурную среду. Такие следы ценных элементов обычно присут-ствуют в виде примесей в других составляющих среды в количествах, достаточных для того, чтобы удовлетворять требованиям роста организмов. Может быть желательным добавление небольших количеств (т.е. 0.2 мл/л) антивспенивающего аген-та, такого как полипропиленгликоль (с мол. весом около 2000) для крупномасштабного культивиро-вания среды, если вспенивание становится пробле-мой.
Для получения значительных количеств крип-тофициновых соединений может быть использова-но аэробное культивирование с погружением в танки. Небольшие количества могут быть получе-ны с использованием культуры во встряхиваемой колбе. Так как время задержки в проявлении про-дуцирования метаболита обычно связывается с инокуляцией больших танков организмами, пред-почтительным является использование вегетатив-ного инокулюма. Вегетативный инокулюм готовит-ся путем инокуляции культурной среды малого объема фрагментами вегетативной трихомы или формой организма, содержащей гетероцисты для получения свежей, активно растущей культуры организма. Вегетативный инокулюм затем перено-сится в большой танк. Среда, использованная для вегетативного инокулюма, может быть такой же как та, которая использовалась для крупномас-штабных культиваций или ферментаций, но может быть использована и другая среда.
Организмы могут быть выращены при темпе-ратурах между 20°С и 30°С и интенсивности па-дающего излучения от около 100 до 200 мкмоль фотонов м-2 сек-1 (фотосинтетически активного из-лучения).
Как это является обычным в процессах аэроб-но погруженной культуры этого типа, газообразная двуокись углерода вводится в культуру путем до-бавления в стерильный воздушный поток пробуль-киваемый через культурную среду. Для эффектив-ноного получения криптофициновых соединений, количество двуокиси углерода должно составлять около 1% (при 24°С и давлении одна атмосфера).
Ранее известные приемы, в частности, патент США 4946835, обеспечивает способы культивиро-вания Nostoc sp., содержание которого вводится здесь ссылкой.
Производство криптофицинового соединения может протекать в процессе культивирования ис-пытываемыми образцами бульона по отношению к организмам, которые, как известно, являются чув-ствительными к этим антибиотикам. Одним из при-годных проверенных организмов является Candida albicans.
После их получения в аэробных условиях по-груженной культуры, криптофициновые соедине-ния изобретения могут быть выделены из культуры и из культурной среды способами, известными специалистам в этой области. Выделение обычно сопровождается первоначально фильтрованием культурной среды для отделения клеток водоросли и затем лиофильной сушкой выделенных клеток. Лиофильно высушенные водоросли могут быть подвегрнуты экстрагированию подходящим рас-творителем, таким как этанол, метанол, изопропа-нол или дихлорметан. Криптофицины могут быть выделены за счет того, что этот экстракт, а также культурная среда подвергаются быстрому хрома-тографированию на колонке с обращенной фазой. Криптофицины могут быть очищены с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (HPLC).
Как будет очевидно из структур криптофици-нов, криптофициновые соединения содержат груп-пы, которые являются способными к химической модификации. Исходное соединение настоящего изобретения рассматривает те криптофицины, ко-торые обладают противо-опухолевой активностью. Например, производные, приведенные в качестве примера в настоящем изобретении, включают со-единения, содержащие эпоксидный кислород или гидроксильные группы на С-7 и С-8 звене А или группу лейциновой кислоты звена В Фигуры 1. Такие производные новых и ранее описанных со-единений, которые обладают желаемой противо-опухолевой активностью, включаются в заявляемое изобретение. Кроме того, связь между структурой криптофициновых соединений и противо-опухолевой активностью обеспечивается в Экспе-риментальной части, приведенной ниже.
В то время как выбранные криптофициновые соединения, которые, как известно, являются мета-болитами, продуцированными водорослями насто-ящего изобретения, другие криптофициновые со-единения, например Криптофицины 8-15, могут быть получены из метаболитов с использованием опубликованных приемов, которые являются из-вестными специалистам в этой области; например, синтезом, описанным в патентах США 4868208, 4845086 и 4845085, содержание которых вводится здесь ссылкой, или за счет использования других способов, известных специалистам в этой области. Кроме того, настоящее изобретение в Эксперимен-тальной части обеспечивает способы получения производных.
Криптофицины являются мощными противо-опухолевыми и противогрибковыми депсипептида-ми из зелено-голубых водорослей (цианобактерий), принадлежащих к Nostocaceae. Первое криптофи-циновое соединение, Криптофицин 1, было выделе-но из живущего на земле Nostoc sp., АТСС 53789, и было найдено, что он является очень активным против грибов, особенно штамм Cryptococcus (R.E. Schwarz et.al., J.Ind.Microbiol. 1990, 5:113-124). Криптофицин 1 был также выделен из живущего на земле Nostoc sp. GSV 224, вместе с 24 дополнитель-ными аналогами криптофицина в виде минималь-ных составляющих водоросли и было найдено, что оно является очень активным против подкожно трансплантированных твердых опухолей у мышей (G.Trimurtulu et.al., J.Am.Chem.Soc. 1994, 16:4729-4737; R.Borrow et.al., J.Am.Chem.Soc. 1995, 117: 2479-2490). Два аналога из Nostoc sp., GSV 224, Криптофицины 3 и 5, были описаны ранее в виде полу-синтетических аналогов Криптофицина 1 (D.F.Sesin, патент США 4845085, опубликованный 4 июля 1989; D.F.Sesin et.al., патент США 4868208, опубликованный 19 сентября 1989). Криптофицины проявляли значительную селективную цитотоксич-ность к опухоли в анализе Corbett и были в равной степени цитотоксичными по отношению к опухоле-вым клеткам, чувствительным к лекарству, и к опу-холевым клетка с сопротивлением лекарству. Криптофицин 1 проявляет такую же форму дей-ствия как винбластин, но отличается от последнего лекарства в необратимости ингибирования микро-трубочкового ансамбля (C.D.Smith et.al., Cancer Res. 1994, 54:3779-3784). Один из криптофицинов из Nostoc sp., GSV 224, Криптофицин 24, был выде-лен из морской губки и назван ареностатином А (M.Kobayashi et.al., Tetrahedron Lett. 1994, 35:7969-72; M.Kobayashi et.al., Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai KoenYoshishu 1994, 36st, 104-110).
Двадцать два дополнительных криптофицино-вых соединения, обозначенных здесь Криптофици-нами 2, 4, 6, 7, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, раскрываются в патентной заявке № 08/172632, поданной 21 декабря 1993, и 08/249955, поданной 27 мая 1994, и Международной заявке № PCT/US94/14740, поданной 21 декабря 1994, такие соединения являются либо метаболитами, выде-ленными из штамма Nostoc sp., либо полученными полу-синтетическим путем из таких метаболитов. Кроме того, раскрытое в этих патентных заявках является характеристикой выбранных криптофи-циновых соединений в качестве анти-микротрубчатых агентов с активностью клиниче-ского типа, проявляемой в отношении широкого спектра опухолей, имплантированных мышам, включая DR и MDR опухоли.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную, или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 -представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте этого крипто-фицинового соединения, R8 криптофицина пред-ставляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном варианте этого криптофицинового соединения R7 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изо-бутил, пентил или изопентил. В дополнительном предпочтительном варианте этого криптофицино-вого соединения R7 представляет Н, R8 представля-ет метил, R3 представляет метил; X и Y не являются оба О.
Настоящее изобретение обеспечивает допол-нительный предпочтительный вариант этого крип-тофицинового соединения, где R3 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном вари-анте этого криптофицинового соединения R9 пред-ставляет метил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном варианте этого криптофицинового соединения R10 представляет метил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных к С3, C6, C10, C16, С17, и C18 обладает R стериохимией. В другом варианте изобретения, по крайней мере, одна из групп, при-соединенных к С3, С6, C10, С16, C17 и C18, обладает S стериохимией.
Один вариант криптофицинового соединения настоящего изобретения представляет соединение, когда Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между C18 и C19, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислоро-дом. Структура этого соединения, Криптофицина 51, является следующей:
Криптофицин-51
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-’эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и C14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 52, является следующей:
Криптофицин-52
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 53, является следующей:
Криптофицин-53
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R гидроксильную группу, R3, R7 и R8 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 55, является следующей:
Криптофицин-55
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 представляют водо-род, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 57, является следую-щей:
Криптофицин-57
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3, R7 и R8 пред-ставляют метил, R4 и R5 представляют водород, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 58, является следующей:
Криптофицин-58
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эписульфидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 61, является следующей:
Криптофицин-61
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-метоксифенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водо-род, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 81, является следую-щей:
Криптофицин-81
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием двойной связи между C18 и С19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 82, является следующей:
Криптофицин-82
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 90, является следующей:
Криптофицин-90
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 91, является следую-щей:
Криптофицин-91
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-азиридинового кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 97, является следующей:
Криптофицин-97
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и С19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 110, является следую-щей:
Криптофицин-110
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-тол ил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между C18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 111, является следую-щей:
Криптофицин-111
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 112, является следую-щей:
Криптофицин-112
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 115, является следую-щей:
Криптофицин-115
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 116, является следую-щей:
Криптофицин-116
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 117, является следую-щей:
Криптофицин-117
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и C14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 118, является следую-щей:
Криптофицин-118
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 119, является следую-щей:
Криптофицин-119
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 120, является следую-щей:
Криптофицин-120
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 121, является следующей:
Криптофицин-121
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 122, является следующей:
Криптофицин-122
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 123, является следующей:
Криптофицин-123
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 124, является следую-щей:
Криптофицин-124
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 125, является следую-щей:
Криптофицин-125
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения. Криптофи-цина 126, является следующей:
Криптофицин-126
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот несущий единичный водород. Структура этого соединения, Криптофицина 127, является следую-щей:
Криптофицин-127
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот несущий единичный водород. Структура этого соединения, Криптофицина 127, является следую-щей:
Криптофицин 128
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этoго соединения, Криптофицина 130, является следую-щей:
Криптофицин-130
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 131, является следую-щей:
Криптофицин-131
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 132, является следую-щей:
Криптофицин-132
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения. Криптофицина 133, является следую-щей:
Криптофицин-133
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 134, является следую-щей:
Криптофицин-134
Впредь набор, приведенный ниже представля-ет криптофициновые соединения, чьи замещающие группы основаны на следующей структуре:
Где
R1 представляет Н или галоид;
R2 представляет Н кислород кeтонной группы; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, или R1 и R2 могут объединять-ся вместе с образованием эписульфидного кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 представляет Н или ОН;
R5-представляет Н или ОН; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи;
R6- представляет Н или галоид;
При следующем условии,
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор, R3 не является метилом.
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
Вариант криптофицинового соединения настоящего изобретения представляет соединение, когда R1 представляет водород, R2 представляет кислород кетонной группы, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи и R6 представляет хлор. Структу-ра этого соединения, Криптофицина 20, является следующей:
Криптофицин 20
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-бром, R2 представляет R гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 25, является следующей:
Криптофицин 25
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 27, является следую-щей:
Криптофицин 27
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R- эпок-сидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 являются водородом и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 32, является следующей:
Криптофицин 32
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1, R4 и R5 являются водородом, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет R-метил, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 33, является следующей:
Криптофицин 33
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1, R2, R4 и R5 являются водородом, R3 представляет R-метил, и R6 представляет водород. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 34, является следующей:
Криптофицин 34
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2, представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 37, является следую-щей:
Криптофицин 37
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 38, является следую-щей:
Криптофицин 38
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,R-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 39, является следую-щей:
Криптофицин 39
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R- эпок-сидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 пред-ставляет S-гидроксильную группу и R5 представля-ет R-гидроксильную группу и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 41, является следующей:
Криптофицин 41
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 представляет R-гидроксильную группу и R5 пред-ставляет S-гидроксильную группу и R6 представля-ет хлор. Структура этого соединения, Криптофи-цина 42, является следующей:
Криптофицин 42
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет водород, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет R-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 48, является следую-щей:
Криптофицин 48
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 представ-ляют водород и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 59, является сле-дующей:
Криптофицин 59
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эписульфидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 60, является следую-щей:
Криптофицин 60
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет водород, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 63, является следующей:
Криптофицин 63
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 представ-ляют водород и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 64, является сле-дующей:
Криптофицин 64
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 69, является следующей:
Криптофицин 69
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 70, является следующей:
Криптофицин 70
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 71, является следующей:
Криптофицин 71
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-бром, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 72, является следующей:
Криптофицин 72
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 73, является следующей:
Криптофицин 73
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 74, является следующей:
Криптофицин 74
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-фтор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 75, является следующей:
Криптофицин 75
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-фтор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6-представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 76, является следующей:
Криптофицин 76
Настоящее изобретение обеспечивает спосо-бы получения приведенных выше криптофицино-вых соединений, а также ранее известных крипто-фицинов посредством полного синтеза.
Изобретение далее обеспечивает то обстоя-тельство, что новые криптофициновые метаболиты, а также ранее описанные криптофициновые мета-болиты могут быть синтезированы с использовани-ем способов, обеспеченных в этом изобретении.
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения криптофицинового соединения, вклю-чающего селективный аллильнозамещенный Е алкен; перегруппировку аллильно замещенного Е алкена через стереоспецифическую перегруппи-ровку Виттига; превращение этого соединения в первую -аминокислоту или -оксикислоту, соче-тание первой кислоты со второй -аминокислотой с образованием первой субъединицы; сочетание третьей -аминокислоты с четвертой -оксикислотой или -аминокислотой с образовани-ем второй субъединицы; и сочетание первой субъ-единицы со второй субъединицей с образованием криптофицина.
Настоящее изобретение далее обеспечивает предпочтительный вариант способа, где получен-ное криптофициновое соединение имеет следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил или фенил или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 -представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и C14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения, способ дает криптофициновое соеди-нение, где Аr представляет фенил, R3 представляет метил и R6 представляет галоидметоксибензил, R7 представляет Н; R8 представляет метил; R9 пред-ставляет изобутил: R10 представляет Н; X пред-ставляет О; и Y представляет О.
Кроме того, что настоящее изобретение обес-печивает криптофициновые соединения с приве-денной выше структурой, настоящее изобретение обеспечивает способы получения ранее раскрытых криптофициновых соединений и известных в лите-ратере криптофициновых соединений. Криптофи-циновые соединения 1, 8 и 35 были получены с помощью полного синтеза. Приведенное здесь ни-же соединение является примером ранее раскры-тых и известных ранее в литераторе криптофици-новых соединений, полученных путем полного синтеза:
где
R1 представляет галоид; R2-представляет ОН; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца;
R3 представляет Н; и R4 представляют Н; или
R3 и R4 могут объединяться вместе с образованием двойной связи.
Настоящее изобретение обеспечивает также фармацевтическую композицию, полезную для ингибирования пролиферации гиперпролифератив-ной клетки млекопитающего, включающую эффек-тивное количество криптофицинового соединения со следующей структурой:
где
Ar представляет метил или фенил или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SН, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца;
или R1 и R2 могут объединяться вместе с образова-нием двойной связи между С18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино;
вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения фармацевтическая композиция далее включает, по крайней мере, один дополнительный противо-опухолевый агент.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ ингибирования пролиферации клетки мле-копитающего, включающий контактирование клет-ки млекопитающего с криптофициновым соедине-нием в количестве, достаточном для ингибирова-ния пролиферации клетки, криптофицинового со-единения, имеющего следующую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SН, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения этот способ далее включает контак-тирование клетки с, по крайней мере, одним допол-нительным противо-опухолевым агентом. В пред-почтительном варианте настоящего изобретения клетка млекопитающего, которая подвергается контактированию, является гиперпролифератив-ной. В другом предпочтительном варианте насто-ящего изобретения гиперпролиферативная клетка является человеческой.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ ингибирования пролиферации гиперпроли-феративной клетки млекопитающего, имеющей множество фенотипов сопротивления лекарству, способ, включающий контактирование клетки с количеством криптофицинового соединения, эф-фективным для нарушения динамического состоя-ния микротрубочковой полимеризации и деполи-меризации, для задержки клеточного митоза, тем самым ингибируя пролиферацию клетки, крипто-фицинового соединения, имеющего следующую структуру:
где
Ar представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и С14;
R6-представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения способ далее включает контактирова-ние клетки с, по крайней мере, одним дополнитель-ным противо-опухолевым агентом. В другом пред-почтительном варианте настоящего изобретения клетка млекопитающего является человеческой.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ смягчения патологического состояния, вы-званного гиперпролиферирующими клетками мле-копитающего, способ, включающий введение субъ-екту эффективного количества фармацевтической композиции, раскрытой здесь, для ингибирования пролиферации клеток. В предпочтительном вари-анте настоящего изобретения клетки млекопитаю-щего являются человеческими.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения, способ далее включает проведение субъекту, по крайней мере, одной дополнительной терапии, направленной на смягчение патологиче-ского состояния. В предпочтительном варианте настоящего изобретения патологическое состояние характеризуется образованием опухолей. В другом предпочтительном варианте настоящего изобрете-ния опухоли выбираются из группы, состоящей из молочной железы, мало-камерного легкого, не-мало-камерного легкого, калоректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который включает панкреатиче-ский гастрит и желудочный гастрит, желудка, мие-ломы, мочевого пузыря, ренальной нейроэндокри-нии, которая включает щитовидную железу и опу-холи, не связанные с заболеванием Ходкинса, и опухоли, связанные с заболеванием Ходкинса.
Способ приготовления криптофициновых со-единений суммируется в Схеме 1, как отражено на Фигуре 5. Исходное вещество представляет 3Е - алкен (a)замещенный в С-2 положение ХН группой в S- конфигурации, где X представляет кислород или NH. L-аланин и L-молочная кислота служат в качестве недорогого источника исходного веще-ства а. Ключевой стадией в синтезе является стере-селективная [2,3] перегруппировка Виттига (D.J.-S.Tsai et.al., J.Org.Chem., 1984, 49:1842-1843; K.Mikami et.al., Tetrahedron 1984, 25: 2303-2308; N.Sayo et.al., Chem. Lett., 1984, 259-262) пропарги-лового эфира а (б) в (3R, 4R)-3-(ХН-замещенный)-4-алкилгепт-5(Е)-ен-1-ин (с), где X представляет кис-лород или защищенный азот (например, трет- бу-тилдиметилсилиламино). Соединение с может быть затем превращено в - окси или аминокислотное звено А предшественника криптофицинового со-единения, метил(5S,6R)-5-(ХР-замещенный)-6-алкил-8-арил-окта-2Е,7Е- диеноат (d), где Р являет-ся пригодной защищающей группой, используя способы, известные специалистам в этой области.
Одной из стратегий синтеза криптофицинового соединения, которое составляется из -окси или аминокислотного звена А, -аминокислотного зве-на В, -аминокислотного звена С и -окси или ами-нокислотного звена D, является создание узла мак-роцикла из двух предшественников, представляю-щих остатки криптофициновой молекулы, напри-мер, А-В предшественника (e), содержащего -окси или аминокислотное звено А и -аминокислотное звено В и C-D предшественника (f), содержащего -аминокислотное звено С и -окси или аминокис-лотное звено D.
В способе, описанном здесь, криптофициновое соединение составляется из А-В и С-D предше-ственников в две стадии путем (1) соединения кон-цевых звеньев А и D в А-В и C-D предшественниках с образованием циклического продукта.
В синтезе Криптофицина 51, описанном в Экс-периментальной части, эфирная связь образуется между -окси группой звена А в А-В остатке и группой карбоновой кислоты звена D в C-D фраг-менте с образованием ациклического С-D-A-B ин-термедиата и затем амидная связь образуется меж-ду группой карбоновой кислоты звена В в А-В остатке и -амино группой звена С в C-D остатке. Соединение К является предшественником А-В остатка, соединение Р является предшественником C-D остатка, и соединение R является ацикличе-ским предшественником С-D-A-B Криптофицина 51. Соединения К и Р содержат защищающие груп-пы на группе карбоновой кислоты звена В и -амино группу звена С для ограничения сочетания с образованием эфира между звеньями А и D в ста-дии 1. Эти защищающие группы удаляются из С-D-A-B интермедиата таким образом, чтобы могло иметь место образование амида между звеньями В и С в стадии 2.
Синтез метил(5S,6В)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2Е,7Е-диеноата (G), звена А предшественника Криптофицина 51 суммируется на Схеме 2 (Фигура 6). (S)транс-3-пентен-2-ол (А), исходное вещество было приготовлено с помощью ферментативного расщепления рацемического соединения. Реакция А с пропаргилхлоридом и основанием в условиях фазового переноса дает пропаргиловый эфир В с 86% выходом. Обработка В бутиллитием при -90°С приводит к спирту С с 71% выходом. Желаемое 3R,4R анти соединение С было продуктом, полу-ченным только при перегруппировке Виттига. По-сле защиты гидроксильной группы С в виде трет- бутилдиметилсилилового эфира (или трет-бутилдиметилсилилового эфира), гидроборирова-ние тройной связи (H.C.Brown, Organic Synthesis Via Boranes, Willey, 1975) приводит к альдегиду D с 73% выходом от С. Затем D было превращено в транс ,-ненасыщенный эфир Е реакцией Хорне-ра-Эмонса с 90% выходом. Селективный озонолиз двойной связи С6-С7 в D дает альдегид F с 83% выходом. Наконец, реакция Виттига F с бензи-лтрифенилфосфонийхлоридом в присутствии бу-тиллития дает G с 80% выходом. Выход G от А составлял 26%.
Реакция сочетания звена А предшественника G с D-3-(3-хлор-4- метоксифенил)аланином звена В с образованием А-В предшественника (К) суммиру-ется на схеме 3 (Фигура 7). Гидролиз группы мети-лового эфира в G гидроокисью лития в ацетоне дает карбоновую кислоту Н с 95% выходом. Соче-тание Н с трихлорэтиловым эфиром I с образова-нием J может быть выполнено с 65% выходом за счет обработки раствора Н в N,N- диметилформа-миде (ДМФА) небольшим избытком пентафторфе-нилдифенилфосфината (FDPP), эквимолярным ко-личеством трифторацетатной соли I, с последую-щей обработкой 3 эквивалентами диизопропилэти-ламина (DIEA) при 25°С (S.Chen et.al., Tetrahedron Lett. 1991, 32: 6711-6714). Фтордесилилирование J затем приводит к К с 95% выходом.
Защищенная аминокислота I была приготов-лена из D-тирозина в пять стадий. Сначала, D-тирозин был прохлорирован сульфурилхлоридом в ледяной уксусной кислоте (R.Zeynek, Норре-Seyler’s Z.f.Physiol.Chemie 1926, 144:247-254). За-тем N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(3-хлор-4-гидроксифенил)-D-аланин был получен с 94% вы-ходом за счет обработки суспензии аминокислоты в 50% водном растворе диоксана дитрет-бутилдикарбонатом в присутствии триэтиламина. Полученный продукт был деметилирован диметил-сульфатом в присутствии карбоната калия кипяче-нием с обратным холодильником в ацетоне с 84% выходом. Затем метиловый эфир был смылен гид-роокисью натрия в водном растворе диоксана с образованием N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(3-хлор-4-метоксифенил)-D-аланина с 86% выходом. Вы-держивание ВОС-защищенной аминокислоты с трихлорзтанолом, пиридином и DDC в дихлорме-тане приводит к трихлорэтиловому эфиру I с 65% выходом. Обработка этого вещества трифторук-сусной кислотой (ТФУК) приводит к количествен-ному выходу трифторацетатной соли 1.
Синтез (2S)-2-[3’(трет-бутоксикарбонил)амино-2’,2’-диметилпропаноилокси]-4-метилпентановой кис-лоты (Р), C-D предшественника, суммируется на схеме 4 (Фигура 8). Исходной точкой для звена С части Р был аминоспирт L. Защита амино группы в L за счет обработки ди-трет- бутилкарбонатом в присутствии триэтиламина (с 93% выходом), с последующим окислением первичного спирта че-тырехокисью рения (P.H.J. Cerlsen et.al., J.Org.Chem. 1981, 46: 3936-3938) дает карбоновую кислоту М (с 66% выходом). L-лейциновая кислота была пре-вращена в аллиловый эфир N с 93% выходом, в условиях фазового переноса, за счет выдерживания ее в смеси аллилбромида в дихлорметане и водном растворе бикарбоната натрия, содержащем тетра-н-бутиламмонийхлорид (S.Friedrich-Bochnitschek et.al., J.Org.Chem., 1989, 54: 751-756). Реакция соче-тания М с N была проведена с 4-диметиламинопиридином (DМАР) и дихлорцикло-карбодиимидом (DCC) в дихлорметане с образова-нием О с 75°/о выходом. Расщепление аллилового эфира О было проведено в ТГФ, содержащем мор-фолин и катализатор тетракис(трифенилфосфин)-палладий с образованием Р с 95% выходом (P.D.Jeffrey et.al., J.Org.Chem. 1982, 47:587-590).
Сочетание А-В предшественника (К) и C-D предшественника (Р) было ·выполнено как показа-но на схеме 5 (Фигура 9). Обработка К и Р смесью DCC/DМАР в дихлорметане приводит к полностью защищенному С-D-A-B интермедиату (Q) с 84% выходом. Восстановительное расщепление группы трихлорзтилового эфира в Q было достигнуто с использованием активированной цинковой пыли в уксусной кислоте. BOC-защищенная группа была затем удалена трифторуксусной кислотой с обра-зованием R в виде трифторацетатной соли с 91% общим выходом от Q.
Макролактамизация R с помощью FDPP при-водит к Криптофицину 51 с 61% выходом (J.Dudash, Jr.et.al., Synth.Commun. 1993, 23:349-356). Общий выход из S-транс-3-пентен-2-ола (А) составлял 7%.
Криптофицин 51 служил в качестве предше-ственника Криптофицина 52, R,R-эпоксида, и Криптофицина 53 S,S-эпоксида. В свою очередь, Криптофицин 52 служил в качестве предшествен-ника Криптофицина 55, 18R, 19S-хлоргидрина и Криптофицина 57, 13,14-дигидроаналога. Крипто-фицин 57 служил в качестве предшественника Криптофицина 58. Криптофицин 53 служил в каче-стве предшественника Криптофицина 61 с исполь-зованием способа, описанного T.H.Chan and J.F.Finkenbine, J.Am.Chem.Soc., 1972, 94:2880-2882, и Криптофицина 97 с использованием способа, описанного Y.Ittah et.al., J.Org.Chem., 1978, 43: 4271-4273.
Для синтеза криптофицинов, которые содер-жали Аr группы, которые отличаются от фенила, звено А предшественников общей формулы d (Схе-ма 1, R3=Me) может быть приготовлено реакцией Виттига альдегида F (Схема 2; TBS- защищающая группа) или S (Схема 6; TBPS-защищающая груп-па) с соответствующим арилтрифенилфосфо-нийхлоридом в присутствии бутиллития. Крипто-фицин 81 был приготовлен из предшественника d (Ar=п-метоксифенил, R3=Me) как показано на схе-мах 6 и 7 (Фигуры 10 и 11).
Ar группа может быть также введена в новый криптофицин на более поздней стадии синтеза. Сначала предшественник d (Ar=R3=Me) был пре-вращен в Криптофицин 82 реакцией сочетания соответствующих А-В (е) и C-D(f) предшественни-ков, как показано на Схеме 8 (Фигура 12). Селек-тивный озонолиз Криптофицина 82 или окисление периодной кислотой соответствующих эпоксидов Криптофицинов 90 и 91 приводит к альдегиду Криптофицина 108. Реакция Виттига Криптофици-на 108 с соответствующим арилтрифенилфосфо-нийхлоридом в присутствии бутиллития дает но-вый криптофицин (Схема 9; Фигура 13). Используя эту процедуру, были получены Криптофицин 110 (Ar=п-фторфенил), Криптофицин 111 (Ar=п-толил), Криптофицин 112 (Ar=2-тиенил) и Криптофицин 124 (Ar=п-хлорфенил). Криптофицин 110 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофици-нов 115 и 116. Криптофицин 111 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофицинов 117 и 118 и хлоргидринов Криптофицинов 128, 130 и 131. Криптофицин 112 служил в качестве предшествен-ника эпоксидов Криптофицинов 119 и 120. Крип-тофицин 124 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофицинов 125, 126 и хлоргидри-нов Криптофицинов 132, 133 и 134.
Другой стратегией при синтезе криптофицина является создание узла макроцикла из трех пред-шественников, например, А-В предшественника (е), содержащего -окси или аминокислотное звено А, предшественника, содержащего -окси или амино-кислотное звено D, и предшественника, содержаще-го -аминокислотное звено С. В способе, описан-ном здесь, криптофицин составляет узел из А-В, С и D предшественников в три стадии за счет (1) соеди-нения концевых А и D в А-В и D предшественниках с образованием ациклического D-A-B интермедиа-та, (2) соединения концевых звеньев D и С в D-А-В и С предшественниках с образованием ациклическо-го С-D-A-B интермедиата и (3) соединения конце-вых звеньев В и С с образованием циклического продукта.
В синтезе Криптофицина 121, описанном в Экспериментальной части, эфирная связь образу-ется между -окси группой звена А в А-В остатке и группой карбоновой кислоты звена D в D фрагмен-те с образованием ациклического D-A-B интерме-диата. Затем образуется амидная связь между группой карбоновой кислоты звена С и -аминогруппой звена D в D-A-B фрагменте. Наконец, амидная связь образуется между группой карбоно-вой кислоты звена В в А-В остатке и -амино груп-пой звена С в C-D остатке. Соединение К является предшественником с А-В остатком, ВОС-L-лейцинальдегид является предшественником звена D и соединение AL является предшественником звена С. Соединение АК является ациклическим С-D-A-B предшественником Криптофицина 121 (Схе-ма 10; Фигура 14). Соединения К и ВОС-L-лейцинальдегида содержат защищающие группы на группе карбоновой кислоты звена В и -аминогруппе звена D для ограничения реакции сочетания с образованием эфира между звеньями А и D в стадии 1. Защищающая группа удаляется из -амино группы звена D в D-A-B интермедиате, таким образом, что может происходить образова-ние амида между амино группой звена С и карбо-новой кислотой С в стадии 2. Эти защищающие группы удаляются из С-D-A-B интермедиата таким образом, что может происходить образование ами-да между звеньями В и С в стадии 2.
Новые криптофициновые соединения настоя-щего изобретения содержат эпоксидные кольца, которые раскрываются с помощью нуклеофилов с другими скоростями, чем эпоксидное кольцо Крип-тофицина 1, или содержат хлоргидриновые функ-циональные группы, которые образуют эпоксид-ные кольца с другими скоростями, чем хлоргидри-новые функциональные группы Криптофицина 8, превращаясь в эпоксидное кольцо Криптофицина 1. Эпоксидное кольцо Криптофицина 1 или хлор-гидриновая функциональная группа (замаскиро-ванное эпоксидное кольцо) Криптофицина 8 явля-ется существенной для оптимальной активности in vivo. Если эпоксидный кислород удаляется (так как найдено в Криптофицине 3) или эпоксидное кольцо гидролизуется до диода (так как найдено в Крип-тофицине 15), антиопухолевая активность сильно снижается. Криптофицин 1 обнаруживает замет-ную токсичность у животных, по сравнению с Криптофицином 8. Это отражается в отношении Т/С (в большей части выше 0%) и суммарных вели-чинах Log уничтожения (в большей части ниже 2.0) для Криптофицина 1, по сравнению с этими вели-чинами для Криптофицина 8 (в большей части Т/С величин 0% и суммарных величин Log уничтоже-ния выше 2.8). Криптофицин 25, соответствующий бромгидриновому аналогу, показывает отношение Т/С и суммарные величины Log уничтожения, ко-торые являются сравнимыми с этими величинами для Криптофицина 1. Это поразительное различие в активности in vivo подтверждает, что бромгидрин Криптофицина 25 превращается более быстро в Криптофицин 1 in vivo, чем Криптофицин 8. Это дальнейшее подтверждение того, что менее ток-сичный Криптофицин 8 может иметь больше вре-мени для аккумулирования в участке опухоли до превращения в активное соединение Криптофицина 1. Эпоксидная группа Криптофицина 1, вероятно, связывается ковалентно с его рецептором мишенью в опухолевой клетке. Новые криптофицины в настоящем изобретении могут потенциально обла-дать лучшей активностью in vivo, чем Криптофи-цин 1 и Криптофицин 8 за счет проявления более благоприятных скоростей образования эпоксида in vivo из соответствующих хлоргидриновых про-лекарств и ковалентного связывания с рецетором-мишенью в опухолевой клетке.
Соединения настоящего изобретения являются более устойчивыми по отношению к гидролизу и сольволизу, чем Криптофицины 1 и 21. Эфирная связь, соединяющая звенья С и D в Криптофицине 1, является относительно чувствительной к мягкому основному гидролизу, расщеплясь при рН 11 до гидрокси кислоты с периодом полу-жизнеспособности 0.83 часа. C-D эфирная связь в Криптофицине 21, в котором недостает метильной группы С-2 на атоме звена С, раскрывается с большей скоростью с периодом полу-жизнеспособности 0.25 часа. C-D эфирная связь является также чувствительной к сольволизу. Если в схеме выделения используют метанол, имеет ме-сто значительный метанолиз Криптофицинов 1 и 21. Криптофицин 21 является гораздо более вос-приимчивым к метанолизу, чем Криптофицин 1. Криптофицин 1 проявляет противоопухолевую активность, тогда как Криптофицин 21 является неактивным, вероятно, потому, что C-D эфирная связь Криптофицина 21 гидролизуется быстрее, чем C-D эфирная связь Криптофицина 1 in vivo. Гидро-лизом C-D эфирной связи можно также объяснить частичное снижение активности in vivo Криптофи-цина 1 при внутрибрюшинном и подкожном путях введения лекарства. C-D эфирная связь криптофи-цинов, содержащих две метильные группы на С-2 атоме звена С, такая как найдена в Криптофицине 52, является устойчивой при рН 11.
Соединения настоящего изобретения и ранее открытые криптофициновые соединения могут быть применены терапевтически в качестве проти-воопухолевых агентов и тем самым использоваться в способах лечения опухолевых заболеваний. Тер-мин “неопластический”, как он использован здесь, относится к опухоли, которая подвергается ано-мальному росту, такому росту, который имеет ме-сто из-за пролиферации клеток, которые не подвер-гаются обычным ограничениям роста. Термин “ан-ти-неопластический агент” (противоопухолевый агент), как он использован здесь, относится к лю-бому соединению, композиции, смеси, совместной смеси или комбинации, которые ингибируют, уда-ляют, замедляют или меняют неопластический фенотип клетки.
Химиотерапия, хирургия, радиационная тера-пия, терапия с биологическими модификаторами ответа и иммунотерапия используются в настоящее время при лечении рака. Каждый вид терапии име-ет специфические указания, которые известны спе-циалистам в этой области, и один из видов терапии или все могут быть применены для достижения полного разрушения неопластических клеток. Хи-миотерапия, использующая один или больше крип-тофицинов, обеспечивается настоящим изобрете-нием. Кроме того, комбинация процессов химиоте-рапии, химиотерапии, использующей криптофици-ны в комбинации с другими неопластическими агентами, также обеспечивается объектом изобре-тения в виде комбинированной терапии, которая является обычно более эффективной, чем использо-вание единственных неопластических агентов. Таким образом, дальнейший аспект настоящего изобретения обеспечивает композиции, содержа-щие терапевтически эффективное количество, по крайней мере, одного нового криптофицинового соединения настоящего изобретения, включающего их нетоксичные соли присоединения, которые слу-жат для обеспечения вышеперечисленного тера-певтического благотворного влияния. Такие компо-зиции могут быть также обеспечены вместе с фи-зиологически подходящей жидкостью, гелем или твердыми носителями, разбавителями, адъюванта-ми и наполнителями. Такие носители, разбавители, адъюванты и наполнители могут быть найдены в United States Pharmacopeia Vol. XXII and National Formulary Vol.XVII. U.S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989), содержание которой вводится здесь ссылкой. Дополнительные формы обработки обеспечиваются в AHFS Drug Information, 1993 ed. by American Hospital Formulary Service, pp.522-660, содержание которой вводится здесь ссылкой.
Настоящее изобретение далее обеспечивает то, что фармацевтическая композиция, использо-ванная для лечения неопластического заболевания, содержит, по крайней мере, одно криптофициновое соединение и, по крайней мере, один дополнитель-ный противо-опухолевый агент. Противо-опухолевые соединения, которые могут быть ис-пользованы в комбинации с криптофицином, вклю-чают такие соединения, которые обеспечены в The Merck Index. 11th ed. Merck and Co., Inc. (1989) pp.Ther 16-17, содержание которой вводится здесь ссылкой. В другом варианте изобретения, противо-опухолевые агенты могут быть антиметаболитами, которые могут включать, но не ограничиваются ими, метотриксан, 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, цитозин арабинозид, гидроксимочевину и 2-хлордеоксиаденозин. В другом варианте настояще-го изобретения, противо-опухолевые агенты рас-сматривают алкилирующие агенты, которые могут включать, но не ограничиваются ими, циклофосфа-мид, мельфалан, бусульфан, параплатин, хлорам-буцил и азотную горчицу (nitrogen mustard). В дру-гом варианте объекта изобретения, противо-опухолевые агенты представляют растительные алкалоиды, которые могут включать, но не ограни-чиваются ими, винкристин, винбластин, таксол и этопсид. В другом варианте настоящего изобрете-ния, рассмотренные противо-опухолевые агенты представляют антибиотики, которые могут вклю-чать, но не ограничиваются ими, доксорубицин (адриамицин), даунорубицин, митомицин с и блео-мицин. В другом варианте объекта изобретения, рассмотренные противо-опухолевые агенты пред-ставляют гармоны, которые могут включать, но не ограничиваются ими, калустерон, диомоставолон, проипонат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолак-тон, тамоксифен, полиэстрадиол фосфат, мегесте-рол ацетат, флутамид, нилутамид и трилотан. В другом варианте объекта изобретения, рассмот-ренные противо- опухолевые агенты включают ферменты, которые могут включать, но не ограни-чиваются ими, L-Аспарагиназу или аминоакриди-новые производные, которые могут включать, но не ограничиваются ими, амсакрин. Дополнительные противо-опухолевые агенты включают те агенты, которые обеспечены в Skeel, Roland Т., “Противо-опухолевые лекарства и модификатор биологиче-ского ответа: классификация, применение и ток-сичность клинически полезных агентов”, Handbook of Cancer Chemotherapy (3rd ed.), Little Brown and Co. (1991), содержание которой вводится здесь ссылкой.
Криптофициновые соединения настоящего изобретения и композиции могут быть введены млекопитающим для ветеринарного использования, таким как домашние животные, и клинического использования для человека, способом аналогич-ным другим терапевтическим агентам. В основном, доза, требуемая для терапевтической эффективно-сти будет меняться в соответствии с типом исполь-зования и формой введения, а также конкретными требованиями индивидуальных хозяев. Обычно дозы будут находиться в области от около 0.001 до 1000 мг/кг, более обычно от 0.01 до 10 мг/кг веса тела хозяина. Или же дозы в пределах этих обла-стей могут быть введены путем постоянного влива-ния в течение более протяженного периода време-ни, обычно превышающего 24 часа, до того момен-та, когда будет достигнуто желаемое терапевтиче-ское воздействие. Действительно, лекарственная доза, а также путь введения должны быть выбраны на основании относительной эффективности, отно-сительной токсичности, характеристик роста опу-холи и влияния криптофицинов на клеточный цикл, лекарственные фармакокинетические характери-стики, возраст, пол, физическое состояние пациента и прежнее лечение.
Криптофициновые соединения с или без до-полнительных противоопухолевых агентов, могут быть составлены в терапевтические композиции в натуральном виде или в солевой форме. Фармацев-тически приемлемые, нетоксичные соли включают основные соли присоединения (полученные со свободными карбоксильными или другими анион-ными группами), которые могут быть получены из неорганических оснований таких как, например, гидроокиси натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изо-пропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и им подобных. Такие соли мо-гут быть также получены в виде кислых солей при-соединения с любыми свободными катионными группами и будут обычно образовываться с неор-ганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или органически-ми кислотами, такими как уксусная, щавелевая, винная, миндальная кислота и им подобными. До-полнительные наполнители, которые далее обес-печивает изобретение, представляют те наполни-тели, которые доступны специалистам в этой обла-сти, например, те, которые найдены в United States Pharmacopeia Vol. XXII and National Formulary Vol.XVII. U.S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989), содержание которой вводится здесь ссылкой.
Пригодность конкретного носителя для вклю-чения в данную терапевтическую композицию за-висит от предпочтительного пути введения. Например, противоопухолевые композиции могут быть составлены для орального введения. Такие композиции обычно готовятся либо в виде жидкого раствора, либо в виде суспензий или в виде твер-дых форм. Оральные композиции, обычно, вклю-чают такие обычно применяемые добавки, как свя-зующие, наполнители, носители, консерванты, стабилизирующие агенты, эмульгаторы, буферы и наполнители, такие как, например, фармацевтиче-ской марки маннитол, лактоза, крахмал, стеарат магния, натрий сахарин, целлюлоза, карбонат маг-ния и им подобные. Эти композиции готовятся в форме растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, подвергающихся высвобождению компози-ций, или порошков, и обычно содержат 1-95% ак-тивного ингредиента, предпочтительно, 2-70%.
Композиции настоящего изобретения могут быть также приготовлены в виде инъецируемых, либо в виде жидких растворов, суспензий, или эмульсий; твердых форм, пригодных для растворе-ния в, суспендирования в, или могут быть приго-товлены жидкими до инъецирования. Такие инъек-ции могут быть введены подкожно, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, внутритрахе-ально или внутриплеврально. Активный ингреди-ент или ингредиенты часто смешиваются с разба-вителями или наполнителями, которые являются физиологически толерантными или совместимыми с активным ингредиентом(тами). Пригодные разба-вители и наполнители являются, например, водой, солевым раствором, декстрозой, глицерином или им подобными и их комбинациями. Кроме того, если желательно, композиции могут содержать минимальные количества вспомогательных ве-ществ, таких как смачивающие или эмульгирую-щие агенты, стабилизирующие или рН буферные агенты.
Изобретение далее обеспечивает способы для использования криптофициновых соединений, объ-единенных общим типом структуры, для ингибиро-вания пролиферации клеток млекопитающего за счет контактирования этих клеток с криптофицино-вым соединением в количестве, достаточном для ингибирования пролиферации клетки млекопита-ющего. Предпочтительный вариант представляет способ ингибирования пролиферации гиперпроли-феративных клеток млекопитающего. Для целей этого изобретения, “гиперпролиферативные клетки млекопитающего” представляют клетки млекопи-тающего, которые не подвергаются характерным ограничениям роста, например, запрограммиро-ванной клеточной смерти (апоптозу). Другой пред-почтительный вариант представляет вариант, ко-гда клетка млекопитающего является человеческой. Изобретение далее обеспечивает контактирование клетки млекопитающего с, по крайней мере, одним криптофициновым соединением и, по крайней мере, с одним дополнительным противоопухолевым агентом. Типы рассмотренных противоопухолевых агентов являются такими же как те, которые рас-крывались здесь выше.
Изобретение далее обеспечивает способы ис-пользования криптофициновых соединений, объ-единенных общим типом структуры, для ингибиро-вания пролиферации гиперпролиферативных кле-ток с фенотипами сопротивления лекарству, вклю-чающему соединения с множеством фенотипов сопротивления лекарству, за счет контактирования указанной клетки с криптофициновым соединением в количестве, достаточном для ингибирования про-лиферации гиперпролиферативных клеток млеко-питающего. Предпочтительный вариант представ-ляет вариант, когда клетка млекопитающего явля-ется человеческой. Изобретение далее обеспечива-ет контактирование клетки млекопитающего с криптофициновым соединением и, по крайней мере, одним дополнительным противоопухолевым аген-том. Типы рассмотренных противоопухолевых агентов представляют такие как те, которые рас-крыты здесь выше.
Изобретение далее обеспечивает способ об-легчения патологических состояний, вызванных гиперпролиферирующими клетками млекопитаю-щего, например, неоплазии, путем введения субъек-ту эффективного количества фармацевтической композиции, обеспеченной здесь выше, для ингиби-рования пролиферации гиперпролиферирующих клеток. Термин “патологическое состояние”, как он использован здесь, относится к любой патологии, возникающей при пролиферации клеток млекопи-тающего, которые не подвергаются нормальным ограничениям клеточного роста. Такая пролифера-ция клеток может быть обусловлена опухолями, включающими, но не ограничивающимися ими, следующие опухоли: молочной железы, мало- ка-мерного легкого, не-мало-камерного легкого, кало-ректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который вклю-чает панкреатический гастрит и желудочный га-стрит, желудка, миеломы, мочевого пузыря, ре-нальной нейроэндокринии, которая включает щи-товидную железу и неоплазмы, не связанные с за-болеванием Ходкинса, и неоплазмы, связанные с заболеванием Ходкинса. В другом варианте изоб-ретения, опухолевые клетки являются человече-скими. Настоящее изобретение обеспечивает далее способы облегчения таких патологических состоя-ний, используя криптофицин в комбинации с другой терапией, а также с другими противоопухолевыми агентами. Такие терапии и их соответствие различ-ным опухолям могут быть найдена в Cancer Principles and Practice of Oncology. 4th.ed/, Editors De Vita, V.,Hellmann,S. and Rosenberg,S., Lippincott Co. (1993), содержание которой вводится здесь ссыл-кой.
В настоящем изобретении криптофициновые соединения проявляются в сильно нарушенной микротрубочковой структуре в культивированных клетках. Кроме того, в противоположность алкало-идам Vinca криптофициновые соединения являются очевидно, плохими субстратами для оттока лекар-ства из Р- гликопротеина. Криптофицин 1 является наиболее цитотоксичным для штамма зелено-голубых водорослей (цианобактерий) Nostoc sp., обозначенного как GSV 224 и проявляет превос-ходную активность по отношению к опухолям, имплантированным мышам. Этот циклический дидепсипептид был ранее выделен из Nostoc sp. АТСС №.53789 в качестве противогрибкового аген-та и его полная структура была определена ранее. Относительная и абсолютная стереохимия этого потенциально важного лекарства была установле-на с использованием комбинации химических и спектральных методов. Двадцать четыре дополни-тельных криптофициновых соединения, Криптофи-цины 2-7, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, также были выделены из GSV 224 и опре-делены их полные структуры и цитотоксичность. Некоторые производные и продукты деструкции описываются с химической и фармацевтической точки зрения.
Следующие примеры служат для иллюстра-ции определенных предпочтительных вариантов и аспектов настоящего изобретения и не рассматри-ваются, как ограничивающие объем изобретения.
Экспериментальная часть.
В описании экспериментальной части, кото-рая следует далее, все веса даются в граммах (г), миллиграммах (мг), микрограммах (мкг), нанограм-мах (нг), пикограммах (пкг), молях (моль) или мил-лимолях (ммоль), все концентрации даются в виде объемных процентов (%), молярных (М), миллимо-лярных (мM), микромолярных (мкМ), наномоляр-ных (нМ), пикомолярных (пкМ) или нормальных (н), все объемы даются в литрах (л), миллитри-ах(мл) или микролитрах (мкл) и линейные измере-ния в миллиметрах (мм), если не оговорено особо.
Следующие примеры иллюстрируют выделе-ние и синтез криптофициновых соединений, а также их применение в качестве терапевтических агентов в соответствии с изобретением.
В экстрактах около 1000 зелено-голубых во-дорослей (цианобактерий), подвергнутых испыта-нию на противоопухолевую активность, было найдено, что липофильный экстракт Nostoc sp. GSV 224 обладает наиболее сильной цитотоксично-стью3, проявляя минимальные ингибирующие кон-центрации (MICs) 0.24 нг/мл против КB, против человечесокй линии клеток назофарингиальной карциномы, и 6 нг/мл против LoVo, человечесокй линии клеток калоректальной аденокарциномы. Более важно, что этот экстракт проявляет значи-тельную селективную цитотоксичность к опухоли в анализе Corbett. Биоанализ, регистрируемый с помощью хроматографии с обращенной фазой, водорослевого экстракта приводил к фракции, ко-торая преимущественно представляла Криптофи-цин 1, мощный фунгицид, который быыл выделен ранее из Nostoc sp. АТСС 53789 исследователями фирмы Merck и было найдено, что он является очень активным против штаммов Cryptococcus.
Криптофицин 1 являлся ответственным за большую часть цитотоксичной активности неочи-щенного водорослевого экстракта Nostoc sp. GSV 224 и чистого соединения, показывая величины IC50 3 и 5 пкг/мл против КB и LoVo, соответственно. В анализе Corbett было найдено, что Криптофицин 1 являлся высоко селективным к опухоли и в равной степени цитотоксичным против чувствительности к лекарству и против сопротивления лекарству опу-холевых клеток. Иммунофлуоресцентный анализ показывает, что Криптофицин 1 взаимодействует с клеточной мишенью подобно тому, как это имеет место с винбластином, но отличается от последне-го лекарства тем, что обладает более продолжи-тельным временем действия и не образует паракри-сталлических тел. В предварительных эксперимен-тах in vivo Криптофицин 1 проявляет очень обе-щающую активность против опухолей, импланти-рованных мышам.
Минимальные количества некоторых других криптофициновых соединений присутствовали в Nostoc sp. GSV 224. Двадцать одно из этих соеди-нений может быть выделено в достаточных коли-чествах для определения структуры и противоопу-холевой оценки in vitro путем экстракции водорос-лей смесью 1:5 дихлорметана/ацетонитрила и жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой экстракта. Криптофицины 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 24, 26, 28, 29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, сопровождающие Криптофицин 1, в фракции, элюированной из флеш колонки с обра-щенной фазой смесью 65:35 ацетонитрил/вода. Криптофицины 2, 3, 4, 5, 6 и 7 были найдены толь-ко, если водоросли экстрагировали метанолом и хроматографию с обращенной фазой проводили в смеси метанол/вода. Криптофицины 2, 3, 4, 5 и 6 были элюированы смесью 3:1 метанол/вода и Криптофицин 7, найденный в более ранней, менее токсичной фракции, элюировали смесью 1:3 мета-нол/вода. Ациклические Криптофицины 5, 6 и 7 являлись случайными продуктами, генерирован-ными за счет разложения Криптофицина 1 в про-цессе процедуры выделения.
Криптофицины 3 и 5 были идентичными с фунгицидными полу- синтетическими соединения-ми, приготовленными из Криптофицина 1, исследо-вателями фирмы Merck8,9. Криптофицин 3 был при-готовлен обработкой Криптофицина 1 цинк-медной парой или дифосфортетраиодидом8. Криптофицин 5 был приготовлен метанолизом Криптофицина 19.
Пример 1 Определение структуры
Определение структур новых соединений, а именно Криптофицинов 2, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 24, 26, 28, 29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, а также тех, которые были раскрыты ра-нее, было проведено прямым способом с использо-ванием методологии, которая является хорошо известной специалистам в этой области. Масс спектральные данные согласовывались с молеку-лярными составами. Данные протонного магнитно-го резонанса и углеродного ядерного магнитного резонанса, полученные из COSY, HMQC, НМВС и NOESY спектров позволяют собрать все основные структуры этих депсипептидного типа соединений. Присутствие различных гидроксильных и амино-кислотных звеньев в каждом соединении были под-тверждены с помощью газохроматографического масс спектрального анализа. Полные структуры, включающие абсолютную стереохимию, были определены с использованием комбинации методов химической деструкции и спектрально аналитиче-ских методов соответствующих производных крип-тофициновых соединений.
Пример 2 Зависимости структура-активность (SAR)
Для изучения структурных характеристик Криптофицина 1, необходимых для оптимальной активности, все соединения, описанные здесь, были оценены на цитотоксичность по отношению к ли-нии клеток KB (человеческой назофарингиальной карциномы), по отношению к LoVo, (человеческой карциномы ободочной (толстой) кишки) и SKOV3 (яичниковой человеческой карциномы). Величины IC50 приведены в Таблицах 1 и 2. Сравнение цито-токсичности показывает, что интактное (неактив-ное) макролидное кольцо, эпокси и метильные группы и двойная связь в 7,8-эпокси-5-гидрокси-6-метил-8-фенил-2-октеновом кислотном звене (смот-ри звено А на Фигуре 1), хлор и O-метильных груп-пах в 3- (3-хлор-4-метоксифенил)аланиновом звене (звено В), метильной группе в звене 3-амино-2-метилпропионовой кислоты (звено С), и изобутиль-ной группе в звене лейциновой кислоты (звено D) Криптофицина 1, являются необходимыми для оптимальной цитотоксичности. Сильная цитоток-сичность Криптофицина 8, наиболее вероятно, обусловлена хлоргидриновой функциональностью, которая выступает в качестве маскирующего аген-та эпоксида.
Наиболее активные соединения были также оценены на селективную цитотоксичность против четырех различных типов клеток, а именно, мыши-ной лейкемии (L1210 или Р388), мышиной твердой опухоли (аденокарциномы толстой кишки 38, пан-креатической аденокарциномы протоки 03, адено-карциномы молочной железы М16/М17), человече-ской твердой опухоли (толстой кишки СХ-1, НСТ8, H116; легкого Р125; молочной железы МХ-1, MCF-7) и фибробласта (LML) со слабым злокачествен-ным развитием с использованием анализа Corbett4, диффузного дискового анализа, смоделированного после анализа, обычно используемого в противо-грибковом и противобактериальном испытании.
Результаты, показанные в Таблице 1, свиде-тельствуют о том, что Криптофицины 1-5 и 8 не являются селективными ни по отношению к твер-дой опухоли, ни по отношению к лейкемии, но го-раздо более активны против линий клеток опухоли, включая те линии клеток опухоли, которые оказы-вают сопротивление лекарству. такие как М17. Ни одно из соединений не проявляет зоны ингибирова-ния для любых линий клеток твердой опухоли, такой зоны, которая составляла бы зону из 250 единиц, т.е. 7.5 мм, больше чем зона ингибирования для линии клеток лейкемии. Криптофицины 1-5 и 8, однако, проявляют заметно большие зоны ингиби-рования (зону из 400 единиц) для всех линий клеток опухоли, по сравнению с зоной ингибирования для фибробласта LML.
Диагностически было найдено, что LML ведет себя в большей степени как нормальная клетка, а не как опухолевая клетка по отношению к клиниче-ски полезным цитотоксичным агентам (смотри данные анализа Corbett для 5-фторурацила, этоп-сида и таксола в Таблице 1). Так как различные цитотоксичности были для зоны больше 250 еди-ниц, Криптофицины 1-5 и 8 были селективны к опу-холи. Поэтому эти соединения стали кандидатами для испытания in vivo.
Криптофицин 1 является активным против ши-рокого спектра мышиных и человеческих опухо-лей, имплантированных мышам, включая опухоли сопротивления лекарству (Таблица 3). Криптофи-цин 1 проявляет превосходную активность против пяти ранних стадий мышиных опухолей, а именно, аденокарцином слепой кишки #38 и #51, опухоли молочной железы, чувствительной к таксолу и ока-зывающей сопротивление таксолу #16/C/RP, и панкреатической двойной аденокарциномы #03 и двух ранних стадий человеческих опухолей, испы-танных у мышей с (SCID)-тяжелым комбинирован-ным иммунодефицитом, а именно МХ-1 груди и Н125 аденосаркомы легкого, проявляющих вели-чины опухолевого предрасположения Т/С (среднее опухолевое предрасположение у обработанных животных/среднее опухолевое предрасположение у необработанных животных), которые составляют меньше чем 10%.
Величины Т/С, которые составляют меньше, чем 42% считаются активными согласно NCI стан-дартам; величины Т/С, которые составляют мень-ше, чем 10% считаются что имеют превосходную активность и потенциальную клиническую актив-ность согласно NCI стандартам4. Два из трех испы-таний показывают суммарные величины Log уни-чтожения (опухолевой клетки) 2.0. Суммарную величину Log уничтожения определяют в виде Т-С/3,2 Td, где Т представляет среднее время в сутках для опухолей обработанной группы для достиже-ния опухоли в 750 мг, С представляет среднее вре-мя в сутках для опухолей контрольной группы для достижения опухоли в 750 мг, и Td представляет время удвоения объема опухоли. Суммарные вели-чины Log уничтожения выше 2.8, 2.0-2.8, 1.3-1.9, 0.5-0.8 и ниже 0.5 с продолжительностью обработ-ки лекарством 5-20 суток считает ++++, +++, ++, + и - (неактивный), соответственно. Характеристика активности от +++ до ++++, которая является ука-занием клинической активности, является необхо-димой для частичного влияния или полной регрес-сии масс размером 100-300 мг большинства транс-плантированных твердых опухолей мышей.
Криптофицин 8 также является активным про-тив широкого спектра опухолей, трансплантиро-ванных мышам (Таблица 4). Он проявляет превос-ходную активность против всех испытанных на сегодняшний день опухолей, показывая величины опухолевого предрасположения Т/С меньше 10%, но более важно, суммарные характеристики актив-ности Log уничтожения от +++ до ++++ и в некото-рых случаях вылечивание.
Хорошая активность in vivo была также обна-ружена с Криптофицином 35 в одном испытании, которое было проведено на сегодняшний день.
Летальная токсичность, наблюдавшаяся в процессе испытаний Криптофицинов 1 и 8, была приписана лейкопении, которая является обычной для всех клинически используемых противоопухо-левых лекарств.
Пример 3 Состояния культуры
Nostoc sp. GSV 224 был получен от профессо-ра C.P.Wolk, MSU-DOE Plant Research Laboratory, Michigan State University. Nostoc sp. ATCC 53789 был куплен у American Туре Culture Collection. Бы-ла использована 1 л склянка культуры водорослей для инокулирования автоклавированной 20 л стек-лянной емкости, содержащей неорганическую сре-ду, обозначенную BG-113, рН которой была дове-дена до 7.0 NaOH. Культуры непрерывно облучали светом с интенсивностью падающего света 200 мкмолей фотонов м-2 сек-1 (фотосинтетически ак-тивного излучения) от скамьи флуоресцентных трубок холодного белого свечения и аэрировали со скоростью ил/мин смесью СО2 и воздуха при тем-пературе 24° +/- 1°С. Обычно культуру собирали фильтрованием через 21 день. Выходы лиофилизо-ванного Nostoc sp. GSV 224 и АТСС 53789 в сред-нем составляли 0.61 и 0.3 г/л культуры, соответ-ственно.
Пример 4 Выделение
Способ А: Лиофилизованный Nostoc sp. GSV 224 экстрагировали 2 л смеси 1:5 CH2CI2/CH3CN в течение 48 часов и экстракт концентрировали в вакууме, получая темно-зеленое твердое вещество. Остаток (1 г; KB MIC 0.24 нг/мл) был помещен в кремниевую колонку, покрытую ODS (55 г, 7х5 см) и подвергнут флеш хроматографии смесью 1:3 CH3CN/H2O (0.8 л), 1:1 CH3CN/H2O (0.8 л), 65:35 CH3CN/H2O (1.0 л), МеОН (0.8 л) и СН2СI2 (0.5 л). Фракция, которая была элюирована 65:35 CH3CN/H2O (420 мг KB MIC 14 пкг/мл) была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil С18, 10 мк, 25 см х 21.5 мм, УФ детектиро-вание при 250 нм, 65:35 CH3CN/H2О, скорость по-тока 6 мл/мин) с получением Криптофицина 1 (tR 49.3 мин, 220 мг) и ряда примесных фракций. Фрак-ция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 28.8 мин, была далее очищена с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии с нор-мальной фазой (силикагель Econosil 5 мк картридж, 250 х 4.6 мм, 6:4 этилацетат/гексан, 3 мл/мин) с получением Криптофицина 16 (3.0 мг). Фракция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 32.5 мин, была подвергнута обработке с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии на ко-лонке силикагель Econosil с использованием смеси 55:45 этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 24 (0.8 мг). Фракция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 35.5 мин, была дважды подвергнута обработке с помо-щью жидкостной гель проникающей хроматогра-фии на колонке силикагель Econosil сначала с ис-пользованием 1:1 смеси этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин и затем с использованием смеси 4:6 этилацетат/метиленхлорид при скорости 2.5 мл/мин с получением Криптофицина 23 (1.2 мг) и Криптофицина 43 (0.1 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 39.5 мин, была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии на колонке силика-гель Econosil с использованием 1:1 смеси этилаце-тат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 2 (6 мг) и Криптофицина 21 (14 мг) и комплексной смеси криптофицинов, элюированных при tR 32.5 мин. Эта последняя фракция, собранная из 400 г сухих водорослей, была подвергнута хро-матографированию на селективной полупрепара-тивной колонке (partisil C18, 250 х 9.4 мм, 10 мк) смесью 65:35 вода/ацетонитрил и аналитической колонке с обращенной фазой (Econosil, 150 х 4.6 мм, 5 мк) смесью 5:4:1 вода/ацетонитрил/метанол при скорости 1.3 мл/мин с получением Криптофи-цина 50 (tR 34.8, 0.4 мг) и Криптофицина 40 (tR 38.8 мин, 0.3 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 44.5 мин, была дважды под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии на колонке силика-гель Econosil 1:1 смесью этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 17 (0.3 мг). Очистка с помощью жидкостной гель про-никающей хроматографии с нормальной фазой, фракции, элюированной из Econosil C18 колонки при tR 54.5 мин, в виде плеча к Криптофицину 1, давала Криптофицин 45 (tR 6.7 мин, 0.1 мг), Крип-тофицин 26 (tR 8.9 мин, 0.5 мг) и Криптофицин 54 (tR 19.8 мин, меньше 0.1 мг) с элюированием смесью 1:1 этилацетат/гексан. Фракцию, элюированную из Econosil C18 колонки в виде широкого пика (tR 58 до 70 минут) подвергали анализу с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии на Econosil силикагелевой колонке с 43:57 этилаце-тат/гексан при 2,5 мл/мин, с получением Крипто-фицина 4 (tR 19.6 мин., 1,5 мг), Криптофицина 31 (tR 9.4 мин., 0.8 мг), Криптофицина 19 (tR 25/8 мин., 1,5 мг), Криптофицина 40 (tR 28 мин., 0,1 мг), Крипто-фицина 28 (tR 29.0 мин., 0,5 мг) и примеси Крипто-фицина 29 (tR 52.5 мин., 2,0 мг) и Криптофицина 30 (tR 49 мин., 3.0 мг). Чистые Криптофицины 29 и 30 получали после обработки с помощью гель прони-кающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil C18, 10 мк, 250 х 10 мм, 3:1 метанол/ во-да). Фракция, элюированная из Econosil C18 колон-ки при tR 78.9 мин., была подвергнута обработке с помощью гель проникающей хроматографии на Econosil силикагелевой колонке с получением Криптофицина 3 (tR 16.4 мин., 3.0 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 82.8 мин, была подвергнута обработке с помощью гель проникающей хроматографии на Econosil силика-гелевой колонке с 45:55 этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин, и давала Криптофицин 18 (tR 19.2, 0.8 мг).
Способ Б:
Лиофилизованный Nostoc sp. GS V 224 (12.23 г) был дважды проэкстрагирован 700 мл и 400 мл порциями МеОН в течение 12 и 5 часов (h), соот-ветственно. Экстракты объединяли и концентриро-вали в вакууме с получением 1,84 г темнозеленого твердого вещества, которое было распределено между водой и CH2Cl2. Липофильную часть (0,65 г, КB MIС 0,24 нг/мл) загружали в ODS - покрытую силикагелевую колонку (55 г, 7 х 5 см) и подверга-ли флеш хроматографированию с 1:3 МеОН/Н2О, 1:1 МеОН/Н2О (0,8 л), 3:1 МеОН/Н2О (0,8 л), МеОН (0,8 л) и СН2Cl2 (0,5 л). Фракция, которая была элюирована 3:1 МеОН/Н2О (22 мг, KB MIC 14 пкг/мл), которая считалась, по существу, вся обла-дающая цитотоксической активностью, была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil C18, 10 мк, 250х10 мм, обнаружение с помощью УФ при 250 нм, скорость потока 3 мл/мин) с использованием 1:5 МеОН/Н2О в каче-стве элюэнта, давала Криптофицины 7 (tR 7.6 мин., 0,2 мг), 5 (tR 15.4 мин., 2,3 мг), 2 (tR 16.0 мин., 1,0 мг), 1 (tR 19.0 мин., 12.0 мг), 4 (tR 26.5 мин., 1,2 мг) и 3 (tR 30.2 мин., 1,4 мг). Фракция (8.1 мг), которая элюи-ровалась из флеш колонки с помощью 1:3 Ме-ОН/Н2О, из одной из культур, проявляла среднюю цитотоксичность (KB MIC 2 мкг/мл). Очистка с помощью жидкостной гель проникающей хромато-графии с использованием 2:3 МеОН/Н2О в качестве элюэнта давала Криптофицин G (7., tR 6.0 мин., 2.4 мг).
Пример 5.
Spectral data for Cryptophycins 1-7
The bold italicized letters in the spectral data refer to the units A-D in Figure 1.
Криптофицин 1
[]D + 33,8 (MeOH, c 1.83); УФ max () 208 (42,400), 218 (33,700), 228 (23,800), 280 (2,210); CD[]202 + 15,900, []206 + 64,900 + 64,900 []214 + 26,900, []224 + 46,300, []237 + 10,500, ИК (CHCI3) max 3425, 2963, 1751, 1719, 1677, 1502, 1259 cм-1. EIMS m/z (относит. интенсивность) 654/656 (20/9), 412/414 (33/12), 280/282 (31/12), 227 (80), 195/197 (92/44), 91 (100), высокого разрешения EIMS m/z 654,2665 (рассчитано для С35H43CIN2O3, 4.3 mmu ошибки). 1H NMR (CDCl3): амино или окси кислот-ное звено (положение углерода, мулиплетность 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5,74 (2, dt; 15,5 и 0,9), 6,68 (3, ddd; 15,5, 9,6 и 5,2), 2,45 (4, ddd; 14.2, 11.1 и 9.6), 2,55 (4, brdd; 14.2 и 5.2), 5,16 (5 ddd; 11.1, 4.9 и 1.9), 1.80 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.1), 2.92 (7, dd, 7.5 и 2.0), 3,69 (8, d; 2.0), 7,25 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); лейци-новая кислота (D) 4.83 (2, dd: 6.8 и 3.3), 1.70 (3, m), 1.36 (3, m), 1.70 (4, m), 0.86 (5, d; 6.6), 0.85 (4-Me, d; 6.6); 3-амино-2-метилпропиленовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.30 (3, ddd; 13.4, 5.8 и 3.8), 3.48 (3, ddd; 13.4, 6.3 и 5.8), 6.93 (3-NH, brt; 5.8); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4,80 (2, ddd; 8.7, 7.3 и 5.4), 5.61 (2-NH, d; 8.7), 3.03 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3.13 (3, dd; 14.4 и 5.4), 7.21 (5, d; 2.1), 3,87 (7-OCH1, s), 6.83 (8, d; 8.5), 7.07 (9, dd; 8.5 и 2/1). 13C NMR (CDCl3): звено (положение углерода) А 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.2 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); D 170.7 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Me); C 175.6 (1), 38.2 (2), 14.1 (2-Me), 41.1 (3); B 170.9 (1), 53.6 (2), 35.0 (3), 129.7 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-OCH3), 112.2 (8), 128.4 (9).
Криптофицин 2
[]D + 20,4 (MeOH, c 0,54); УФ max () 206 (43,800), 218 (37,500), 232 (22,900), 278 (2,410); CD []203 +54.100, []212 + 16,500, []225 + 53,600, []236 - 14,000, ИК (СHCl3) max 3423, 3029, 2961, 1742, 1724, 1678, 1512, 1258 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 620 (11, М+), 431 (3), 378 (8), 377 (6), 311 (11), 246 (10), 244 (8), 227 (14), 195 (17), 161 (84, CH3O-C6H4-CH=CH=CO+), 121 (79, CH3O - C6H4-CH2+), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 620.3094 (рассчи-тано для С55H44N2O8, 0,3 mmu ошибки); 161,0605 (рассчитано для С10Н9О2, - 0,2mmu ошибки); 121,0658 (рассчитано для C8H9O, - 0,4 mmu ошиб-ка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.71 (2, dd; 15.4 и 1.3), 6.70 (3, ddd; 15.4, 10.2 и 5.0), 2.45 (4, m), 2.55 (4, m), 5.18 (5, ddd; 11.3, 4.8 и 2.0), 1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.7 и 2.0), 3.68 (8, d; 2.0), 7.24 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); лейциновая кислота (D) 4,82 (2, dd; 10.1 и 3.7), 1.70 (3, m), 1.33 (3, m), 1.70 (4, m), 0.86 (5, d; 6.4), 0.84 (4-Me, d; 6.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.68 (2, m), 1.23, (2-Me, d; 7.3), 3.39 (3-H2, m), 7.02 (3-NH, brt; 6.0); O-метилтирозин (В) 4.79 (2, ddd; 8.1 7.0 и 5.7), 5.55 (2-NH, d; 8.1), 3.07 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.7), 7.10 (5/9, d; 8.6), 6.81 (6/8, d; 8.6), 3.78 (7-OCH3, s). 13C NMR (CDCl3): звено (положение углерода) А 165.1 (1), 125.1 (2), 141.1 (3), 36.7 (4), 76.0 (5), 40.7 (6), 13.6 (6-Ме), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 21.3 (5), 22.9 (4-Me); C 176.0 (1), 38.1 (2), 14.2 (2-Me), 40.7 (3); B 171.1 (1), 53.9 (2), 35.3 (3), 131.0 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6,8), 158.6 (7), 55.2 (7-OCH3).
Криптофицин 3
[]D + 20,3 (MeOH, с 1,13); УФ max () 206 (51,700), 218 (31,200), 230
(22,900), 246 (18,800), 280 (3,230); CD []205 +50.000, []212 -390, []218 -47,200, []233-100, []251 +33,400, []271 +4,310. ИК (СНСl3) max 3417, 2926, 1742, 1721, 1676, 1499, 1336 cм-1. EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 638/640 (2/0.7, M+), 412/414 (63/19), 280/282 (15/5), 227 (100), 195 (63), 91 (98), высокое разрешение EIMS m/z 638.2764 (рассчи-тано для C35H43CIN2O7, -0.5mmu ошибка), 412.1516 (рассчитано для C20Н27CINO6, 1.1 mmu ошибка), 227.1293 (рассчитано для С15Н17NO, 1.0 mmu ошибка). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.77 (2, d, 15.5), 6.68 (3, ddd; 15.5, 9.5 и 5.3), 2.37 (4, m), 2.54 (4, m), 5.01 (5, ddd; 11.4, 6 и 1.5), 2.56 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 6.01(7, dd, 15.8 и 8.8), 6.41 (8, d; 15.8), 7.28-7.34 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.1 и 3.6), 1.62 (3, m), 1.36 (3, m). 1.62 (4, m), 0.77 (5, d; 6.5), 0.73 (4-Me, d; 6.3), 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71(2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.28 (3, dt; 13.5 и 7.0), 3.50 (3, ddd; 13.5, 4.9 и 4), 6.93 (3-NH, brt; 6.3); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.8), 3.05 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.5), 7.22 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОСН3, s). 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 и 2.2). 13С NMR (CDCl3): звено (положе-ние углерода) A 165.4 (1), 125.2 (2), 141.4 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Ме), 130.0 (7), 130.0 (8), 136,7 (9), 126.1 (10/14), 128.6 (11/13), 128.4 (12), D 170.1 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Ме); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме), 41.2 (3); В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.1 (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-ОСН3), 112.2 (8), 127.6 (9).
Криптофицин 4
[]D + 36.7 (MeOH, с 1.93); УФ max () 206 (41,800), 228 (25,000), 240 (21,200), 248 (22,500), 280 (3,000), 290 (1,230); CD []205 + 63.900, []711 +3,040, []218 -71,900, []229 -11,700, []234 -130, []252 + 47,500, []270 + 5,400. ИК (СНСI3) max 3410, 2962, 2917, 1741, 1718, 1678, 1511, 1251 cм-1. EIMS m/z (относит.интенсивность) 604 (2, M+), 378 (74), 246 (11), 227 (46), 161 (100), 91 (96), высокое разреше-ние EIMS m/z 604.3127 (рассчитано для C35H44N2O7, 2,2 mmu ошибка), 378.1910 (рассчитано для С20Н28NO6, 0,7mmu ошибка), 227.1293 (рассчитано для C15H17NO, l,7mmu ошибка), 161.0605 (рассчи-тано для С10Н9О2, - 0.2mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (А) 5.74 (2, dd; 15.3 и 1.2), 6.71 (3, ddd; 15.3, 10.3 и 5.0), 2,37 (4, m), 2.53 (4, m), 5.03 (5, ddd; 11.2, 6.4 и 2.0), 2.55 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.8), 6.01 (7, dd; 15.8 и 8.8), 6.40 (8, d; 15.8), 7.28-7.37 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.1 и 3.6), 1.65 (3, m), 1.34 (3, m), 1.65 (4, m), 0.75 (5, d; 6.5), 0.72 (4-Me, d; 6.3); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.69 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.5), 3.39 (3-H2, m), 7.03 (3-NH, brt; 6.0); O-метилтирозин (В) 4.79 (2, m), 5.61 (2-NH, d; 7.8), 3.08 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.3), 7.11 (5/9, d; 8.8), 6.81 (6/8, d; 8.8), 3.78 (7-ОСН3, s). 13С NMR (CDCl3): звено (положе-ние углерода) A 165.3 (1), 125.1 (2), 141.5 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.7 (11/13), 127.6 (12), D 170.8 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Me); С 175.9 (1), 38.2 (2), 14.2 (2-Me), 40.9 (3), В 171.2 (1), 53.8 (2), 35.3 (3), 131.0 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6/8), 158.6 (7), 55.2 (7-ОСН3).
Криптофицин 5
[]D + 36,0 (MeOH, с 0,55); УФ max () 206 (45,600), 218 (37,700), 280 (3,790), 286 (3,480), 325 (2,080), CD []203 +7,710, []206 +29,000, []210 +21.400, []222 +59.800, []234 +12.800, []241 +13.700. ИК (СНСl3) max 3426, 2958, 1728, 1672, 1502, 1259 cм-1. EIMS m/z (относит.интенсивность) 686/688 (0.15 10.05), 655/657 (1/0,3), 654/656 (1,5/0,5), 311/313 (75/27),195 (66), 155 (54), 121 (51), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 686.2983 (рассчи-тано для C36H47CIN2O9, - 1,3 mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода; мультиплетность J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.87 (2, d; 15.3), 6.72 (3, dt; 15.3 и 6.8), 2.60 (4, m), 2.52 (4, ddd; 15.2, 7.8, и 6.8), 5.11 (5, ddd; 12.3, 7.8, и 7.1), 1.87 (6, m), 1.12 (6-Me, d; 7.1), 2.91 (7, dd; 7.3 и 2.1), 3.70 (8, d; 2.1), 7.24 (10/14, brd; 7.4), 7.29-7.36 (11/12/13, m); лейциновая кислота (D) 4.09 (2, m), 2.86 (2-OH, brd, 6.1), 1.83 (3, m), l.42 (3, m), 1.86 (4, m), 0.90 (5, d; 6.6), 0.87 (4-Me, d; 6.8); 3-амино-2-метилпропленовая кислота (С) 3.64 (1-ОСН3, s), 2.60 (2, m), 1.07 (2-Me, d; 7.3), 3.27 (3, ddd; 13.5, 8.0 и 5.5), 3.39 (3, m), 6.32 (3-NH, t; 5.4); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.59 (2, dt; 6 и 7.5) 6.30 (2-NH, d; 7.5), 2.95 (3, dd; 13.6 и 7.5), 3.0 (3, dd; 13.6 и 6.0), 7.2 (5, d; 2.1), 3,86 (7-ОСH3, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.05 (9, dd; 8.5; 2.1). 13С NMR (CDCl3): звено (по-ложение углерода) A 164.8 (l), 126,5 (2),139.2 (3), 34.4 (4), 75.5 (5), 39.2 (6), 12.9 (6-Me), 63.3 (7), 58.7 (8), 136.8 (9), 125.7 (10/14), 128.6 (11/13), 128.4 (12); D 175.1 (1), 69.2 (2), 43.2 (3), 24.3 (4), 21.2 (5), 23.2 (4-Me); С 175.4 (1), 51.9 (1-OMe), 39.1 (2), 14.7 (2-Me), 41.6 (3); B 170.6 (1), 54.6 (2), 37.4 (3),129.5 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.1 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.2 (8), 128.4 (9).
Криптофицин 6
[]D + 17,1 (MeOH, с 1,1); УФ max () 206 (40,000), 218 (30,100), 228 (21,400), 282 (2,430); CD []203 +37,700, []210 - 5,430, []213 -1,260, []221 +24,100, []232 +8,480, []240 +13,400, []254 +790, ИК (CHCl3) max 3425, 3006, 2956,1726, 1672,1641,1502,1462,1259 см-1, FABMS (тиоглице-рин) m/z, (относит.интенсивность) 573/575 (13/6) [M-H2O]+, 217 (26), 91 (100). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислотное зевно (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 5, 7,8-триокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.92 (2, dt, 15.0 и 1.5), 6.94 (3, dt; 15 и 7.5), 2.51 (4, m), 2.64 (4, m), 3.97 (5, ddd; 9.3, 6.5 и 4.5), 2.03 (6, m), 1.10 (6-Me, d; 6.5), 3.70 (7, dd; 9.0 и 7.5), 4.64 (8, d; 7.5), 7.33-7.39 (10/11/13/14, m), 7.28 (12, tt; 6.5 и 2.0); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.60 (2, td; 8.0 и 6.0), 6.09 (2-NН, brd; 8.0), 2.96 (3, dd; 13.8 и 8,0), 3.02 (3, dd; 13.8 и 6.0), 7.22 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОСН3 s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.07 (9, dd; 8.5 и 2.0) 3-амино-2-метилпропионовая кислота (C) 3.63 (1-OCH3, s), 2,58 (2, m), 1,07 (2-Me, d; 7,0), 3.24 (3, ddd; 13.8, 8 и 6.5), 3.41 (3, ddd; 13.8, 6.5 и 4.8), 6.21 (3-NH, brt; 6,5). 13С NMR (CDCl3): звено (положение углеро-да) А 165.2 (1), 125.6 (2), 141.3 (3), 36.9 (4), 82.5 (5). 46.3 (6), 14.3 (6-Ме), 85.1 (7), 84.8 (8), 140.9 (9), 125.8 (10/14), 128.6 (11/13). 127.8 (12); В 170.6 (1), 54.5 (2), 37.3 (3), 129.6 (4),131.0 (5), 122.5 (6), 154.1 (7), 56.1 (7-ОСН3), 112.2 (8), 128.5 (9) С 52.0 (1-ОСН3), 175.4 (1), 39.2 (2), 14.7 (2-Ме), 41.6 (3).
Криптофицин 7
[]D + 51,9 (MeOH, с 0,89); УФ max () 206 (23,400), 220 (14,900), 282 (1,670), CD []202 +35,400, []206 -1,730, []211 -19,200, []220 -15,800, []232 +29,000, []263 +2,040. ИК (СНСl3) max 3426, 2946, 1732, 1675, 1501, 1258 cm-1. EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 455/457 (1/0.3, [М-2Н2О]+), 105 (100), 77 (98); FAВMS m/z (magic bullet matrix) 496/498 [M-H2O+Na]+, (тиоглицериновая матрица) 474/476 [M-H2O1+H]+. 1H NMR (CD3OD): амино или оксикислотное звено (положение углерода, муль-типлетность; J in Hz) 5,7,8-триокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 6.06 (2, ddd; 15.5, 1.3 и 1.0), 6.80 (3, dt, 15.5 и 7.5), 2.49 (4, m), 2.59 (4, m), 3.92 (5, ddd; 9,5, 6.3 и 4.7), 1.95 (6, m), 1.08 (6-Me, d; 6.7), 3.59 (7, dd; 9.0 и 7.8), 4.56 (8, d; 7.8), 7.37 (10/14, brd; 7.3), 7.31 (11/13, brt; 7.3), 7.24 (12, tt, 7.3 и 1.5), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.52 (2, dd; 6.9 и 5.0), 2.93 (3, dd; 13.8 и 6.9), 3.15 (3, dd; 13.8 и 5.0), 7.20 (5, d; 2.2), 3.78 (7-ОСН3, s), 6.88 (8, d; 8.4), 7.08 (9, dd; 8.4 и 2.2). 13С NMR (CD3ОD): звено (положение углерода) A 167.4 (1), 127.6 (2), 140.9 (3), 37.9 (4), 84.0 (5), 47.6 (6), 14.4 (6-Me), 86.0 (7), 85.8 (8), 142.9 (9), 127.1 (10/14), 129.3 (11/13), 128.5 (12), В 177.6 (1), 57.3 (2), 38.2 (3), 132.8 (4), 132.1 (5), 122.9 (6), 155.0 (7), 56.5 (7-ОСН3), 113.2 (8), 130.1 (9).
Криптофицин 16
[]D + 41,3 (MeOH, с 5,2); УФ max () 242 (4963), 280 (2430), 286 (2212), ИК (neat) max 3402, 3270, 2960, 1748, 1724, 1676, 1514, 1466, 1343, 1239, 1177 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 640/642 (66/27), 398/400 (47/16), 265 (55), 227 (93), 181 (100); высокое разрешение EIMS m/z 640.25676 (рассчитано для C34Н41CIN2O8, -l.6 mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.74 (2, d; 16), 6.67 (3, ddd; 15.3, 9.7 и 5.5), 2.45 (4, dt; 14.3 и 10.4), 2.55 (4, brdd; 14.3 и 5.3), 5.15 (5, ddd; 11.2, 4.8 и 1.8), 1.8 (6, m), 1.14 (6-Me.d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.69 (8, d; 2.0). 7.24-7.26 (10/14, m), 7.33-7.39 (11/12/13, m), 3-хлор-4-оксифенилаланин (В) 4.8 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.8), 3.03 (3, dd, 14.5 and 7.0), 3.11 (3, dd; 14.4 и 5.6). 7.17 (5, d; 2.2), 5.61 (7-OH, s), 6.91 (8, d; 8.3), 7.0 (9, dd; 8.3 и 2.2); 3-амино-2-метилпропионовая кис-лота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.28 (3, dt; 13.6 и 6.8), 3.49 (3, ddd; 13.6, 5 и 4.1), 6.92 (3-NH, br t; 6.l) лейциновая кислота (D) 4.83 (2, dd; 10.1 и 3.3), 1.36 (3, m), 1.67-1.75 (3, m), 1.67-1.75 (4, m), 0.85 (5, d; 7.5), 0.86 (4-Me, d; 6.8). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.2 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7). 59.0 (8), 136.8 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1 (3), 129.9 (4), 129.6 (5), 120.0 (6), 150.4 (7), 116.4 (8), 129.2 (9); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.1 (3), D 170.8 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 21.3 (5), 22.9 (4-Ме).
Криптофицин 17
[]D + 27,8 (CHCl3, с. 0,37); УФ max () 248 (14740), 268 (8100), 278 (3400), 284 (2840), ИК (neat) max 3412, 2958, 1750, 1723, 1668, 1504, 1463, 1290, 1177, 751 cm-1, EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (10/3), 398/400 (95/35), 284 (100), 149 (95); высокое разрещение EIMS m/z 624.26161 (рассчитано для С34Н41CIN2O7 -1.4 mmu ошибка). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода; мультиплетность J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (А) 5,77 (2, d; 15.4), 6.67 (3, ddd; 15.4, 9.5, и 5.3), 2.37 (4, m), 4.99 (5, ddd; 11.2, 6.3, и 1.6), 2.54 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.7), 6.01 (7, dd; 15.7, и 8.7), 6.41 (8, d; 15.9), 7.28-7.34 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-4-oксифенилланин (В) 4.82 (2, m), 5.63 (2-NH, d; 8.7), 3.12 (3, dd; 14.7, и 5.6), 3.03 (3', dd, 14.7, и 7.1), 7.18 (5, d; 2.0), 5.47 (7-OH, br s), 6.91 (8, d; 8.3), 7.02 (9, dd; 8.3, и 2.0); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.21 (2-Me, d’ 6.9), 3.25 (3, m), 3.52 (3’, m), 6.89 (3-NH, br t; 6.1), дейциновая кислота (D) 4,84 (2, dd; 9.6, и 3.1), 1.62 (3, m), 1.36 (3', m), 1.62 (4, m), 0.77 (5, d' 6.5), 0.73 (4-Me, d; 6.5); 13С NMR (CDCl3) звено (поло-жение углерода) А 165.4 (1), 125.3 (2), 141.3 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 129.9 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.1(3), 129.6 (4), 131.9 (5), 126.2 (6), 150.3 (7), 116.3 (8), 127.6 (9), С 175.9 (1), 38.4 (2), 13.9 (2-Ме), 41.3 (3), D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Ме).
Криптофицин 18
[]D + 54,9 (MeOH, с 0,93); УФ max () 250 (20518), 284 (3857). ИК (neat) max 3411, 3271, 2966, 1746, 1728, 1668, 1505, 1463, 1258, 1178 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 638/640 (4.5/1.1), 412/414 (59/19), 280(17), 227 (100); высокое разре-шение EIMS m/z 638.272934 (рассчитано для С35Н43СIN2O7, 2.9 mmu ошибка). 1H NMR (CDCI3): амино или оксикислотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2.7-октадиеновая кислота (А) 5.76 (2, d; 15.5), 6.65 (3, ddd; 15.4, 9.2 и 6.2), 2.38-2.47 (4, m), 5.08 (5, ddd; 10.6, 4.9 и 2.2), 2.58 (6, m), 1.15 (6-Me, d; 6.8), 6.07 (7, dd; 15.9 и 8.5), 6.43 (8, d; 15.9), 7.21-7.35 (10/11/12/13/14, m); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4,83 (2, m), 3.05 (3, dd; 14.5 и 7.1), 5.65 (2-NH, d; 8.7), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.5), 7.21 (5, d; 2.4), 3.86 (7-ОСН3, s), 6.83 (8, d; 8.3), 7.08 (9, dd; 8.3 и 2.2), 3-амино-2-метилпропионовая кис-лота (С) 2.73 (2. m), 1.23 (2-Me, d; 7.2), 3.23 (3, dt; 13.5 и 6.8), 3.56 (3, ddd; 13.5, 5.7 и 4.0), 6.85 (3-NH, dd; 7.1 и 6.2); лейциновая кислота (D) 4.8 (2, d; 4.6), 1.86-1.89 (3, m), 0.94 (3-Me, d; 7.0), 1.20-1.26 (4, m), 1.39-1.44 (4, m), 0.77 (5, d; 7.4). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.2 (2), 141.5 (3), 36.4 (4), 77.7 (5), 41.9 (6), 17.1 (6-Me), 129.8 (7), 131.9 (8), 136.8 (9), 128.6 (10/14), 126.2 (11/13), 127.6 (12); В 170.0 (1), 53.5 (2), 35.1(3), 129.9 (4), 131.1(5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1(7-ОСН3), 112.2 (8), 128.5 (9); С 175.3 (1), 38.6 (2), 14.0 (2-Ме), 41.4 (3), D 169.5 (1), 76.6 (2), 36.2 (3), 15.5 (3-Ме), 24.2 (4), 14.0 (5).
Криптофицин 19
[]D + 62.6 (MeOH, с 0,67); УФ max () 204 (44900), 230 (17000), 248 (15600), 280 (2500); ИК (neat) max 3413, 3272, 2966, 1745, 1726, 1672, 1504, 1258, 1199, 1178, 1066, 692 cm-1; EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (3.0/1.4), 398/400 (58/21), 280/282 (15/5), 227 (100), 195/197 (57/22); высокое разрешение EIMS m/z 624.2585 (рассчи-тано для С34Н41CIN2O7, 1.8 mmu ошибка). 1Н-NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислотa (A) 5.76 (2, d; 15.2), 6.64 (3, ddd; 15.4, 9.1 и 6.2), 2.38 (4, m), 2.47 (4, m), 5.04 (5, ddd; 7.1, 5.1 и 1.8), 2.57 (6, m), 1.15 (6-Me, d, 6.9), 6.05 (7, dd; 15.8 и 8.5), 6.43 (8, d; 15.8), 7.29-7.35 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.84 (2, m), 5.67 (2-NH, d; 8.9), 3.04 (3, dd; 14.3 и 7.1), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.3), 7.22 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОСН3, s), 6.83 (8, d; 8.2), 7.08 (9, dd; 8.2 и 2.0), 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.75 (2, m), 1.23 (2-Ме, d; 7.1), 3.19 (3, m), 3.59 (3, m), 6.80 (3-NH, brt; 6.7); 2-оксиизовалерьяновая кислота (D) 4.73 (2, d; 4.2), 2.09 (3, m), 0.84 (4, d; 6.9), 0.95 (3-Me, d; 6,9). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.3 (2), 141.3 (3), 36.3 (4), 77.7 (5), 42.0 (6), 17.1 (6-Me), 129.9 (7), 131.9 (8), 136.8 (9), 126.1 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 171.0 (1), 53.4 (2), 35.1(3), 130.0 (4), 131.1(5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.2 (8), 128.5 (9); С 175.1(1), 38.7 (2), 13.9 (2-Ме), 41.5 (3), D 169.6 (1), 76.9 (2), 29.8 (3), 19.0 (4), 16.7 (3-Ме).
Криптофицин 21
[]D + 40,2 (СHСl3, с 0,72); УФ max () 240 (6700), 280 (2400), 288 (2100), ИК (neat) max 3403, 3279, 2957, 1731, 1673, 1503, 1464, 1409, 1372, 1258, 1174, 1065, 1023, 889 cm-1; EIMS m/z (отно-сит. интенсивность) 640/642 (10/4), 612 (5), 478 (15), 398 (40), 266 (33), 227 (76), 195 (95), 155 (100), 127 (90), высокое разрешение EIMS m/z 640.2550 рас-считано для C34Н41CIN2O8, 0.2mmu ошибка); 1H NMR (CDCI3) амино или окси-кислотное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенилоктановая кис-лота (А) 5.73 (2, d; 15.4), 6.68 (3, ddd; 15.0, 9.9 и 4.9), 2.45 (4, m), 2.56 (4, m), 5.19 (5, ddd; 11.2, 5.1 и 1.5), 1.80 (6, m), 1.14 (6-Me, d, 7.1), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.68 (8, d; 1.8), 7.25 (10/14, m), 7.33-7.38 (11/12/13, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.74 (2, ddd; 8.2, 6.8 и 6.2), 5.68 (2-NH, d; 8.6), 2.98 (3, dd; 14.3 и 7.7), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.6), 7.21 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4 и 2.0), 3-аминопропионовая кислота (С) 2.56 (2, m), 3.51 (3, m), 3.45 (3, m), 6.90 (3-NH, br t; 5.8), лейциновая кислота (D) 4.89 (2, dd; 10.0 и 3.3), 1.67 (3, m), 1.31 (3, m), 1.67 (4, m), 0.84 (5, d; 6.4), 0.83 (4-Me, d; 6.4); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 75.9 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.7 (1), 53.9 (2), 35.0 (3), 129.8 (4), 130.9 (5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1(7- ОMе), 112.2 (8), 128.3 (9), С 172.6 (1), 32.4 (2), 34.4 (3), D 170.5 (1), 71.2 (2), 39.5 (3), 24.4 (4), 22.8 (5), 21.2 (4-Ме).
Криптофицин 23
[]D + 47 (MeOH, с 1,55); УФ max () 240 (4571), 282 (2174), 290 (2177); ИК (neat) max 3284, 2960, 1747, 1724, 1653, 1540, 1490, 1339, 1272, 1174 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 674/675/678 (47/35/8), 432/434/436 (11/5/2), 299/301/303 (39/30/7), 227 (64), 215/217/219 (31/20/8), 141 (100), высокое разрешение EIMS m/z 674.21643 (рассчитано для С34Н4CI2N2O8, -0.3mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.77 (2, d; 15.4), 6.65 (3, ddd; 15.4, 9.3 и 6.0), 2.47 (4, dt; 14.2 и 10.2), 2.55 (4, br dd; 14.2 и 5.6), 5.13 (5, ddd; 11.0, 4.6 и 1.6), 1.81 (6, m), 1.15 (6-Me, d; 6.9), 2.93 (7, dd; 7,6 и 2.0), 3.7 (8 d; 2.0), 7.22-7.26 (10/14, m), 7.32-7 .39 (11/12/13, m), 3.5-дихлор-4-оксифенилаланин (В) 4.81 (2, m), 5.69 (2-NH, d; 8.6), 3.11 (3, dd; 14.5 и 5.6), 3.50 (3, dd; 14.3 и 7.0), 7.13 (5/9, s), 5.78 (7-ОН, s) 3-амино-2-метилпропионовая кислота (C), 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.19 (3, dt; 13.4 и 6.9), 3.58 (3, ddd; 13.6, 5.8 и 4.1), 6.82 (3-NH, br t; 5.9); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 9.9 и 3.2), 1.38 (3, m), 1.68-1.75 (3, m), 1.68-1.75 (4, m), 0.86 (4-Me, d; 6.7), 0.87 (5, d, 6.7). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.4 (2), 140.9 (3), 36.7 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 58.9 (8),136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.7 (1), 53.3 (2), 35.0 (3), 130.3 (4), 129.0 (5/9), 121.0 (6/8), 146.7 (7); С 175.3 (1), 38.4 (2), 13.9 (2-Ме), 41.5 (3), D 170.8 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 21.3 (4-Ме), 22.9 (5).
Криптофицин 24
[]D + 48,8 (CHCl3, с 0,63); УФ max () 228 (19006), 242 (8249), 274 (2351), ИК (neat) max 3400, 3284, 2959, 1732, 1678, 1652, 1514, 1248, 1178 cm-1; EIMS m/z (относит. интенсивность) 606 (2, M+), 364 (7), 161(55, СH3О-C6H4-CH=CH=CO+), 121 (100, СH3О-С6H4-CH2+), 91(68); высокое разрешение EIMS m/z 606.2954 (рaссчитано для C34H42N2O8, -l.3 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикис-лотное звено (положение углерода, мультиплет-ность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.70 (2, dd; 15.2 и 1.3), 6.70 (3, ddd; 15.2,10.3 и 4.7). 2.43 (4, dt; 14.3 и 10.9), 2.56 (4, m), 5.20 (5, ddd; 11.3, 5.1 и 2.0),1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.68 (8, d; 2.0), 7.23 -7.38 (10/11/12/13/14, m); О-метилтирозин (В) 4.73 (2, m), 5.58 (2-NH, d; 8.3), 3.03 (3, dd; 14.5 и 7.5), 3.14 (3, dd; 14.5 и 5.7), 7.11 (5/9, d; 8.6), 6.81 (6/8, d; 8.6), 3.78 (7-OMe, s), 3-аминопропионовая кислота (С) 2.55 (2-Н2, m), 3.42 (3, m), 3.53 (3, m), 6.97 (3-NH, br t; 5.7), лейциновая кислота (D) 4.89 (2, dd; 9.9 и 3.5), 1.29 (3, m), 1.62 - 1.70 (3/4, m), 0.83 (5, d; 5.9), 0.84 (4-Me, d; 6.l); 13С NMR (CDCl3); звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125,3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 75.9 (5), 40.6 (6), 13.4 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.7 или 170.6 (1), 54.1 (2), 35.2 (3), 128.5 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6/8), 158.6 (7), 55.2 (7-ОМе); С 172.8 (1), 32.5 (2), 34.2 (3); D 170.6 или 170.7 (1), 71.2 (2), 39.5 (3), 24.4 (4), 21.3 (5), 22.8 (4-Ме).
Криптофицин 26
[]D + 28,2 (СHСl3, с 1.31); УФ max () 254 (14615), 284 (2949), ИК (neat) max 3299, 2960, 1732, 1644, 1504, 1258, 1209 cm-1; EIMS m/z (относит интенсивность) 656/658 (0.5/0.1, М+), 638/640 (1.7/1.0), 525/527 (3.7/1.8), 412/414 (10/4), 280/282 (12/11), 227 (20), 195 (48), 131 (68); высокое разре-шение EIMS m/z 656.2836 (рассчитано для C35H45СIN2О8, 2,8 mmu ошибка), 638.2712 (рассчи-тано для С35Н43CIN2O7, 4.7mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3), амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода; мультиплетность, J in Hz) 3,5-диокси-6-метил-8-фенил-7-октеновая кислота (A) 2.46 (2, dd; 14.8 и 7.8), 2.58 (2, dd; 14.8 и 3.0), 5.46 (3, m), 1.86 - 1.90 (4-Н2, m), 3.61 (5, m), 2.37 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 6.06 (7, dd; 16 и 8.7), 6.47 (8, d; 16), 7.37 (10/14, br d; 7.9), 7.32 (11/13, br t; 7.6), 7.22 - 7.28 (12, m), 3-хлор-4-метилоксифенилаланин (В) 4.73 (2, br dt; 6.4 и 8.1), 6.14 (2-NH, d; 8.6), 2.84 (3, dd; 14.4 и 8), 3.18 (3, dd; 14.4 и 6.3), 7.21 (5, d; 2.2), 3.85 (7-ОМе, s), 6.82 (8, d; 8.6), 7.08 (9, dd; 8.6 и 2.2), 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.87 (2, m), 1.19 (2-Me, d; 7.0), 3.01 (3, ddd; 13.4, 10.6 и 4.9), 3.73 (3, ddd; 13.4, 8.2 и 4.7), 6.72 (3-NH, br dd; 7.3 и 5.2); лейциновая кислота (D) 4.95 (2, dd; 9.7 и 4.2), 1.62 - 1.72 (3, m), 1.79 - 1.84 (3, m), 1.62 - 1.72 (4, m), 0.90 (4-Ме, d; 6.4), 0.95 (5, d; 6.4). 13С NMR (CDCl3): звено (положение углерода) A 170.0 (1), 41.5 (2). 71.4 (3), 37.3 (4), 71.9 или 71.8 (5), 43.6 (6), 16.6 (6-Me), 130.8 (7), 132.5 (8), 136.8 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.2 (2), 34.7 (3), 130.3 (4), 131.1(5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.2 (8), 128.5 (9), С 174.3 (1), 40.1(2), 14.4 (2-Ме), 42.5 (3); D 170.7 (1), 71.8 или 71.9 (2), 38.9 (3), 24.6 (4), 21.6 (4-Ме), 22.9 (5).
Криптофицин 28
[]D + 65.6 (MeOH, с 0,93); УФ max (МеОН) 204 (48000), 230 (19300), 248 (18700), 280 (3400), ИК (neat) max 3413, 3270, 2958, 1745, 1726, 1665, 1504, 1258, 1197, 1175, 1066, 694 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 624/626 (3.0/1.3), 412/414 (70/24), 280/282(13/6), 213 (100), 195/197 (86/40); высокое разрешение EIMS m/z 624.2626 (рассчи-тано для C34H41CIN2O7, - 2.4 mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода, мультиплетность, J in Hz) 5-окси-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.78 (2, d; 15,6), 6.71 (3, ddd; 15.6, 9.9 и 5.4), 2.40 (4, m), 2.53 (4, m), 5.17 (5, m), 2.53 (6-H2, br t; 6.7), 6.07 (7, dt; 15,8 и 7.4), 6.44 (8, d; 15.8), 7.27-7.38 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.72 (2-NH, d; 8.5), 3.04 (3, dd; 14.5 и 7.2), 3.14 (3, dd; 14.5 и 5.4), 7.22 (5, d; 2.0), 3.87 (7-ОМе, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 и 2.0); 3-aмино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1.21 (2-Me, d; 7.2), 3.29 (3, dt; 13.5 и 7.0), 3.49 (3, ddd; 13.5, 4.9 и 3.8), 6.97 (3-NH, br t; 5.6), лейцино-вая кислота (D) 4.82 (2, m), 1.40 (3, m), 1.62 (3, m), 1.62 (4, m). 0.76 (4-Me, d; 6.3), 0.74 (5, d; 6.3); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.2 (2), 141.2 (3), 38.5 (4), 73.5 (5), 38.6 (6), 124.1(7), 133.8 (8), 136.7 (9), 126.1(10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1 (3),129.8 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1(7-ОМе), 112.3 (8), 128.4 (9), С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме), 41.2 (3), D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 21.5 (4-Ме), 22.6 (5).
Криптофицин 29
[]D + 22.2 (СHСl3, с 1,13); УФ max () 250 (17000), 284 (3300), ИК (neat) max 3415, 3272, 2960, 1744, 1734, 1674, 1504, 1259, 1197, 1174, 1067, 694 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 624/626 (2.6/1.1), 398/400 (44/15), 227 (100), 195/197 (50/16), 155/157 (59/20), 131 (63), 91(95); высокое разреше-ние EIMS m/z 624.2607 (рассчитано для C34H41CIN2О7, -0.5 mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода; мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.75 (2, dd; 15.3 и 1.1), 6.69 (3, ddd; 15.3, 10.1 и 5.3), 2.36 (4, m), 2.54 (4, m), 5.03 (5, ddd; 11.0, 6.4 и 1.8), 2.56 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 6,01 (7, dd; 15.8 и 8.8), 6.41(8, d; 15.8), 7.28-7.33 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.76 (2, m), 5.67 (2-NH, d; 8.6), 3.0 (3, dd; 14.4 и 10.2), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.9), 7.22 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОМе, s). 6.83 (8, d; 8.4), 7.08 (9, dd; 8.4 и 2.2) 3-аминопропионовая кислота (С) 2.55 (2-H2, m), 3.44 (3, m), 3.55 (3, m), 6.89 (3-NH, br t; 5.7), лейциновая кислота (D) 4.90 (2, dd; 9.9 и 3.5), 1.34 (3, ddd; 15.4, 10.3 и 3.5). 1.63 (3, m), 1.63 (4, m). 0.76 (4-Me, d; 6.4), 0.72 (5, d; 6.4), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.6 (1), 125.2 (2), 141.5 (3), 36.4 (4), 77.1(5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.8 (2), 34.9 (3), 129.9 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.2 (8), 128.4 (9); С 172.6 (1), 32.4 (2), 34.5 (3); D 170.4 (1), 71.5 (2), 39.7 (3). 24.4 (4), 21.2 (4-Ме), 22.6 (5).
Криптофицин 30
[]D + 12.3 (СHСl3, с 1,53); УФ max () 254 (17200), 284 (3600); ИК (neat) max 3414, 3306, 2961, 1738,1729, 1660, 1504, 1258, 1205, 1183, 1066, 695 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 656/658 (1.0/0.3), 638/640 (3.0/1.0), 525/527 (3.8/1.3), 412/414 (10.5/3.6), 280/282 (10.3/3.8), 227 (29), 195/197 (48/17), 155/157 (74/21), 131 (100); высокое разрешение EIMS m/z 656.2852 (рассчитано для C35H45CIN2O8, l.3 mmu ошибка); 1H-NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода мультиплетность; J in Hz) 3,5-диокси-6-метил-8-фенил-7-октеновая кислота (A) 2.25 (2, dd; 16.0 и 9.6), 2.64 (2, brd; 16.0), 3,89 (3, m), 2.51 (3-OH, d; 6.4), 1.77 (4, ddd; 14.3, 9.8 и 2.1), 1.88 (4, ddd; 14.3, 11.3 и 3.8), 4.88 (5, ddd; 11.3, 6.2 и 2.1), 2.53 (6, m), 1.10 (6-Me, d; 6.8), 5.99 (7, dd; 15.9 и 9.0), 6.40 (8, d; 15.9), 7.28-7.33 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.60 (2, m), 6.61 (2-NH, d; 8.1), 3.09 (3, dd; 14.2 и 5.6), 3.15 (3, dd; 14.2 и 7.3), 7.22 (5, d; 2.1), 3.86 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d, 8.3), 7.07 (9, dd; 8.3 и 2.1), 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.67 (2, m), 1.21 (2-Me, d; 7.3), 3.26 (3, ddd; 13.6, 7.3 и 6.4), 3.63 (3, ddd; 13.6, 6.2 и 3.9), 6.75 (3-NH, br t; 6.3); лейциновая кислота (D) 4.83 (2, dd; 9.6, 4.1), 1.42 (3, m), 1.64 (3, m), 1.64 (4, m). 0.79 (4-Ме, d; 6.4), 0.76 (5, d; 6.4), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 171.6 (1), 42.4 (2), 66.0 (3), 41.3 (4), 76.0 (5), 42.0 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 131.9 (8), 136.7 (9), 126.1(10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.8 (1), 54.3 (2), 35.1 (3), 130.1(4), 131.1(5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.1(8), 128.7 (9), С 175.6 (1), 39.7 (2), 13.8 (2-Ме), 41.5 (3), D 171.9 (1), 72.1(2), 39.1 3), 24.6 (4), 21.4 (4- Me), 22.7 (5).
Криптофщнн 31
[]D + 50.6 (МеОH, с 1,13); УФ max () 242 (3800), 284 (700); ИК (neat) max 3412, 3272, 2961, 1745, 1725, 1678, 1537, 1481, 1270, 1196, 1176, 1000, 698 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 688/690/692 (1.2/1.0/0.4), 446/448/450 (7.9/6.7/3.1), 314/316/318 (17/11/3), 91 (100), высокое разреше-ние EIMS m/z 688.2336 (рассчитано для C35H42CI2N2O8, - 1.8 mmu ошибка 1H-NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.78 (2, d; 15.5), 6.66 (3, ddd; 15.5, 9.4 и 6.0), 2.47 (4, ddd; 14.1, 10.8 и 9.4), 2.56 (4, m), 5.14 (5, ddd; 10.8, 4.7 и 1.7), 1.82 (6, m). 1.15 (6-Me, d; 7.1), 2.93 (7, dd, 7.5 и 1.9), 3.70 (8, d; 1.9), 7.24-7.26 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); 3,5-дихлор-4-метоксиофенилаланин (В) 4.83 (2, m), 5.68 (2-NH. d; 9.0), 3.0 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.6), 7.16 (5/9, s), 3.87 (7-ОМе, s), 3-амино-2-метил-пропионовая кислота (С) 2.74 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.20 (3, m), 3.58 (3, ddd; 13.5, 5.6 и 4.1), 6.82 (3-NH, br t; 5.6) лейциновая кислота (D) 4.83 (2, m), 1.38 (3, m), 1.72 (3, m), 1.72 (4, m). 0.87 (4-Me, d; 6.8), 0.86 (5, d; 6.8), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.4 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.5 (6- Me), 63.0 (7), 58.9 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.8 (1), 53.3 (2), 35.2 (3), 129.3 (4), 129.6 (5/9), 134.5 (6/8), 151.2 (7), 60.6 (7-ОМе); С 175.3 (1), 38.3 (2), 13.9 (2-СН3), 41.5 (3), D 170.6 (1). 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 22.9 (4-Ме), 21.3 (5).
Криптофицин 40
[]D + 41.6 (СHСl3, с 0,31); УФ max () 242 (4974), 266 (3911), 274 (3666), 286 (2359), 328 (511); ИК (neat) max 3415, 2959, 1748, 1723, 1667,1505, 1463, 1289, 1176 cm-1; EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 640/642 (5/2), 280/282 (7/3), 213 (13),195/197 (51/17), 155 (29), 141(32), 121(28), 91 (100), 69 (47); высокое разрешение EIMS m/z 640.2570 (рассчитано для С34Н41CIN2O8, - l.8mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.77 (2, d; 15.1), 6.72 (3, ddd; 15.1, 9.7 и 4.9), 2.42 (4, m), 2.58 (4, m), 5.33 (5, m), 1.89 (6, ddd; 12.9, 8.1 и 5.0), 2.13 (6, ddd; 12.9, 9.3 и 5.0), 2.98 (7, ddd; 6.7, 4.5 и 1.9), 3.64 (8, d; 1.9), 7.31-7.39 (10/11/13/14, m); 7.22 (12, 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.83 (2, m), 5.64 (2-NH, d, 8.6), 3.03 (3, dd; 14.3 и 7.5), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.4), 7.21(5, d; 2.0), 3.87 (7-ОМе, s), 6.84 (8, d 8.3), 7.08 (9, dd; 8.3 и 2.0); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7.3), 3.31 (3, dt; 13.8 и 6.9), 3.50 (3. ddd; 13.6, 5.7 и 3.9), 6.96 (3-NH, br t; 6.0); лейциновая кислота (D) 4.85 (2, dd; 6.7, 3.4), 1.42 (3, m), 1.72 (3, m), 1.72 (4, m), 0.86 (4-Ме, d, 3.7), 0.87 (5, d, 3.7); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.2 (2), 140.9 (3), 39.0 (4), 72.0 (5), 37.3 (6), 59.0 (7), 58.7 (8), 140.9 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.l (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.5 (6), 157.0 (7), 56.1(7-ОМе), 112.3 (8), 128.4 (9); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.1 (3), D 170.9 (1), 71.4 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 21.5 (4-Ме), 22.8 (5).
Криптофицин 43
[]D + 20 (СHСl3, с 0,2); УФ max () 250 (20512), 282 (4083), 294 (1734); ИК (neat) max 3400, 3272, 2927, 1727, 1660, 1516, 1455, 1242, 1175 cm-1 EIMS m/z (относит.интенсивность) 533 (24), 484 (3), 445 (14), 398 (9), 364 (29), 227 (59), 149 (67), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 590.3044 (рассчитано для С34Н41N2O7, -5.2mmu ошибка), 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz.) 5-oкси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.75 (2, d; 15.3), 6.69 (3, ddd; 15.3, 9.9 и 5.3), 2.37 (4, dt; 14.2 и 10.4), 2.52 (4, m), 5.01 (5, ddd; 11.2, 6.4 и 1.8), 2.55 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.9), 6.01 (7, dd; 15.8 и 8.9), 6.41 (8, d; 15.8), 7.21-7.34 (10/11/12/13/14, m); 4-метоксифенилаланин (B) 4.80 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.4), 3.06 (3, dd; 14.5 и 7.2), 3.13 (3, dd; 14.4 и 5.3), 7.06 (5/9, d; 8.4), 6.74 (6/8, d; 6.74 (6/8, d; 8.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота c 2.69 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.33 (3, m), 3.44 (3, dt; 14.0 и 4.7), 7.0 (3-NН, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.0 и 3.6), 1.60-1.67 (3, m). 1.35 (3, m), 1.60-1.67 (4, m), 0.76 (5, d; 6.4), 0.73 (4-Me, d; 6.7); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 125.2 (2), 141.5 (3), 36.5 (4), 77.5 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.8 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 53.8 (2), 35.3 (3),129.8 (4), 130.5 (5/9), 115.6 (6/8), 154.6 (7), С 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.0 (3), D 71.6 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.9 (4-Ме). Из-за небольшого размера образца, сигналы карбонильного углерода не могут быть видны.
Криптофицин 45
[]D + 72.0 (МеОН, с 0,12); УФ max () 250 (25500), 284 (5300), ИК (neat) max 3407, 3239, 2958, 1743, 1727, 1667, 1538, 1469, 1242, 1196, 1177, 694 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 658/660/662 (2.1/1.4/0.3), 483 (7.6) 432/434/436 (9.5/6.4/1.8), 300/302/304 (8.0/5.5/1.2), 227 (100) 91 (87), высокое разрешение EIMS m/z 658.2207 (рас-считано для С34Н40CI2N2O7, 0.6 mmu ошибка); 1H NMR (СDСl3) амино или оксикислотное звено (положение ушлерода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-oктадиеновая кислота (A) 5.80 (2, d; 14.7), 6.66 (3, ddd; 14.7, 8.5 и 5.5), 2.38 (4, m), 2.53 (4, m), 4.97 (5, br dd; 10.4 и 6.2), 2.57 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.7), 6.01 (7, dd; 15.9 и 8.7), 6.42 (8, d; 15.9), 7.28-7.34 (10/11/1314, m), 7.22 (12, m), 3,5-дихлор-4-оксифенилaланин (В) 4.82 (2, m), 5.73 (2-NH, br d; 8.7), 3.02 (3, dd; 14.3 и 6.2), 3.10 (3, dd; 14.3 и 5.2). 7.14 (5/9, s), 5.79 (7-OH, s), 3-амино-2-метилпропиoновая кислота (С) 2.73 (2, m), 1.21 (2-Ме, d; 7.0), 3.17 (3, m), 360 (3, m), 6.81 (3-NH, br t; 6.7), лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.0 и 3.2), 1.38 (3, ddd; 14.9, 10.2 и 3.2), 1.65 (3, m), 1.65 (4, m). 0.78 (4-Me, d; 6.5), 0.73 (5, d; 6.5), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.4 (2), 141.2 (3), 36.4 (4), 77.6 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 131.9 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12); B 171.0 (1), 53.2 (2), 35.0 (3), 130.4 (4), 129.1 (5/9), 121.0 (6/8), 146.7 (7); С 175.2 (1), 38.5 (2), 13.9 (2-Me), 41.6 (3), D 170.7 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Криптофицин 49
[]D + 68.1 (МеОН, с 0,075); УФ max () 246 (25500), 284 (5200); ИК (neat) max 3401, 3282, 2962, 1744, 1728. 1668, 1540, 1505, 1464, 1258, 1198, 1177, 1066, 694 cm-1 EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (0.8/0.3) 398/400 (43/14), 227(78), 195/197 (58/26) 91 (l00); высокое разрешение EIMS m/z 624.2650 (рассчитано для C34Н41CIN2О7, -4.8mmu ошибка), 1H NMR(CDCl3) амино или oксикислотное звено (положение угле-рода мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.77 (2, d; 14.1), 6.67 (3, m), 2.38 (4, m), 2.50 (4, m), 5.01 (5, m), 2.56 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.5), 6.03 (7, dd; 15.8 и 8.6), 6.42 (8, d; 15.8), 7.29-7.35 (10/11/13/14, m), 7.23 (12; m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.64 (2-NH, m), 3.06 (3, m), 3.13 (3, m), 7.22 (5, m), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, m), 7.08 (9, m); 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 6.7), 3.26 (3, m), 3.53 (3, m), 6.90 (3-NH, m); 2-оксивалерьяновая кислота (D) 4.81 (2, dd; 8.8 и 3.9), 1.63 (3, m), 1.68 (3, m), 1.33 (4-H2, m). 0.74 (5, t; 7.3).
Криптoфицин 50
[]D + 32.0 (СHСl3, с 0.44); УФ max () 242 (4933), 262 (3996, 274 (3719), 286 (2430), 332 (359); ИК (neat) max 3412, 3274, 2958, 1752, 1724, 1676, 1648, 1503, 1465, 1258, 1177, 1066, 753; EIMS m/z (относит.интенсивность) 640/642 (4/2), 398/400 (11/4), 280/282 (10/3), 227 (17), 195/197 (57/18), 157 (20), 141(31), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 640.2531 (рассчитано для C34Н41CIN2O8, 2.1 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикис-лотное звено (положение углерода, мультиплет-ность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенилоктановая кислота (A) 5.73 (2, d; 15.7), 6.67 (3, ddd; 15.7, 9.7 и 5.4), 2.45 (4, m), 2.55 (4, m), 5.13 (5, ddd; 11.2, 5.0 и 1.7), 1.78 (6, m), 1.15 (6-Me, d, 6.9), 2.91 (7, dd, 7.5 и 1.9), 3.68 (8, d;, 1.7), 7.25 (10/14, m), 7.33-7.38 (11/12/13, m); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.80 (2, ddd, 8.3, 7.1 и 5.4), 5.61 (2-NH. d; 8.3), 3.03 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3,13 (3, dd; 14.4 и 5.6), 7.2l (5, d; 1.9), 3.87 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4 и 2.2); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.29 (3, dt; 13.6 и 6.9), 3.49 (3, ddd; 13.6, 6.7 и 5.0), 6.92 (3-NH, br t; 6.7) 2-оксипентановая кислота (D) 4.75 (2, dd; 9.2 и 3.7), 1.55 (3, m), 1.65 (3, m), 1.33 (4-Н2, m), 0.84 (5, t; 7.3), 13С NMR (CDCl3) звено values (положения углерода) А 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.9 (4), 76.3 (5), 40.8 (6), 13.6 (6-Me), 63.2 (7), 59.1 (8), 136.8 (9), 125.5 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (11). В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1(3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.5 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.3 (8), 128.5 (9), С 175.6 (1), 38.4 (2), 14.1(2-Ме), 41.2 (3); D 170.4 (1), 72.4 (2), 32.7 (3), 18.4 (4),13.5 (5).
Криптофицин 54
EIMS m/z (относит.интенсивность) 654/656 (17/10), 493 (5), 411/413 (12/4), 280 (16), 227 (25), 195/197 (45/25), 141(30), 91 (100); высокое разре-шение EIMS m/z 654.2686 (рассчитано для C35H43CIN2О8, 2.2 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3): амино или оксиксилотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) (A) 5.73 (2, d; 15.4), 6.66 (3, ddd; 15.4, 9.7, 5.7), 2.46 (4, m), 2.53 (4, m), 5.16 (5, ddd; 11.0, 4.2, 1.7), 1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 2.89 (7, dd, 7.4, 1.8), 3.69 (8, d, 1.9), 7.25 (10/14, m), 7.30-7.38 (11/12/13, m); (В) 4.81 (2, m), 5.63 (2-NH, d; 8.6), 3.03 (3, dd; 14.5, 7.3), 3.13 (3, dd, 14.5, 5.5), 7.21 (5, d, 2.2), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4, 2.2); (С) 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.26 (3, ddd; 13.4, 6.8, 6.8), 3.51 (3, ddd, 13.4, 6.8, 5.3), 6.88 (3-NH, br t; 6.8); (D) 4.73 (2. d; 4.2), 1.78-1.82 (3, m), 0.92 (3-Me, d; 6.8), 1.36-1.41 (4, m), 1.18-1.20 (4, m), 0.80 (5, t; 7.5); 13С NMR (CDCl3): звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.4 (2), 141.0 (3), 36.6 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.2 (6-Me), 63.1(7), 58.7 (8), 136.7 (9), 125.4 (10/14), 128.6 (11/13), 128.5 (12); В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.0 (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 125.2 (6), 153.9 (7), 56.1(7-ОМе), 112.2 (8), 128.4 (9), С 175.4 (1), 38.5 (2), 14.0 (2-Ме), 41.3 (3), D 169.4 (1), 76.5 (2), 36.1(3), 15.6 (3-Ме), 24.0 (4), 11.2 (5).
Пример 6 Синтез производных Криптофицина
Криптофицин 8
К раствору 3.8 мг Криптофицина 1 в 1.5 мл 2:1 смеси 1,2- диметоксиэтана/воды было добавлено 9 мкл 1N Hcl. Раствору позволяли перемешиваться в течение 4 часов, нейтрализовали карбонатом калия и упаривали. Остаток был в виде перегородки меж-ду водой и СН2Сl2. СН2Сl2 - растворимая часть бы-ла очищена с помощью жидкостной гель проника-ющей хроматографии с обращенной фазой с полу-чением 3.3 мг чистого Криптофицина 8.
(Здесь и далее во всех последующих приме-рах)
Данные EIMS-электронной эмиссионной спек-троскопии m/z (относительная интенсивность) 690/692/694 (0.8/0.5/0.2). EIMS высокого разреше-ния m/z 690.2533 (расcчитано для C35H44N2O8 -5.8 mmu oшибка). 1Н-ЯМР (СDCl3)-данные протонного магнитного резонанса; амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность, J в Гц) 8-хлор-5,7-диокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.79 (2d-дублет; 15.4), 6.69 (3, ddd-тройной дублет; 15.4, 9.7 и 5.6), 2.68 (4 ddt-двойной дублет триплет; 14.0, 5.5 и 1.8), 2.38 (4 m- мульти-плет); 5.11 (5ddd-тройной дублет; 10.8, 8.6 и 1.8), 2.51 (6 m-мультиплет), 1.05 (6-Ме, d-дублет; 7.0), 4.01 (7dd-двойной дублет; 9.6 и 1.4), 4.65 (8 d-дублет; 9.6), 7.36-7.41 (10/11/12/13/14, m), лейци-новая кислота (D) 4.92 (2, dd; 10.1 и 3.5), 1.76 (3/4, m), 1.45 (3, m), 0.94 (5, d; 6.6), 0.94 (4-Me, d; 6.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.2), 3.25 (3, ddd; 13.6, 6.8 и 6.l), 3.54 (3, ddd; 13.5, 6.1 и 3.4), 6.91 (3-NH, brt; 6.l); 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, ddd; 8,8, 7.2 и 5.6), 5.64 (2-NH, d; 8.8). 3.03 (3, dd; 15.4 и 7.2), 3.16 (3, dd; 15.4 и 5.6), 7.23 (5, d, 2.2), 3,88 (7-ОСН3, s), 6.85 (8, d; 8.5), 7.09 (9, dd; 8.5 и 2.2).
Криптофицин 9
К раствору 10 мг Криптофицина 1 в 1 мл сухо-го метанола было добавлено 10 мкл НСl (получен-ного путем обработки 1.25 г тионилхлорида 25 мл МеОН). После перемешивания в течение 4 часов, растворитель удаляли в вакууме и образец остав-ляли в вакууме на 12 часов. Очистка с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой давала 8 мг чистого. Криптофи-цина 9.
1H NMR (CDCl3): amino or hydroxy acid unit (catbon position, multiplicity, J in Hz), 5.7-dihydroxy-8-methoxy-8-methoxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 5.76 (2, d; 15.5), 6.67 (3, ddd; 15.5, 9.5 and 5.6), 2.34 (4, ddd; 14.1, 11.1 and 9.5), 2.62 (4, dddd; 14.1, 5.6, 1.8 and 1.5), 5.09 (5, ddd; 11.1, 7.8 and 1.8), 2.24 (6, dqd; 7.8, 7.0 and 2.2), 1.03 (6-Me, d; 7.0), 3.71 (7, dd; 8.3 and 2.2), 4.03 (8, d; 8.3), 3.20 (8-ОСН3, s), 7.31-7.40 (10/11/12/13/14, m), leucic acid (D) 4.86 (2, dd, 9.8 and 3.5), 1.71 (3/4, m). 1.41(3, m), 0.89 (5/4-Me, d; 6.4); 3-amino-2-methylpropionic acid (C) 2.71 (2, ddq; 6.8, 3.9 and 7.2), 1.21 (2-Me, d; 7.2); 3.23 (3, ddd; 13.5, 6.8 and 6.0), 3.52 (3, ddd; 13.5. 6.0 and 3.9), 6.90 (3-NH, brt; 6.0); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.82 (2, ddd; 8.8, 7.4 and 5.7), 5.66 (2-NH, d; 8.8), 3.02 (3, dd; 14.4, 7.4), 3.15 (3, dd; 14.4 and 5.5), 7.23 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОСН3, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 and 2.2).
Криптофицин 10
К перемешиваемому раствору 7 мг Криптофи-цина 9 в 1 мл ацетона и 0.3 мл воды было добавле-но 8 мкл 2N раствора NaOH. После перемешивания в течение 4 часов, раствор подвергали нейтрализа-ции до рН 7 1N раствором НCl и растворитель уда-ляли при пониженном давлении. Остаток подверга-ли обработке с помощью жидкостной гель прони-кающей хроматографии с обращенной фазой с использованием смеси 7:3 MeOH/H2O с получением чистого Криптофицина 10 (5 мг).
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity; J in Hz); .5,7-dihydroxy-8-methoxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 5.99 (2, dt; 15,4 and 1.3), 6.82 (3, dt, 15.4 and 7.3), 2.30 (4, m), 2.50 (4, m), 3.66 (5, td; 7.8 and 3.5), 2.05 (6, d pentet; 1.8 and 7.0), 0,96 (6-Me, d; 7.0), 4.04 (7, dd; 8.8 and 2.0), 4.01 (8, d; 8.8), 3.12 (8-ОСН3, s), 7.26-7.36 (10/11/12/13/14, m), 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.50 (2, m), 1.02 (2-Me, d; 7.3), 3.16 (3, dd; 13.4 and 6.9), 3.82 (3, dd; 13.4 and 6.6), 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.57 (2, dd; 8.5 and 6.5), 2.82 (3, dd; 13.9 and 8.6), 3.03 (3, dd, 13.9 and 6.5), 7.25 (5, d; 2.2), 3.82 (7-ОСН3, s), 6.96 (8, d; 8.6), 7.13 (9, dd; 8.6 and 2.2). 13С NMR (CD3OD): 179.5, 173.4, 168.2, 155.4, 143.7, 141,7, 131.9, 131.7, 129.8, 129.3 (2C, 129.2 (2C), 128.8, 126.2, 123.2, 113.4, 85.9, 74.5, 74.1, 56.8, 56.6, 56.3, 43.3, 41.2, 40.2, 38.8, 38.0, 15.5, 9.9.
Криптофицин 12
К раствору 5 мг Криптофицинов 1, 5 или 8 в 1 мл 4:1 смеси ацетон/вода было добавлено 15 мкл 2N раствора NaOH. После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 часов, реакци-онную смесь подвергали нейтрализации до рН 7 1N раствором НСl и растворитель упаривали. Веще-ство, растворимое в СН2Cl2 пропускали через не-большой кремниевый картридж с СН2Сl2, 1:1 EtOAc/CH2Cl2, и EtOAc. Фракция, элюированная EtOAc, содержала чистый. Криптофицин 12.
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity, J in Hz); 5,7,8-trihydroxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 6.07 (2, ddd; 15.5, 1.3 and 1.2), 6.40 (3, dt; 15.5 and 7,3), 2.49 (4, m), 2.60 (4, m). 3.92 (5, ddd; 9.3, 6.7 and 4.5), 1.94 (6, m), 1.07 (6-Me, d, 6.6), 3.61 (7, dd; 8.9 and 7.6), 4.56 (8, d; 7.6), 7.36 (10/14, dd; 7.4 and 1.5), 7.32 (11/13, brt; 7.5), 7.25 (12, m), 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.54 (2, ddq; 7.0, 6.6 and 7.0), 1.02 (2-Me, d; 7.0), 3.14 (3, dd; 13.5 and 7.0), 3.42 (3, dd; 13.4 and 6.6), 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.57 (2, dd, 8.4 and 6.7), 2.83 (3, dd; 13.8 and 8.4), 3.02 (3, dd; 13.8 and 6.6), 7.25 (5, d; 2.1), 3.82 (7- ОСН3, s), 6.95 (8, d; 8.5), 7.12 (9, dd; 8.5 and 2.1).
Метилирование Криптофицина 12 диазомета-ном давало Криптофицин 6.
Криптофицин 14
К раствору 3 мг Криптофицина 6 в 1 мл 3:1 смеси ацетон/вода было добавлено 5 мкл 2N рас-твора NaOH. После перемешивания в течение 5 часов, реакционную смесь подвергали нейтрализа-ции до рН 7 1N раствором НСl и затем упаривали досуха. Остаток подвергали обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой с получением 2.4 мг. Криптофи-цина 14.
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity; J in Hz); 5-hydroxy-6-methyl-8-phenyl-2,7-octadienoic acid (A) 5.98 (2, d; 15.3), 6.78 (3, dt; 15.3 and 7.5), 2.35 (4, m), 3.64 (5, td; 7.2 and 4.8), 2.47 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.9), 6.22 (7, dd; 15.9 and 8.1), 6.39 (8, d, 15.9), 7.24-7.36 (10/11/12/13/14, m); 3-amino-2-methylpropionic acid (C) 2.35 (2, m), 1.02 (2-Me, d; 6.9), 3.18 (3, dd; 13.2 and 6.6), 3.36 (3, dd; 13.2 and 4.5); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (B) 4.58 (2, dd; 8.7 and 6.3), 2.80 (3, dd; 13.8 and 9.0), 3,05 (3, dd; 13.8 and 6.3), 7.25 (5, d, 2.l), 3.82 (7-ОСH3, s), 6.95 (8, d; 8.4), 7.13 (9, dd; 8.4 and 2.1).
Криптофицин 35
Каталитическое количество PtO2 было добав-лено в колбу, содержащую 0.5 мл СН2Сl2. Колба была подвергнута вакуумированию, был введен H2 и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Раствор 10 мг Криптофицина 1 в минимальном количестве СН2Cl2 был добавлен и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут. Катализатор удаляли фильтро-ванием через целит/хлопковую ткань и раствори-тель упаривали. Обработка остатка с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой с использованием С18 колонки давала 6.5 мг Криптофицина 35
EIMS m/z (relative intensity) 656/658 (25/10), 412/414 (25/12), 280/282 (20/10), 195/197 (78/25), 141(58), 91 (100); high resolution EIMS m/z 656.2864 (calcd for С35Н45CIN2О8, 0.0 mmu error); 1H NMR (CDCl3) amino or hydroxy acid unit values (carbon positions, multiplicities, J in Hz) 2,3-dihydro-7,8-epoxy-5-hydroxy-6-methyl-8-phenyl octanoic acid (A) 2.32 (2, ddd; 14.5, 9.2, 5.8), 2.10 (2, ddd; 14.5, 9.2, 6.2), 1.5-1.8 (3/4 overlapping m), 5.07 (5, ddd; 12.5, 5.6, 2.0), 1.80 (6, m), 1.12 (6-Me, d; 7.0), 2.90 (7, dd; 7.4, 1.8), 3.67 (8, d; 1.8), 7.24 (10/14, m), 7.32-7.38 (11/12/13, m); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.71 (2, ddd; 8.7, 6.4, 6.3), 5,62 (2-NH, d; 8.7), 3.08 (2H-3, br d; 6.4), 7.19 (5, d; 2.0), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, d, 8.5), 7.07 (9, dd; 8.4, 2,0); 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.72 (2, m), 1.18 (2-Me, d, 6.9), 3.12 (3, ddd; 11.4, 10.6, 5.6). 3.70 (3, ddd), 6.76 (3-NH, br t, 6.0); leucic acid (D) 4.83 (2, dd; 9.9, 3.8), 1.39 (3, m), 1.70 (3, m), 1.72 (4, m), 0.87 (4-Me, d; 5.3), 0.86 (5, d; 5.3), 13С NMR (CDCl3) unit values (carbon positions) A 172.4 (1), 36.2 (2), 32.0 (3), 21.1 (4), 76.6 (5), 40.2 (6),13.6 (6-Me), 63.3 (7), 59.2 (8), 136.8 (9), 125.6 (10/14),128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.7 (1), 53.7 (2), 35.5 (3), 130.0 (4), 131.1 (5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.1 (8), 128.5 (9), С 175.2 (1), 38.2 (2), 13.6 (2-Ме), 42.1 (3); D 171.9 (1), 71.7 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 22.9 (4-Ме), 21.4 (5).
Пример 7 Анализ активности криптофицино-вых соединений в микротрубочковой деполимери-зации.
Винбластин, цитохалазин В, тетраметилрода-мин изотиоцианат (TRITC)- фалоидин, сульфоро-дамин В (SRB) и антитела против -тубулина и виментина были получены из Sigma Chemical Company. Базальная среда орла, содержащая соли Earle (ВМЕ), была из Gibco и фетальная бычья сы-воротка (FBS) была куплена у Halcone Laboratories.
Линии клеток.
Jurkat Т линия клетки лейкемии и клеток А-10 гладкой мышцы крысиной аорты были получены из American Туре Culture Collection и культивированы в ВМЕ, содержащем 10% FBS и 50 мкг/мл гентами-цин сульфата. Клетки яичниковой человеческой карциномы (SKOV3) и суб-линия, которая выбрана для сопротивления винбластину (SKVLB1), были великодушным подарком от Dr.Victor Ling из Ontario Cancer Institute. Обе линии клеток содержа-ли в ВМЕ, содержащем 10% FBS и 50 мкг/мл гента-мицин сульфата. Винбластин добавляли с конеч-ной концентрацией 1 мкг/мл в SKVLB1 клетки через 24 часа после пассажа для поддержания выбран-ного давления для Р-гликопротеин-сверхэкспрессирующих клеток.
Анализы клеточной пролиферации и задержки цикла.
Анализы клеточной пролиферации были вы-полнены, как описано Skehan et.al.11. Для Jurkat клеток, культуры обрабатывали инкубированными лекарствами, как описано в Skehan et.al.11, и общие клеточные наборы определяли с помощью подсче-та клеток в гемацитометре. Процентное содержа-ние клеток в митозе определяли с помощью окра-шивания 0.4% Giemsa в PBS с последующими тремя быстрыми промывками PBS. По крайней мере, 1000 клеток на обработку были подсчитаны на присут-ствие миотических структур и миотического индек-са, рассчитанного в виде отношения клеток с мио-тическими структурами к общему числу подсчи-танных клеток.
Влияние криптофицинов и винбластина на пролиферацию клеток Jurkat и клеточного цикла.
Кривые доза-ответ для эффектов криптофици-новых соединений и винбластина на клеточную пролиферацию и процентное содержание клеток в митозе показываются на Фигурах 2А и 2В, соответ-ственно. Меньше, чем 3% необработанных клеток, обнаруживают митотические структуры. И крип-тофициновые соединения и винбластин вызывают зависимое от дозы увеличение процента клеток, наблюдавшихся в митозе. Увеличение в митотиче-ском индексе близко коррелировало с уменьшением клеточной пролиферации, т.е. концентрации и криптофициновых соединений и винбластина, ко-торые заставляли 50% клеток аккумулироваться в митозе, были фактически такими же, как концен-трация, которая ингибировала клеточную проли-ферацию на 50%. Величины IC50 для криптофици-новых соединений и винбластина для этих эффек-тов составляли 0.2 и 8 нМ соответственно.
Влияние цитохалазина В, винбластина и криптофицинов на цитоскелет.
Клетки (А-10) гладкой мышцы аорты были выращены на стеклянных покровных стеклах и обработаны РBS, 2 мкМ цитохалазина В, 100 нМ винбластина или 10 нМ криптофициновых соеди-нений. Спустя 24 часа, микротрубочковые и ви менти новые промежуточные волокна были визуа-лизованы с помощью непрямого иммунофлуорес-центного анализа и микроволокна были окрашены с использованием TRITC-фаллоидина. Были иссле-дованы морфологические эффекты каждого лекар-ства. Необработанные клетки проявляли полно-стью расширенные микротрубочковые сетки с окружающими ядро микротрубочковыми органи-зующими центрами. Виментиновые промежуточ-ные волокна были также равномерно распределен-ными по всей цитоплазме, в то время как пучки микроволокон были сконцентрированы вдоль большой оси клетки. Цитохалазин В вызывал пол-ную деполимеризацию микроволокон наряду с аккумулированием паракристаллических остатков. Это соединение не оказывало влияния ни на рас-пределение микротрубочек, ни на распределение промежуточных волокон. И винбластин и крипто-фициновое соединение вызывали заметное опусто-шение микротрубочек. Ни одно из соединений не оказывало влияния на организацию микроволокна; однако, виментиновые промежуточные волокна сплющивались, образуя концентрические кольца вокруг ядра клеток, обработанных либо винбла-стином, либо криптофициновым соединением.
Влияние криптофицинов и винбластина на таксол-стабилизированные микротрубочки.
Клетки А-10 были обработаны в течение 3 ча-сов 0 или 10 мкМ таксола до добавления PBS, 100 нМ винбластина или 10 нМ криптофицинового соединения. Спустя 24 часа, организация микро-трубочек была исследована с помощью иммуно-флуоресцентного анализа, как описано выше. По сравнению с контрольными клетками, микротру-бочки в таксол-обработанных клетках были интен-сивно связаны, особенно в клеточных полярных областях. Как и прежде, винбластин вызывал пол-ную деполимеризацию микротрубочек в необрабо-танных предварительно клетках. Однако, предва-рительная обработка таксолом предотвращала микротрубочки от деполимеризации в ответ на винбластин. Аналогично, предварительная обра-боткa таксолом полностью стабилизировала мик-ротрубочки против криптофицин-индуцированной деполимеризации.
Обратимость деполимеризации микротрубо-чек за счет винбластина и криптофицина.
Клетки А-10 были обработаны либо 100 нМ винбластина, либо 10 нМ криптофицинов в течение 24 часов, приводя в результате к полной деполиме-ризации микротрубочек. Затем клетки были про-мыты и проинкубированы в среде свободной от лекарства в течение 1 часа или 24 часов. Микро-трубочки подвергались быстрой повторной поли-меризации после удаления винбластина, показывая значительные уровни микротрубочек спустя 1 час и полное морфологическое восстановление за 24 часа. Напротив, микротрубочки не появляются повторно в клетках обработанных криптофицино-выми соединениями ни через 1 час, ни через 24 часа после удаления соединения.
Обратимость ингибирования клеточной про-лиферации криптофицинами. винбластином и так-солам.
SKOV3 клетки были обработаны в течение 24 часов ранее установленными IC50 дозами винбла-стина, криптофициновых соединений или таксола (т.е. величинами определенными в опытах сумми-рованных в Таблице 5). В течение этого времени плотность клетки увеличивалась от 0,4 до 0.5 ± 0.05 единиц поглощения (Фигура 3), указывал на 25% увеличение количества клеток для всех трех обработок. Удаление лекарства приводило к быст-рому росту клеток, обработанных винбластином, так что их количество увеличивалось приблизи-тельно в три раза в течение 24 часов. Напротив, клетки обработанные криптофициновыми соедине-ниями или таксолом оставались блокированными, увеличиваясь только в 0,2 - 0,4 раза в течение 24 часов после удаления лекарства. Пролиферативная способность клеток, обработанных криптофицина-ми или таксолом, впоследствии восстанавливалась, так как клетки затем удваивались в следующие 24 часа.
Влияние комбинаций винбластина и крипто-фицинов на клеточную пролиферацию.
SKOV3 клетки были обработаны комбинация-ми криптофицинов и винбластина в течение 48 часов. Затем было определено процентное содер-жание выживших клеток и были рассчитаны вели-чины IC50 для каждой комбинации. Влияние этих обработок указанными комбинациями, а также обработок одним лекарством, изображается в виде изоболограм. (Фигура 4). Величины IC50 для ком-бинаций криптофициновых соединений и винобла-стина очень близко приближается к линии адди-тивности, указывая на то, что эти два лекарства индуцируют только аддитивное ингибирование клеточной пролиферации.
Токсичность криптофицинов, винбластина и таксола по отношению к SKOV3 и SKVLB1 клет-кам.
SKVLB1 клетки оказывают сопротивление противораковым лекарствам натурального проис-хождения из-за их сверх экспрессии Р-гликопротеина 12. Способности таксола, винбла-стина и криптофициновых соединений к ингибиро-ванию роста SKOV3 и SKVLB1 клеток суммируется в таблице 5. Таксол вызывает зависимое от дозы ингибирования пролиферации обеих линий клеток с величинами IC50 для SKOV3 и SKVLB1 клеток 1 и 8000 и М, соответственно. Винбластин также инги-бирует рост обеих линий клеток, с величинами IC50 0,35 и 4200 нМ для SKOV3 и SKVLB1 клеток, соот-ветствно. Криптофицины демонстрируют величины IC50 7 и 600 пкМ для SKOV3 и SKVLB1 клеток, со-ответственно. Результатирующие факторы сопро-тивления для SKVLB1 клеток соединениям рассчи-тываются в виде IC50 для SKVKB1. IC50 для SKOV3 клеток также указываются в таблице 5.
Таким образом, это демонстрирует, что насто-ящее изобретение обеспечивает новые криптофи-циновые соединения, а также ранее описанные криптофициновые соединения, которые являются мощными ингибиторами клеточной пролиферации, действующими за счет разрыва сетки микротрубо-чек и ингибирования митоза. Криптофициновые соединения разрушают организацию микротрубо-чек и, таким образом, нормальные клеточные функции, включающие функции митоза.
Классические антимикротрубочковые агенты, такие как колхицин и алкалоиды Винка, задержи-вают клеточное деление при митозе. Кажется уместным сравнить эффект одного из этих агентов на клеточную пролиферацию с криптофициновыми соединениями. Для этой цели винбластин алкалои-да Винка был выбран в качестве представителя антимикротрубочковых агентов. Таким образом, было проведено сравнение влияния криптофицино-вых соединений и винбластина на пролиферацию и развитие клеточного цикла клеточной линии Jukart Т-клеток лейкемии. Оба соединения вызывали па-раллельное зависимое от дозы ингибирование кле-точной пролиферации и аккумулирование клеток в митозе.
Так как антимитотические эффекты обычно опосредуются разрушением микротрубочек в ми-тотических веретенах, эффекты криптофициновых соединений на цитоскелетные структуры были охарактеризованы с помощью флуоресцентной спектроскопии. Иммунофлуоресцентное окрашива-ние клеток, обработанных либо криптофициновым соединением, либо винбластином, четко демон-стрирует, что оба соединения вызывают полную потерю микротрубочек. Аналогичные исследова-ния с SKOV3 клетками демонстрируют, что анти-микротрубочковые эффекты криптофициновых соединений не являются уникальными для линии клеток гладкой мышцы. Ни одно лекарство оказы-вает влияние на уровни или распределение микро-волокнистых пучков, что было легко проиндуциро-вано цитохалазином В, указывая на то, что потеря микротрубочек не может быть обусловлена неспе-цифическим механизмом, например, активацией протеаз или потерей энергетического заряда. И винбластин и криптофициновые соединения также заметно ускоряют схлопывание виментиновых промежуточных волокон так, что яркоокрашенные кольца образуются вокруг клеточных ядер.
Удаление винбластина из культурной среды приводит к быстрой повторной полимеризации микротрубочек. Напротив, клетки, обработанные криптофициновыми соединениями, оставались истощенными по отношению к микротрубочкам в течение, по крайней мере, 24 часов после того как соединение было удалено из культур.
Настоящее изобретение демонстрирует, что криптофициновые соединения нарушают Р-гликопротеин-опосредованное многократное со-противление лекарству. Транспорт за счет Р-гликопротеина ограничивает способность проти-вораковых лекарств натурального продукта к ин-гибированию роста опухолевых клеток с требуе-мым или de novo сопротивлением лекарству13-15. Алкалоиды Винка, хотя и очень полезные как начальный источник химиотерапии, являются чрезвычайно хорошими сусбтратами для транс-порта Р-гликопротеина и, таким образом, являются очень ограниченно полезными против Р-гликопротеин- опосредованных MDR опухолей.
Поэтому, идентификация агентов, которые мо-гут перекрывать многократное сопротивление ле-карству, должна приводить к развитию полезных и новых противораковых агентов. Криптофициновые соединения настоящего изобретения оказывается являются такими агентами, так как они являются плохими субстратами для Р-гликопротеин-опосредованного транспорта. Этот факт отражает-ся в низком факторе клеточного сопротивления для криптофициновых соединений, по сравнению с винбластином, таксолом и другими натуральными лекарственными продуктами. Полный синтез крип-тофицинов.
Структуры новых синтезированных соедине-ний, а именно Криптофицинов 51, 52, 53, 55, 56, 57, 58 и 61 были подтверждены непосредственным образом с использованием методологии, которая является хорошо известной специалистам в этой области. Масс спектральные данные согласовыва-лись с молекулярными составами. Данные протон и углерод ЯМР-спектров были аналогичны данным для криптофицина 1 и соответствующих аналогов природного происхождения и полусинтетических аналогов.
Следующие примеры демонстрируют полный синтез криптофициновых соединений, а также их применение в качестве терапевтических агентов в соответствии с изобретением.
Пример 8 Синтез Криптофицина 51
S-транс-3-пентен-2-ол (A)
Смесь рацемического транс-3-пентен-2-ола (933 мг, 11 ммолей), трифторзтиллаурата (4.14 г, 15 ммолей) и свиной панкретит липазы (PPL, 2.0 г) в 25 мл безводного диэтилового эфира перемешивали в течение 80 часов. Затем PPL отфильтровывали и промывали три раза. Эфирные фильтраты упари-вали и липкое масло затем подвергали вакуумной разгонке с коротким дефлегматором. S-транс-3-пентен-2-ол (А) конденсировался в ловушке, охла-ждаемой жидким азотом (338 мг).
1Н-ЯМР (CDCl3) 5.57 (4-Н; dq, -15.3/6.0), 5.47 (3-Н; ddd, -15.3/6.4/1.2), 4.19 (2-Н, 1:4:6:4:1 реntuplet, 6.4), 2.24 (ОН, bs), 1.63 (5-H3; d, 6.0), 1.19 (1-Н3, d; 6.4). 13С NMR (CDCl3) 135.5 (3), 125.5 (4), 68.7 (2), 23.3 (5), 17.5 (1).
S-транс-2-(2-пропинилокси)-3-пентен (В)
К интенсивно перемешиваемой смеси S-энантиомера А (628 мг, 7.3 ммоля), тетрабутилам-моний гидросульфата (138 мг, 0.41 ммоля) и 40% NaOH в воде (5 мл) при 0°С добавляют по каплям хлористый пропаргил (767 мг, 10.3 ммоля, 745 мкл). Интенсивное перемешивание продолжают в тече-ние ночи после чего смесь нейтрализуют НСl при 0°С и пропаргиловый эфир экстрагируют в пентан. Экстракт упаривают и пропаргиловый эфир очи-щают на короткой колонке с силикагелем (2% ди-этиловый эфир/пентан) с получением 778 мг про-паргилового эфира В,
[]D -118.9° (с 2.0, СHCl3); 1H NMR (СDCl3) 5.70 (4-H; dq, 18.5/6.5), 5.31 (3-Н, ddd, 18.5/7.2/1.4), 4.15 (1’-Н; dd, -15.6/2.1), 4.01 (1’-Н; dd, -15.6/2.1), 4.01 (2-H; m), 2.38 (3’-H, t, 2.1), 1.73 (5-H; dd, 6.5/l.4), l.25 (1H; d, 6.3).
(3R,4R)-4-Метилгепт-5(Е)-ен-1-ин-3-ол (С)
Аликвоту гексанового раствора бутиллития (2.5 М, 5.1 мл, 12.8 ммоля) упаривают в вакууме и остаток охлаждают до -90°С. Медленно добавляют раствор пропаргилового эфира В (454 мг, 3.66 ммоля) в 10 мл ТГФ. После этого позволяют темпе-ратуре подняться в течение ночи до комнатной температуры, реакционную смесь гасят раствором NH4Cl. Экстракция эфиром три раза, выпаривание высушенного экстракта и очистка остатка на ко-лонке с силикагелем (:% ЕtOАс/гексан) дает 332 Mr спирта С (выход 71%),
[]D +32.9° (с 3.0, СHCl3); IR (NaCl) max 3306, 2968, 1455, 1379, 1029, 975 cm-1. 1H NMR (CDCl3) 5.61 (6-H, dq, 15.3/6.3), 5.38 (5-H; dd, 15.3/7.7), 4.13 (3-H; bs), 2.45 (1-H; d, 1.5), 2.38 (4-H; m), 2.20 (ОН; bd, 3.3), 1.68 (7-Н; d, 6.2), 1.09 (4-CH3; d, 6.8). 13С NMR (CDCl3) 131.5 (5), 127.9 (6), 83.5 (2), 73.6 (1), 66.2 (3), 43.4 (4), 18.1(7), 15.7 (4-Me).
(3S,4R)-3-трет-Бутилдиметилсилилокси-4-метилгепт-5Е-еналь (D).
К перемешиваемому раствору спирта С (248 мг, 2 ммоля) и имидазола (340 мг, 5 ммолей) в 3 мл сухого ДМФА добавляют трет-бутилдиметилсилил хлорид (452 мг, 3 ммоля). После перемешивания смеси в течение ночи, добавляют 10 мл 10% рас-твора NaOH для разрушения избытка трет- бутил-диметилсилил хлорида. Продукт экстрагируют в эфир и экстракт промывают последовательно во-дой, 0.5 N НCl, и водой, сушат и выпаривают. Очистка остатка с помощью хроматографии на силикагеле с гексаном дает 457 мг (3R,4R)-3-трет-бутилдиметилсилилокси-4-метилгепт-5Е-ен-1-ина (выход 96%).
1Н-ЯМР (СDCl3) 5.50 (6-Н; dq, 15.3/6.1), 5.38 (5-H; dd, 15.3/7.5), 4.16 (3-Н; dd, 5.7/1.7), 2.37 (1-Н; d, 1.7), 2.35 (4-H; m), 1.68 (7-H; d, 6.1), 1.07 (4-Me, d, 6.8), 0.90 (CMe3; s), 0.12 (SiMe; s), 0.09 (SiMe; s).
Используя ту же процедуру, соответствующее TBDPS производное (3R,4R)- 3-трет-бутилдифенилсилилокси-4-метилгепт-5Е-ен-1-ина было получено с выходом 92%,
[]D -32.9° (с 3.0, СHCl3);. 1Н NMR (CDCl3) 7.72/7.38 (2Ph-H5), 5.32 (6-Н; m), 5,25 (5-Н; dd, 16.2/7.3), 4.29 (3-Н; dd, 5.2/2.0), 2.38 (4-H; m), 2.33 (1-Н, d, 2.0), 1.64 (7-H; d, 5.3), 1.11 (4-Me; d, 6.9), 1.06 (CMe3). 13С NMR (CDCl3) 136.l/ 135.9 /133.6 /129.7/129.6/127.5/127.3 (Ph), 132.4 (5), 126.1 (6), 83.3 (2), 73.5 (1), 68.0 (3), 43.6 (4), 26.9 (СMe3), 19.4 (CМе3), 18.0 (7), 14.7 (4-Ме).
2-Метилбутен (1.15 мл, 2М раствор в ТГФ, 2.3 ммоля) был добавлен к 1.1 мл раствора BF3 в ТГФ (1М, 1.1 ммоля) при -25°С и смесь перемешивали в бане со льдом в течение двух часов. Затем темпе-ратуру понижали до -50°С и сразу добавляли рас-твор ТВS производного (238 мг, 1 ммоль) в 1 мл ТГФ. Охлаждающую баню удаляли и реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной темпера-туры и оставляли при комнатной температуре в течение одного часа. Затем добавляли 2.2 М рас-твор КН2РО4/К2НРО4 (4.8 мл) и 30% H2O2 (0.8 мл) при 0°С. Спустя 1 час, ТГФ упаривали и остаток экстрагировали в эфир. Сухой эфирный экстракт выпаривали, остаток хроматографировали на си-ликагеле (1% EtOAc/reкcaн) с получением 194 мг альдегида D (выход 76%).
1H NMR (CDCl3) 9.78 (1-Н; t, 2.3), 5.46 (6-Н, dq, 15.3/6.1), 5.34 (5-Н; dd, 15.3/7.5), 4.13 (3-Н; m), 2.47 (2-Н; m), 2.31 (4-Н; m), 1.66 (7-Н; br d, 6.1), 0.99 (4- Me; d, 6.8), 0.87 (СМе3; s), 0.07 (SiMe; s), 0.04 (SiMe; s).
Производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (ТВDРS) альдегида получали с 83% выхо-дом, 1Н-ЯМР (СDСl3)
9.52 (1-Н; t, 2.4), 7.69/7.40 (2Ph-H5), 5.28 (6-Н; m), 5,22 (5-H, dd, 16.2/6.2), 4.19 (3-Н; m), 2.42 (2-H; m), 2.29 (4-H; m), 1.60 (7-H; d, 5.4), 1.07 (СМе3). 1,02 (4-Me; d, 6.9). 13С NMR (CDCl3) 202,0 (1), 136.l/133.6/ 133.3 /130.2/129.7/127.7/127.6 (Ph), 132.3 (5), 126.2 (6), 72.8 (3), 47.6 (2), 42.2 (4), 27.1 (СMe3), 19.6 (CМе3), 18.3 (7), 14.9 (4-Ме).
Метил(5S,6R)-5-трет-Бутилдиметилсилилокси-6-метил-7-оксонона-2Е,7Е-диеноат (E)
К перемешиваемому раствору альдегида D (0.74 г, 2.9 ммоля) и триметилфосфонацетата (632 Mr, 3.5 ммоля) в 5 мл ТГФ, охлажденного до -78°С, добавляли тетраметилгуанидин (435 мкл, 3.5 ммо-ля). Через 30 минут охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали дополнительно четыре часа. Смесь нейтрализовали 1 N HCl и продукт экстраги-ровали в эфир. Выпаривание высушенного эфирно-го экстракта оставляло остаток, который хромато-графировали на силикагеле (5% ЕtoАс/гексан) с получением 0.814 г Е (выход 96%). 1Н-ЯМР (СDCl3)
6.93 (3-H; dt, 15.6/7.8), 5.62 (2-H; dd, 15.6/1.2), 5.37 (8-Н, m), 5.37 (7-Н, m), 3.71 (ОСН3, s), 3.61 (5-Н, m), 2.29 (4-Н2, m), 2.22 (6-H, m), 1.66 (9-Н3; br d, 6.1), 0.99 (6-Me; d, 6.8), 0.88 (СМе3: s), 0.03 (SiMe; s), 0.01 (SiMe; s).
Производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (TBDPS) альдегида получали с 90% выхо-дом, 1Н-ЯМР (СDCl3)
7.68/7.38 (2Ph-Н5), 6.75 (3-Н; dt, 15.6/7.4), 5.62 (2, Н; d, 15.6), 5.34 (8-Н, m), 5.29 (7-Н, m), 3.70 (5-H, m), 3.68 (ОСH3, s), 2.28 (4-H2, m), 2.20 (6-Н, m), 1.62 (9-H3; d, 5.3), 1.08 (СМe3), 099 (6-Me; d, 6.9). 13C NMR (CDCl3) 166.7 (1), 146.4 (3). 136.0/134.2/133.8/129.62/129.56/127.5/1274 (Ph) 132.5 (7), 125.8 (8), 122.6 (2), 76.2 (5), 51.3 (ОСH3) 41.7 (6), 36.8 (4), 27.0 (СMe3) 19.4 (CМе3), 18.1 (9), 14.7 (6-Ме).
Метил(5S,6Н)-5-трет-Бутилдиметилсилилокси-6-метил-7-оксогепт-2(Е)-7-еноат (F)
Озон пропускали через раствор метилового эфира Е (328 мг, 1.0 ммоля) и 97 мкл пиридина в 15 мл CH2Cl2 при -78°С и за протеканием озонолиза наблюдали с помощью тонкослойной хроматогра-фии. После того как был израсходован метиловый эфир, добавляли около 500 мг цинковой пыли и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Температуру мед-ленно повышали до 25°С. Смесь отфильтровывали и фильтрат последовательно промывали насыщен-ными растворами CuSO4 и NaHCO3. После упари-вания растворителя, неочищенный альдегид F (249 мг, 83%) использовали в следующей стадии без дальнейшей очистки. 1Н-ЯМР (СDCl3)
9.96 (7-Н; t, 2.3). 6.96 (3-Н; dt, 15.7/7.6), 5.90 (2-H; dd, 15.7/0.7), 4.05 (5-Н; m), 3.74 (ОMе; s), 2.51 (6-H; m), 2.45 (4-Н2; m), 1.09 (6-Ме; d, 6.9), 0.88 (СМе3; s), 0.04 (SiMe; s), 0.03 (SiMe; s).
Метил(5S,6R)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2(Е),7Е- диеноат (G)
К перемешиваемому раствору альдегида F (25.0 мг, 0.08 ммоля) в 1.5 мл ТГФ при -78°С добав-ляли 0.80 мл охлажденной (-78°С) смеси бензи-лтрифенилфосфонийхлорида (268 мг, 0.69 ммоля, в 6.9 мл ТГФ) и н- бутиллития (280 мкл, 2.5 М в гек-сане). Через 15 минут охлаждающую баню удаля-ли и перемешивание продолжали в течение двух часов. Реакцию гасили насыщенным раствором хлористого аммония и ТГФ упаривали. Концентрат экстрагировали в гексан дважды и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили и выпаривали. Оставшееся масло, 5:1 смесь Е и Z изомеров, растворяли в 1.5 мл бензола, содержаще-го тиофенол (0.02 М) и 1.1'- азо6ис(циклогексанкарбонитрил) (VAZO, 0.006 М), и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 5 часов. После охлаждения до комнатной температуры, добавляли гексан (15 мл) и органиче-ский раствор последовательно промывали 10% раствором NaOH и солевым раствором, сушили (MgSO4) и выпаривали. Хроматографирование остатка на силикагеле (2% EtOAc/гексан) приводи-ло к получению 24 мг (выход 80%) продукта G.
[]D + 68.2 (с 1,5, CHCl3); EIMS m/z 374 (<1%; М+), 359 (1; М+ -СН3), 317 (10; М+ -Bu), 275 (10), 243, (73), 143 (20), 115 (10), 97 (64), 89 (31), 73 (100), HREIMS m/z 374.2232 (C22H34О3Si, +4.5mmu), 359.2031 (С21H31O3Si, + l.l mmu), 317.1579 (C18H25O3Si, -0.6mmu); UV (МеОН) max () 206 (33500), 252 (20100) nm; IR max 2952, 2855, 1725, 1657, 1435, 1257, 1168, 1097, 970, 836, 775 cm-1; 1H NMR 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.96 (3-H; ddd, 15.6/7.8/7.5), 6.37 (8-H; d, 15.9), 6.16 (7-H; dd, 15.9/8.1), 5.84 (2-H; d, 15.6), 3.75 (5-H; ddd, 10.2/6.0/4.2), 3.72 (ОMе, s), 2.44 (6-H; m), 2.36 (4-Н2; m), 1.10 (6-Me; d, 6.9), 0.91 (Si-СМе3; s), 0.06 (Si-Me; s), 0.05 (Si- Me; s); 13С NMR 166.8 (1), 146.4 (3), 137.6 (Ph 1’), 131.9 (8); 130.4 (7), 128,5 (Ph 3’/5’). 127.0 (Ph 4’), 126.0 (Ph 2’/6’), 122.9 (2), 75.0 (5), 51.4 (ОМе), 42.8 (6), 37.6 (4), 25.9 (Si-CМе3), 18.1 (Si-СМе3), 16.2 (6-Me), -4.4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me). Calcd for C22Н34О3Si: С, 70.52; H, 9.17. Found: С, 70.72; H, 9.42.
(5S,6R)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенилокта-2Е,7Е-диеновая кислота (Н)
К раствору сложного эфира Cr (159 мг, 0,43 ммоля) в 7 мл ацетона было добавлено 5 мл 1N LiOH. Смесь перемешивали при температуре 25С в течение 3 часов, разбавляли 20 мл Et2O и окисляли 1N Hcl до ~ рН4. Органический слой отделили и промывали порциями по 20 мл рассола и воды, сушили (Mq SO4) и выпаривали. Оставшееся масло подвергали хромотографии на силикагеле (40% EtOAc в гексане, содержащем 0,5% АсОН с получе-нием чистой кислоты Н в виде бледножелтого ма-ловязкого масла (145 мг, с выходом 95%).
[]D + 87.0 (с 1.4, CHCl3); EIMS m/z 343 (1; М+-ОН), 303 (5), 275 (9), 257 (4), 229 (62), 213 (16), 171 (22), 143 (37), 131(16), 115 (23), 97 (100), 91 (44); HREIMS m/z 343.2107 (С21H31O2Si, -l.3mmu), 229.1220 (С15Н17O2, +0.9mmu); UV max () 206 (24500), 252 (15600) nm; IR mx 3300-2800 (br), 2956, 2856, 1697, 1651, 1419, 1256, 1097, 836, 693 cm-1; 1Н NMR 10.4 (СО2H; bs, W1/2 100), 7.2-7.4 (Ph-Н5; m), 7.09 (3-Н; ddd, 15.6/7.6/7.6), 6.39 (8-Н; d, 15.9), 6.16 (7-H; dd, 15.9/8.1), 5.85 (2-Н; d, 15.6), 3.78 (5-Н; ddd, 6.0/6.0/4.2), 2.46 (6-Н; m), 2.40 (4-H2; m), 1.12 (6-Me; d, 6.9), 0.92 (Si-CMe3; s), 0.07 (SiMe2; s); 13С NMR 171.6 (1), 149.1 (3), 137.5 (Ph 1’), 131.8 (8), 130.5 (7), 128.5 (Ph 3’/5’), 127.1 (Ph 4’), 126.1 (Ph 2’/6’), 122.7 (2), 74.9 (5), 42.9 (6), 37.6 (4), 25.8 (Si-CMe3), 18.1 (Si-CMe3), 16.1 (6-Me), -4.4 (Si-Me), -4.5 (Si-Me).
2.2.2-трихлорэтиловый эфир 3-(3-хлор-4-метоксифенил)-D-аланина (I)
Образец производного D-хлор-тирозина BОС (160 Mr, 0.35 ммоля) растворяли в 3 мл чистой три-фторуксусной кислоты и оставляли при комнатной температуре на 1 час. Избыток реагента удаляли при пониженном давлении, возвращая желаемый амин 1 в виде трифторацетатной соли (165 мг, 100% выход),
[]D + 1.7 (с 5.2, CHCl3); IR max 3400-2500 (br), 1760, 1680, 1500, 1200, 1130, 1070, 805, 710 cm-1, 1H NMR 8.07 (NH2; br m, W1/2 45), 7.27 (5-H; s), 7.12 (9-H; d, 8.1), 6.88 (8-H; d, 8.1), 4.86/4.67 (СH2CCl3; AB q, -12.0), 4.41 (2-H; bs, W1/2 20), 3.86 (ОMе; s), 3.33 (3-H; dd, -14.4/3.6), 3.22 (3-H’; dd, -14.4/6.6); 13С NMR 167.6 (1), 155.0 (7). 130.9 (5), 128.8 (9), 125.4 (4), 123.1(6), 112.7 (8). 93.4 (ССl3), 75.3 (CН2ССl3), 56.1 (ОMе), 54.2 (2), 34.9 (3).
Соединение J
К перемешиваемому раствору Н (25 мг, 0.07 ммоля) в 3 мл безводного ДМФА в атмосфере арго-на последовательно добавляли пентафордифенил-фосфинат (FDPP, 32 мг, 0.08 ммоля), трифтораце-татную соль (35 мг, 0.07 ммоля) и диизопропилэти-ламин (DIEA, 27 мг, приблизительно 36 мкл, 0.21 ммоля, приблизительно 3 эквивалента). Перемеши-вание продолжали в течение одного часа при 25°С и затем реакционную смесь экстрагировали 20 мл Et2O. Эфирный экстракт промывали 10 мл 1 N НCl, с последующей промывкой 10 мл насыщенного раствора NaHCO3, 20 мл рассола и 20 мл воды, сушили (MgSO4) и выпаривали. Оставшееся бледно желтое масло подвергали хроматографии на сили-кагеле (15% EtOAc в гексане) с получением J в виде бесцветного масла (32 мг, с выходом 65%):
[]D + 11.8 (с 1.2, CHCl3); EIMS m/z; 644/646/648/650 (7/8/6/3; М+-Вu), 570/572/574 (46/100/21), 536/538 (18/15), 394/396 (67/29), 275 (20), 155/157 (29/9), HREIMS m/z 644.0981 (C29H34Cl4NO5Si, -2.13mmu); UV max () 204 (54900), 230 (23200), 248 (19200),184 (3500) nm; IR max 3290, 2980, 2850, 1760, 1680, 1640, 1505, 1380, 1270, 1169, 990, 720 cm-1, 1H NMR unit A 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.87 (3- H; ddd, 15.0/7.8/7.5), 6.37 (8-H; d, 16.2), 6.18 (7-H; dd, 16.2/8.1), 5.82 (2-H; d, 15.0), 3.75 (5-H; ddd, 9.9/6.0/4.8), 2.46 (6-H; m), 2.36 (4-H2; m), 1.11 (6-Me; d, 6.9), 0.91 (SiCMe3; s), 0.07 (SiMe; s), 0.06 (SiMe; s); unit В 7.19 (5-Н; d, 2.1), 7.04 (9-H; dd, 8.4/2.1), 6.85 (8-H; d, 8.4), 5.85 (NH; d, 7.8). 5.08 (2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.81/4.74 (CH2CCl3; AB q, -11.7), 3.87 (ОMе; s). 3.22 (3-H; dd, -14.l/5.7), 3.l2 (3- H’; dd, -14.1/6.0). 13С NMR unit A 165.1 (1), 143.0 (3), 137.6 (9), 132.0 (8), 130.4 (7), 128.5 (11/13), 127.0 (12), 126.0 (10/14), 124.7 (2), 75.0 (5). 42.6 (6). 37.6 (4), 25.9 (Si-CMe3), 18.1 (Si-CМе3), 16.5 (6-Me), -4.3 (Si-Me). -4.6 (Si-Me); unit B 170.1 (1), 154.3 (7), 131.1 (5). 128.5 (4/9), 122.6 (6), 112.2 (8), 94.2 (CCl3), 74.8 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
(1',R,5S,6R)-N-l’-(кар6о-2'',2",2"-трихлорэтокси)-2’-(3-хлор-4- метоксифенил)этил-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2Е,7Е-диенамид (К)
К раствору J (50 мг, 0.07 ммоля) в 4 мл MeCN добавляли 400 мкл 50% водного раствора HF и смесь перемешивали в течение 1 часа при 25°С. Экстракция в 30 мл Et2O с последующим промыва-нием эфирного экстракта 30 мл порциями насы-щенного раствора NaHCO3, рассола и воды, высу-шиванием (MgSO4) и выпариванием давала спирт К в виде бесцветной пены (40 мг, выход 95%)
[]D - 6.1 (с 1.3, CHCl3); EIMS m/z (rel intensity) 587/589/591/593 (M+, < 1%), 552/554/556 (1/2/0.5), 456/458/460/462 (1/2/1/0.2), 342/344/346 (7/8/4), 212/214 (15/5), 195/197 (6/2), 155/157 (99/34), 131 (100), 91 (77); HREIMS m/z 587.0721 (C27H2935Cl4NO5, +7.9mmu); UV max 204 (56500), 230 (22100), 248 (18100), 284 (3600) mm; IR max 3400, 3300, 2980, 1780, 1680, 1640, 1505, 1270, 1180, 1090, 1000, 770 cm-1. 1H NMR unit A 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.92 (3-H, ddd, 15.3/7.8/7.5), 6.46 (8-H; d, 15.9), 6.14 (7-H; dd, 15.9/8.4), 5.90 (2-H; d, 15.3), 3.65 (5-H; ddd 7.8/5.6/4.0), 2.39 (6-H/4-H2; bm), 1.78 (OH; bs, W1/2 40 Hz), 1.14 (6-Me; d, 6.9), unit В 7.18 (5-Н; d, 1.8), 7.03 (9-Н; dd, 8.4/1.8), 6.84 (8-Н; d, 8.4), 5.97 (NH; d, 7.8), 5.06 (2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.79/4.72 (CH2CCl3; AB q, -12.0), 3.86 (ОMе; s), 3.20 (3-H; dd, - 14.1/5.7), 3.10 (3-H’; dd. -14.1/6.0). 13С NMR unit A 165.3 (1), 142.6 (3), 137.0 (9), 131.7 (8), 131.0 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (12), 126.1(10/14), 125.0 (2), 73.8 (5), 43.2 (6), 37.2 (4), 16.8 (6-Me), unit B 170.2 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (9), 128.3 (4), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (CCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
3-(трет-Бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропановая кислота (М).
К раствору 3-амино-2.2-диметилпропан-1-ола (L) (3 г, 29 ммолей) в 51 мл 10% раствора триэта-ноламина в МеОН добавляли ди-трет-бутил дикар-бонат (6.7 г, 31 ммоль) и смесь перемешивали при 25°С в течение 1 часа. После удаления растворите-ля, остаток растворяли в СН2Сl2 (30мл) и раствор дважды промывали 1М раствором КНSO4 (рН 2) и один раз насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало 5.8 г, (выход 93%) 3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропанола в виде белого твердого ве-щества, которое непосредственно использовали для следующей стадии без дальнейшей очистки (выше 95% чистоты по данным ЯМР анализа), т.пл 70.5-71.5 C;
IR max 3350, 1685, 1456 cm-1; 1H NMR 4,87 (NH;, br s), 3.72 (ОН; br s), 3.19 (1-H2; d, 5.1), 2.95 (3-H2; d, 6.0), 1.44 (CMe3; s), 0.85 (2-Me2; s); 13С NMR (CDCl3) 157.6 (BОС CО), 79.7 (CMe3), 68.1(1), 47.1 (3), 36.7 (2), 28.3 (СMe3), 22.4 (2-Ме2).
К раствору спирта 3-(трет-бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропанола (5.3 г, 25.9 ммоля) и периодата натрия (16.6 г, 77.7 ммоля) в четыреххлористом углероде (52 мл) аце-тонитриле (52 мл) и воде (78 мл) добавляли гидрат треххлористого рутения (122 мг) и смесь переме-шивали при 25°С в течение 1 часа. Смесь отфиль-тровывали через целит и добавляли насыщенный раствор карбоната калия в воде (50 мл). Водный слой отделяли, промывали эфиром (20 мл), подкис-ляли НCl до рН 2 при 0°С и экстрагировали СН2Сl2 (и экстрагировали 3 раза по 30 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало остаток, который сначала подвер-гали флеш хроматографии с обращенной фазой на С18 кремниевой колонке (ODS 120 А, 50 до 90% МеОН) и затем кристаллизовали из эфира с полу-чением 3.7 г, (выход 66%) М в виде белого твердого вещества. т.пл. 106-108°С;
EIMS m/z (геl intensity) 217 (0.1), 161(11), 98 (25), 88 (71), 57 (100); HREIMS m/z 217.1292 (С10Н19NO4, +2.2mmu); IR max 3450-2500, 1710, 1694, 1510 cm-1; 1H NMR of major conformer 5.03 (NH; br s), 3.26 (3-H2; m), 1.45 (СМе3; s), 1.24 (2-Me2; s); 13С NMR (CDCl3) 183.2 (l), 156.3 (BОС CО), 79.6 (CМе3), 49.5/47.9 (2/3), 28.4 (СMe3), 22.9 (2-Ме2).
Аллил (2S)-2-гидрокси-4-метилпентаноат (N).
К раствору 2.66 г L-лейциновой кислоты (20 ммолей) и 1.74 г бикарбоната натрия (20 ммолей) в 30 мл воды при 0°С добавляли 30 мл раствора 6.44 г тетрабутиламмоний хлорида (20 ммолей) и 1.74 мл аллилбромида (20 ммолей) в CH2Cl2. После ин-тенсивного перемешивания смеси в течение 24 ча-сов, СН2Сl2 выпаривали. Добавляли около 50 мл воды и водный слой экстрагировали четыре раза Еt2О. Эфирный раствор сушили над безводным сульфатом натрия и затем выпаривали. Остаток пропускали через короткую Si колонку с получени-ем 3.21 г аллилового эфира N (выход 93%) в виде бесцветного масла,
[]D - 8.4 (с 1.1, CHCl3); IR max 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm-1; 1Н NMR 5.92 (allyl 2-Н; m), 5.34 (allyl 3-Hz; dd, 17.4/1.1), 5.28 (allyl 3-HE; dd, 10.5/1.1), 4.67 (allyl 1-H2; d, 5.7), 4.23 (2-H; br s), 2.64 (ОН; br s), 1.89 (4-H; m), 1.57 (3-Н2; m), 0.96 (5-H3; d, 6.5), 0.95 (4-Me; d, 6.7), 13С NMR 175.3 (1), 131.4 (allyl C-2), 118.6 (3), 68.9 (2), 65.7 (allyl C-1), 43.2 (3), 24.1 (4), 23.0 (5), 21.3 (4-Me).
Аллил (2S)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил) ами-но-2',2'-диметилпропаноилокси]-4-метилпентаноат (О).
К раствору 0.8 г М (3.7 ммоля), 0.76 г N (4.4 ммоля) и 92 мг DМАР в 10 мл сухого СН2Cl2 при 0С добавляли 0.84 г DDС (4.1 ммоля) в СН2Сl2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 3 часов и фильтровали. Фильтрат промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили (Na2SO4) и выпаривали в вакууме. Флеш хромато-графия (силикагель, 5% ЕtOАс/гексан) давала 1.0 г (выход 92°/о) чистого О в виде бесцветного масла, Rf 0.68 (17:83 ЕtOАс/гексан),
[]D - 29.4 (с 18.1, CHCl3); EIMS m/z (rel inten-sity) 371 (2, M+), 242 (13), 184 (12), 126 (20), 84 (100); HREIMS m/z 371.2317 (C19H33NO6, -0.9mmu), IR (neat) max 3385, 2963, 1731, 1720, 1513 cm-1, 1H NMR (300 MHz, CDCl3) unit C 5.39 (NH; obscured br s), 3.33 (3-Н; dd -13.5/7.4), 3.27 (3-Н’, dd, -13.5/5.9), 2.78 (2-Н, m), 1.44 (СМез; s), 1.23 (2-Ме; s), 1.22 (2-Me; s), unit D 5.91 (allyl 2-H, ddt, 16.6/10.3/6.0 Hz), 5.34 (allyl 3-HZ; bd, 16.6), 5.27 (allyl 3-HE; bd, 10.3), 5.08 (2-H; dd, 9.6/3.6), 4.65 (allyl 1-H2; m), 1.6-1.9 (3-H2/4-H; m), 0.94 (5-H3; d, 6.3), 0.94 (4-Me; d, 7,3). 13С NMR unit С 176.5 (1). 156.3 (BОС CО), 79.0 (CМе3), 48.6 (3), 44.0 (2), 28.4 (СMe3). 22.2/23.0 (2-Ме2); unit D 170.6 (1), 131.4 (allyl С-2), 119.1 (allyl С-З), 70.9 (2), 66.0 (allyl C-l), 39.5 (3), 24.8 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме).
(2S)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил)aмино-2’.2’-диметилпропаноилокси]-4-метилпентановая кисло-та (Р).
К 10 мл раствора 180 мг (0.49 ммоля) О и 60 мг (0.05 ммоля) тетракис(трифенилфосфин)палладия в сухом ТГФ (в атмосфере аргона) медленно добав-ляли 470 мкл (5.4 ммоля) сухого морфолина в тече-ние 10 минут. После перемешивания в течение 50 минут, добавляли 40 мл эфира и раствор промыва-ли 1 N НCl (40 мл) и затем экстрагировали насы-щенным раствором бикарбоната натрия (2 раза по 30 мл). Водный экстракт подкисляли раствором 0.5 N НCl и экстрагировали эфиром (40 мл). Эфирный экстракт промывали водой (2 раза по 30 мл), суши-ли (MgSO4) и упаривали в вакууме с получением Р в виде бесцветного подвижного масла (152 мг, выход 95%):
[]D - 22.2 (с 2.2, CHCl3); EIMS m/z (геl intensi-ty) 331 (1, М+), 275 (1), 258 (4), 231 (9), 202 (36), 174 (13), 144 (31). 126 (16), 114 (14), 98 (54), 88 (50), 84 9100); HREIMS m/z 331.2004 (C16H29NO6, -1.0mmu). 1H NMR (CDCl3) unit С 5.41 (NH; dd, 5.7/5.4), 3.30 (3-Н2; m); 2.68 (2-Н; m), 1.43 (CMe3; br s), 1,22 (2-Me, s), 1.21 (2-Me; s); unit D 6.47 (l-OH, br s, W1/2 35), 5.09 (2-Н; dd, 9.3/2.7), 1.7-1.9 (3-H2/4-H; m), 0.97 (5-H3; d, 6.0), 0.94 (4-Me, d, 6.0). 13С NMR (CDCl3) unit С 176.5 (1), 156.5 (BОС СО), 79.3 (CМе3). 48.6 (3), 44.0 (2), 28.3 (СMe3), 23.0 (2-Ме), 22.2 (2-Ме), unit D 175.4 (1), 70.6 (2), 39.5 (3), 24.8 (4), 23.0 (5), 21.4 (4-Ме).
Соединение О.
К раствору спирта К (80 мг, 0.14 ммоля), кис-лоты Р (68 Mr, 0.21 ммоля) и DМАР (4 мл) в сухом CH2Cl2 (4 мл), перемешиваемому при 0°С в атмо-сфере аргона, добавляли DDC (44 мг, 0.21 ммоля) в сухом СН2Сl2 (1 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 минут, время в течение которого обра-зовывался белый осадок, и затем позволяли нагреться до комнатной температуры и перемеши-вали дополнительно еще 4 часа. Осадок офильтро-вывали и фильтрат разбавляли Et2O (40 мл) и про-мывали последовательно разбавленным раствором НCl (1 М, 40 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (40 мл), и рассолом (40 мл). Эфирный слой сушили (Mg2SO4) и выпаривали в вакууме с получением воскообразного твердого вещества. Хроматография (силикагель, ЕtOАс:гексан 1:3) дает чистый Q виде бесцветного вязкого масла (103 мг, выход 84%),
[]D - 3.1 (с 2.9, CHCl3); EIMS m/z 800/802/804/806 (<1, М+-С5Н8O2), 415/417/419/421(5/3/3/2), 342/344/346 (7/9/4), 286/288/290 (2/6/2), 207 (34), 178 (22), 155/157 (66/24), 131 (36), 91(70), 70 (100); HREIMS m/z 800.2179 (С38Н48N2O835Сl4, -1.4mmu): UV (МеОН) max () 204 (51200), 230 (18500), 248 (17200), 282 (2200) nm; IR (NaCl) max 3376, 2965, 1755, 1728, 1712, 1678, 1504, 1258, 1150, 1067, 732 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A: 7.28-7.33 (10-H/14-H/11-H/13-H; m), 7.22 (12-H; m), 6.78 (3-H; ddd, 15,8/6.4/6.3), 6.40 (8-H; d, 15.8), 6.01 (7-H; dd, 15.8/8.7), 5.88 (2-H; d, 15.8), 5.06 (5-H; bm, W1/2 20 Hz), 2.62 (6-H; m), 2.53 (4-Н2; bm. W1/2 15 Hz), 1.12 (6-СН3; d, 6.8); unit B 7.18 (5-Н; d, 2.0), 7.05 (9-Н; dd, 8.5/2.0), 6.83 (8-H; d, 8.5), 6.49 (NH; d, 7.9), 5.06 (2-H; bm, W1/2 20 Hz), 4.79/4.70 (СH2CCl3; AB q, -11.7), 3.85 (ОСH3; s), 3.20 (3-Hb; dd, -14.1/5.8), 3.07 (3-Ha; dd, -14.1/6.7), unit C 5.38 (NH; bt, 6.5), 3.27 (3-H2; d, 6.5), 1.20 (2-СН3; s), 1.15 (2-СН3’; s), unit D 4.92 (2-H; dd, 10.0/3.8), 1.72 (4-H; bm, W1/2 Hz), 1.67 (3-Hb; ddd, -14.l/10.0/5.0/), 1.56 (3-Ha; ddd, - 14.1/9.1/3.8), 1.43 (СО2СМе3, s), 0.86 (4-CH3; d, 6.4), 0.82 (5-H3; d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.4 (1), 139.3 (3), 136.9 (9), 131.7 (8), 130.1(7), 128.6 (11/13), 127.5 (12), 126.2 (10/14), 125.4 (2), 76.5 (5), 41.1 (6), 33.4 (4), 16.7 (6-Me); unit B 170.0 (1), 154.1 (7), 131.2 (5), 128.8 (4), 128.5 (9), 122.3 (6), 112.1 (8), 94.3 (CH2CCl3), 74.6 (CH2CCl3), 56.1 (7-OMе), 53.2 (2), 36.6 (3), unit C 176.9 (1), 156.4 (CO2CMe3), 79.1 (СО2CМе3), 48.7 (3), 44.0 (2), 22.8 (2-Ме’); 22.3 (2-Ме’); unit D 170.7 (1), 71.4 (2), 39.5 (3), 28.4 (СО2CMe3), 24.8 (4), 23.0 (4-Ме), 21.4 (5).
Аминокислота R.
К аминокислоте Q (100 мг, 0.11 ммоля) добав-ляли активированную цинковую пыль (400 мг, из-быток) и АсОН (4 мл). Гетерогенную смесь подвер-гали воздействию ультразвука в течение 45 минут, перемешивали дополнительно в течение 90 минут при комнатной температуре и затем выливали на целитовую подкладку. Органическое вещество смывали с целитовой подкладки СНзСl2. Раствори-тель удаляли в вакууме, оставляя карбоновую кис-лоту в виде бесцветного аморфного твердого ве-щеcтва.
Полученную неочищенную кислоту без очист-ки растворяли в трифторуксусной кислоте (ТФУК, 5 мл) и позволяли оставаться при комнатной тем-пературе в течение 1 часа. Спустя это время, избы-ток ТФУК удаляли в вакууме и получающееся аморфное твердое вещество затем подвергали хро-матографической очистке (Sep-Pak™, силикагель, сначала СН2Сl2, затем 10% МеОН/СН2Сl2) с полу-чением желаемого соединения в виде трифтораце-татаммонийной соли. Повторная лиофилизация водного раствора соли дает свободную аминокис-лоту R в виде бесцветного аморфного твердого вещества (68 мг, выход 91% в двух стадиях); ИК (NaCl)
max 3300, 3200, 2965, 1693, 1606, 1504, 1441, 1259, 1201, 1146, 1066, 727 cm-1. 1H NMR (CD3OD) unit A: 7.33 (10-H/14-H; d, 7.4), 7.28 (11-H/13-H; t, 7.4), 7.18-7.23 (12-H; m), 6.69 (3-H; ddd, 15.6/7.7/7.0), 6.43 (8-Н; d, 15.8), 6.04 (7-Н; dd, 15.8/8.9), 6.00 (2-H; d, 15.6), 5.01 (5-H; ddd, 9.1/6.9/3.1), 2.64 (4-Hb; bm, W1/2 30 Hz), 2.60 (6-H; bm, W1/2 20 Hz), 2.49 (4-Ha; ddd, 15.8/9.1/7.7). 1.13 (6-Me; d, 6.7); unit В 7.18-7.23 (5-H; m), 7.11 (9-H; dd, 8.3/1.6), 6.92 (8-Н; d, 8.3), 4.59 (2-H; bm, W1/2 20 Hz), 3.81 (ОСН3; s), 3.14 (3-Hb; dd, -13.7/4.3), 2.96 (3-H2; m, W1/2 20 Hz), unit C 2.96 (3-Ha; bm, W1/2 20 Hz), 1.31 (2-СН3, s), 1.25 (2-СН3’; s), unit D 4.90 (2-Н; dd, 9.6/4.0), 1.66 (4-H; bm, W1/2 25 Hz), 1.59 (3-Hb; ddd, -14.4/9.6/4.8), 1.53 (3-Ha; ddd, - 14.4/9.1/4.0), 0.81 (4-Me; d, 6.5), 0.74 (5-H3; d, 6.5). 13С NMR (CD3OD) unit A 167.7 (1), 140.7 (3), 138.4 (9). 133.0 (8), 131.7 (7), 129.6 (11/13), 128.5 (12), 127.3 (10/14), 127.1 (2), 78.4 (5), 43.1 (6). 35.7 (4), 17.4 (6-Me), unit B 179.8 (1), 155.2 (7), 132.3 (4), 132.1 (5), 130.1 (9), 123.0 (6), 113.4 (8), 56.6 (7-ОMе), 56.6 (2), 37.8 (3), unit С 176.8 (1), 48.2 (3), 42.2 (2), 23.3 (2-Ме), 23.3 (2-Ме’), unit D 172.0 (1), 73.4 (2), 40.7 (3), 26.0 (4), 23.1 (4-Me), 21.8 (5).
Криптофицин 51
К перемешиваемому раствору аминокислоты Т (75 мг, 0.11 ммоля) в безводном ДМФА (20 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли диизопропилэтиламин (DIEA, 44 мг, 60 мкл, 0.34 ммоля, приблизительно 3 эквивалента) с последующим добавлением пентафтордифенил-фосфината (FDPP, 55 Mr, 0.14 ммоля, приблизи-тельно 1.3 эквивалента) в ДМФА (2 мл). Смесь пе-ремешивали в течение 12 часов, добавляли Et2O (40 мл) и Н2О (40 мл), сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаточное воскообразное твердое вещество очищали далее с помощью хро-матографии с обращенной фазой (ODC, 10 мкл 30% H2O/MeCN, 3 мл мин-1) с получением Криптофици-на 51 в виде бесцветного аморфного твердого ве-щества (45 мг, выход 61%),
[]D +26.4 (с 0.25, СHCl3); EIМS m/z 652/654 (М+, 3/1), 632/634 (3/2), 426/428 (51/15), 227 (64), 195/197 (64/22), 155/157 (71/15), 131(59), 91(100); HREIMS m/z 652.2936 (С36Н45N2О735Cl, -2.1mmu), UV (МеОН) max () 204 (52000), 228 (20400), 250 (13400), 284 (2800) nm IR (NaCI) max 3376, 3270, 2960, 1747, 1721, 1659, 1536, 1514,1259,1150, 1066, 1013, 980, 694 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.32 (10-H/14-H; dd, 8.0/1.5), 7.29 (11-H/13-H, t, 8.0), 7.24 (12-H; bm, W1/2 15 Hz), 6.77 (3-H; ddd, 15.2/10.8/4.3), 6.40 (8-H; d, 15.8), 6.01 (7-H; dd, 15.8/8.8), 5.76 (2-H; dd, 15.2/1.1), 5.04 (5-H; ddd, 11.1/6.4/1.9), 2.54 (4-Hb/6-H, bm, W1/2 15 Hz), 2.37 (4-Ha; ddd, -14.3/11.1/10.8 ), 1.13 (6-Me; d, 6.8); unit В 7.20 (5-H, d, 2.0), 7.05 (9-H; dd, 8.4/2.0), 6.84 (8-H; d, 8.4), 5.61 (NH; d, 7.8), 4.74 (2-H; ddd, 7.8/7.6/5.4), 3.87 (OMe; s), 3.11 (3-Hb; dd, -14.2/5.4), 3.06 (3-Нa; dd, -14.2/7.6); unit C 7.24 (NH; bm, W1/2 15 Hz), 3.40 (3-Hb; dd, -13.5/8.5), 3.12 (3-Ha; dd, -13.5/3.6), 1.22 (2-Ме, s), 1.15 (2-Ме’, s), unit D 4.85 (2-Н; dd, 10.2/3.6), 1.66 (3-Hb; ddd, - 14.0/10.2/4.6), 1.61 (4-H; bm W1/2 20.0 Hz), 1.33 (3-Ha; ddd, -14.0/9.0/3.6), 0.74 (4- Me; d, 6.6), 0.72 (5-Н3; d, 6.6). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (1), 142.2 (3), 136.7 (9), 131.7 (8), 130.1 (7), 128.6 (11/13), 127.5 (12), 126.1 (10/14), 124.6 (2), 77.0 (5), 42.2 (6), 36.5 (4), 17.3 (6-Me), unit B 170.3 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.5 (4), 128.3 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.2 (2), 35.3 (3); unit С 178.0 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.8 (2-Me), 22.6 (2-Me’), unit D 170.6 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Пример 9 Синтез Криптофицина 52 и Крипто-фицина 53.
К перемешиваемому раствору Криптофицина 51 (75 мг, 0.12 ммоля) в безводном дихлорметане при 0°С в атмосфере аргона добавляли раствор м- хлорпербензойной кислоты (mСРВА, 50 мг, 0.23 ммоля, приблизительно 2 эквивалента на 80% ак-тивный кислород) в дихлорметане (1 мл). Спустя 30 минут реакционной смеси позволяют нагреться до комнатной температуры и перемешивают дополни-тельно в течение 12 часов. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении с получением 1.8:1 смеси Криптофицинов 52 и 53 (по данным ЯМР анализа), соответственно, в виде аморфного твердого вещества. Смесь региоизомерных эпокси-дов растворяли в минимальном количестве ацето-нитрила и подвергали хроматографированию с обращенной фазой (YMCODS, 10 мк, 250 мм х 22.5 мм, 30% H2O/MeCN, 6 мл мин-1) для разделения Криптофицина 52 (37 мг, выход 48%) и Криптофи-цина 53 (19 мг, выход 25°/о).
Спектральные данные для Криптофицина 52
[]D +19.9 (с 0.5, СHCl3), EIMS m/z 668/670 (4/2, М+), 445 (35), 244 (12), 227 (22), 195/197 (66/27), 184 (45),155/157 (38/10), 91 (100), HREIMS m/z 668.2873 (C36H45N2O835Cl, -0.9mmu), 445.2497 (C25H35NO6, -3.3mmu); UV (MeOH) max () 204 (35100), 218 (20900) nm; IR (NaCl) max 3415, 3270, 2960,1748, 1721, 1650, 1536, 1504, 1260, 1192, 1150, 1066, 1013, 800, 698 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.33-7.38 (11-H/12-H/13-H; bm, W1/2 25 Hz), 7.24 (10-H/14-H; m, W1/2; 15 Hz), 6.76 (3-Н; ddd, 15.1/10.8/4.3), 5.71 (2-H; dd, 15.1/1.7), 5.20 (5-H; ddd, 11.0/5.0/1.8), 3.68 (8-H, d. 1.9), 2.92 (7-H, dd, 7.5/1.9), 2.57 (4-Hb; ddd, -14.6/1.8/1.7), 2.45 (4-Ha; ddd -14.6/11.0/10.8), 1.78 (6-Н; bm, W1/2 15 Hz), 1.14 (6-Me; d, 6.9); unit B 7.18 (5-H; d, 2.2), 7.04 (9-H; dd, 8.4/2.2), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.56 (NH; d, 7.9), 4.73 (2-H; ddd, 7.9/7.4/5.3), 3.87 (OMe; s), 309 (3-Hb; dd, -14.6/5.3), 3.05 (3-Ha; dd, - 14.6/7.4); unit C 7.20 (NH; dd, 8.6/3.2), 3.41 (3-Hb; dd, -13.4/.86), 3.10 (3-Ha; dd, -13.4/3.2), 1.22 (2-Me; s), 1.15 (2-Me’, s); unit D 4.82 (2-H; dd, 10.2/3.5), 1.73 (3-Hb; bm, W1/2 20Hz), 1.66 (4-H; bm, W1/2 20 Hz), 1.31 (3-Ha, ddd; -13.8/9.1/3.5), 0.84 (4-Me; d, 6.6), 0.82 (5-H3; d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A 164.9 (1), 141.8 (3), 136.7 (9) 128.7 (11/13), 128.3 (12), 125.6 (10/14),124.7 (2); 75.9 (5), 63.0 (7) 59.0 (8) 40.7 (6), 36.9 (4), 13.5 (6-Me), unit B 170.3 (1), 154.1 (7) 130.9 (9) 129.5 (4), 128.5 (9), 122.6 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-OMe), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С 178.0 (1), 465 (3), 42.8 (2), 22.8 (2-Me), 22.8 (2-M’e), unit D 170.5 (1), 71.2 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Спектральные данные для Криптофицина 53
[]D +20.8 (с 1.7, СHCl3); EIMS m/z 668/670 (5/4, M+), 445 (32), 244 (15), 227 (24), 195/197 (64/21), 184 (60), 155/157 (33/9), 91 (100); HREIMS m/z 668.2853 (С36Н45O835Сl, 1.1mmu); UV (MeOH) max () 204 (38700), 218 (22900) nm; IR (NaCl) max 3415, 3280, 2917, 2849, 1748, 1722, 1660, 1504, 1465, 1260, 1190, 1150, 1066, 755 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.29-7.36 (11-H/12-H/13-H, bm, W1/2 20 Hz), 7.23 (10-H/14-H; dd, 8.3/1.7), 6.77 (3-H; ddd, 15.1/10.9/4.3), 5.81 (2-H; dd, 15.1/1.3), 5.17 (5-H; ddd, 11.2/4.9/1.8), 3.58 (8-H; d, 1.7), 2.90 (7-H; dd, 7.8/1.7), 2.67 (4-Hb; ddd, 14.7/11.2/10.9), 2.56 (4-Ha; dddd, 14.7/4.3/l.8/l.3), 1.67-1.78 (6-H, bm, W1/2; 45), 1.03 (6-СН3; d, 7.1); unit B 7.21 (5-H; d, 2.1), 7.07 (9-H, dd, 8.5/2.1), 6.84 (8-H; d, 8.4), 5.90 (2-NH; d, 7.9), 4.75 (2-H; ddd, 7.9/7.9/4.9), 3.85 (7-OCH3; s), 3.14 (3-Hb; dd, 14.5/4.9), 3.03 (3-Ha; dd, 14.5/7.9), unit C 7.29-7.36 (3-NH; bm, W1/2 25), 3.43 (3-Hb; dd, 13.7/8.8), 3.10 (3-Нa; dd, 13.7/3.4), 1.23 (2-CH3; s), 1.17 (2-СН3’, s); unit D 4.92 (2-H; dd, 10.3/3.2), 1.67-1.78 (3-Hb/4-H; bm, W1/2 45), 1.48 (3-Нa; ddd, 13.9/8.8/3.2), 0.89 (4-СН3; d, 6.6), 0.86 (5-H3; d, 6.6). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1(1), 142.0 (3), 137.0 (9), 128.5 (11/13), 128.5 (12), 125.3 (10/14), 124.6 (2), 76.7 (5), 63.2 (7), 56.2 (8), 40.8 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.4 (1), 154.0 (7), 130.8 (5), 129.7 (4), 128.2 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.4 (2), 35.3 (3), unit С 177.9 (1). 46.4 (3), 42.7 (2), 23.0 (2-Ме), 22.7 (2-Ме’); unit D 170.5 (1), 71.3 (2), 39.2 (3), 24.7 (4), 22.8 (4-Ме), 21.3 (5).
Пример 10 Синтез Криптофицина 55
К раствору Криптофицина 52 (6 мг, 0.009 ммоля) в 0.6 мл 2:1 смеси 1,2- диметоксиэтан/вода добавляли 2 мкл 12 N раствора НCl. Раствору поз-воляли перемешиваться при комнатной температу-ре в течение 20 часов, нейтрализовали карбонатом калия, фильтровали через 5 мк фильтр и упаривали. Вещество, нерастворимое в ацетонитриле, очища-ли с помощью гель проникающей хроматографии с обращенной фазой на С18 колонке (250 х 10 мм колонка) с использованием 4:1 смеси МеОН/Н2О с получением 3.0 мг Криптофицина 55 (выход 48%).
[]D +42.5 (с 1.1, СHCl3); EIMS m/z 704/706/708 (М+ <1), 668/670 (1.5/0.5, M+-HCl), 445 (6), 226 (8), 195/197 (16/5), 184 (10), 155/157 (33/11), 135 (100), 91 (99), 77 (30); HREIMS m/z 668.2873 (M+-HCl, С36Н45N2O835Cl, - 0.8mmu); UV (МеОН ) max () 204 (48400), 218 (29200), 284 (1600) nm, IR (NaCl) max 3410, 3286, 2959. 1748, 1723, 1666, 1538, 1504, 1455, 1257. 1178, 1066, 753 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.35-7.42 (10-H/11-H/12-H/13-H/14-H; m), 6.78 (3-H; ddd, 15.1/10.6/4.5). 5.78 (2-H; dd, 15.1/1.7), 5.16 (5-H; ddd, 11.1/8.3/2.1), 4.65 (8-H; d, 9.7), 4.01 (7-H; bd, 9.7), 2.69 (4-Hb; dddd, -14.5/4.5/2.1/1.7), 2.50 (6-H; bm, W1/2 15), 2.38 (4-Ha; ddd, -14.5/11.1/10.6), 1.53 (7-OH, s), 1.04 (6-Me, d, 7.1), unit В 7.21 (5-H; d, 2,2), 7.07 (9-H; dd, 8.5/2.2), 6.85 (8-Н; d, 8.5), 5.57 (2-NH; d, 7.8), 4.74 (2-H; ddd, 7.8/7.6/5.2), 3.88 (7-ОСН3, s), 3.13 (3-Hb; dd, 14.5/5.2), 3.05 (3-Ha, dd, 14.5/7.6); unit C 7.21 (3-NH; m), 3.38 (3-Hb; dd, 13.5/8.3), 3.17 (3-Ha; dd, 13.5/4.1), 1.23 (2-СН3; s), 1.17 (2-СН3’; s), unit D 4.93 (2-H; dd, 10.1/3.5), 1.78 (3-Hb; ddd, 13.5/10.1/5.0), 1.72 (4-H; bm, W1/2 20), 1.43 (3-Ha; ddd, 13.5/8.8/3.5), 0.92 (4-СН3; d, 6.6), 0.92 (5-Н3, d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (C-1), 142.4 (C-3), 138.4 (C-9), 129.0 (C-11/13), 128.3 (C-12), 128.0 (C-10/14), 124.6 (C-2), 76.1 (C-5), 74.1 (C-7), 62.0 (C-8), 38.4 (C-6), 36.5 (C-4), 8.6 (6-Me); unit B 170.3 (C-1), 154.1 (C-7), 130.9 (C-5), 129.6 (C-4), 129.2 (C-9), 122.6 (C-6), 112.3 (C-8), 56.1(7-ОMе), 54.3 (C-2), 35.3 (C-3); unit С 177.8 (C-1), 46.5 (C-3), 42.8 (C-2), 22.9 (2-Me), 23.0 (C-2-Me’); unit D 170.3 (C-1), 71.3 (C-2), 39.7 (C-3), 24.8 (C-4), 22.7 (4-Me), 21.6 (C-5).
Получали также соответствующий диол, Криптофицин 56 (2.8 мг, выход 44%).
Пример 11 Синтез Криптофицина 57
Небольшое количество PtO2 (около 1 мг) до-бавляли в склянку, содержащую 0.5 мл СН2НСl2. Удаляли воздух из склянки и вводили H2 и смесь перемешивали при комнатной температуре в тече-ние 20 минут. Добавляли раствор, содержащий 10.2 мг Криптофицина 52 (0.015 ммоля) в CH2HCl2 (0.3 мл), и смесь перемешивали при комнатной тем-пературе в течение 20 минут. Катализатор удаляли фильтрованием через целит/хлопковую ткань и растворитель удаляли в вакууме. Жидкостная гель проникающая хроматография с обращенной фазой (ODS, 10 мк, 250 х 22.5 мм, MeCN/H2O (3:1), 5 мл мин-1) давала чистый Криптофицин 57 (9.1 мг, вы-ход 89%).
[]D +3.4 (c=4.5, СHCl3); EIMS m/z 670/672 (М+, 9/3), 447 (10), 246 (63), 229 (20), 195/197 (78/25), 184 (58), 155/157 (39/13), 128 (21), 91 (100), 77 (23), HREIMS m/z 670.3037 (С36H47N2О835Cl, -1.6mmu); UV (МеОН) max () 204 (31400), 218 (12000), 204 (1200) nm; 1H NMR (CDCl3) unit A: 7.30-7.37 (11/12/13-H, bm), 7.23 (10/14-H, bdd, 7.9, 1.9), 5.03 (5-H, ddd, 9.0, 5.6, 3.4), 3.66 (8-H, d, 2.1), 2.89 (7-H, dd, 7.7, 2.1), 2.27 (2-Hb, ddd, 14.3, 8.7, 6.2), 2.04 (2-Ha, ddd, 14.3. 8.8, 6.8), 1.64-1.75 (6-H/4-H2, bm), 1.61 (3-H2, bm, W1/2 25), 1.11 (6-СН3, d, 7.1), unit B: 7.19 (5-H, d, 2.1), 7.04 (9-H, dd, 8.3, 2.1), 6.83 (8-H, d, 8.3), 5.55 (2-NH, d, 8.3), 4.65 (2-H, ddd, 8.3, 7.3, 5.3), 3.87 (7-OCH3, s), 3.16 (3-Hb, dd, 14.3, 7.3), 3.08 (3-Ha, dd, 14.3, 5.3), unit С: 6.91(3-NH, dd, 6.4, 6.4), 3.41 (3-Hb, dd, 13.5, 6.4), 3,30 (3-Ha, dd, 13.5, 6.4), 1.21 (2-СН3, s), 1.13 (2-СН3’, s), unit D: 4.80 (2-H, dd, 9.8, 4.1), 1.64-1.75 (3-Hb/4-H, bm), 1.34 (3-Ha, ddd. 15.4, 10.1, 4.1), 0.86 (4-СН3, d, 6.5), 0.84 (5-Н3, d, 6.5); 13С NMR (CDCl3) unit A: 172.6 (1), 136.9 (9), 128.7 (11/13), 128.5 (12), 125.6 (10/14), 76.8 (5), 63.4 (7), 59.2 (8), 40.2 (6), 36.2 (2), 32.2 (4), 21.4 (3), 13.6 (6-Me), unit B: 170.4 (1), 154.0 (7), 131.1 (5), 130.0 (4), 128.5 (9), 122.5 (6), 112.2 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.6 (1), 47.0 (3), 43.1 (2), 22.5 (2-Me’), 22.4 (2-Me), unit D: 171.7 (1), 72.0 (2), 39.0 (3), 24.6 (4), 22.8 (4-Me), 21.8 (5).
Пример 12 Синтез Криптофицина 58
К перемешиваемому раствору Криптофицина 57 (5.5 мг, 0.008 ммоля) в 3 мл хлороформа, сво-бодного от этанола, при температуре около -60°С добавляли TMSCI (использовали в таком виде, как получали из Aldrich, около 4.5 мг, около 5.2 мкл, около 0.04 ммоля). Реакционную смесь перемеши-вали в течение 20 минут, время за которое не оста-валось исходного материала. Затем летучие ком-поненты, удаленные при пониженном давлении, оставляли аморфное твердое вещество. Это веще-ство поглощали ацетонитрилом и подвергали об-работке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии (ODS, 10 мк, 250 х 22.5 мм, MeCN/H2O (3:1), 5 мл мин-1) для выделения чистого Криптофицина 58 (5.4 мг, выход 93%) в виде основ-ного продукта.
[]D +7.2 (c=2.1, СHCl3); EIMS m/z 706/708/710 (М+, 27/23/8), 670/672 (M+ -HCI, 14/13), 583 (54), 581 (53), 485 (23), 483 (21), 447 (34), 294 (21), 282 (39), 246 (57), 195/197 (87/27), 184 (73), 155/157 (45/10), 128 (30), 91(95), 77 (30), 69 (100), HREIMS m/z 706.2844 (С36Н48N2O835Cl2, -5.6mmu), m/z 670.3070 (M+-HCl, С36Н47N2O835Cl, -4.9mmu); UV (МеОН) max () 204 (331900), 218 (11800), 284 (1800) nm; 1H NMR (CDCl3) unit А: 7.34-7.42 (10/11/12/13/14-Н, bm), 5.01 (5-Н, ddd, 9.6, 8.3, 2.5), 4.65 (8-Н, d, 9.6), 4.00 (7-Н, dd, 9.6, 1.9), 2.42 (6-Н, ddq, 8.3, 1.9, 7.0), 2.29 (2-Hb, ddd, 14.3, 9.4, 4.5), 2.06 (2-Ha, ddd, 14.3. 8.3, 7.5), 1.62-1.82 (3-Н2/4-Н2, bm), 0.99 (6-СН3, d, 7.0), unit В: 7.20 (5-H, d, 2.1), 7.06 (9-H, dd, 8.3, 2.1), 6.84 (8-H, d, 8.3), 5.62 (2-NH, d, 8.3), 4.61 (2-H, ddd, 8.3, 7.7, 5.4), 3.87 (7-ОСН3, s), 3.17 (3-Hb, dd, 14.3, 7.7), 3.11 (3-Ha, dd, 14.3, 5.4), unit С: 6.97 (3-NH, dd, 6.4, 6.2), 3.43 (3-Hb, dd, 13.4, 6.2), 3.31 (3-Ha, dd, 13.4, 6.4). 1.23 (2-СН3, s), 1.16 (2-СН3’, s), unit D: 4.93 (2-H, dd, 10.0, 4.0), 1.86 (3-Hb, ddd, 14.0, 10.0, 5,5), 1.58 (3-Ha, ddd, 14.0, 8.3, 4.0), 0.97 (4-СН3, d, 6,8), 0.94 (5-Н3, d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A: 172.8 (1), 138.7 (9), 129.0 (12), 128.9 (11/13), 128.0 (10/14), 76.5 (5), 73.8 (7), 62.1 (8), 38.1 (6), 35.9 (2), 31.8 (4), 21.4 (3), 8.7 (6-Me), unit В: 170.6 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.2 (4), 128.5 (9). 122.4 (6). 112.2 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.4 (2), 35.0 (3) unit С: 177.2 (1), 47.0 (3), 43.2 (2), 22.5 (2-Ме’), 22.4 (2-Ме). unit D: 171.8 (1), 72.0 (2), 39.4 (3), 24.9 (4), 22.9 (4-Ме), 21.7 (5).
Пример 13 Синтез Криптофицина 61
К раствору Криптофицина 53 (5 мг, 0.007 ммоля) в сухом бензоле добавляли сульфид трифе-нилфосфина (4 мг, 0.014 ммоля) с последующим добавлением 0.65 мкл трифторуксусной кислоты в виде раствора в сухом бензоле (100 мкл). Раствору позволяли перемешиваться при комнатной темпе-ратуре в течение 6 часов, нейтрализовали бикар-бонатом натрия, фильтровали и упаривали. Оста-ток разделяли между водой и СH2Сl2. Вещество, растворимое в СН2Cl2, очищали с помощью гель проникающей хроматографии с обращенной фазой на С18 колонке с использованием 4:1 смеси Ме-ОН/Н2О с получением чистого Криптофицина 61 (1.9 мг, выход 37%).
[]D +28.4 (c=0.7, СНСl3), EIMS m/z 684/686 (М+, not observed), 652/654 (M+-S, 5/4), 426/428 (90/29), 294 (10), 227 (100), 195/197 (57/20), 184 (20), 155/157 (34/9), 131 (45), 129 (44), 91 (76), 77 (27), HREIMS m/z 652.2973 (M+-S, С36H45N2O735Cl, -5.8mmu); UV (MeOH) max () 204 (26700), 218 (11600), 284 (820) nm; IR (NaCl) max 3410, 3271, 2958, 1749, 1724, 1670, 1503, 1463, 1258, 1176, 1066, 758 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.29-7.34 (11/12/13-H; m), 7.25 (10/14-H, bd, 6.6), 6.73 (3-H, ddd, 15.2/10.6/4.5), 5.66 (2-H; dd, 15.2/1.7), 5.22 (5-Н; ddd, 11.2/4.2/2.0), 3.68 (8-H, d, 5.1), 3.01 (7-H, dd, 8.4/5.1), 2.52 (4-Hb, dddd, - 14.4/4.5/2.0/1.7), 2.41 (4-Ha, ddd, -14.4/11.2/10.6), 1.68-1.74 (6-H, m), 1.14 (6-Me, d, 6.9); unit В 7.18 (5-H, d, 2.2), 7.04 (9-H, dd, 8.4/2.2), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.45 (NH, d, 7.8), 4.75 (2-H, ddd, 7.8/7.3/5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.09 (3-Hb, dd, -14.5/5.4), 3.05 (3-Ha, dd, -14.5/7.3); unit C 7.17 (NH, dd, 8.3, 3.9), 3.39 (3-Hb, dd, -13.5/8.3), 3.14 (3-Ha, dd, -13.5/3.9), 1.23 (2-Me, s), 1.16 (2-Me’, s), unit D 4.86 (2-H, dd, 10.2/3.4), 1.77 (3-Hb, ddd, -14.0/10.2/4.9), 1.68-1.74 (4-H, m), 1.42 (3-Ha, ddd, -14.0/8.7/3.4), 0.92 (4-Me, d, 6.6), 0.88 (5-Н3, d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 164.9 (1). 141.7 (3), 138.3 (9), 128.8 (11/13), 128.0 (12), 126.7 (10/14), 124.7 (2), 76.6 (5), 45.8 (7), 43.9 (8), 43.9 (6), 36.6 (4), 16.0 (6-Me), unit В 170.2 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.4 (4), 128.3 (9). 122.8 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.2 (2), 35.3 (3), unit С 177.9 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.9 (2-Ме), 22.8 (2-Ме’). unit D 170.4 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.7 (4), 22.7 (4-Me), 21.4 (5).
Пример 14 Синтез Криптофицина 81
Соединение S
Соединение S представляет трет-бутилдифенилсилиловый эфир (TBDVS) производ-ное F.
Соединение Т
К 10 мл ТГФ раствора п-метоксибензилтрифенилфосфоний хлорида (1 ммо-ля) при -78°С добавляли 400 мкл бутиллития (1 ммоль, 2.5 М в гексане). Смесь перемешивали в течение 30 минут и затем добавляли 2.64 мл алик-воту 3 мл ТГФ раствора альдегида S (75.0 мг, 0.24 ммоля) при -78°С. Спустя 30 минут, охлаждение прекращали, но перемешивание продолжали до-полнительно в течение двух часов, время в течение которого температура медленно поднималась до 25°С. Реакцию гасили насыщенным раствором хлористого аммония и ТГФ упаривали. Продукт экстрагировали в гексан дважды и объединенные органические экстракты промывали рассолом, сушили и затем концентрировали. Остаток перено-сили в флеш колонку с силикагелем (3% ЕtOАс/гексан) и получали 63 мг соединения Т и 40 мг смеси T и Z изомеров.
Соединение Т имело следующие свойства:
[]D +110.5 (СНСl3, с 0.75), IR max 2956, 2857, 1724, 1608, 1511, 1428, 1250, 1173, 1111, 1037, 821, 703, 505 cm-1, EIMS m/z (relative intensity %) 497 (<1, М+-ОMе), 471 (31, М+-Вu), 367 (56), 294 (31), 199 (75), 135 (100); high-resolution EIMS 497.24770 (calcd for C32H37O3Si, +3.5mmu, M+-OMe), 471.19859 (calcd for С29Н31О4Si, +0.6mmu, M+-Bu). 1H NMR 7.71/7.68 (SiPh2, 2'-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H; d; 6.5), 7.45/7.43 (SiPh2, 4'-H/4''-H; t ; 7.4), 7.39/7.38 (SiPh2, 3'-H, 5'-H/3"-H, 5"-H; dd; 7.4, 6.5), 7.24 (10-H, 14-H; d; 8.7), 6.85 (11-H, 13-H; d; 8.7), 6.79 (3-H; dt; 15.7, 7.5), 6.19 (8-H, d, 16.1), 6.00 (7-H, dd, 16.1, 8.1), 5.66 (2-H, dt, 15.7, 1.3), 3.82 (5-H, m), 3.81 (-ОСН3, S). 3.69 (СО2CH3, S), 2.41 (6-H, m), 2.36 (4-H, m), 2.30 (4-H, m), 1.12 (6-СН3, d, 7.0), 1.09 (СМе3, S). 13С NMR 166.7 (1), 158.8 (12), 146.0 (3). 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 134.1/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 130.4 (9), 130.0 (8), 129.7/129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 129.5 (7), 127.6/127.5 (3’, 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 122.8 (2), 113.9 (11, 13), 76.4 (5), 55.2 (ОСН3), 51.3 (СО2CH3), 42.1 (6), 37.1 (4), 27.0 (CMe3), 19.5 (CMe3), 16.2 (6-СН3).
Дополнительно соединение Т получали из смеси Т и Z изомеров. 40 Mr смеси Е и Z изомеров растворяли в 4 мл раствора бензола, содержащего тиофенол (0.002 М) и ACN (0.006 М). Смесь нагре-вали при кипячении с обратным холодильником в течение 5 часов. Обработка и очистка на короткой силикагелевой колонке давала 37.2 мг соединения Т.
Соединение U
К 6 мл ацетонового раствора соединения Т (76 мг, 0.15 ммоля) добавляли 4.4 мл 1 N LiОН в воде. Прозрачный раствор перемешивали в течение но-чи. Ацетон упаривали и водный раствор подкисля-ли 1 N раствором НCl. Продукт три раза экстраги-ровали EtOAc Органический слой сушили и кон-центрировали. Очистка на силикагелевой колонке (20% EtOAc/ гексан с 0.5 % АсОН) давала 62.2 мг кислоты соединения U (выход 81%);
[]D +120.8 (СHCl3, с 3.1), IR max 2960, 2858, 1695, 1650, 1511, 1427, 1250, 1111, 1036, 702 cm-1; 1Н NMR 7.73/7.70 (SiPh2, 2’-Н, 6’-Н/2’’-Н, 6’’-Н, d, 7.0), 7.50 (SiPh2, 4’-Н/4’’-Н, m), 7.44 (SiPh2, 3’-Н, 5’-Н/ 3’’-Н, 5’’-Н, m), 7.29 (10-Н, 14-Н, d, 8.6), 6.96 (3-Н; dt; 15.6, 7.8), 6.89 (11-Н, 13-Н, d, 8.6), 6.22 (8-Н, d, 16.0), 6.03 (7-Н, dd, 16.0, 7.9), 5.70 (2-Н, d, 15.6), 3.88 (5-Н, m), 3.83 (ОСН3, S), 2.43 (6-Н, m), 2.40 (4-Н, m), 1.17 (6-СН3, d, 6.9), 1.14 (СМе3, s); 13С NMR, 171.7 (1), 158.8 (12), 148.8 (3), 135.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 133.9/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 130.3 (9), 130.0 (8), 129.7 (SiPh2, 4’/4’’), 129.4 (7), 127.6 (SiPh2, 3’, 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 122.5 (2), 113.9 (11, 13), 76.2 (5), 55.2 (ОСН3), 42.3 (6), 37.1 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CМе3), 16.0 (6-СН3).
Соединение V
Соединение U (59 мг, 0.12 ммоля), трифтора-цетатную соль соединения 1 (57.2 мг, 0.12 ммоля) и диизопропилэтиламин (DIEA, 62 мкл, 0.36 ммоля) растворяли в 1.5 мл сухого ДМФА. К этому рас-твору добавляли пентафордифенифосфинат (FDPP, 55 мг, 0.14 ммоля) в 0.6 мл ДМФА) и реакционную смесь перемешивали в течение двух часов. Добав-ляли эфир и органический слой последовательно промывали 1 N раствором НCl, насыщенного рас-твора бикарбоната натрия, и рассолом, соответ-ственно. Концентрирование и очистка с помощью хроматографии (силикагелевая колонка, 8% ЕtOАс/гексане) давали 74.2 мг соединения V (выход 72%)
[]D + 53.8C (CHCl3, c. 1.6); IR max 3286, 2959, 1760, 1667, 1640, 1607, 1510, 1253, 1174, 1111, 1067, 1027, 703 cm-1 EIMS m/z (relative intensity %) 798/799/800/801/802/803/804/805 (31/14/44/17/23/10/6/3, M+-Bu), 766 (40), 694/695/696/697/698/699/700/701 (70/31/100/38/58/19/14/5), 662 (67), 622 (71), 544 (70), 518 (83); high-resolution EIMS 798.1443 (calcd for C40H40Cl4NO6Si, -6.4mmu, M+-Bu). 1H NMR unit A 7.69/7.65 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H; d; 6.5), 7.41 (SiPh2, 4’-H/4’’-H, m), 7.35 (SiPh2, 3’-H, 5’-H/3’’-H, 5’’-H, m), 7.24 (10-H, 14-H; d, 8.7), 6.85 (11-H, 13-H, d, 8.7), 6.65 (3-H, dt, 15.3, 7.5), 6.20 (8-H, d, 16.1), 6.03 (7-H, dd, 16.1, 8.0), 5.50 (2-H, d, 15.3), 3.81 (OСН3, S), 3.77 (5-H, m), 2.39 (6-H, m), 2.34 (4-H, m), 2.29 (4-H’ m), 1.11 (6-Me, d, 6.9), 1.06 (СМе3, S); unit В 7.15 (5-Н, d, 1.8), 7.00 (9-Н, dd, 8.4, 1.8), 6.83 (8-H, d, 8.4), 5.65 (NH, d, 7.7), 5.01 (2-H, ddd, 7.7, 6.0, 5.5), 4.78/4.72 (СH2CCl3, ABq, - 11.9), 3.86 (ОMе, S), 3.15 (3-H; dd, 6.1, -14.5), 3.08 (3-H’, dd, 5.8, -14.5). 13С NMR unit A 165.1(1), 158.8 (12), 142.5 (3), 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’). 134.2/133.6 (SiPh2, 1’/1’’), 130.4 (9), 129.9 (8), 129.7/129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 129.5 (7), 127.6/127.5 (SiPh2, 3’ 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 124.6 (2), 113.9 (11, 13), 76.4 (5), 55.2 (ОMе), 42.1 (6), 37.2 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CMe3) 16.6 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (4/9), 122.5 (6), 112.1 (8), 94.2 (ССl3), 74.7 (CH2ССl3), 56.1 (ОMе), 52.9 (2), 36.4 (3).
Соединение W
К раствору соединения V (55.8 мг, 0.065 ммо-ля) в 5.7 мл ацетонитрила добавляли 0.2 мл 49% гидрофторидной кислоты при 0°С. Баню со льдом удаляли через пять минут и реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 17 часов. Продукт экстрагировали в эфир, промывали после-довательно насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Концентрирование и очистка с помощью хроматографии с нормальной фазой (си-ликагелевая колонка, 25% EtOAc/ гексан) давала 31.6 мг соединения W (выход 79%);
[]D -3.7° (СНСl3, с 1.3), IR max 3286, 2961, 1756, 1668, 1634, 1607, 1510, 1251, 1175, 1066, 812 cm-1. 1H NMR unit А 7.27 (10-H, 14-Н, d, 8.5), 6.93 (3-Н, dt, 15.4, 7.6), 6.83 (11-Н, 13-Н. d, 8.5), 6.34 (8-Н, d, 15.9), 5.88 (7-Н, dd 15.9, 8.2), 5.86 (2-Н, d, 15.4), 3.81 (ОMе, S), 3.80 (5-Н, m), 2.40 (6-Н, m), 2.36 (4-Н, m), 1.13 (6-Ме, d, 6.8); unit B 7.17 (5-Н, d, 1.9), 7.05 (9-Н, dd, 8.5, 1.9), 6.83 (8-Н, d, 8.5), 5.90 (NH, d, 7.7), 5.03 (2-Н, ddd, 7.8, 5.9. 5.6). 4.79/4.72 (СH2CCl3, ABq, -11.9), 3.86 (ОСН3, S), 3.20 (3-Н, dd, 6.0, -14.3), 3.09 (3-Н’, dd, 5.9, -14.3). 13С NMR unit A 165.2 (1), 159.1 (12), 142.6 (3), 131.3 (9), 129.8 (7), 128.7 (8), 127.3 (10, 14), 125.0 (2), 114.0 (11, 13). 73.8 (5), 55.3 (ОMе), 43.3 (6), 37.2 (4), 16.9 (6-Me) unit B 170.1 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.5 (4/9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (СCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
(2S,2’R)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4- метилпентановая кислота (АС)
Раствор метил(S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропаноата (Х) (10 г, 85 ммолей) в 300 мл приблизительно 9М аммиака в метаноле нагревали до 50°С в откаченной стеклянной ампуле в течение 168 часов, продували аргоном для удаления из-бытка аммиака и затем выпаривали досуха в ваку-уме. Остаток растертый с эфиром оставлял после себя (S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропанамид (5.7 г, выход 66%) в виде твердого белого вещества, т.пл 85.5-87.5°С
[]D +28.7 (с 3.5, МeOH); EIMS m/z (ге1 inten-sity) 88 (19, М-Ме), 85 (35), 73 (69); HREIMS m/z 88.0397 (С3H6NО2, +0.2mmu); IR max 3384, 2960, 1671, 1473 cm-1; 1Н NMR 5.83 (NH; br s), 5.42 (NH; br s), 3.73 (3-H2; m), 2.25 (2-H; m), 1.19 (2-Me; d, 7.2); 13С NMR 180.7 (1), 65.4 (3), 44.0 (2), 14.5 (2-Me). Anal. Found: С, 46.45; H, 8.83. Calcd for С4Н9NO2: С, 46.59; Н, 8.79.
Суспензию (S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропанамида (2.1 г, 20 ммолей) в безводном ТГФ (20 мл) медленно добавляли к 1М комплексу бор-ТГФ (61 ммоль, 61 мл), охлажденному до 0°С. Смесь кипятили с обратным холодильником в тече-ние 6 часов, охлаждали до 0°С, осторожно разла-гали концентрированной НCl (10 мл) и концентри-ровали в вакууме. Коцентрат насыщали NaOH (20 г), экстрагировали СНCl3 (4 раза по 15 мл) и объ-единенные экстракты сушили (MgSO4). После филь-трования и удаления растворителя, разгонка в ва-кууме давала 1.4 г (выход 77%) (R)-3-амино-2-метилпропан-1-ола (Y) в виде бесцветного масла с т.кип. 110-112°С (40 мм Hg).
[]D +8.9° (с 22.6, МеОН); IR max 3358, 1873, 1598, 1466 cm-1; 1Н NMR 5.18 (NH2; br s), 3.8 (1-H2; m), 2.95 (3-H; m), 2.68 (3-H; m); 1.81 (2-H; m), 0.82 (2-Me; d, 7.2); 13С NMR 66.9 (1), 46.4 (3), 37.1 (2), 14.4 (2-Me).
К раствору аминоспирта Y (2.0 мг, 22 ммоля) в 39 мл 10% раствора триэтиламина в МеОН добав-ляли ди-трет-бутил-дикарбонат (5.4 мг, 25 ммолей) и смесь перемешивали при 25°С в течение 30 ми-нут. После удаления растворителя, остаток рас-творяли в СН2Сl2 и раствор дважды промывали 1 М КНSO4 (рН 2) и один раз насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало 4.3 г (выход 100%) (R)-3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2-метилпропан-1-ола в виде вязкого масла, которое использовали непо-средственно в следующей стадии без дальнейшей очистки (больше 95 % чистоты, по данным ЯМР анализа);
IR max 3356. 1976, 1686, 1523, 1456 cm-1; 1Н NMR 4.82 (NH; br s), 3.54 (1-Н; dd, -11.4/4.2), 3.31 (1-Н/3-Н; m), 3.25 (3-H; dd, -14.1/6.6), 1.77 (2-Н; m), 1.44 (СМе3; s), 0.87 (2-Ме; d, 6.9).
К раствору спирта (R)-3-(трет-бутоксикар6онил)амино-2-метилпропан-1- ола (2.2 г, 12 ммолей) периодата натрия (7.5 г, 35 ммолей) в четыреххлористом углероде (25 мл), ацетонитриле (25 мл) и воде (38 мл) добавляли гидрат треххлори-стого рутения (51 мг, 0.25 ммоля) и смесь переме-шивали при 25°С в течение 1 часа. Смесь разбав-ляли СН2Сl2 (100 мл) и затем отфильтровывали через целит. Фильтрат подкисляли (рН 9) 2 М рас-твора К2СО3 и водный слой промывали эфиром. Водный слой подкисляли раствором 1 М КНSO4 до рН 2 при 0°С и экстрагировали СН2Сl2 (3 раза по 20 мл). Объединенные экстракты промывали насы-щенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удале-ние растворителя в вакууме давало 2.0 г (выход 85%) (R)-3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2-метилпропановой кислоты (Z) в виде липкого твер-дого вещества. Чистую Z (1.75 г, выход 74%) кри-сталлизовали из эфира, т.пл. 69.5-70.5С.
[]D -18.4° (с 2, МеОН); EIMS m/z (ге1 intensity) 147 (60; М+ -Мe2С=СН2), 130 (12), 74 (29), 57 (100); HREIMS m/z 147.0517 (С5Н9NO4, +1.4mmu), IR max 3322-2400, 2797, 1711, 1654, 1413 cm-1; 1H NMR of major conformer 5.00 (NH; br s), 3.32 (3-H; m), 3.24 (3-H’; m), 2.71 (2-H; m), 1.44 (CMe3; s), 1.20 (2-Ме; d); 13С NMR of major/minor (2:1 ratio) con-formers 180.7/179.5 (1), 156.0/157.7 (BОС CО), 79.5/81.0 (CМе3), 42.7/44.0 (3), 39.9/40.2 (2), 28.3/28.3 (CMe3), 14.6/14.6 (2-Ме). Anal. Found: С, 53.04; Н, 8.62. Calcd for С9H17NO4: С, 53.18; Н, 8.43.
К раствору 2.66 г L-лейциновой кислоты (20 ммолей) и 1.74 г бикарбоната натрия (20 ммолей) в 30 мл воды при 0°С добавляли 30 мл раствора 6.44 г тетрабутиламмоний хлорида (20 ммолей) и 1.74 мл аллилбромида (20 ммолей) в СН2Сl2. После ин-тенсивного перемешивания смеси в течение 24 ча-сов, СН2Сl2 выпаривали. Добавляли около 50 мл воды и водный слой экстрагировали четыре раза Et2O. Эфирный раствор сушили над безводным сульфатом натрия и затем выпаривали. Остаток пропускали через короткую Si колонку с получени-ем 3.21 г аллил (2S)-2-гидрокси-4-метилпентаноата (АА) (выход 93%) в виде бесцветного масла,
[]D -8.4° (с 1.1, СHCl3); IR max 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm-1; 1Н NMR 5.92 (allyl 2-Н; m), 5.34 (allyl 3-НZ; dd, 17.4/1.1), 5.28 (allyl 3-HE, dd, 10.5/1.1), 4.67 (allyl 1-H2, d, 5.7), 4.23 (2-H, br s), 2.64 (ОН; br s), 1.89 (4-H; m), 1.57 (3-H2; m), 0.96 (5-Н3; d, 6.5), 0.95 (4-Me; d, 6.7); 13С NMR 175.3 (1), 131.4 (allyl C-2), 118.6 (3), 68.9 (2), 65.7 (allyl C-1), 43.2 (3). 24.1 (4), 23.0 (5), 21.3 (4-Me).
К раствору 1.74 г Z (8.55 ммоля), 1.34 г АА (8.0 ммолей) и 64 мг DМАР в 12 мл сухого СН2Сl2 при 0°С добавляли по каплям 8 мл раствора DDC (2.47 г, 12 ммолей) в СН2Сl2. Прозрачный раствор пере-мешивали при 0°С в течение 30 минут и затем при 23°С в течение 3 часов. Белый осадок отфильтро-вали, растворитель выпаривали и остаток повтор-но растворяли в Et2O. Эфирный раствор промывали последовательно холодным 0.5 N раствором NaCl, раствором бикарбоната натрия и рассолом. Высу-шенный эфирный слой (Na2SO4) выпаривали и про-дукт очищали с помощью флеш хроматографии (силикагель) с получением 2.62 г (выход 92%) чи-стого аллил(2S, 2’R)-2-[3'(трет-бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4-метилпентаноата (АВ) в виде бесцветного масла,
[]D -51.3° (с 3.41, СНСl3), EIMS m/z (rel intensi-ty) 301 (5.2), 284 (4.0), 258 (1.5), 228 (43.5), 170 (41.8), 130 (74.5), 112 (100); HREIMS m/z 301.1532 (C14H23NO6, -0.7mmu, M-Me2C=CH2), 284.1496 (С14Н22NO5, +0.2mmu); IR max 3395, 2962, 1747, 1715, 1515, 1251, 1175, 1083 cm-1. 1H NMR unit С 5.17 (NH; br s), 3.42 (3-H; m), 3.22 (3-H’; m), 2.78 (2-H, m), 1.43 (СМе3; br s), 1.21 (2-Me; d, 7.1); unit D 5.90 (allyl 2-Н; m), 5.33 (allyl 3-НZ; d, 16.3), 5.27 (allyl 3-HE; d, 10.3), 5.09 (2-H; dd, 9.7/3.7), 4.63 (allyl 1-H2; m), 1.80 (3-H2; m), 1.64 (4-H, m), 0.96 (5-Н3; d, 6.5), 0.94 (4-Ме; d, 7.3). 13С NMR unit C 174.7 (1), 156.0 (BОС CО), 79.2 (CМе3), 43.1 (3), 40.3 (2), 28.3 (СMe3), 14.5 (2-Me), unit D 170.4 (1), 131.4 (allyl C-2), 119.0 (allyl C-3), 70.9 (2), 65.9 (allyl C-1), 39.6 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Me).
К 10 мл раствора 282 Mr (0.8 ммоля) АВ и 91 мг (0.08 ммоля) тетра-кис(трифенилфосфин)палладия в сухом ТГФ мед-ленно добавляли 688 мкл (8 ммолей) сухого мор-фолина. После перемешивания в течение 40 минут, растворитель упаривали и добавляли 100 мл CH2Cl2. Раствор последовательно промывали 2 N НCl (40 мл) и водой. Органический слой отфиль-тровывали и фильтрат экстрагировали дважды насыщенным раствором бикарбоната натрия. По-сле обратного промывания СН2Cl2, водный слой сначала подкисляли до рН 3 холодным раствором КНSO4 при 0°С и затем экстрагировали три раза эфиром. Высушенный эфирный экстракт выпари-вали с получением 250 мг (2S, 2’R)-2-[3’ (трет-бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4-метилпентановой кислоты (АС) (выход 100%) в виде воскоподобного твердого вещества,
[]D -47.9° (с 4.7, СНСl3); EIMS m/z (rel intensi-ty) 261 (12), 244 (18), 217 (28), 198 (17), 188 (100), 160 (61), HREIMS m/z 261.1221 (С11Н19NO6, -0.8mmu, M-Me2C=CH2), 244.1221 (С11H18NO5, -3.6mmu); IR max 3376, 2960, 1738, 1518, 1174, 786 cm-1. 1Н NMR (CDCl3+D2O) unit C 3.49 (H-3; dd, -13.8/3.5), 3.12 (3-H; dd, -13.8/8.7), 2.68 (2-H; m), 1.43 (СMe3; br s), 1.21 (2-Ме, d, 7.1); unit D 5.12 (2-H; dd, 9.6/3.5), 1.90-1.68 (3H/4-H; m), 0.97 (5-H; d. 6.1), 0.94 (4-Ме; d, 6.0). 13С NMR unit С 174.6 or 174.8 (1), 156.1 (BOC CО), 79.5 (CМе3), 43.0 (3), 40.4 (2), 28.3 (СMe3), 14.5 (2-Ме); unit D 174.6 or 174.8 (1). 70.5 (2), 39.5 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.4 (4-Ме).
Соединение AD
Спирт W (34.8 мг, 0.056 ммоля), соединение АС (26.8 мг, 0.085 ммоля) и DМАР (1.74 мг) раство-ряли в 283 мкл дихлорметана. К этой смеси добав-ляли 666 мкл раствора DDC (17.5 мг, 0.085 ммоля) в дихлорметане. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Растворитель упаривали с потоком азота, добавляли эфир и отфильтровывали белый осадок. Фильтрат последовательно промывали 0.5 N раствором НСl, насыщенным раствором бикар-боната натрия и рассолом. Концентрирование и хроматографирование (колонка с силикагелем, 25% ЕtOАс/гексан) давало 46 мг соединения АD (выход 90%);
[]D -11.8 (СНСl3, с 2.0), IR max 3369, 2961, 1737, 1511, 1252, 1174, 1066, 813, 756 cm-1. 1H NMR (500MHz) unit А 7.25 (10-H/14-H, dt, 8.5, 2.1), 6.84 (11-H/13-H, dt, 8.5, 2.1), 6.76 (3-Н, ddd, 15.5, 6.5, 6.4), 6.34 (8-Н, d, 15.6), 5.88 (2-Н, bd, 15.5), 5.86 (7-Н, dd 15.6, 8.7), 5.04 (5, m), 3.80 (ОMе, s), 2.56 (6-H, m), 2.52 (4-H, m), 1.10 (6-Me, d, 6.8); unit В 7.19 (5-H, d, 2.1), 7.05 (9-H, dd, 8.5, 2.1), 6.83 (8-H, d, 8.5), 6,55 (NH, bd, 7.3), 5.04 (2-H, m), 4.78/4.70 (СН2ССl3, ABq, -11.8), 3.85 (ОСН3, S), 3.19 (3-H, dd, 6.3, -13.8), 3.08 (3-H’, dd, 6.8, -13.8); unit С 5.14 (NH, bt, 6.3), 3.32 (3-Н, m), 3.20 (3-Н’ m). 2.73 (2-Н, m), 1.42 (СМе3, s). 1.18 (2-Ме, d, 7.0); unit D 4.93 (2-Н, dd, 10.0, 3.7), 1.67 (3-Н/4-Н, m), 1.55 (3-Н’, m), 0.86 (5-Н, d, 6.5), 0.83 (4-Ме-Н, d, 6.5). 13С NMR unit А 165.4 (1), 159.1 (12), 139.3 (3), 131.1 (9). 129.7 (7), 128.5 (8) 127.3 (10, 14), 125.4 (2), 114.0 (11, 13), 76.5 (5), 55.3 (ОMе), 41.1 (6), 33.4 (4), 16.7 (6-Ме); unit B 170.5 (1), 154.1 (7), 131.2 (5), 128.9 (4), 128.5 (9), 122.4 (6), 112.1 (8), 94.3 (ССl3), 74.6 (CН2ССl3), 56.1 (ОMе), 53.2 (2), 36.6 (3), unit С 175.2 (1), 156.0 (BОСCО), 79.3 (CMe3), 43.1 (3), 40.4 (2), 28.3 (СMe3), 14.4 (2-Ме), unit D 170.1 (1), 71.4 (2), 39.5 (3), 24.7 (4), 22.9 (5), 21.4 (4-Ме).
Криптофицин 81
Соединение АD (46 мг , 0.05 ммоля) смешивали с активированной Zn пылью (178 мг, избыток) в 1.3 мл НОАс. Смесь подвергали воздействию ультра-звука в течение 45 минут и затем перемешивали дополнительно 90 минут. Добавляли около 30 мл дихлорметана. Твердое вещество отфильтровывали и фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток раство-ряли в 1.1 мл ТФУК и раствор перемешивали в течение одного часа. ТФУК выпаривали в вакууме и добавляли воду. Проведение лиофильной сушки давало свободную аминокислоту. Аминокислоту растворяли в 4.6 мл ДМФА. К этому раствору до-бавляли 26 мкл DIEA и FDPP (30 мг, 0.075 ммоля, в 2.2 мл ДМФА), соответственно. После перемешива-ния в течение 6 часов, растворитель упаривали и добавляли EtOAc. Раствор промывали 0.5 N рас-твором НСl и рассолом соответственно. Выпарива-ние растворителя с последующей хроматографиче-ской очисткой (силикагель, эфир) давало 20.5 мг Криптофицин 81 (выход 61%).
[]D +34.9 (СHCl3, с 0.45); IR max 3409, 3270, 2958, 1746, 1725, 1672, 1511, 1251, 1175, 1066, 1025, 972, 816 cm-1. 1Н NMR (500 MHz) unit A 7.26 (10-H/14-H; dt, 8.6, 2.5), 6.84 (11-Н/13-Н, dt, 8.6, 2.5), 6.68 (3-Н, ddd, 15.4, 9.9, 5.6), 6.35 (8-Н, d, 15.9), 5.86 (7-Н, dd, 15.9, 8.8), 5.77 (2-Н, dd, 15.4, 0.9), 4.99 (5-H, ddd, 11.2, 6.0, 1.7), 3.80 (ОСН3, S), 2.53 (4-H/6-H, m), 2.37 (4-H’, ddd, 11.2, 9.9,-14.6), 1.12 (6-Me, d, 6.9), unit B 7.22 (5-H, d, 2.2), 7.08 (9-H, dd, 8.4, 2.4), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.64 (NH, d, 8.6), 4.81 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, S), 3.13 (3-Н; dd, 5.6. -14.5), 3.05 (3-H’, dd, 7.1, -14.5); unit С, 6.93 (NH, bdd, 5.8, 5.6), 3.50 (3-Н, ddd, 5.2, 3.9, -13.5), 3.28 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.7, - 13.5), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.84 (2-Н, dd, 10.1, 3.4), 1.67 (3-Н/ 4-Н; m), 1.38 (3-Н’, m), 0.78 (5-Н, d, 6.5), 0.75 (4-Ме-Н, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 159.2 (12), 141.4 (3), 131.1 (9), 129.6 (7), 128.4 (8), 127.3 (10, 14), 125.2 (2), 114.1 (11, 13), 77.5 (5), 55.3 (ОMе), 42.2 (6), 36.4 (4), 17.4 (6-Ме); unit B 171.0 (1), 154.0 (7), 131.2 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.1 (8), 56.2 (ОMе), 53.5 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.2 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме); unit D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 15 Синтез Криптофицина 82
Соединение АЕ
Соединение АЕ представляет производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (TBDMS) Е.
Соединение AF
Гидролиз АЕ (150 мг) проводили с 87% выхо-дом с использованием процедуры, описанной выше для гидролиза Т и U.
1H NMR 7.69/7.64 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H, d, 6.3), 7.41 (SiPh2, 4’-H/4’’-H, m), 7.39 (SiPh2, 3’-Н, 4-Me-H/ 3’’-H, 5’’-H, m), 6.86 (3-H; dt; 15.5, 7.5), 5.62 (2-H. d, 15.5), 5.30 (7-H/8-H, m).
Соединение AG
Получение AG (96 мг) из AF (76 мг, 0.18 ммоля) проводили с 70 % выходом с использованием про-цедуры, описанной выше для получения V из U. 1H NMR unit A 7.67 (SiPh2, 2’-Н, 6’-Н/2’’-Н, 6’’-H; m), 7.46-7.31 (SiPh2, 3’-Н, 4’-H, 4-Ме-Н/3’’-Н, 4’’-Н, 5’’-Н, m), 6.62 (3-Н, dt, 15.4, 7.6), 5.51/5.48 (2-Н, d, 15.4), 5.33 (7/8, m), 3.70 (5-Н, m), 2.22 (4-Н/6-Н, m), 1.61 (9, bd, 7.4), 1.06 (СМе3, S), 0.98 (6-Ме, d, 6.8); unit B 7.16 7.16 (5-Н, d, 1.7), 7.00 (9-H, dd, 8.5, 1.7), 6.83/6.82 (8-Н, d, 8.5), 5.68/5.66 (NH, d, 7.3), 5.03 (2-Н, m), 4.78/4.73 (СH2CCl3, ABq, -11.9), 3.87 (ОMе, S), 3.16 (3-H; m), 3.09 (3-H’, m). 13С NMR unit A 165.1 (1), 143.0/142.9 (3), 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 134.3/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 132.5 (7), 129.6 (8), 129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 127.5 (SiPh2, 3’, 4-Ме/3’’, 5’’), 125.7/125.4 (2), 76.3 (5), 41.6 (6), 36.9/36.8 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CМе3), 18.1 (9), 16.4/16.3 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (4/9), 122.5 (6), 112.1 (8), 94.2 (CCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 52.9 (2) 36.4 (3).
Соединение АН
Получение АН (53.4 мг) из AG (84 мг, 0.11 ммоля) проводили с 92 % выходом с использовани-ем процедуры, описанной выше для получения W из V.
1H NMR unit A 6.83 (3-Н, dt, 15.4, 7.5), 5.80 (2-Н, d, 15.4), 5.51 (8-Н, m), 5.33 (7-Н, dd, 15.2, 8.3), 3.50 (5-Н, m), 2.42 (4-Н, m), 2.30 (4-Н’, m), 2.28 (6, m), 1.68 (9, d, 7.3), 0.99 (6-Ме, d, 6.7); unit В 7.20 (5-Н, d, 1.8), 7.03 (9-Н, dd, 8.4, 1.8), 6.80 (8-Н, d, 8.4), 6.10 (NH, bd, 7.0), 5.07 (2-Н, m), 4.80/4.70 (СH2CCl3, ABq, -11.5), 3.88 (ОСН3, S), 3.20 (3-Н, dd, 5.5, -14.3), 3.10 (3-Н’, dd, 7.2, -14.3). 13С NMR unit A 165.4 (1), 142.8 (3), 132.2 (7), 127.7 (8), 125.7 (2), 73.6 (5), 42.8 (6), 36.9 (4), 18.1 (9), 16.8 (6-Ме); unit B 170.2 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.5 (4/9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (ССl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.1 (2), 36.5 (3).
Криптофицин 82
Соединение Аl (36.8 мг, выход 86 % ) получали из 27.4 мг (0.052 ммолей) соединения АН с исполь-зованием процедуры, описанной выше для АD.
Соединение Аl (68 мг, 0.083 ммоля) было под-вергнуто циклизации до Криптофицина 82 (28.5 мг) с использованием процедуры, описанной выше для циклизации АD до Криптофицина 81;
[]D +19.9 (СНСl3, с 2.0). 1H NMR (500 MHz) unit А 6.65 (3-H, ddd, 15.4, 9.5, 5.6), 5.76 (2-Н, d, 15.4), 5.48 (8-Н, dq, 15.3, 6.5), 5.27 (7-Н, ddd, 15.3, 8.4, 1.5), 4.89 (5- Н, ddd, 10.7, 5.6, 1.5), 2.38 (4-Н, m), 2.33 (4-H’/6-Н, m), 1.66 (9-Н, dd, 6.4, 1.5), 1.00 (6-Me, d, 6.9); unit B 7.22 (5-Н, d, 2.0), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.0), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.74 (NH, m), 4.81 (2-Н, ddd, 8.5, 7.3, 5.6), 3.87 (ОMе, S), 3.13 (3-Н, dd, 5.6, - 14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.3, -14.4), unit С, 6.93 (NH, bdd, 6.7, 4.7), 3.52 (3-Н, ddd, 4.7, 3.9, -13.5), 3.27 (3-Н’, ddd, 6.8, 6.7, -13.5), 2.72 (2-Н, dqd, 7.1, 6.8, 3.9), 1.20 (2-Me; d, 7.1), unit D 4.88 (2-Н, dd, 9.6, 3.4), 1.75 (3-Н/ 4-H; m), 1.47 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.2), 0.91 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.5 (1), 141.7 (3), 131.4 (7), 127.1 (8), 125.2 (2), 77.7 (5), 41.5 (6), 36.2 (4), 17.9 (9), 17.2 (6- Me); unit B 171.0 (1), 153.9 (7), 131.1 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.5 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.3 (3), 38.2 (2), 14.0 (2-Ме), unit D 170.9 (1), 71.5 (2). 39.6 (3), 24.6 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме).
Пример 16 Синтез Криптофицина 90 и Крип-тофицина 91
Общая процедура для эпоксидирования Крип-тофицинов стирольного типа.
К раствору криптофицина (около 10 мг/мл) в дихлорметане добавляли три эквивалента м-хлорбензойной кислоты в дихлорметане (около 10 мг/мл). Раствор перемешивали при комнатной тем-пературе до тех пор пока весь исходный материал не прореагирует. Раствор пропускали через корот-кую колонку с силикагелем с использованием СН2Сl2 и затем 1:4 СН2Сl2 :Et2O с получением смеси двух эпоксидов. Эпоксиды разделяли с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии (С-18, 7:3 MeCN:H2O).
Используя эту процедуру, Криптофицин 82 (5 мг) был превращен в 2.2 мг Криптофицина 90 и 1.2 мг Криптофицина 91.
Спектральные данные для Криптофицина 90
1Н-ЯМР (500 МГц) -звено А 6.67 (3-Н, ddd, 15.4, 9.5, 5.8), 5.79 (2-Н, d,
15.4), 5.09 (5-Н, ddd, 10.4, 4.5, 2.6), 2.84 (8-Н, qd, 5.2, 2.2), 2.57 (7-Н, dd, 7.6,
2.2), 2.46 (4-Н, m), 1.82 (6-Н, m), 1.32 (9-Н, d, 5.2), 1.03 (6-Ме, d, 6.9), unit B 7.22 (5-Н, d, 2.2), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.74 (NH, d, 8.6), 4.81 (2- Н, ddd, 8.3, 7.4, 5.7), 3.87 (ОMе, S), 3.14 (3-H; dd, 5.4, -14.5), 3.03 (3-H’, dd, 7.3, - 14.5), unit С, 6.95 (NH, bdd, 6.7, 4.8), 3.52 (3-H, ddd, 4.8, 3.7, -13.4), 3.29 (3-H’, ddd, 6.7, 6.5, -13.4), 2.74 (2-H, dqd, 7.3, 6.5, 3.7), 1.24 (2-Me; d, 7.3), unit D 4.90 (2-Н, dd, 9.9, 3.7), 1.75 (3-H, m), 1.60 (4-Н, m), 1.49 (3-Н’, ddd, 8.7, 3.7, -13.7), 0.95 (5-Н, d, 6.5), 0.91 (4-Ме-Н, d, 6.7). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 141.1 (3), 125.3 (2), 76.3 (5), 60.0 (7), 56.8 (8), 40.2 (6), 36.5 (4), 17.5 (9), 13.3 (6-Me), unit В 171.0 (1), 154.0 (7), 131.1 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.2 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.7 (1), 71.4 (2), 39.6 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме)
Спектральные данные для Криптофицина 91
1Н-ЯМР (500 МГц) -звено А 6.68 (3-Н, ddd, 15.4. 9.8. 5.4), 5.78 (2-Н, d, 15.4), 5.09 (5-Н, ddd, 11.1, 3.7, 2.0), 2.75 (8-Н, rn), 2.62 (7-Н, dd, 9.5, 2.1), 2.48 (4-Н, m), 1.78 (6-Н, m), 1.32 (9-Н, d, 5.2), 0.99 (6-Ме, d, 7.1), unit В 7.23 (5-Н, d, 1.9), 7.09 (9-Н, dd, 8.4, 1.9), 6.85 (8-Н, d, 8.4), 5.68 (NH, d, 8.4), 4.82 (2-Н, m), 3.88 (ОMе, S), 3.15 (3-Н, dd, 5.4, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4); unit С, 6.95 (NH, bdd, 6.0, 4.6), 3.53 (3-Н, ddd, 5.0, 4.0, -13.4), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.7, -13.4), 2.75 (2-Н, m), 1.23 (2-Ме; d, 6.7); unit D 4.92 (2-H, dd, 9.8, 3.4), 1.77 (3-H, m), 1.58 (4-H; m), 0.96 (5-H, d, 7.3), 0.92 (4-Me-H, d, 6.7).
Пример 17 Синтез Криптофицина 97
К раствору циклического депсипептида, Криптофицина 53 (9 мг, 0.013 ммоля), растворенно-го в диметилсульфоксиде (1 мл) добавляли азид цинка (40 мг) и концентрированную серную кисло-ту (4 мкл). Затем смеси позволяли перемешиваться при 75-85°С в течение 2 суток. После этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной тем-пературы, разбавляли Et2O (15 мл) и органический слой промывали рассолом (2 раза по 20 мл) и во-дой (20 мл). Затем эфирный экстракт сушили (MgSO4) и растворитель удаляли в вакууме с воз-вращением аморфного бесцветного твердого веще-ства, которое было преимущественно азидоспир-том, Криптофицином 86. Очистки продукта дости-гали за счет хроматографии с обращенной фазой (ODS, 10 мкл, 250 х 1- мм, 25% H2O/MeCN, 3 мл мин-1) с возращением чистого азидоспирта, Крип-тофицина 86, в виде аморфного бесцветного твер-дого вещества (7.4 мг, выход 77%).
Спектральные данные для Криптофицина 86
[]D - 22.0 (c=3.0, CHCl3); MS (EI) m/z 482/484 (highest observed ion, M+-229, 8/3), 625/627 (14/5), 259 (7), 195/197 (100/34), 184 (14), 155/157 (82/70), 91 (23), 77 (22); HRMS, obsd m/z 482.1791, C23H31N2O735Cl ( 2.9mmu); MS (FAB) m/z (magic bullet matrix) 712/714 (M+ +H, 79/36), 686/688 (31/12), 232 (74), 184 (100). 1H NMR (CDCl3) unit A 7.37-7.42 (10/11/12/13/14-Н, bm. W1/2=20), 6.77 (3-Н, ddd, 15.2, 10.6, 4.4), 5.77 (2-Н, dd, 15.2, 1.3), 5.45 (5-Н, ddd, 11.0, 4.2, 2.0), 4.55 (8-H, d, 5.7), 3.75 (7-H, dd, 7.3, 5.7), 2.55 (4-Hb, dddd, 14.5, 4.4, 2.0, 1.3), 2.43 (4-Ha, ddd, 14.5, 11.0, 10.6), 2.34 (7-OH, s), 1.80 (6-H, ddq, 7.3, 4.2, 7.0), 0.99 (6-Me, d, 7.0), unit В: 7.20 (5-H, d, 2.2), 7.06 (9-H, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.76 (NH, d, 7.7), 4.74 (2-H, ddd, 7.7, 7.5, 5.5), 3.87 (ОСH3, s), 3.10 (3-H, dd, 14.5, 5.5), 3.06 (3-Ha, dd, 14.5, 7.5), unit С: 7.22 (NH, dd, 8.4, 3.7), 3.40 (3-Hb, dd, 13.6, 8.4), 3.14 (3-Ha, dd, 13.6, 3.7), 1.23 (2-СН3, s), 1.16 (2-CH3, s), unit D: 4.85 (2-H, dd, 9.5, 5.1), 1.71 (3-Hb, ddd, 13.6, 9.5, 5.9), 1.59 (4-H, bm, W1/2=25), 1.50 (3-Ha, ddd, 13.6, 7.9, 5.1), 0.89 (4-СН3, d, 6.6), 0.85 (5-Н3, d, 6.6), 13С NMR (CDCl3) unit A: 165.3 (1), 143.0 (3), 135.1 (9), 129.1 (12), 128.9 (11/13), 128.6 (10/14), 124.3 (2), 75.1 (7), 74.6 (5), 67.8 (8), 39.3 (6), 34.7 (4), 11.9 (6-Me), unit B: 170.5 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.7 (4), 128.3 (9), 122.5 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.8 (1), 46.5 (3), 42.8 (2), 22.9 (2-Me), 22.7 (2-Me’), unit D: 170.2 (1), 71.4 (2), 39.4 (3), 24.7 (4), 22.6 (4-Me), 21.8 (5).
Криптофицин 97
К раствору циклического депсипептида, Криптофицина 86 (5.5 мг, 0.008 ммоля), растворен-ного в смеси Et2O/CH2Cl2 (3:1 мл, 0.5 мл), добавляли эфирный раствор (0.5 мл) трифенилфосфина (3 мг, 0.011 ммоля). Затем смеси позволяли перемеши-ваться при комнатной температуре в течение 3 суток. После этого времени растворитель удаляли в вакууме и остаток растворярли в СН2Сl2 и подвер-гали очистке с помощью жидкостной гель прони-кающей хроматографии (CN колонка, 10 мк, 250 х 10 мм, 80% EtOAc/CH2Cl2, 3 мл мин-1) с возращени-ем чистого Криптофицина 97, в виде аморфного бесцветного твердого вещества (4.2 мг, выход 82%).
UV (MeОН) max () 202 (24400), 218 (9400), 284 (2200) mm; MS (EI) m/z 667/669 (M+, 11/3), 639/641 (41/16), 442 (21), 226 (17), 195 (43), 196 (32), 197 (100), 198 (71), 199 (11), 182/184 (25/16), 155/157 (63/22), 146 (30), 91 (40), 77 (29); HRMS, obsd m/z 667.3061, C36H46N3O735Cl (-3.6mmu). 1H NMR (CDCl3) unit A 7.35 (11-H/13-H; m, W1/2=15 Hz), 7.28 (12-H, m), 7.16 (10-H/14-H; m, W1/2=15 Hz), 6.74 (3-H; ddd, 15.2/9.0/6.1), 5.69 (2-H, d, 15.2), 5.21 (5-H, ddd, 9.2/4.3/4.2), 2.79 (8-H, bs), 2.51 (4-Н2, m), 2.11 (7-Н, bd, 6.5), 1.48 (6-Н, m). 1.13 (6-Ме, d, 6.9); unit В: 7.18 (5-Н, d, 2.1), 7.04 (9-Н, d, 8.4, 2.1), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.53 (NH, m), 4.73 (2-H, ddd, 7.6, 5.6, 5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.09 (3-Hb, dd, 14.7, 5.4), 3.04 (3-Ha, dd, 14.7, 7.6), unit С: 7.20 (NH, m), 3.40 (3-Hb, dd, 13.5, 8.6), 3.11 (3-Ha, dd, 13.5, 3.3), 1.22 (2-Me, s), 1.15 (2-Me, s), unit D: 4.84 (2-H, dd, 10.1, 3.7), 1.71 (3-Hb, m), 1.67 (4-H, bm, W1/2=25), 1.35 (3-Ha, m), 0.86 (4-Me, d, 6.7), 0.84 (5-Н3, d, 6.5); 13С NMR (CDCl3) unit A: 165.0 (1), 142.1 (3), 139.2 (9), 128.8 (11/13), 127.5 (12), 125.4 (10/14), 124.6 (2), 76.6 (5), 42.5 (6), 42.1 (7), 40.5 (8), 36.6 (4), 14.8 (6-Me), unit В: 170.2 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.5 (4), 128.2 (9), 122.6 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.9 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.8 (2-Me/2-Me’), unit D: 170.5 (1), 71.3 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.3 (5).
Пример 18 Синтез Криптофицинов 110-112 и 124
Криптофицин 108
К смеси Криптофицина 90 и Криптофицина 91 (27 мг, 0.045 ммоля) в 0.8 мл тетрагидрофурана добавляли 400 мкл водного раствора периодной кислоты (32 мг, 0.14 ммоля). Прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в тече-ние 5 часов. Добавляли воду и водный раствор экстрагировали дважды этилацетатом. Органиче-ский слой промывали водой, сушили и концентри-ровали. Остаток очищали с помощью хроматогра-фии с обращенной фазой на ODS колонке (1:1 MeCN/H2O) с получением выхода Криптофицина 108 90%.
1H-ЯМР (500 Мгц) -звено А 9.64 (7-Н, d, 1.9), 6.67 (3-Н, ddd, 15.3 10.0, 5.4), 5.81 (2-Н, dd, 15.3, 0.9), 5.32 (5-Н, ddd, 11.0, 6.6, 2.1), 2.65 (6-Н, qdd, 7.2, 6.9, 1.9), 2.53 (4-Н, m), 2.44 (4-Н’, m), 1.17 (6-Ме, d, 7.2); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.2), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.91 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, S), 3.16 (3-H; dd, 5.4, -14.6), 3.00 (3-H’, dd, 7.8, -14.6), unit С 7.05 (NH, bdd, 6.9, 5.0). 3.47 (3-H, ddd, 4.6, 4.2, -13.5), 3.32 (3-H’, ddd, 6.9, 6.6, - 13.5), 2.73 (2-H, m), 1.23 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.83 (2-H, dd, 9.5, 3.6), 1.75 (3-H, m), 1.70 (4-H; m), 1.40 (3-H’, ddd, 9.5, 3.9, -14.0), 0.93 (5-H, d, 6.6), 0.88 (4-Me-H, d, 6.6). 13С NMR (125 MHz) unit A 200.6 (7), 165.4 (1), 140.5 (3), 125.6 (2), 73.7 (5), 50.1 (6), 36.1 (4), 10.8 (6-Me); unit B 171.1 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128.3 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.8 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.0 (3), 38.1 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.4 (1), 71.3 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 22.9 (5), 21.4 (4-Ме).
Криптофицин 108 получали также селектив-ным озонолизом Криптофицина 82 с использовани-ем процедуры, описанной выше для озонолиза Е в F.
Общая процедура для pеакции Виттига
Бутиллитий (0.4 мл, 2.5 М в гексане) добавля-ли к 10 мл раствора арилтрифенилфосфоний хло-рида (1 ммоль) в ТГФ при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут при -78°С и затем помещали на 1 час в баню со льдом. Три эквивалента указанной выше смеси добавляли к раствору Криптофицина 108 в ТГФ (около 30 мг/мл) при -78°С. Раствор перемешивали в течение 20 минут до удаления охлаждающей бани. Когда температура поднималась до 25°С, реакцию гаси-ли насыщенным водным раствором хлористого аммония. Смесь экстрагировали дважды этилаце-татом. Органический экстракт промывали водой, сушили и концентрировали. Остаток очищали на флеш колонке ODS колонке (65:35 MeCN/H2O) с получением смеси Е и Z изомеров ( содержание от 8% до 13% Z изомеров зависело от природы ариль-ной группы; анализ определяли с помощью ЯМР). Желаемый Е изомер кристаллизовали из эфира.
Криптофицин 110
Реакция Виттига приводила к 5.1 мг п-фторфенильного аналога (содержавшего около 8% Z изомера) из 7.3 мг Криптофицина 108 (было воз-вращено около 1 мг непрореагировавшего альдеги-да). После кристаллизации из эфира, получали 4.0 мг чистого Криптофицина 110;
[]D +42.4 (МеОН, с 2,1). 1H NMR unit А 7,29 (10-H/14-Н; dd, 8.6, 5,6), 6,99 (11-Н/13-H, dt, 8.6, 8.5), 6.68 (3-Н, ddd, 15.3, 9.7, 5.6), 6.38 (8-H, d, 15.8), 5.83 (7-H, dd, 15.8, 8,8), 5.78 (2-H, d, 15.3), 5.00 (5-H, ddd, 10.8, 7.3, 1.3), 2.53 (4-H/6-H, m), 2.36 (4-H’, m), 1,13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7,21 (5-H, d, 1,8), 7,07 (9-H, dd, 8.4, 1.8), 6,84 (8-H, d, 8.4), 5.68 (NH, d, 8,5), 4.82 (2-H, m), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.6, -14.4), 3.04 (3-H, dd, 7.2, -14.4); unit С, 6,95 (NH, bdd, 6,8, 5,9), 3.50 (3-H, td, 4.4, -13,5), 3.28 (3-H’, ddd, 6.8, 6.7, -13.5), 2.72 (2-H, m), 1.23 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, m), 1.65 (3-Н/4-Н; m), 1.35 (3-H’, ddd, 4.5, 3.8, - 10,9), 0.78 (5-H, d, 6.4), 0.74 (4-Me-H, d, 6.4). 13C NMR (75 MНz) unit A 165.4 (1), 162.3 (12, d, 1JC-F 245.8 Hz), 141.4 (3), 132.9 (9), 130.6 (7), 129.9 (8), 127.6 (10/14, d, 3JC-F 8.0 Hz), 125.2 (2), 115.5 (11/13, d, 2JC-F 21.5 Hz), 77.4 (5), 42.2 (6), 36,4 (4), 17.3 (6-Ме); unit В 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128,4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3); unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Мe); unit D 170.9 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.2 (4-Мe).
Криптофицин 111
Реакция Виттига приводила к 43 мг п-толильного аналога (содержавшего около 9% Z изомера) из 55 мг Криптофицина 108. После кри-сталлизации из эфира, получали 34 мг чистого Криптофицина 111;
[]D +44.3 (СHCl3, с 0.6); EIMS m/z (relative intensity %) 652 (2.9, М+), 497 (3.6), 412 (23.8), 242 (20), 145 (46), 105 (75); high-resolution EIMS 652.29094 (calcd for С36Н45СIN2О7, А-0,6mmu, М+). 13Н NMR unit A 7.21 (10-H/14-H; d, 8.0), 7.11 (11-H/13-H, d, 8,0), 6.68 (3-H, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 6.37 (8-H, d, 15,8), 5.95 (7-H, dd, 15.8, 8.6), 5.76 (2-H, d, 15.2), 4.99 (5-H, dd, 10.4, 6,2). 2,51 (4-Н/6-Н, m), 2,38 (4-H’, m), 2.32 (12-Me, s), 1.13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7.22 (5-H, d, 2.1), 7.08 (9-H, dd, 8.4, 2,1). 6.83 (8-H, d, 8.4), 5.80 (NH, d, 8.4), 4,81 (2-H, m), 3,86 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.6, -14.4), 3.03 (3-H’, dd, 7.3, -14.4); unit С 6.98 (NH, bdd, 6.0, 5.7), 3.49 (3-H, td, 4.6. -13.4), 3.29 (3-H’, ddd, 6.7, 6.6, -13.4), 2.70 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.81 (2-H,m), 1.65 (3-H/4-H; m), 1.37 (3-H’, m), 0,78 (5-H’, d, 5,8), 0.73 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (75 MHz) unit A 165.5 (1), 141.5 (3), 137.4 (12), 133.9 (9), 131.7 (7), 129.3 (10/14), 129.0 (8), 126.0 (11/13), 125.1 (2), 77.4 (5), 42.2 (6), 36.4 (4), 21.1 (12-Me), 17.3 (6-Me); unit B 171.0 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Me); unit D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.2 (4-Me).
Криптофицин 112
Реакция Виттига приводила к 35 мг 2-тиенильного аналога (содержавшего около 13% Z изомера) из 51 мг Криптофицина 108. После кри-сталлизации из эфира, получали 25 мг чистого Криптофицина 111;
1Н NMR (500 MHz) unit A 7.12 (12-H; d, 4.9), 6.94 (11-H, dd, 4.9, 3,4), 6.90 (10-H, d, 3.4), 6.68 (3-Н, ddd, 15,2, 9.5, 5,3), 6.54 (8-H, d, 15.7), 5.83 (7-H, dd, 15.7, 8.7), 5.78 (2-H, d, 15.2), 4.96 (5-H, dd, 9.5, 6.5), 2.51 (4-Н/6-Н, m), 2.35 (4-H’, m), 1.13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7.21 (5-H, d, 1.6), 7.07 (9-H, dd, 8.4, 1.6), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.74 (NH, d, 7.1), 4.82 (2-H, m), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.5, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.1, -14.4); unit С, 6.97 (NH, bt, 5.8), 3.50 (3-H, ddd, 4.4, 4.3, -13.4), 3.28 (3-H’, ddd, 6.8, 6.6, -13.4), 2.71 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, m), 1.67 (3-Н/4-Н; m), 1.39 (3-H’, m), 0.80 (5-H, d, 6.4), 0.77 (4-Me-H, d, 6.4).
Криптофицин 124
Реакция Виттига приводила к 131 мг п-хлорфенильного аналога (содержавшего около 10% Z изомера) из 153 мг Криптофицина 108. По-сле кристаллизации из эфира, получали 107 мг чистого Криптофицина 124;
[]D +29.2 (СHCl3, с 0.5); high- resolution EIMS m/z 672.23691 (calcd for С35Н42Сl2N2O7, 0.0mmu). 1Н NMR (500 MHz) unit А 7.26 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.68 (3-Н, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 6.36 (8-Н, d, 15.8), 5.98 (7-Н, dd, 15.8, 8.8), 5.77 (2-Н, d, 15.2), 5.00 (5-Н, bdd, 9.4, 6.3), 2.54 (4-Н/6-Н, m), 2.38 (4-Н’, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit B 7.22 (5-Н, d, 1.7), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 1.7), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.73 (NH, bd, 7.8), 4.82 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, s), 3.13 (3-Н, dd, 5.5, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4), unit С, 6.97 (NH, bt 5.8), 3.49 (3-Н, td, 4.2, -13.4), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.7, 6.6, -13.4), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2), unit D 4.81 (2-Н, m), 1.65 (3-H/4-H; m), 1.35 (3-Н’, m), 0.77 (5-Н, d, 7.1), 0.75 (4-Ме-Н, d, 7.1). 13С NMR (75 MHz) unit А 165.4 (1), 141.3 (3), 135.2 (12), 133.2 (9), 130.9 (7), 130.6 (8), 128.7 (11/13), 127.3 (10/14), 125.2 (2), 77.3 (5), 42.2 (6), 36.5 (4), 17.3 (6-Ме); unit B 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.8 (1). 71.5 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 22.8 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 19 Синтез Криптофицинов 115-120 и 126
Криптофицины 115 и 116
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стираль-ного типа, Криптофицин 110 (3.5 мг) был превра-щен в 2.0 мг Криптофицина 115 и 1 мг Криптофи-цина 116.
Спектральные данные для Криптофицина 115
[]D +29.1 (МеОН, с 0.8), EIMS m/z (relative intensity %) 672 (1.9, М+), 412 (5.8), 245 (17), 195 (52), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100), high-resolution EIMS 668.2853 (calcd for С35Н42СlFN2O8, +3.4mmu, M+). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.22 (10-H/14-H; ddt, 8.7, 5.2, 2.0), 7.01 (11-H/13-H, ddt, 8.7, 8.5, 2.0), 6.68 (3-H, ddd, 15.2, 9.7, 5.2), 5.74 (2-H, dd, 15.2, 0.8), 5.15 (5-H, ddd, 11.2, 5.0, 1.8), 3.67 (8-H, d, 2.0), 2.88 (7-H, dd, 7.4, 2.0), 2.54 (4-H, dtd, 5.2, 1.8, -14.4), 2.44 (4-H’, ddd, 11.2, 9.7, -14.4), 1.79 (6-H, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit В 7.21 (5-H, d, 2.0), 7.06 (9-H, dd, 8.3, 2.0), 6.83 (8-H, d, 8.3), 5.63 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-H, ddd, 8.4, 7.2, 5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.4, -14.4), 3.03 (3-H’, dd, 7.2, -14.4), unit C 6.94 (NH, bdd, 6.7, 5.0), 3.48 (3-H, ddd, 5.0, 3.7, -13.4), 3.30 (3-H’, ddd, 6.8, 6.7, -13.4), 2.72 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.4) unit D 4.83 (2-H, dd, 9.9, 3.6), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.35 (3-H’, m), 0.87 (5-H, d, 6.5), 0.85 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 162.9 (12, d, 1JC-F 245.4 Hz), 141.0 (3), 132.5 (9), 127.3 (10/14, d, 3JC-F 8.3 Hz), 125.3 (2), 115.7 (11/13, d, 2JC-F 21.9 Hz), 76.1 (5), 63.0 (7), 58.3 (8), 40.5 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.7 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Ме), unit D 170.7 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Ме).
Криптофицины 117 и 118
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стироль-ного типа, Криптофицин 111 (6.2 мг) был превра-щен в 3.5 мг Криптофицина 117 и 1 мг Криптофи-цина 118.
Спектральные данные для Криптофицина 117
[]D +25.5° (МеОН, с 1.8), EIMS m/z (relative intensity %) 668 (4.8, М+), 412 (6.2), 280 (11), 173 (9.4), 145 (15), 135 (34), 105 (100); lush-resolution EIMS m/z 668.28532 (calcd for С36H45CIN2O8 +1.1mmu, М+). 1Н NMR (500 Mhz) unit A 7.17/7.13 (10-H/11-H/13-H/14-H, А2B2 q, 8.0), 6.67 (3-Н, ddd, 15.4, 9.8, 5.6), 5.73 (2-Н, dd, 15.4, 0.9), 5.14 (5-Н, ddd, 11.2, 4.9, 2.0), 3.65 (8-Н, d, 2.0), 2.91 (7-Н, dd, 7.6, 2.0), 2.54 (4-Н, bdd, 5.6, -14.3), 2.44 (4-Н’, ddd, 10.7, 9.8, -14.3), 2.35 (12-Ме, s), 1.77 (6-Н, m), 1.14 (6-СН3, d, 6.9); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.2), 7.07 (9-Н, dd, 8.5, 2.2), 6.83 (8-Н, d, 8.5), 5.65 (NH, d, 8.5), 4.80 (2-Н, ddd, 8.3, 7.4, 5.6), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.6, -14.5), 3.02 (3-Н’, dd, 7.4, -14.5); unit С 6.93 (NH, bd, 6.8, 5.1), 3.48 (3-Н, ddd, 5.1, 3.8, -13.2), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.8, -13.2), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.1); unit D 4.82 (2-H, dd, 9.8, 3.6), 1.70 (3-H/4-H, m), 1.33 (3-H’, m), 0.85 (5-H, d, 6.5), 0.84 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 141.0 (3), 138.4 (12), 133.7 (9), 129.4 (10/14), 125.6 (11/13), 125.3 (2), 76.2 (5), 62.9 (7), 59.0 (8), 40.7 (6), 36.7 (4), 21.1 (12-Me), 13.6 (6-Me); unit В 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.7 (1). 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.8 (5), 21.2 (4-Ме).
Спектральные данные для Криптофицина 118
1Н-ЯМР спектр указанного криптофицина яв-лялся подобным спектру Криптофицина 38 за ис-ключением мультиплетов при 7.30-7.38 для фе-нильных протонов, заменяйшихся 4Н мультипле-том при 7.15 и 3Н синглетом при 2.35 для р-толильных протонов.
Криптофицины 119 и 120
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стирoль-ного типа, Криптофицин 112 (8 мг) был превращен в 1.2 мг Криптофицина 119 и 0.5 мг Криптофицина 120.
Спектральные данные для Криптофицина 119
1Н-ЯМР (500 МГц) unit А 7.28 (12-Н, d, 5.2), 7.11 (10-Н, d, 3.3), 7.00 (11-Н, dd, 5.2, 3.3), 6.68 (3-Н, ddd, 15.1, 9.9, 5.2), 5.76 (2-Н, dd, 15.1, 1.3), 5.15 (5-Н, ddd, 11.2, 5.5, 1.8), 3.94 (8-Н, d, 2.0), 3.10 (7-Н, dd, 7.5, 2.0), 2.56 (4-Н, bdd, 5.2, -14.3), 2.44 (4-Н’, ddd, 11.2, 9.9, -14.3), 1.76 (6-Н, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.3), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 2.3), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.63 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-Н, ddd, 8.5, 7.4, 5.7), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.7, -14.5), 3.03 (3-Н’, dd, 7.4, -14.5), unit С 6.95 (NH, bd, 6.5, 5.3), 3.48 (3-Н, ddd, 5.3, 3.6, -13.5), 3.31 (3-Н’, ddd, 6.8, 6.5, -13.5), 2.72 (2-Н, rn), 1.23 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.85 (2-Н, dd, 10.3, 3.5), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.33 (3-H’, m), 0.86 (5-H, d, 6.3), 0.85 (4-Me-H, d, 6.3).
Криптофицины 125 и 126
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стирoль-ного типа, Криптофицин 124 (47 мг) был превращен в 26 мг Криптофицина 125 и 12 мг Криптофицина 126.
Спектральные данные для Криптоицина 125
[]D +35.6 (СНСl3, с=0.9); high-resolution EIMS m/z 688.2301 (calcd for C35H42Cl2N2O8, +1.7mmu). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.33 (11-H/13-H, dt, 8.5, 2.0), 7.18 (10-H//14-H, dt, 8.5, 2.0), 6.67 (3-H, ddd, 15.1, 9.9, 5.2), 5.73 (2-H, dd, 15.1, 0.9), 5.15 (5-H, ddd, 11.0, 4.7, 1.5), 3.66 (8-H, d, 1.9), 2.87 (7-H, dd, 7.4, 1.9), 2.53 (4-H, m), 2.42 (4-H’, ddd, 10.6, 10.5, -14.4), 1.78 (6-H, m), 1.12 (6-СН3, d, 7.0); unit В 7.20 (5-Н, d, 2.1), 7.06 (9-Н, dd, 8.3, 2.1), 6.83 (8-Н, d, 8.3), 5.72 (NH, d, 8.1), 4.79 (2-H, ddd, 8.3, 7.9, 5.4), 3.86 (ОMе, s), 3.12 (3-H; dd, 5.4, -14.5), 3.02 (3-H’, dd, 7.4, -14.5); unit С 6.97 (NH, bdd, 6.3, 5.5), 3.46 (3-H, ddd, 4.4, 4.1, -13.7), 3.22 (3-H’, ddd, 7.0, 6.3, -13.7), 2.70 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, dd, 9.9, 3.4), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.33 (3-H’, m), 0.87 (5-H, d, 6.5), 0.84 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 141.0 (3), 135.3 (12), 134.4 (9), 128.9 (11/13), 126.9 (10/14), 125.3 (2), 76.0 (5), 63.1 (7), 58.2 (8), 40.4 (6). 36.7 (4), 13.4 (6-Me), unit B 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.3 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.7 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.0 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Me); unit D 170.7 (1), 71.2 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Me).
Спектральные данные для КриптоФицина 126
1Н-ЯМР (300 МГц) unit А 7.26 (11-Н/13-Н, d, 8.1), 7.17 (10-H//14-H, d, 8.1), 6.70 (3-Н, ddd, 15.1, 9.4, 5.3), 5.81 (2-Н, d, 15.1), 5.14 (5-Н, bdd, 10.0, 4.5), 3.57 (8-Н, bs), 2.85 (7-Н, bd, 7.6), 2.66 (4-Н, m), 2.59 (4-Н’, m), 1.77 (6-Н, m), 1.04 (6-СН3, d, 7.0), unit В 7.23 (5-Н, bs), 7.08 (9-Н, bd, 8.4), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.82 (NH, d, 6.8), 4.81 (2-Н, ddd, 7.2, 6.8, 5.4), 3.86 (ОMе, s), 3.14 (3-Н; dd, 5.4, -14.1), 3.03 (3-Н’, dd, 7.4, -14.1), unit С 7.03 (NH, bt, 5.7), 3.47 (3-H, ddd, 4.0, 3.7, -13.1), 3.34 (3-H’, ddd, 6.8, 6.4, -13.1), 2.72 (2-H, m), 1.24 (2-Me, d, 7.0), unit D 4.90 (2-H, dd, 10.0, 2.5), 1.74 (3-H/4-H; m), 1.45 (3-H’, m), 0.91 (5-H, d, 6.5), 0.86 (4-Me-H, d, 6,5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 141.3 (3), 135.6 (12), 134.1 (9), 128.8 (11/13), 126.8 (10/14), 125.2 (2), 76.8 (5), 63.3 (7), 55.6 (8), 40.8 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.7 (2), 35.0 (3), unit С 175.7 (1), 41.0 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.8 (1), 71.4 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 23.1 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 20 Синтез Криптофицинов 121-123 и 127
Соединение AJ
К раствору моногидрата BОС-L-лейцина (1.245 г, 5 ммолей) в 30 мл безводного СН2Сl2 до-бавляли твердый EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3- этилкарбодиимид гидрохлорид) (0.53 г, 2.75 ммоля) в атмосфере N2 при перемешивании при 0°С. После перемешивания при 0°С в течение 1.5 часов, смесь концентрировали ниже 5°С и остаток раз-бавляли 35 мл холодного EtOAc, последовательно промывали двумя порциями (10 мл) каждого, охла-жденного на льду раствора, 5% водного раствора КНSO4, 5% водного NaHCO3, рассолом. Органиче-скую фазу отделяли, сушили (MgSO4) при 5°С и выпаривали ниже 5°С. Оставшееся масло разбав-ляли охлажденным на льду ТГФ (5 мл) и добавляли раствор соединения К (295 мг, 0.5 ммоля) в охла-жденный на льду безводный ТГФ (5 мл). Затем были добавлены несколько кристаллов DМАР к смеси, которую перемешивали и позволяли смеси достигнуть 25°С в течение ночи. Добавляли рас-твор 5% водного NaHCO3 (5 мл) и полученную двухфазную смесь интенсивно перемешивали при 25°С в течение 2 часов. Добавляли EtOAc (40 мл), водную фазу экстрагировали добавлением EtOAc (2 раза по 20 мл) и объединенные органические слои промывали водой и рассолом, сушили (NaSO4), фильтровали и выпаривали. Остаток от-фильтровывали через слой силикагеля с 25% EtOAc в гексане с получением соединения AJ в виде бес-цветного масла (385 мг, выход 96%):
[]D 13.6° (c= 0.63, СНCСl3); EIMS m/z (ге1. intensity) 805/803/801 (M+, 1%), 568/570/572/574 (9/10/6/2), 523/525/527 (5/6/1), 418/420/422/424 (15/15/6/2), 341/343/345/347 (58/70/35/9), 307/309/311(29/22/10), 224/227/228/229 (10/100/31/14), 208/210/211/2’12 (20/83/45/54), HREIMS m/z 800.2218 (С35H48 35Cl4N2O8, -5.3mmu); 1Н NMR (CDCl3) unit А 7.21-7.35 (Ph-H5; m), 6.77 (3-H; ddd, 6.7/6.7/15.3), 6.4 (8-H; d, 15.8), 6.05 (7-H; dd. 8.7/15.8), 5.9 (2-H; d, 15.3), 5.0 (5-H, m), 2.6 (6-H, m), 2.55 (4-H2; m), 1.17 (6-Me; d, 6.7), unit В 7.22 (5-H; s), 7.05 (9-H: d, 8.1), 6.84 (8-H, d, 8.1), 6,55 (NH; d, 7.8), 5.0 (2-H; ddd, 5.5/7.1/7.8), 4.68-4.8 (СН2ССl3; ABq, 11.9), 3.86 (OMe; s), 3.2 (3-H; dd, 5.5/14.0), 3.06 (3-H’: dd, 7.1/14.0), unit D 4.8 (NH; d), 4.2 (2-H; m), 1.65 (4-H; m), 1.55 (3-H; m), 1.4 (СMe3); s), 1.37 (3-H’; m), 0.85 (4-Me; d, 6.5), 0.8 (5-H, d, 6.5); 13С NMR unit A 165.4 (1), 139.3 (3), 137.0 (9), 131.5 (8), 130.5 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (12), 126.2 (10/12), 125.8 (2), 76.2 (5), 40.8 (6), 33.4 (4), 16.8 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 129.0 (9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.4 (CСl3), 74.7 (CH2ССl3), 56.1 (ОMе), 53.3 (2), 36.5 (3), unit D 173.2 (1), 155.7 (BОС-CO), 80.0 (CMe3), 52.4 (2), 41.2 (3), 28.3 (СMe3), 24.8 (4), 22.8 (4-Ме), 21.6 (5).
Соединение АК
Соединение AJ (115 мг, 0.134 ммоля) раство-ряли в ТФУК (3 мл) и оставляли при 25°С в течение 1 часа. Растворитель удаляли и остаток выпарива-ли повторно из СН2Сl2 с получением в результате аморфного твердого вещества. Это твердое веще-ство растворяли в безводном ТГФ (5 мл) и добавля-ли достаточное количество диэтилизопропиламина с доведением рН раствора до 8-9, когда аликвота раствора оставляла пятно на влажной рН бумаге. Раствор охлаждали до 0°С с перемешиванием и добавляли раствор соединения AL в ТГФ (3 мг). Для приготовления соединения AL, соединение Z (55 мг, 0.27 ммоля) растворяли в ТГФ (3 мл) и до-бавляли диэтилизопропиламин (0.046 мл, 0.27 ммоля). К этой смеси после охлаждения до -15°С добавляли по каплям пивалоилхлорид (0.033 мл, 0.27 ммоля) и раствор перемешивали при -15°С в течение 10 минут и при 0°С в течение 20 минут. Полученную суспензию переносили затем в рас-твор соединения AJ в ТГФ. Полученную смесь пе-ремешивали при -0°С и позволяли достигнуть тем-пературы 25°С в течение ночи. Через 12 часов нахождения при температуре 25°С добавляли 5% водный раствор NaHCO3 и полученную смесь ин-тенсивно перемешивали при 25°С в течение 1.5 часов. Добавляли EtОАс (40 мл) и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали дополнительно EtOAc (2 раза по 10 мл). Объединенные органиче-ские экстракты промывали 5% водным раствором NaHCO3 (20 мл), 5% водным раствором KHSO4 (20 мл) и рассолом, сушили (NaSO4) и выпаривали. Оставшееся масло хроматографировали на силика-геле, элюируя 35% EtOAc в гексане с получением соединения АК в виде бесцветной пены (98 мг, вы-ход 83%).:
[]D -8.3 (с 0.88, СHCl3); 1Н NMR (CDCl3) unit A 7.28-7.35 (Ph-Н4; m), 7.22 (H-12; m), 6.75 (H-3; ddd, 6.4/6.4/15.4), 6.4 (H-8; d, 15.9), 6.04 (H-7; dd, 8.6/15.9) 5.95 (H-2, d, 15.4), 5.0 (H-5; m), 2.6 (H-4; m), 1.1 (6-Me; d, 6.8); unit B 7.22 (Н-5, d, 1.5), 7.15 (NH; d, 7.6), 7.05 (H-9; dd, 1.5/8.2), 6.85 (H-8; d, 8.2), 5.0 (H-2; m), 4.8- 4.68 (CH3CCl3; ABq, 12), 3.86 (OMe; s), 3.2 (H-3, m), 3.1 (Н-3’, dd, 7.2/14.1), unit С 5.0 (NH; m), 3.2 (H2-3; m), 2.55 (H-2; m), 1.1 (2-Me; d, 7.1), unit D 6.12 (NH; m), 4.4 (H-2; m). 1.65 (H-4; m), 1.55 (Н-3; m), 1.4 (H-3’, m), 0.86 (4-Me; d, 6.8), 0.81 (5-H, d, 6.8); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.8 (1), 138.9 (3), 131.5 (8), 130.4 (7), 128.6 (11/13), 127.4 (12), 126.2 (10/14), 125.8 (2), 76.3 (5), 33.6 (4), 16.6 (6-Me); unit B 170.2 (1), 154.1 (7), 136.9 (4), 131.2 (5), 128.6 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 94.4 (CCl3), 74.5 (CН2ССl3), 56.1 (OMe), 53.4 (2), 36.6 (3); unit C 175.4 (1), 156.3 (BОС-CO), 79.5 (OCМе3), 43.6 (3), 41.3 (2), 15.1 (2-Me); unit D 172.6 (1), 51.3 (2), 40.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (4-Me), 21.5 (5).
Криптофицин 121
Соединение АК (73 мг, 0.082 ммоля) растворя-ли в АсОН (3.5 мл), добавляли активированную Zn пыль и полученную суспензию подвергали ультра-звуковому воздействию в течение 45 минут. После перемешивания при 25°С дополнительно в течение 1.5 часов смесь разбавляли СН2Сl2 (5 мл) и филь-тровали через целитR. Твердое вещество промыва-ли дополнительно СН2Сl2 (10 мл) и полученный фильтрат упаривали. Остаток без дальнейшей очистки растворяли в ТФУК (3 мл), хранили при 25°С в течение 1 часа и растворитель удаляли в вакууме. Остаток повторно выпаривали из СН2Сl2 , затем из толуола до получения бесцветного твер-дого вещества. Это твердое вещество растворяли в ДМФА (3 мл), добавляли FDPP (43 мг, 0.108 ммоля) с последующим добавлением достаточного коли-чества диэтилизопропиламина с доведением рН раствора до рН8-9, когда аликвота оставляла пят-но на влажной рН бумаге. После перемешивания при 25°С в течение 16 часов, смесь разбавляли эфиром (40 мл) и промывали 5% водным раствором KHSO4 (2 раза по 1 мл), 5% водным раствором NaHCO3 (15 мл) и рассолом. После сушки (Na2SO4) и выпаривания остаток очищали с помощью гель проникающей жидкостной хроматографии с обра-щенной фазой на С-18 колонке с силикагелем (EconosilR С-18, 22 х 250 мм), элюируя смесью СН3СN/вода 65:35 при 6 мл/мин. Фракцию, элюи-руемую при tR 48 минут, собирали и выпаривали с получением аморфного твердого вещества (26 мг, выход 50%):
[]D +46.5 (с 0.81, СHCl3); EIMS m/z 637/639 (М+, 1%), 449/451 (2/1), 420 (5), 411/413 (7/5), 227/228 (9/7), 195 (10), 184 (15), 167/168/169 (40/86/29), 155/157 (100/26), 91 (85), 69 (86); HREIMS m/z 637,2864 (С35H44 35Cl N3 O6, + 5.5mmu); 1H NMR unit A 7,21-7.35 (Ph-H5; m), 6,75 (Н-3; ddd, 4,2/10.8/16), 6.4 (H-8; d, 16), 6,04 (H-7; dd, 8.8/16), 5.75 (H-2; d, 16), 5,1 ((H-5; m), 2.55 (H-4; m, H-6; m), 2.35 (H-4’, m); unit B 7,18 (H-5; d, 2), 7.05 (H-9; dd, 2.0/8.3), 6.85 (H-8: d, 8.3), 5.7 (NH; d, 7.2), 4.7 (H-2; ddd, 4.9/7.2/7.7), 3.86 (ОMе, s), 3,1 (H-3; dd, 4.9/14.4), 3.0 (H-3’; dd, 7.7/ 14.4); unit С 7.25 (NH, m), 3,5 (H-3; m), 3.4 (H-3’; m), 2.55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7.2); unit D 5.8 (NH; d, 7.2), 4.4 (H-2; m), 1.55 (H-4; m), 1.38 (H2-3; dd, 7.2/7.7), 0.76 (4-Me; d, 6.6), 0.74 (H-5; d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (1), 141.9 (3), 136.8 (9), 131.7 (8), 130.2 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (14), 126.1 (10/12), 125.1 (2), 76.5 (5), 42.3 (6), 36.3 (4), 17.2 (6-Me); unit B 171.0 (1), 154.1 (7), 130.8(5), 129.6 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112,4 (8), 56,2 (OMe), 54.4 (2), 35.4 (3), unit С 175.8 (1), 41.0 (3), 38.6 (2), 14.8 (2-Me); unit D 173.2 (1), 51.1 (2), 40,9 (3), 24.7 (4), 23,4 (4-Ме), 21,5 (5)
Криптофицины 122 и 123
К перемешиваемому раствору (0°С) Крипто-фицина 121 ( мг, 0.011 ммоля) в безводном СН2Сl2 (1.3 мл) добавляли 99% м-СРВА (17 vu, 0.1 ммоля) в виде одной порции. Затем добавляли безводный толуол (0.7 мл) и полученную смесь перемешивали при 25°С в течение 72 часов. Растворитель выпари-вали в вакууме и оставшееся твердое вещество очищали с помощью гель проникающей жидкост-ной хроматографии с обращенной фазой на С-18 колонке с силикагелем (EconosilR С-18, 22 х 250 мм), элюируя смесью СН3СN/вода 65:35 при 6 мл/мин. Криптофицин 122 (9 мг, выход 44%) элюировали при tR 37.5 минут и Криптофицин 123 (5 мг, выход 23%) элюировали при tR 40 минут.
Криптофицин 122
[]D +35.0 (с 1. CHCl3), EIMS m/z 653/655 (1.6/0.7, М+), 411/413 (20/5), 280/282 (39/19), 252/254 (13/8), 223/225/227 (19/10/23), 211/213 (18/6), 195/197 (51/13), 184/186 (49/11), 176/168/169 (20/16/21), 155/156/157 (95/59/42), 139/141/143 (60/40/24), 135/135 (30/11). 129/131 (40/29), 91 (100); HREIMS m/z 653.2906 (C35 Н44 35Сl N3 O7, -3.8mmu). 1Н NMR (d6-acetone) unit A 6.65 (Н-3, ddd, 38/11.0/15.0), 5.9 (H-2; dd, 1.9/15.0), 5.25 (Н-5; ddd, 1.9/4.9/11.5), 3.82 (Н-8; d, 2.0), 3.0 (H-7; dd, 2.0/7.7), 2.65 (H-4; dddd, 2.0/2.0/3.8/14.5), 2.4 (H-4’; ddd, 11.0/11.5/ 14.5), 1.85 (H-6, dqd, 4.9/7.4/7.7), 1.1 (6-Me; d, 6.9); unit В 7.45 (NH; d, 7.9), 7.22 (H-9; dd, 2.0/8.4), 7.0 (H-8; d, 8.4), 4.45 (H-2; ddd, 3.6/7.9/11.2), 3.84 (ОMе; s), 3.2 (H-3; dd, 3.6/14.5), 2.75 (H-3’; dd, 11.2/14.5); unit C 7.8 (NH; d, 8.8), 3.65 (H-3; ddd, 3.3/8.8/13.2), 3.1 (H-3’, ddd, 2.1/2.1/13.2), 2.55 (H-2; m), unit D 7.35 (NH; d, 8.1), 4.25 (H-2, ddd, 4.8/8.1/10.8), 1.65 (H-4; m), 1.45 (H-3; ddd. 5.1/10.8/13.7), 1.35 (H-3’; 4.8/9.0/13.7), 0.8 (4-Me/ H-5; d, 6.5); 13С NMR unit A 165.9 (1), 140.8 (3), 138.6 (9), 129.4 (11/13), 129.2 (12), 126.7 (2), 126.6 (10/14), 76.0 (5), 63.9 (7), 59.3 (8), 41.2 (6), 37.7 (4), 13.9 (6-Me); unit B 171.9 (1), 154.6 (7), 132.5 (4), 131.4 (5), 129.0 (9), 122.4 (6), 113.1 (8), 56.9 (2), 65.4 (OMe), 36.4 (3) unit C 177.2 (1), 41.3 (3), 38.9 (2), 15.7 (2-Me); unit D 174.2 (1), 51.7 (2), 40.6 (3), 25.3 (4), 23.1 (4-Me), 21.5 (5).
Криптофицин 123
[]D +25.2° (с 0.58, СHCl3); 1H NMR (CDCl3) unit A 7.21-7.35 (Ph-H5, m), 6.75 (H-3, ddd, 4.1/10.9/14.1), 5.85 (H-2; dd, 1.4/15.2), 5.25 (H-5, m), 3.6 (H-8; d, 2.0), 2.9 (H-7, dd, 2.0/7.8), 2.7 (H-4; m), 2.55 (H-4’; m). 1.75 (H-6; m), 1.05 (6-Me; d, 7.1), unit В 7.18 (H-5; d, 2.0), 7.05 (H-9; dd, 2.0, 8.5), 6.85 (H-8; d, 8.5), 5.95 (NH; d, 7.7), 4.7 (H-2; ddd, 4.9/7.7/8.1), 3.86 (OMe; s), 3.15 (H-3; dd, 4.9/14.5), 3.05 (H-3’; dd, 8.1/14.5); unit С 7.25 (NH; m), 3.55 (H-3; ddd, 4.6/8.7/13.3), 3.15 (H-3’; ddd, 3.0/3.1/13.3), 2.55 (H-2; m), 1.2 (2-Me; d, 7.3); unit D 6.0 (NH; d, 8.2), 4.45 (H-2; m), 1.6 (H-4; m), 1.55 (H2-3; m), 0.88 (4-Me; d, 7.1), 0.87 (5-H; d, 7.1).
Криптофицин 127
Криптофицин 122 (5 мг, 0.0075 ммоля) раство-ряли в СНСl3 (2 мл) и охлаждали до -40°С в атмо-сфере N2. Добавляли по каплям триметилсилилхло-рид (0.02 мл, 0.157 ммоля) и полученную смесь перемешивали при -40°С в течение 1 часа. Раство-ритель выпаривали и остаток фильтровали через слой силикагеля с 15% EtOH в диэтиловом эфире с получением Криптофицина 127 (4 мг, выход 77%).
[]D +28.6 (с 1.16, СНСl3); EIMS m/z 653 (0.5; M+-HCl); 411 (2); 182/184 (22/26), 153/155 (68/40); 135 (31); 107/108/109 (55/22/31); 91/92 (100/30); 79/81 (45/35); НREIMS m/z 653.2841 (C35H4435CIN3O7, 2.6mmu); 1Н NMR (СНСl3) unit A 7.3-7.4 (Ph-H5; m), 6.75 (Н-3, ddd, 4.2/10.9/15.0), 5.8 (H-2; dd, 1.5/15.0), 5.2 (H-5; ddd, 1.9/9.9/9.9), 4.65 (H-8; d, 9.6), 4.0 (Н-7, brd, 9.6), 2.65 (H-4; m), 2.48 (H-6; m), 2.35 (H-4’; ddd, 10.9/11.2/14.5), 1.02 (6-Me; d, 7.0); unit B 7.18 (H-5; d, 2.2), 7.05 (H-9; dd, 2.2/8.6), 6.85 (H-8; d, 8.6), 6.05 (NH; d, 7.7). 4.65 (H-2; ddd, 4.7/7.7/8.6), 3.86 (OMe; s), 3.15 (H-3; dd, 4.7/14.6), 2.9 (H-3’; dd, 8.6/14.6); unit C 7.25 (NH; brdd, 4.1/5.7), 3.4 (H2-3; m), 2.55 (H-2; m), 1.15 (2-Me, d, 7.5); unit D 6.2 (NH; d, 8.2), 4.45 (H-2; m), 1.65 (H-4; m), 1.55 (H2-3; m), 0.93 (4-Me; d, 6.8), 0.92 (5-Me; d, 6.8); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.4 (1), 142.4 (3), 138.8 (9), 128.8 (11/13), 128.2 (12), 128.0 (10/14), 124.0 (2), 75.6 (5), 73.9 (7), 62.1 (8), 38.6 (6), 36.4 (4), 8.5 (6-Me); unit B 171.1 (1), 154.0 (7), 130.8 (5), 129.8 (4), 128.2 (9), 122.4 (6), 112.4 (8), 56.1 (ОMе), 54.5 (2), 35.4 (3); unit C 175.8 (1), 41.1 (3), 38.8 (2), 14.8 (2-Me); unit D 173.2 (1), 51.1 (2), 40.9 (3), 25.0 (4), 22.8 (5), 21.8 (4-Me).
Пример 21 Синтез Криптофицинов 128 и 130-134
Криптофицины 128, 130 и 131
Неочищенную 2:1 смесь 5.7 мг Криптофици-нов 117 и 118 растворяли в СНСl3 (0.5 мл) и обра-батывали триметилсилилхлоридом (5 мкл) при -60°С в течение 3 часов.
Разделение с помощью гель проникающей жидкостной хроматографии с обращенной фазой, полученной смеси хлоргидринов давало Крипто-фицин 128, Криптофицин 130 и Криптофицин 131. Дальнейшая очистка с помощью гель проникаю-щей жидкостной хроматографии с нормальной фазой давала чистый Криптофицин 128 (2.1 мг).
Спектральные данные для Криптофицина 128
[]D +51.4 (CHCl3, с 0.4), IR max 3408, 3281, 2958, 1747, 1731, 1668, 1538, 1505, 1258, 1179, 1067, 910, 733 cm-1; EIMS m/z (relative intensity %) 668 (0.3, М+- HCl), 500 (1.2), 445 (4.2), 407 (6), 318 (12), 274 (17), 240 (33), 199 (29), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); high-resolution EIMS 668.2851 (calcd for С35H45CIN2O8, +1.3mmu, M+-HCl). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.27 (10-H/14-H, d, 8.0), 7.18 (11-H/13-H, d, 8.0), 6.69 (3-H, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 5.79 (2-H, dd, 15.2, 0.8), 5.10 (5-H, ddd, 11.0, 8.4, 1.7), 4.63 (8-H, d, 9.6), 3.99 (7-H, bd, 9.6), 2.67 (4-H, bdd, 5.4, - 14.2), 2.49 (6-H, dqd, 7.6, 7.6, 1.7), 2.36 (4-H’, td, 10.7, -14.2), 2.35 (12-Me, s), 1.04 (6-СН3, d, 7.1); unit B 7.23 (5-Н, d, 2.1), 7.09 (9-Н, dd, 8.5, 2.1), 6.84 (8-Н, d, 8.5), 5.83 (NH, d, 8.6), 4.80 (2-H, ddd, 8.2, 7.5, 5.7), 3.87 (ОMе, s), 3.16 (3-H, dd, 5.6, - 14.4), 3.00 (3-H’, dd, 7.5, -14.4); unit C 6.94 (NH, bt, 5.8), 3.53 (3-H, ddd, 5.4, 4.1, - 13.5), 3.24 (3-H’, ddd, 6.9, 6.6, -13.5), 2.74 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.92 (2-H, dd, 9.9, 3.2), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.47 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.4), 0.92 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.6 (1), 141.6 (3), 139.2 (12), 135.3 (9), 129.7 (10/14), 127.9 (11/13), 125.2 (2), 76.4 (5), 74.0 (7), 62.0 (8), 38.4 (6), 36.3 (4), 21.1 (12-Me), 8.6 (6-Me); unit В 171.1 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.0 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3); unit С 175.3 (1), 41.3 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме); unit D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.7 (3), 24.7 (4), 23.1 (5), 21.5 (4-Me).
Cпектральные данные для Криптофицина 130
1H-ЯМР (300 Мгц) unit А 7.27 (10-H/14-H, d, 7.8), 7.16 (11-H/13-H, d, 7.8), 6.69 (3-Н, ddd, 15.1, 9.6, 5.2), 5.75 (2-Н, d, 15.1), 5.40 (5-Н, ddd, 10.6, 3.0, 1.8), 5.05 (8-Н, d, 5.9), 3.74 (7-Н, ddd, 10.5, 5.4, 5.2), 2.59 (4-Н, m), 2.55 (6-Н, m), 2.37 (4-Н’, m), 2.33 (12-Ме, s), 1.06 (6-СН3, d, 6.9); unit B 7.21 (5-Н, bs), 7.07 (9-Н, bd, 8.4), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.77 (NH, d, 6.6), 4.80 (2-Н, m), 3.87 (ОMе, s), 3.12 (3-Н; dd, 5.6, -14.4), 3.02 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4), unit С 7.00 (NH, bt, 6.5), 3.47 (3-Н, ddd, 4.3, 4.0, -13.3), 3.24 (3-H’, ddd, 6.7, 6.6, -13.3), 2.72 (2-Н, m), 1.23 (2-Ме, d, 7.3); unit D 4.80 (2-Н, m), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.42 (3-Н’, ddd, 7.9, 4.7, -13.0), 0.91 (5-Н, d, 6.4), 0.86 (4-Ме-Н, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.5 (1), 142.1 (3), 138.8 (12), 135.2 (9), 129.5 (10/14), 127.5 (11/13), 124.8 (2), 77.8 (5), 74.2 (7), 67.2 (8), 39.4 (6), 34.6 (4), 21.1 (12-Ме), 12.3 (6-Ме), unit В 171.0 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.5 (4), 128.4 (9), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3)’ unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.3 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (5), 21.6 (4-Ме).
Спектральные данные для Криптофицина 131
1H-ЯМР (300 Мгц) unit A 7.18 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.64 (3-Н, ddd, 15.2, 9.8, 5.4), 5.70 (2-Н, d, 15.2), 5.06 (5-Н, bt, 9.1), 4.86 (8-Н, d. 9.7), 4.06 (7-Н, bd, 9.7), 2.54 (4-Н, bdd, 5.2, -14.2), 2.37 (12-Ме, s), 2.13 (4-Н’, т), 1.85 (6-Н, m), 0.97 (6-СН3, d, 6.6); unit В 7.21 (5-Н, d, 2.1), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 2.1). 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.66 (NH, d, 10.0), 4.79 (2-Н, bq, 7.7), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-Н; dd, 5.6, - 14.4), 3.02 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4); unit С 6.93 (NH, bt, 6.2), 3.51 (3-H, ddd, 5.0, 4.2, - 13.5), 3.27 (3-H’, ddd, 6.7, 6.4, -13.5), 2.73 (2-H, rn), 1.23 (2-Me; d, 7.3), unit D 4.86 (2-H, dd, 9.7, 3.4), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.46 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.0), 0.93 (4-Me-H, d, 6.4).
Криптофицин 132, 133 и 134
Смесь Криптофицина 124 и изомера Z (134 мг, 0.199 ммолей) растворяли в дихлорметане (6 мл) и позволяли взаимодействовать с м-хлорпербензойной кислотой (103 мг, 0.598 ммолей) при комнатной температуре в течение 36 часов. Добавляли фосфатный буфер (10 мл, рН 8) для удаления хлорбензойной кислоты образующейся в процессе реакции. Через 30 минут водный слой заменяли диметилсульфоксидом (50 мкл) и свежим образцом фосфатного буфера (10 мл). Перемеши-вание продолжали в течение 30 минут. Органиче-ский слой отделяли растворитель упаривали и остаток очищали с помощью жидкостной гель про-никающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil ODS силикагель, 22 х 250 мм, 35% смесь вода/СН3СN, при 6 мл/мин) с получением Крипто-фицина 134 (tR 52.5 мин, 9 мг, выход 6%), частично чистого Криптофицина 133 (tR 61 мин, 32 мг, выход 22%) и неочищенного Криптофицина 132 (tR 67.5 мин, 72 мг). Дальнейшая очистка с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии с нор-мальной фазой (Econosil силикагель, 10 х 250 мм, 56% ЕtOАс/гексан, 3 мл/мин) давала чистый Крип-тофицин 132 (65 мг, выход 45%),
Спектральные данные для Криптофицина 132
[]D +60.1° (СНСl3, с=1.1); EIMS m/z (relative intensity %) 688 (1.6, М+- HCl), 412 (10), 261 (11), 195 (57), 184 (28), 165 (28), 155 (92), 135 (85), high-resolution EIMS m/z 688.23563 (сalcd for С35Н42Сl2N2О8, -3.8mmu, M+-HCl). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.33 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.67 (3-H, ddd, 15.2, 9.9, 5.1), 5.79 (2-H, dd, 15.2, 1.1), 5.10 (5-H, ddd, 1.11, 8.1, 1.5), 4.63 (8-H, d, 9.5), 3.98 (7-H, bd, 9.3), 2.62 (4-H, bdd, 5.1, -14.2), 2.47 (6-H, dqd, 7.4, 7.4, 1.5), 2.40 (4-H’, td, 10.8, -14.2), 2.35 (12-Me, s), 1.02 (6-СН3, d, 7.0); unit B 7.21 (5-H, d, 2.1), 7.06 (9-H, dd, 8.4, 2.1), 6.82 (8-H, d, 8.4), 6.04 (NH, d, 8.5), 4.74 (2-H, td, 8.0, 5.4), 3.85 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.3, -14.4), 2.95 (3-H’, dd, 7.8, -14.4); unit C 7.00 (NH, bt, 5.9). 3.48 (3-H, ddd, 5.0, 3.9, -13.4), 3.23 (3-H’, ddd, 6.6, 6.3, -13.4), 2.71 (2-H, m), 1.21 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.91 (2-H, dd, 9.7, 3.4), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.45 (3-H’, m), 0.92 (5-H, d, 6.6), 0.91 (4-Me-H, d, 6.6). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.7 (1), 141.6 (3), 137.3 (12), 134.8 (9), 129.4 (11/13), 129.0 (10/14), 125.2 (2), 76.4 (5). 74.0 (7), 61.4 (8), 38.4 (6), 36.2 (4), 8.7 (6-Ме); unit В 171.1 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.1 (4), 128.4 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.8 (2), 34.9 (3); unit С 175.3 (1), 41.0 (3), 38.1 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.7 (3), 24.7 (4), 23.1 (5), 21.5 (4-Ме).
1Н-ЯМР спектр является подобным спектру Криптофицина 27, за исключением того, что два мультиплета при 7.31 (10/14) и 7.36-7.40 (11/12/13) для фенильных протонов заменялись на два дубле-та при 7.26 (10/14) и 7.36 (11/13) для п-хлорфенильных протонов.
Пример 22 Отношения структура-активность (SAR) и оценка in vivo
Цитотоксичности Криптофицинов 1, 3 и 8 и новых криптофицинов по отношению к человече-ским линиям КB и LoVo опухолевых клеток пока-зывают в Таблице 6. Криптофицин 51 и Криптофи-цин 3 проявляют сравнимые цитотоксичности (IC50 3.5-5.8 нМ). Криптофицин 52 (IC50 43-70 пкМ), од-нако, обладает слегка меньшей цитотоксичностью, чем Криптофицин 1 (IC50 9-29 пкМ), и Криптофицин 55 (IC50 33-47 пкМ), обладает слегка меньшей ци-тотоксичностью, чем Криптофицин 8 (IC50 9-19 пкМ). Цитотоксичность IC50 для Криптофицинов 117, 122, 125, 127, 128 и 132 является сравнимой с цитотоксичностью для Криптофицинов 1, 8, 52 и 55; однако, данные не позволяют в настоящий мо-мент провести более полные сравнения.
Криптофицин 52 является активным in vivo, но требует, грубо, применения три раза по полной дозе, по сравнению с Криптофицином 1. Актив-ность in vivo Криптофицина 52 против пяти твер-дых опухолей мышиного происхождения и трех человеческих твердых опухолей суммируется в Таблице 7. Аналогично Криптофицин 55 был акти-вен in vivo, но требовал также применения трех полных дозировок, по сравнению с Криптофицином 8. Активность in vivo Криптофицина 55 против шести твердых опухолей мышиного происхожде-ния и четырех человеческих твердых опухолей суммируется в Таблице 8. Данные in vivo оказыва-ется коррелируют с данными in vitro.
Криптофицины 117, 125, 128 и 132 являются активными in vivo против панкреатической адено-карциномы мышиного происхождения (Раnс 03). Криптофицины 117 и 128 оказывается являются более сильными, так что они требуют меньших общих доз, чем Криптофицины 1 и 8, соответствен-но, тогда как Криптофицины 125 и 132 являются менее сильными, так что они требуют более высо-ких общих доз, чем Криптофицины 1 и 8, соответ-ственно. Данные суммируются в Таблице 9.
Величины Т/С, которые составляют меньше чем 42%, считаются активными согласно NCl стан-дартам; считается что величины Т/С, которые со-ставляют меньше, чем 10%, имеют превосходную активность и потенциальную клиническую актив-ность согласно NCl стандартам. Суммарную вели-чину Log уничтожения определяют в виде Т-С/3.2 Td, где Т представляет среднее время в сутках для опухолей обработанной группы для достижения опухоли в 750 мг, С представляет среднее время в сутках для опухолей контрольной группы для до-стижения опухоли в 750 мг, и Td представляет вре-мя удвоения объема опухоли. T.H.Corbett et.al., Cytotocxic Anticancer Drugs: Model and Conceptd for Drug Discovery and Development, pp. 35-87; Kluwer: Norwell, 1992). Суммарные величины Log уничто-жения выше 2.8, 2.0-2.8, 1.3-1.9, 0.7-1.2 и ниже 0.7 с продолжительностью обработки лекарством 5-20 суток считают ++++, +++, ++, + и (неактивный), со-ответственно. Характеристика активности от +++ до ++++, которая является указанием на клиниче-скую активность, является необходимой для ча-стичного влияния или полной регрессии масс с 100-300 мг размером большинства трансплантирован-ных твердых опухолей мыши. Криптофицин 52 показывает величины Т/С, находящиеся в области от 0 до 14% для мышиных опухолей и от 4.1 до 16 для человеческих опухолей и суммарные величины Log уничтожения от 1.1 до 2 для мышиных опухо-лей и от 0 до 3.2 для человеческих опухолей. Крип-тофицин 1 показывает величины Т/С, находящиеся в области от 0 до 27% и величины Log уничтоже-ния в области меньше 1 до 2. Криптофицин 55 по-казывает величины Т/С, находящиеся в области от больше чем 0 до 4.4% и величины Log уничтожения в области от 2.1 до больше 4.6 (кривые) для всех, но одного из трех, Colon 26 эксперимента, который показывает суммарную величину Log уничтожения 1.2. Криптофицин 8 показывает величины Т/С, больше чем 0 и величины Log уничтожения больше 2.8 (некоторые кривые), как показано в Таблице 10. Оказывается, что Криптофицины 117 и 125 имеют величины Т/С и суммарные величины Log уничто-жения, которые сравнимы с этими величинами для других криптофицинов эпоксидного типа, а именно Криптофицинов 1 и 52, тогда как Криптофицины 128 и 132 имеют величины Т/С и суммарные вели-чины Log уничтожения, которые являются сравни-мыми с этими величинами для других криптофици-нов хлорфицинового типа, а именно Криптофици-нов 8 и 55.
Все публикации и патентные заявки, перечис-ленные в этом описании, но не индивидуально и конкретно введенные здесь ссылкой, вводятся здесь ссылкой, как если бы они были указаны как кон-кретно и индивидуально введенными ссылкой.
Хотя вышеприведенное изобретение было описано в некоторых деталях с помощью иллю-страции и примера с целью разъяснения и понима-ния, для специалиста в этой области будет очевид-но в свете описания этого изобретения, что некото-рые изменения и модификации могут быть проведе-ны в нем без отклонения от сути и объема заявляе-мого в формуле изобретения.
Неопластические заболевания, характеризу-ющиеся пролиферацией клеток, не подвергаются нормальному контролю клеточного роста, в боль-шинстве своем вызывают смерть у людей. Клини-ческое испытание по химиотерапии продемонстри-ровало, что для лечения этих заболеваний жела-тельными являются новые и более эффективные лекарства. Такой эксперимент продемонстрировал также , что лекарства, которые разрушают систему микротрубочек цитоскелета, могут быть эффектив-ными в ингибировании пролиферации опухолевых клеток.
Система микротрубочек эукариотических кле-ток составляет основной компонент цитоскелета и находится в динамическом состоянии-упорядоченная структура и разупорядоченная структура; таким образом, что гетеродимеры тубу-лина полимеризуются с образованием микротру-бочек, а микротрубочки деполимеризуются до со-ставляющих их компонентов. Микротрубочки иг-рают ключевую роль в регулировании клеточной архитектуры, метаболизма и деления. Динамиче-ское состояние микротрубочек является критиче-ским для их нормальных функций. Что касается клеточного деления, тубулин полимеризуется в микротрубочки, которые образуют митотическое веретено. Затем микротрубочки деполимеризуются, когда используемое митотическое веретено запол-нится. Таким образом, агенты, которые нарушают полимеризацию или деполимеризацию микротру-бочек, и тем самым ингибируют митоз, включают некоторые наиболее эффективные химиотерапев-тические агенты для клинического применения.
Такие анти-митотические агенты или яды мо-гут быть классифицированы на три группы на ос-новании их молекулярного механизма действия. Первая группа состоит из агентов, включающих колхицин и колцемид, которые ингибируют обра-зование микротрубочек за счет разрушения тубу-лина. Вторая группа состоит из агентов, включаю-щих винбластин и винкристин, которые индуциру-ют образование паракристаллических агрегатов тубулина. Винбластин и винкристин являются хо-рошо известными противораковыми лекарствами. Их действие разрушения микротрубочек митотиче-ского веретена, преимущественно ингибирует ги-перпролиферативные клетки. Третья группа состо-ит из агентов, включающих таксол, который уско-ряет полимеризацию тубулина и таким образом стабилизирует структуру микротрубочек.
Однако, большинство из них, обладающих ак-тивностью в качестве противоопухолевого агента, не гарантирует эффективность против опухолевой клетки и, конечно, не против опухолевой клетки, которая проявляет фенотип сопротивления лекар-ству. Алкалоиды Винка, такие как винбластин и винкристин, являются эффективными против опу-холевых клеток и опухолей, однако, у них отсут-ствует активность против некоторых опухолей и клеток с сопротивлением лекарству. Одной из ос-нов опухолевой клетки, проявляющей сопротивле-ние лекарству (DR) или множественное сопротив-ление лекарству (MDR), является сплошная сверх-экспрессия Р-гликопротеина. Соединения, которые являются плохими субстратами для транспорта Р-гликопротеина, должны быть пригодными для раз-рушения таких DR или MDR фенотипов.
Таким образом, проявление DR или MDR фе-нотипа многими опухолевыми клетками и клиниче-ски доказанная форма действия противо-микротрубочковых агентов против опухолевых клеток делает необходимым развитие анти- микро-трубочковых агентов цитотоксических в отноше-нии опухолевых клеток с отсутствием сопротивле-ния лекарству, а также цитотоксических в отноше-нии к опухолевым клеткам с фенотипом сопротив-ления лекарству. Агенты, которые являются обе-щающими в этом отношении, включают класс со-единений, известных как криптофицины.
Что касается способов получения криптофи-цинов, в настоящее время не известен способ пол-ного синтеза криптофицинов. Криптофициновые соединения в настоящее время получают путем выделения из зелено-голубых водорослей или пу-тем полу-синтетических вариантов способа таких естественно полученных соединений. Отсутствие полного синтетического способа неизбежно делает трудным получение стереоспецифических крипто-фицинов, способа, который может привести к мак-симальной активности и увеличению стабильности соединения. Например, исследование показало, что криптофицины с неактивным макроциклическим кольцом являются более активными. Таким обра-зом, полный синтетический способ, который может давать криптофицины с макроциклическим коль-цом, которое является более стабильным, чем в естественно полученных криптофицинах, будет желательным. Настоящее изобретение решает эти проблемы.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил или фенил, или любую про-стую незамещенную, или замещенную ароматиче-скую, или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
Настоящее изобретение далее обеспечивает общие синтетические способы получения крипто-фицинов. Настоящее изобретение также обеспечи-вает применение криптофицинов в фармацевтиче-ских препаратах для ингибирования пролиферации клеток млекопитающего и для лечения опухоли.
Фигура 1 представляет общую структуру вы-бранных криптофициновых соединений настояще-го изобретения и систему чисел для оксикислотных элементов А и D и аминокислотных элементов В и С в выбранных вариантах;
Фигуры 2А и 2В графически изображают вли-яние криптофициновых соединений и винбластина на клеточную пролиферацию Jurkat и прогрессию клеточного цикла. Клетки Jurkat проинкубированы с указанными концентрациями криптофициновых соединений (А) или винбластина (В) в течение 24 часов. Для каждого образца были определены чис-ло жизнеспособных клеток () и митотический индекс (ђ), как описано в Экспериментальной ча-сти. Величины представляют значение +/- стан-дартное отклонение (sd) для трех образцов в одном из трех подобных экспериментов;
Фигура 3 графически изображает обратимость влияния винбластина, криптофицинов и таксола на клеточный рост. SKOV3 клетки были обработаны 0.1 нМ винбластина (ђ), 0.1 нМ криптофицинов () или 1 нМ таксола (х) в момент времени =0. Эти концентрации ингибировали клеточный рост на 50% для каждого соединения. Через 24 часа клетки промывали и инкубировали в среде, свободной от лекарства, в течение указанного времени. Плот-ность клеток определяли с помощью окрашивания сульфородамином В (SRB), как описано в Экспери-ментальной части, и экспрессировали в виде +/- sd поглощения при 560 нм для тройных образцов в одном из трех экспериментов;
Фигура 4 изображает изоболограммы для комбинационных эффектов винбластина и крипто-фицинов на клеточную пролиферацию. SKOV3 клетки были обработаны винбластином (0-600 пкМ) и/или криптофицинами (1-100 пкМ) в течение 48 часов. Затем количество клеток было определе-но с помощью окрашивания SRB, как описано в Экспериментальной части, и были определены величина IC50s () и линия аддитивности (---) для комбинаций винбластина и криптофициновых со-единений. Величины представляют значения для двух экспериментов каждый содержащий тройные образцы.
Фигура 5 представляет первую схему синтеза криптофицинов в соответствии с настоящим изоб-ретением;
Фигура 6 представляет схему для получения оксикислотного элемента А;
Фигура 7 представляет схему для получения субъединицы криптофицина, включающей окси-кислотный элемент А и аминокислоту В;
Фигура 8 представляет схему для получения субъединицы криптофицина, включающей амино-кислотный элемент С и оксикислоту D;
Фигура 9 представляет первую схему для син-теза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 10 представляет вторую схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 11 представляет схему для синтеза субъединицы криптофицина, включающей окси-кислоту D;
Фигура 12 представляет третью схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением;
Фигура 13 представляет четвертую схему для синтеза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением; и
Фигура 14 представляет пятую схему для син-теза выбранных криптофицинов в соответствии с настоящим изобретением.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С18 и С18
R3-представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В одном из аспектов настоящего изобретения обеспечиваются новые криптофициновые соедине-ния, имеющие следующую структуру:
где
R1 представляет Н, ОН, галоид, О кетогруппы, NH2, SН, низшую алкокси группу или низшую алкиль-ную группу;
R2 представляет Н, ОН, О кетогруппы, NH2, SH, низшую алкокси группу или низшую алкильную группу; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, или двойной связи между C10 и С11; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием тетрагидрофуранового кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 представляет ОН, низшую алканоильную группу или низшую - оксиалканоилокси группу;
R5 представляют Н или ОН группу;
R6 представляет Н; или
R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и С6;
R7 представляет бензильную, оксибензильную, метоксиксибензильную, галоидоксибензильную, дигалоидоксибензильную, галоидметоксибензиль-ную или дигалоидметоксибензильную группу;
R8 представляет ОН, низшую -аминокислоту, С1 связывается с N - аминокислоты, или этерифици-рованной низшей -аминокислоты, где C1 связыва-ется с N этерифицированной низшей -аминокислотной группы;
R4 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалкановой кислотой; и
R5 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей а-оксиалкановой кислотой; и
со следующими условиями:
R1 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкокси группу только, если R2 представ-ляет ОН, О кетогруппы, NH2, SH;
R2 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкокси группу только, если R1 -представляет ОН, О кетогруппы, NH2, SH;
если R1 представляет ОН, R2 представляет ОН, R3 представляет метил, R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептидной группы со структурой Х:
где O1 указанного X соответствует R4, N8 указанно-го X соответствует R8, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4- метоксибензилом;
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R9 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной свя-зи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом;
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С10 и С11, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, R9 представляет метил и R10 представляет изобутил, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом; и
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидной группы, R9 представляет метил, R5 и R9 объединяются вместе с образованием двойной свя-зи между C5 и С6, R4 связывается с концевой кар-боксильной группой лейциновой кислоты и R8 при-соединяется к азоту концевой группы либо 3- ами-но-2-метилпропионовой кислоты, либо метилового эфира 3-амино-2- метилпропионовой кислоты, R7 не является 3-хлор-4-метоксибензилом.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных в С2, С8, С9, С10 и С11, обла-дает R стереохимией. В дальнейшем варианте изобретения, по крайней мере, одна из групп, при-соединенных в С2, С8, C9, С10 и С11, обладает S сте-реохимией.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения в соответствии с приведенной выше структурой, где структура дидепсипептида, который образуется, если R4 или R5 объединяется вместе с R8, имеет следующую структуру Х:
где О1 указанного X соответствует R4 или R5, N8 указанного X соответствует R8, R9 представляет Н или низшую алкильную группу и R10 представляет Н или низшую алкильную группу.
Следующие термины, как они использованы здесь, имеют указанные значения, если не оговоре-но противоположное значение, четко имеются в виду из использования в контексте:
“низшая -аминокислота” подразумевает -аминокислоту, имеющую от трех до восьми атомов углерода, и включает линейные и не-линейные углеводородные цепи; например, 3-амино-2-метилпропионовую кислоту.
“Этерифицированная низшая -аминокислота” подразумевает -аминокислоту, имеющую от трех до восьми атомов углерода, где водород карбоксильной группы замещается ме-тильной группой; например метиловый эфир 3-амино-2-метилпропионовой кислоты.
“Низшая алканоилокси группа” подразумева-ет алканоилокси группу с одним- семью атомами углерода и включает линейные и не-линейные уг-леводородные цепи.
“Низшая -оксиалканоилокси группа” подра-зумевает -оксиалканоилокси группу с двумя- се-мью атомами углерода и включает линейные и не-линейные углеводородные цепи, например, 2-окси-4-метилвалерьяновую кислоту.
“Низшая алкоксильная группа” подразумева-ет любую алкильную группу с одним- пятью ато-мами углерода, связанными с атомом кислорода.
“Низшая алкильная группа” подразумевает алкильную группу с одним- пятью атомами угле-рода и включает линейные и не-линейные углево-дородные цепи, включающие, например, метиль-ные, этильные, пропильные, изопропильные, бу-тильные, изобутильные, трет-бутильные, сескви-бутильные, метилированные бутильные группы, пентильные и трет-пентильные группы.
“Аллильно замещенный алкен” подразумевает алкен, который содержит алкильный заместитель.
“Эпоксидное кольцо” подразумевает трех-членное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома кислорода.
“Азиридиновое кольцо” подразумевает трех-членное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома азота.
“Эписульфидное кольцо” подразумевает трехчленное кольцо, чей скелет состоит из двух атомов углерода и атома серы.
“Сульфатное кольцо” подразумевает пяти-членное кольцо, состоящее из углерод-углерод-кислород-сера-кислородного скелета с двумя до-полнительными атомами кислорода, связанными с атомом серы.
“Мономалкилфосфатное кольцо” подразуме-вает пятичленное кольцо, состоящее из углерод-углерод-кислород-фосфор-кислородного скелета с двумя дополнительными атомами кислорода, один из которых содержит низшую алкильную груп-пу.соединенную с атомом фосфора.
“Простая незамещенная ароматическая груп-па” относится к обычным ароматическим кольцам, содержащим 4n+2 pi электронов в моноцикличе-ской сопряженной системе (например, фурил, пир-ролил, тиснил, пиридил) или бициклической со-пряженной системе (например, индолил или нафтил).
“Простая замещенная ароматическая группа” относится к фенильной группе, замещенной еди-ничной группой (например, низшей аклкильной группой или галоидом).
“Гетероароматическая группа” относится к ароматическим кольцам, которые содержат один или больше неуглеродных заместителей, таких как кислород, азот или сера.
“Галоид” относится к тем членам группы в пе-риодической таблице элементов, которые известны как галоиды. Способы галоидирования включают, но не ограничиваются ими, присоединение галои-дводородов, замещение при повышенной темпера-туре, фотогалоидирование и т.д. и такие способы известны специалистам в этой области.1,2.
Один из вариантов криптофицинового соеди-нения настоящего изобретения представляет со-единение, где R1 и R2 объединяются вместе с обра-зованием эпоксидной группы, R3 представляет ме-тил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4- метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 2, является следующей:
Криптофицин 2
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого криптофицинового соеди-нения, Криптофицина 4, является следующей:
Криптофицин 4
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 пред-ставляет (2- карбометоксипропил)амино группу. Структура этого соединения, Криптофицина 6, является следующей:
Криптофицин 6
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 и R8 являются ОН группами, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6 таким образом, что представляют двойную связь, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил. Структура этого соединения, Криптофицина 7, является сле-дующей:
Криптофицин 7
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет хлор, R2 представляет ОН группу, R3 пред-ставляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с об-разованием двойной связи между C5 и C6, R7 пред-ставляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объеди-няются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 8, является следующей:
Криптофицин 8
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет метокси группу, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипеп-тида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 9, является следующей:
Криптофицин 9
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 представ-ляет метокси группу, R2 и R4 являются ОН группа-ми, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 представляет (2-карбоксипропил)амино группу. Структура этого соединения, Криптофицина 10, является следующей:
Криптофицин 10
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R4 объ-единяются вместе с образованием тетрагидрофу-ранового кольца, R2 представляет ОН группу, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 пред-ставляет (2- карбоксипропил)амино группу. Струк-тура этого соединения, Криптофицина 12, является следующей:
Криптофицин 12
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R4 представляет ОН группу, R5 и R6 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R8 представляет (2- карбоксипропил)амино груп-пу. Структура этого соединения, Криптофицина 14, является следующей:
Криптофицин 14
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием ди-депсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 16, является сле-дующей:
Криптофицин 16
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 17, является следующей:
Криптофицин 17
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вме-сте с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет втoр-бутил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 18, является следующей:
Криптофицин 18
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 и R6 объединяются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вме-сте с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изопропил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 19, является следующей:
Криптофицин 19
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием ди-депсипептида со структурой X, где R9 представляет водород и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 21, является сле-дующей:
Криптофицин 21
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3,5-дихлор-4-гидроксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 23, является следующей:
Криптофицин 23
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипеп-тида со структурой X, где R9 представляет водород и R10 представляет изобутил. Структура этого со-единения, Криптофицина 24, является следующей:
Криптофицин 24
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R4 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R5 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 26, является сле-дующей:
Криптофицин 26
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R8 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 28, является следующей:
Криптофицин 28
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R8 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет водород и R10 пред-ставляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 29, является следующей:
Криптофицин 29
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет метил, R5 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 30, является сле-дующей:
Криптофицин 30
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3,5-дихлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет изо-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 31, является следующей:
Криптофицин 31
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 представляет гидрокси, R6 представляет водород, R7 представля-ет 3-хлор-4-метоксибензил и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 35, является следующей:
Криптофицин 35
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет водород, R5 и R6 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со структурой X, где R9 представ-ляет метил и R10 представляет изобутил. Структура этого соединения, Криптофицина 40, является сле-дующей:
Криптофицин 40
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R6 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3,5-дихлор-гидроксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет изобутил. Структура этого соединения, Крип-тофицина 45, является следующей:
Криптофицин 45
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидеп-сипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет пропил. Структура этого соединения, Криптофицина 49, является следую-щей:
Криптофицин 49
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием двойной связи между C10 и С11 атомами углерода, R3 представляет водород, R5 и R6 объединяются вместе с образова-нием двойной связи между C5 и C6, R7 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидепсипептида со струк-турой X, где R9 представляет метил и R10 представ-ляет пропил. Структура этого соединения, Крипто-фицина 50, является следующей:
Криптофицин 50
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, где R1 и R2 объ-единяются вместе с образованием эпоксидной группы, R3 представляет метил, R5 и R6 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между C5 и С6, R7 представляет 3-хлор-метоксибензил, и R4 и R8 объединяются вместе с образованием дидеп-сипептида со структурой X, где R9 представляет метил и R10 представляет втор-бутил. Структура этого соединения, Криптофицина 54, является сле-дующей:
Криптофицин 54
Из вышеприведенных соединений, Криптофи-цины 2, 4, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54 являются метаболитами, продуцированны-ми штаммом Nostoc sp. зелено-голубых водорослей (цианобактерий), которые были культивированы этими соединениями, впоследствии выделенными из этой культуры. Криптофицины 6 и 7 являются артефактами, которые продуцируются, если про-цедура выделения использует растворители, со-держащие метанол. Криптофицины 8, 9, 10-12, 14 и 35 являются производными этих естественно про-дуцированных метаболитов, которые были хими-чески модифицированы способами, описанными в Экспериментальной части этой заявки, с альтерна-тивными способами для создания приведенных в качестве примеров соединений, а также не приве-денных в качестве примеров соединений, доступ-ных для специалистов в этой области.
Настоящее изобретение обеспечивает спосо-бы продуцирования вышеприведенных криптофи-циновых соединений за счет культивирования штамма Nostoc sp.. Морфологические характери-стики Nostoc sp. зелено-голубых водорослей (циа-нобактерий), как они раскрыты в патенте США 4946835, являются такими, что они являются ните-видными и состоят из растительных клеток. В бо-лее длинных волокнах гетероцисты периодически наблюдаются в интеркалярном положении; акине-ты не наблюдаются. Репродуцирование происхо-дит за счет гормогоний дополнительно к статисти-ческим трихомным разрывам. Основа для иденти-фикации Nostoc sp. может быть найдена в J.Gen.Micro., 111:1-61 (1979).
Изобретение далее обеспечивает тот вариант, в котором Nostoc sp. могут быть культивированны-ми и новые криптофициновые метаболиты, а также и предварительно описанные криптофициновые метаболиты, могут быть выделены из этой культу-ры. В предпочтительном варианте настоящего изобретения штамм Nostoc sp., обозначенный GSV 224, представляет штамм, который культивируется и из которого выделяются соединения, представ-ленные следующей структурой:
где
R1 представляет Н, ОН, галоид, О кетонной группы, NH2, SH, низшую алкоксильную группу или низ-шую алкильную группу;
R2 представляет Н, ОН, О котонной группы, NH2, SH, низшую алкоксильную группу или низшую алкильную группу; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца или двойной связи между C10 и С11; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием тетрагидрофураногового кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 представляют ОН, низшую алканоилокси группу или низшую -оксиалканоилокси группу;
R5 представляют Н или ОН группу;
R6 представляет Н; или
R5 и R6 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C5 и C6;
R7 представляет бензильную, оксибензильную, метоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидметоксибензильную или дигалоидметоксибензильную группу;
R8 представляют ОН, низшую -аминокислоту, где С1 связывается с N - аминокислоты, или этерифи-цированную низшую -аминокислоту, где С1 связы-вается с N этерифицированной -аминокислотной группы;
R4 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалканоильной кислотой; или
R5 и R8 могут объединяться вместе с образованием дидепсипептидной группы, состоящей из низшей -аминокислоты, связанной с низшей -оксиалканоильной кислотой;
при следующих условиях:
R1 представляет Н, низшую алкильную группу или низшую алкоксильную группу только, если R2 представляет ОН, О кетонной группы, NH2, SH.
В предпочтительном варианте изобретения химически модифицированный криптофициновый метаболит, выделенный вышеописанным способом, точно обеспечивает соединение, также имеющее эту структуру. Способы химической модификации криптофициновых соединений с получением до-полнительных соединений в пределах объема настоящего изобретения являются доступными специалистам в этой области. Однако, дополни-тельные способы описываются более детально в Экспериментальной части этой заявки.
Дополнительно к новым криптофициновым со-единениям настоящего изобретения, настоящее изобретение обеспечивает новые способы получе-ния, а также применения вышеприведенных соеди-нений, которые включают следующие ранее рас-крытые криптофициновые соединения, Криптофи-цины 1, 3, 5, 13 и 15. Структуры этих соединений являются следующими:
Криптофицин 1
Криптофицин 3
Криптофицин 5
Криптофицин 13
Криптофицин 15
Изобретение при этом направляется на обес-печение любого штамма Nostoc sp. и, предпочти-тельно на обеспечение штамма Nostoc sp., GSV 224, для продуцирования криптофициновых соедине-ний. С этой целью GSV 224, штамм Nostoc sp., был помещен в банк данных 7 октября 1993 согласно Budapest Treaty Международного банка данных микроорганизмов с целью процедуры патентования с патентной культурой, помещенной в банк данных коллекции American Туре Culture, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 U.S.A. под номером АТСС Acession № 55483. Другие штаммы Nostoc sp., в частности, штамм МБ 5357, ранее помещен-ные в банк данных Merck and Со, под номером АТСС №53789, представляют штаммы, которые могут быть рассмотрены для использования в практике настоящего изобретения.
Как это имеет место с другими организмами, характеристики Nostoc sp., подвергаются измене-ниям. Например, могут быть получены рекомби-нанты, варианты или мутанты специфических штаммов путем обработки различными известными физическими или химическими мутагенами, такими как ультрафиолетовое излучение, радиационное излучение, гамма-излучение или путем обработки N-метил-N’-нитро-N-нитрозогуанидином. Все есте-ственные и индуцированные варианты, мутанты и рекомбинанты специфических штаммов, которые сохраняют характеристики продуцирования крип-тофицинового соединения, включаются в пределы объема заявленного изобретения.
Криптофициновые соединения настоящего изобретения могут быть получены культивирова-нием штамма Nostoc sp. в аэробных условиях, по-груженных в соответствующую культурную среду до продуцирования, в основном, антибиотиковой активности. Другие приемы использования культу-ры, такие как рост на поверхности на отвержден-ной среде также могут быть использованы для про-дуцирования этих соединений. Культурные среды, использованные для роста специфических штам-мов, могут включать любую среду из многих азот-ных и углеродных источников и неорганических солей, которые известны специалистам в этой об-ласти. Экономия в процессе продуцирования, оп-тимальные выходы и легкость выделения продукта являются теми факторами, которые принимаются в расчет при выборе углеродных источников и ис-точников азота, которые используются. Среди пи-тальных неорганических солей, которые могут быть введены в культурные среды, используются обычные растворимые соли, способные давать ионы железа, калия, натрия, магния, кальция, ам-мония, хлорида, карбоната, фосфата, сульфата, нитрата и им подобные ионы.
Следы ценных элементов, которые являются необходимыми для роста и развития организмов, должны быть также включены в культурную среду. Такие следы ценных элементов обычно присут-ствуют в виде примесей в других составляющих среды в количествах, достаточных для того, чтобы удовлетворять требованиям роста организмов. Может быть желательным добавление небольших количеств (т.е. 0.2 мл/л) антивспенивающего аген-та, такого как полипропиленгликоль (с мол. весом около 2000) для крупномасштабного культивиро-вания среды, если вспенивание становится пробле-мой.
Для получения значительных количеств крип-тофициновых соединений может быть использова-но аэробное культивирование с погружением в танки. Небольшие количества могут быть получе-ны с использованием культуры во встряхиваемой колбе. Так как время задержки в проявлении про-дуцирования метаболита обычно связывается с инокуляцией больших танков организмами, пред-почтительным является использование вегетатив-ного инокулюма. Вегетативный инокулюм готовит-ся путем инокуляции культурной среды малого объема фрагментами вегетативной трихомы или формой организма, содержащей гетероцисты для получения свежей, активно растущей культуры организма. Вегетативный инокулюм затем перено-сится в большой танк. Среда, использованная для вегетативного инокулюма, может быть такой же как та, которая использовалась для крупномас-штабных культиваций или ферментаций, но может быть использована и другая среда.
Организмы могут быть выращены при темпе-ратурах между 20°С и 30°С и интенсивности па-дающего излучения от около 100 до 200 мкмоль фотонов м-2 сек-1 (фотосинтетически активного из-лучения).
Как это является обычным в процессах аэроб-но погруженной культуры этого типа, газообразная двуокись углерода вводится в культуру путем до-бавления в стерильный воздушный поток пробуль-киваемый через культурную среду. Для эффектив-ноного получения криптофициновых соединений, количество двуокиси углерода должно составлять около 1% (при 24°С и давлении одна атмосфера).
Ранее известные приемы, в частности, патент США 4946835, обеспечивает способы культивиро-вания Nostoc sp., содержание которого вводится здесь ссылкой.
Производство криптофицинового соединения может протекать в процессе культивирования ис-пытываемыми образцами бульона по отношению к организмам, которые, как известно, являются чув-ствительными к этим антибиотикам. Одним из при-годных проверенных организмов является Candida albicans.
После их получения в аэробных условиях по-груженной культуры, криптофициновые соедине-ния изобретения могут быть выделены из культуры и из культурной среды способами, известными специалистам в этой области. Выделение обычно сопровождается первоначально фильтрованием культурной среды для отделения клеток водоросли и затем лиофильной сушкой выделенных клеток. Лиофильно высушенные водоросли могут быть подвегрнуты экстрагированию подходящим рас-творителем, таким как этанол, метанол, изопропа-нол или дихлорметан. Криптофицины могут быть выделены за счет того, что этот экстракт, а также культурная среда подвергаются быстрому хрома-тографированию на колонке с обращенной фазой. Криптофицины могут быть очищены с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (HPLC).
Как будет очевидно из структур криптофици-нов, криптофициновые соединения содержат груп-пы, которые являются способными к химической модификации. Исходное соединение настоящего изобретения рассматривает те криптофицины, ко-торые обладают противо-опухолевой активностью. Например, производные, приведенные в качестве примера в настоящем изобретении, включают со-единения, содержащие эпоксидный кислород или гидроксильные группы на С-7 и С-8 звене А или группу лейциновой кислоты звена В Фигуры 1. Такие производные новых и ранее описанных со-единений, которые обладают желаемой противо-опухолевой активностью, включаются в заявляемое изобретение. Кроме того, связь между структурой криптофициновых соединений и противо-опухолевой активностью обеспечивается в Экспе-риментальной части, приведенной ниже.
В то время как выбранные криптофициновые соединения, которые, как известно, являются мета-болитами, продуцированными водорослями насто-ящего изобретения, другие криптофициновые со-единения, например Криптофицины 8-15, могут быть получены из метаболитов с использованием опубликованных приемов, которые являются из-вестными специалистам в этой области; например, синтезом, описанным в патентах США 4868208, 4845086 и 4845085, содержание которых вводится здесь ссылкой, или за счет использования других способов, известных специалистам в этой области. Кроме того, настоящее изобретение в Эксперимен-тальной части обеспечивает способы получения производных.
Криптофицины являются мощными противо-опухолевыми и противогрибковыми депсипептида-ми из зелено-голубых водорослей (цианобактерий), принадлежащих к Nostocaceae. Первое криптофи-циновое соединение, Криптофицин 1, было выделе-но из живущего на земле Nostoc sp., АТСС 53789, и было найдено, что он является очень активным против грибов, особенно штамм Cryptococcus (R.E. Schwarz et.al., J.Ind.Microbiol. 1990, 5:113-124). Криптофицин 1 был также выделен из живущего на земле Nostoc sp. GSV 224, вместе с 24 дополнитель-ными аналогами криптофицина в виде минималь-ных составляющих водоросли и было найдено, что оно является очень активным против подкожно трансплантированных твердых опухолей у мышей (G.Trimurtulu et.al., J.Am.Chem.Soc. 1994, 16:4729-4737; R.Borrow et.al., J.Am.Chem.Soc. 1995, 117: 2479-2490). Два аналога из Nostoc sp., GSV 224, Криптофицины 3 и 5, были описаны ранее в виде полу-синтетических аналогов Криптофицина 1 (D.F.Sesin, патент США 4845085, опубликованный 4 июля 1989; D.F.Sesin et.al., патент США 4868208, опубликованный 19 сентября 1989). Криптофицины проявляли значительную селективную цитотоксич-ность к опухоли в анализе Corbett и были в равной степени цитотоксичными по отношению к опухоле-вым клеткам, чувствительным к лекарству, и к опу-холевым клетка с сопротивлением лекарству. Криптофицин 1 проявляет такую же форму дей-ствия как винбластин, но отличается от последнего лекарства в необратимости ингибирования микро-трубочкового ансамбля (C.D.Smith et.al., Cancer Res. 1994, 54:3779-3784). Один из криптофицинов из Nostoc sp., GSV 224, Криптофицин 24, был выде-лен из морской губки и назван ареностатином А (M.Kobayashi et.al., Tetrahedron Lett. 1994, 35:7969-72; M.Kobayashi et.al., Tennen Yuki Kagobutsu Toronkai KoenYoshishu 1994, 36st, 104-110).
Двадцать два дополнительных криптофицино-вых соединения, обозначенных здесь Криптофици-нами 2, 4, 6, 7, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, раскрываются в патентной заявке № 08/172632, поданной 21 декабря 1993, и 08/249955, поданной 27 мая 1994, и Международной заявке № PCT/US94/14740, поданной 21 декабря 1994, такие соединения являются либо метаболитами, выде-ленными из штамма Nostoc sp., либо полученными полу-синтетическим путем из таких метаболитов. Кроме того, раскрытое в этих патентных заявках является характеристикой выбранных криптофи-циновых соединений в качестве анти-микротрубчатых агентов с активностью клиниче-ского типа, проявляемой в отношении широкого спектра опухолей, имплантированных мышам, включая DR и MDR опухоли.
Настоящее изобретение обеспечивает новые криптофициновые соединения, имеющие следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную, или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 -представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте этого крипто-фицинового соединения, R8 криптофицина пред-ставляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном варианте этого криптофицинового соединения R7 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изо-бутил, пентил или изопентил. В дополнительном предпочтительном варианте этого криптофицино-вого соединения R7 представляет Н, R8 представля-ет метил, R3 представляет метил; X и Y не являются оба О.
Настоящее изобретение обеспечивает допол-нительный предпочтительный вариант этого крип-тофицинового соединения, где R3 представляет этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном вари-анте этого криптофицинового соединения R9 пред-ставляет метил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил. В другом предпочтительном варианте этого криптофицинового соединения R10 представляет метил, этил, пропил, бутил, изобутил, пентил или изопентил.
Изобретение далее обеспечивает криптофици-новые соединения, где, по крайней мере, одна из групп, присоединенных к С3, C6, C10, C16, С17, и C18 обладает R стериохимией. В другом варианте изобретения, по крайней мере, одна из групп, при-соединенных к С3, С6, C10, С16, C17 и C18, обладает S стериохимией.
Один вариант криптофицинового соединения настоящего изобретения представляет соединение, когда Аr представляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между C18 и C19, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи меж-ду С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислоро-дом. Структура этого соединения, Криптофицина 51, является следующей:
Криптофицин-51
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-’эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и C14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 52, является следующей:
Криптофицин-52
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 53, является следующей:
Криптофицин-53
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R гидроксильную группу, R3, R7 и R8 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 55, является следующей:
Криптофицин-55
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 представляют водо-род, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 57, является следую-щей:
Криптофицин-57
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3, R7 и R8 пред-ставляют метил, R4 и R5 представляют водород, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 58, является следующей:
Криптофицин-58
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эписульфидного кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 61, является следующей:
Криптофицин-61
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-метоксифенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединя-ются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R10 представляет водо-род, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 81, является следую-щей:
Криптофицин-81
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием двойной связи между C18 и С19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляет водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 82, является следующей:
Криптофицин-82
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 90, является следующей:
Криптофицин-90
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет метил, R1 и R2 объединяются вместе с об-разованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 91, является следую-щей:
Криптофицин-91
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-азиридинового кольца, R3, R7 и R8 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 97, является следующей:
Криптофицин-97
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и С19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 110, является следую-щей:
Криптофицин-110
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-тол ил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между C18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 111, является следую-щей:
Криптофицин-111
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 112, является следую-щей:
Криптофицин-112
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 115, является следую-щей:
Криптофицин-115
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-фторфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 116, является следую-щей:
Криптофицин-116
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 117, является следую-щей:
Криптофицин-117
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и C14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 118, является следую-щей:
Криптофицин-118
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 119, является следую-щей:
Криптофицин-119
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет 2-тиeнил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y являются кислородом. Структура этого соединения, Криптофицина 120, является следую-щей:
Криптофицин-120
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 121, является следующей:
Криптофицин-121
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 122, является следующей:
Криптофицин-122
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот, несущий один водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 123, является следующей:
Криптофицин-123
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием двойной связи между С18 и C19, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вме-сте с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 124, является следую-щей:
Криптофицин-124
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 125, является следую-щей:
Криптофицин-125
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 представляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения. Криптофи-цина 126, является следующей:
Криптофицин-126
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот несущий единичный водород. Структура этого соединения, Криптофицина 127, является следую-щей:
Криптофицин-127
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет фенил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, X представляет кислород и Y представляет азот несущий единичный водород. Структура этого соединения, Криптофицина 127, является следую-щей:
Криптофицин 128
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 представляет S-хлор, R2 пред-ставляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этoго соединения, Криптофицина 130, является следую-щей:
Криптофицин-130
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-толил, R1 представляет R-хлор, R2 пред-ставляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 пред-ставляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 131, является следую-щей:
Криптофицин-131
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 132, является следую-щей:
Криптофицин-132
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между С13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения. Криптофицина 133, является следую-щей:
Криптофицин-133
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда Аr пред-ставляет п-хлорфенил, R1 представляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 и R7 представляют метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи между C13 и С14, R6 представляет 3-хлор-4-метоксибензил, R9 пред-ставляет изобутил, R8 и R10 представляют водород, и X и Y представляют кислород. Структура этого соединения, Криптофицина 134, является следую-щей:
Криптофицин-134
Впредь набор, приведенный ниже представля-ет криптофициновые соединения, чьи замещающие группы основаны на следующей структуре:
Где
R1 представляет Н или галоид;
R2 представляет Н кислород кeтонной группы; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, или R1 и R2 могут объединять-ся вместе с образованием эписульфидного кольца;
R3 представляет Н или низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 представляет Н или ОН;
R5-представляет Н или ОН; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи;
R6- представляет Н или галоид;
При следующем условии,
если R1 и R2 объединяются вместе с образованием эпоксидного кольца, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор, R3 не является метилом.
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
Вариант криптофицинового соединения настоящего изобретения представляет соединение, когда R1 представляет водород, R2 представляет кислород кетонной группы, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образовани-ем двойной связи и R6 представляет хлор. Структу-ра этого соединения, Криптофицина 20, является следующей:
Криптофицин 20
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-бром, R2 представляет R гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 25, является следующей:
Криптофицин 25
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 27, является следую-щей:
Криптофицин 27
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R- эпок-сидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 являются водородом и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 32, является следующей:
Криптофицин 32
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1, R4 и R5 являются водородом, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет R-метил, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 33, является следующей:
Криптофицин 33
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1, R2, R4 и R5 являются водородом, R3 представляет R-метил, и R6 представляет водород. Структура этого соеди-нения, Криптофицина 34, является следующей:
Криптофицин 34
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2, представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 37, является следую-щей:
Криптофицин 37
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 38, является следую-щей:
Криптофицин 38
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,R-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двойной связи, и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 39, является следую-щей:
Криптофицин 39
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R- эпок-сидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 пред-ставляет S-гидроксильную группу и R5 представля-ет R-гидроксильную группу и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 41, является следующей:
Криптофицин 41
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием R,R-эпоксидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 представляет R-гидроксильную группу и R5 пред-ставляет S-гидроксильную группу и R6 представля-ет хлор. Структура этого соединения, Криптофи-цина 42, является следующей:
Криптофицин 42
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет водород, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет R-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 48, является следую-щей:
Криптофицин 48
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 представ-ляют водород и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 59, является сле-дующей:
Криптофицин 59
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 и R2 объединяются вместе с образованием S,S-эписульфидного кольца, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объединяются вместе с образованием двой-ной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 60, является следую-щей:
Криптофицин 60
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет водород, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 63, является следующей:
Криптофицин 63
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 представ-ляют водород и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 64, является сле-дующей:
Криптофицин 64
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 69, является следующей:
Криптофицин 69
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 70, является следующей:
Криптофицин 70
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-бром, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 71, является следующей:
Криптофицин 71
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-бром, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 72, является следующей:
Криптофицин 72
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет S-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 73, является следующей:
Криптофицин 73
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-хлор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет водород. Структура этого соедине-ния, Криптофицина 74, является следующей:
Криптофицин 74
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет S-фтор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6 представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 75, является следующей:
Криптофицин 75
Другой вариант соединения настоящего изоб-ретения представляет соединение, когда R1 пред-ставляет R-фтор, R2 представляет R-гидроксильную группу, R3 представляет S-метил, R4 и R5 объеди-няются вместе с образованием двойной связи и R6-представляет хлор. Структура этого соединения, Криптофицина 76, является следующей:
Криптофицин 76
Настоящее изобретение обеспечивает спосо-бы получения приведенных выше криптофицино-вых соединений, а также ранее известных крипто-фицинов посредством полного синтеза.
Изобретение далее обеспечивает то обстоя-тельство, что новые криптофициновые метаболиты, а также ранее описанные криптофициновые мета-болиты могут быть синтезированы с использовани-ем способов, обеспеченных в этом изобретении.
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения криптофицинового соединения, вклю-чающего селективный аллильнозамещенный Е алкен; перегруппировку аллильно замещенного Е алкена через стереоспецифическую перегруппи-ровку Виттига; превращение этого соединения в первую -аминокислоту или -оксикислоту, соче-тание первой кислоты со второй -аминокислотой с образованием первой субъединицы; сочетание третьей -аминокислоты с четвертой -оксикислотой или -аминокислотой с образовани-ем второй субъединицы; и сочетание первой субъ-единицы со второй субъединицей с образованием криптофицина.
Настоящее изобретение далее обеспечивает предпочтительный вариант способа, где получен-ное криптофициновое соединение имеет следую-щую структуру:
где
Аr представляет метил или фенил или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 -представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и C14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения, способ дает криптофициновое соеди-нение, где Аr представляет фенил, R3 представляет метил и R6 представляет галоидметоксибензил, R7 представляет Н; R8 представляет метил; R9 пред-ставляет изобутил: R10 представляет Н; X пред-ставляет О; и Y представляет О.
Кроме того, что настоящее изобретение обес-печивает криптофициновые соединения с приве-денной выше структурой, настоящее изобретение обеспечивает способы получения ранее раскрытых криптофициновых соединений и известных в лите-ратере криптофициновых соединений. Криптофи-циновые соединения 1, 8 и 35 были получены с помощью полного синтеза. Приведенное здесь ни-же соединение является примером ранее раскры-тых и известных ранее в литераторе криптофици-новых соединений, полученных путем полного синтеза:
где
R1 представляет галоид; R2-представляет ОН; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца;
R3 представляет Н; и R4 представляют Н; или
R3 и R4 могут объединяться вместе с образованием двойной связи.
Настоящее изобретение обеспечивает также фармацевтическую композицию, полезную для ингибирования пролиферации гиперпролифератив-ной клетки млекопитающего, включающую эффек-тивное количество криптофицинового соединения со следующей структурой:
где
Ar представляет метил или фенил или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SН, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца;
или R1 и R2 могут объединяться вместе с образова-нием двойной связи между С18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино;
вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения фармацевтическая композиция далее включает, по крайней мере, один дополнительный противо-опухолевый агент.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ ингибирования пролиферации клетки мле-копитающего, включающий контактирование клет-ки млекопитающего с криптофициновым соедине-нием в количестве, достаточном для ингибирова-ния пролиферации клетки, криптофицинового со-единения, имеющего следующую структуру:
где
Аr представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SН, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и С19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между С13 и С14;
R6 представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения этот способ далее включает контак-тирование клетки с, по крайней мере, одним допол-нительным противо-опухолевым агентом. В пред-почтительном варианте настоящего изобретения клетка млекопитающего, которая подвергается контактированию, является гиперпролифератив-ной. В другом предпочтительном варианте насто-ящего изобретения гиперпролиферативная клетка является человеческой.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ ингибирования пролиферации гиперпроли-феративной клетки млекопитающего, имеющей множество фенотипов сопротивления лекарству, способ, включающий контактирование клетки с количеством криптофицинового соединения, эф-фективным для нарушения динамического состоя-ния микротрубочковой полимеризации и деполи-меризации, для задержки клеточного митоза, тем самым ингибируя пролиферацию клетки, крипто-фицинового соединения, имеющего следующую структуру:
где
Ar представляет метил, или фенил, или любую про-стую незамещенную или замещенную ароматиче-скую или гетероароматическую группу;
R1 представляет галоид, SH, амино, моноалкила-мино, диалкиламино, триалкиламмоний, алкилтио, диалкилсульфоний, сульфат или фосфат;
R2 представляет ОН или SH; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием эпоксидного кольца, азиридинового кольца, эпи-сульфидного кольца, сульфатного кольца или мо-ноалкилфосфатного кольца; или
R1 и R2 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C18 и C19;
R3 представляет низшую алкильную группу;
R4 и R5 представляют Н; или
R4 и R5 могут объединяться вместе с образованием двойной связи между C13 и С14;
R6-представляет бензильную, оксибензильную, алкоксибензильную, галоидоксибензильную, дига-лоидоксибензильную, галоидалкоксибензильную или дигалоидалкоксибензильную группу;
R7, R8, R9 и R10 каждый независимо представляют Н или низшую алкильную группу; и
X и У каждый независимо представляют О, NH или алкиламино.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения способ далее включает контактирова-ние клетки с, по крайней мере, одним дополнитель-ным противо-опухолевым агентом. В другом пред-почтительном варианте настоящего изобретения клетка млекопитающего является человеческой.
Настоящее изобретение обеспечивает также способ смягчения патологического состояния, вы-званного гиперпролиферирующими клетками мле-копитающего, способ, включающий введение субъ-екту эффективного количества фармацевтической композиции, раскрытой здесь, для ингибирования пролиферации клеток. В предпочтительном вари-анте настоящего изобретения клетки млекопитаю-щего являются человеческими.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения, способ далее включает проведение субъекту, по крайней мере, одной дополнительной терапии, направленной на смягчение патологиче-ского состояния. В предпочтительном варианте настоящего изобретения патологическое состояние характеризуется образованием опухолей. В другом предпочтительном варианте настоящего изобрете-ния опухоли выбираются из группы, состоящей из молочной железы, мало-камерного легкого, не-мало-камерного легкого, калоректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который включает панкреатиче-ский гастрит и желудочный гастрит, желудка, мие-ломы, мочевого пузыря, ренальной нейроэндокри-нии, которая включает щитовидную железу и опу-холи, не связанные с заболеванием Ходкинса, и опухоли, связанные с заболеванием Ходкинса.
Способ приготовления криптофициновых со-единений суммируется в Схеме 1, как отражено на Фигуре 5. Исходное вещество представляет 3Е - алкен (a)замещенный в С-2 положение ХН группой в S- конфигурации, где X представляет кислород или NH. L-аланин и L-молочная кислота служат в качестве недорогого источника исходного веще-ства а. Ключевой стадией в синтезе является стере-селективная [2,3] перегруппировка Виттига (D.J.-S.Tsai et.al., J.Org.Chem., 1984, 49:1842-1843; K.Mikami et.al., Tetrahedron 1984, 25: 2303-2308; N.Sayo et.al., Chem. Lett., 1984, 259-262) пропарги-лового эфира а (б) в (3R, 4R)-3-(ХН-замещенный)-4-алкилгепт-5(Е)-ен-1-ин (с), где X представляет кис-лород или защищенный азот (например, трет- бу-тилдиметилсилиламино). Соединение с может быть затем превращено в - окси или аминокислотное звено А предшественника криптофицинового со-единения, метил(5S,6R)-5-(ХР-замещенный)-6-алкил-8-арил-окта-2Е,7Е- диеноат (d), где Р являет-ся пригодной защищающей группой, используя способы, известные специалистам в этой области.
Одной из стратегий синтеза криптофицинового соединения, которое составляется из -окси или аминокислотного звена А, -аминокислотного зве-на В, -аминокислотного звена С и -окси или ами-нокислотного звена D, является создание узла мак-роцикла из двух предшественников, представляю-щих остатки криптофициновой молекулы, напри-мер, А-В предшественника (e), содержащего -окси или аминокислотное звено А и -аминокислотное звено В и C-D предшественника (f), содержащего -аминокислотное звено С и -окси или аминокис-лотное звено D.
В способе, описанном здесь, криптофициновое соединение составляется из А-В и С-D предше-ственников в две стадии путем (1) соединения кон-цевых звеньев А и D в А-В и C-D предшественниках с образованием циклического продукта.
В синтезе Криптофицина 51, описанном в Экс-периментальной части, эфирная связь образуется между -окси группой звена А в А-В остатке и группой карбоновой кислоты звена D в C-D фраг-менте с образованием ациклического С-D-A-B ин-термедиата и затем амидная связь образуется меж-ду группой карбоновой кислоты звена В в А-В остатке и -амино группой звена С в C-D остатке. Соединение К является предшественником А-В остатка, соединение Р является предшественником C-D остатка, и соединение R является ацикличе-ским предшественником С-D-A-B Криптофицина 51. Соединения К и Р содержат защищающие груп-пы на группе карбоновой кислоты звена В и -амино группу звена С для ограничения сочетания с образованием эфира между звеньями А и D в ста-дии 1. Эти защищающие группы удаляются из С-D-A-B интермедиата таким образом, чтобы могло иметь место образование амида между звеньями В и С в стадии 2.
Синтез метил(5S,6В)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2Е,7Е-диеноата (G), звена А предшественника Криптофицина 51 суммируется на Схеме 2 (Фигура 6). (S)транс-3-пентен-2-ол (А), исходное вещество было приготовлено с помощью ферментативного расщепления рацемического соединения. Реакция А с пропаргилхлоридом и основанием в условиях фазового переноса дает пропаргиловый эфир В с 86% выходом. Обработка В бутиллитием при -90°С приводит к спирту С с 71% выходом. Желаемое 3R,4R анти соединение С было продуктом, полу-ченным только при перегруппировке Виттига. По-сле защиты гидроксильной группы С в виде трет- бутилдиметилсилилового эфира (или трет-бутилдиметилсилилового эфира), гидроборирова-ние тройной связи (H.C.Brown, Organic Synthesis Via Boranes, Willey, 1975) приводит к альдегиду D с 73% выходом от С. Затем D было превращено в транс ,-ненасыщенный эфир Е реакцией Хорне-ра-Эмонса с 90% выходом. Селективный озонолиз двойной связи С6-С7 в D дает альдегид F с 83% выходом. Наконец, реакция Виттига F с бензи-лтрифенилфосфонийхлоридом в присутствии бу-тиллития дает G с 80% выходом. Выход G от А составлял 26%.
Реакция сочетания звена А предшественника G с D-3-(3-хлор-4- метоксифенил)аланином звена В с образованием А-В предшественника (К) суммиру-ется на схеме 3 (Фигура 7). Гидролиз группы мети-лового эфира в G гидроокисью лития в ацетоне дает карбоновую кислоту Н с 95% выходом. Соче-тание Н с трихлорэтиловым эфиром I с образова-нием J может быть выполнено с 65% выходом за счет обработки раствора Н в N,N- диметилформа-миде (ДМФА) небольшим избытком пентафторфе-нилдифенилфосфината (FDPP), эквимолярным ко-личеством трифторацетатной соли I, с последую-щей обработкой 3 эквивалентами диизопропилэти-ламина (DIEA) при 25°С (S.Chen et.al., Tetrahedron Lett. 1991, 32: 6711-6714). Фтордесилилирование J затем приводит к К с 95% выходом.
Защищенная аминокислота I была приготов-лена из D-тирозина в пять стадий. Сначала, D-тирозин был прохлорирован сульфурилхлоридом в ледяной уксусной кислоте (R.Zeynek, Норре-Seyler’s Z.f.Physiol.Chemie 1926, 144:247-254). За-тем N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(3-хлор-4-гидроксифенил)-D-аланин был получен с 94% вы-ходом за счет обработки суспензии аминокислоты в 50% водном растворе диоксана дитрет-бутилдикарбонатом в присутствии триэтиламина. Полученный продукт был деметилирован диметил-сульфатом в присутствии карбоната калия кипяче-нием с обратным холодильником в ацетоне с 84% выходом. Затем метиловый эфир был смылен гид-роокисью натрия в водном растворе диоксана с образованием N-(трет-бутоксикарбонил)-3-(3-хлор-4-метоксифенил)-D-аланина с 86% выходом. Вы-держивание ВОС-защищенной аминокислоты с трихлорзтанолом, пиридином и DDC в дихлорме-тане приводит к трихлорэтиловому эфиру I с 65% выходом. Обработка этого вещества трифторук-сусной кислотой (ТФУК) приводит к количествен-ному выходу трифторацетатной соли 1.
Синтез (2S)-2-[3’(трет-бутоксикарбонил)амино-2’,2’-диметилпропаноилокси]-4-метилпентановой кис-лоты (Р), C-D предшественника, суммируется на схеме 4 (Фигура 8). Исходной точкой для звена С части Р был аминоспирт L. Защита амино группы в L за счет обработки ди-трет- бутилкарбонатом в присутствии триэтиламина (с 93% выходом), с последующим окислением первичного спирта че-тырехокисью рения (P.H.J. Cerlsen et.al., J.Org.Chem. 1981, 46: 3936-3938) дает карбоновую кислоту М (с 66% выходом). L-лейциновая кислота была пре-вращена в аллиловый эфир N с 93% выходом, в условиях фазового переноса, за счет выдерживания ее в смеси аллилбромида в дихлорметане и водном растворе бикарбоната натрия, содержащем тетра-н-бутиламмонийхлорид (S.Friedrich-Bochnitschek et.al., J.Org.Chem., 1989, 54: 751-756). Реакция соче-тания М с N была проведена с 4-диметиламинопиридином (DМАР) и дихлорцикло-карбодиимидом (DCC) в дихлорметане с образова-нием О с 75°/о выходом. Расщепление аллилового эфира О было проведено в ТГФ, содержащем мор-фолин и катализатор тетракис(трифенилфосфин)-палладий с образованием Р с 95% выходом (P.D.Jeffrey et.al., J.Org.Chem. 1982, 47:587-590).
Сочетание А-В предшественника (К) и C-D предшественника (Р) было ·выполнено как показа-но на схеме 5 (Фигура 9). Обработка К и Р смесью DCC/DМАР в дихлорметане приводит к полностью защищенному С-D-A-B интермедиату (Q) с 84% выходом. Восстановительное расщепление группы трихлорзтилового эфира в Q было достигнуто с использованием активированной цинковой пыли в уксусной кислоте. BOC-защищенная группа была затем удалена трифторуксусной кислотой с обра-зованием R в виде трифторацетатной соли с 91% общим выходом от Q.
Макролактамизация R с помощью FDPP при-водит к Криптофицину 51 с 61% выходом (J.Dudash, Jr.et.al., Synth.Commun. 1993, 23:349-356). Общий выход из S-транс-3-пентен-2-ола (А) составлял 7%.
Криптофицин 51 служил в качестве предше-ственника Криптофицина 52, R,R-эпоксида, и Криптофицина 53 S,S-эпоксида. В свою очередь, Криптофицин 52 служил в качестве предшествен-ника Криптофицина 55, 18R, 19S-хлоргидрина и Криптофицина 57, 13,14-дигидроаналога. Крипто-фицин 57 служил в качестве предшественника Криптофицина 58. Криптофицин 53 служил в каче-стве предшественника Криптофицина 61 с исполь-зованием способа, описанного T.H.Chan and J.F.Finkenbine, J.Am.Chem.Soc., 1972, 94:2880-2882, и Криптофицина 97 с использованием способа, описанного Y.Ittah et.al., J.Org.Chem., 1978, 43: 4271-4273.
Для синтеза криптофицинов, которые содер-жали Аr группы, которые отличаются от фенила, звено А предшественников общей формулы d (Схе-ма 1, R3=Me) может быть приготовлено реакцией Виттига альдегида F (Схема 2; TBS- защищающая группа) или S (Схема 6; TBPS-защищающая груп-па) с соответствующим арилтрифенилфосфо-нийхлоридом в присутствии бутиллития. Крипто-фицин 81 был приготовлен из предшественника d (Ar=п-метоксифенил, R3=Me) как показано на схе-мах 6 и 7 (Фигуры 10 и 11).
Ar группа может быть также введена в новый криптофицин на более поздней стадии синтеза. Сначала предшественник d (Ar=R3=Me) был пре-вращен в Криптофицин 82 реакцией сочетания соответствующих А-В (е) и C-D(f) предшественни-ков, как показано на Схеме 8 (Фигура 12). Селек-тивный озонолиз Криптофицина 82 или окисление периодной кислотой соответствующих эпоксидов Криптофицинов 90 и 91 приводит к альдегиду Криптофицина 108. Реакция Виттига Криптофици-на 108 с соответствующим арилтрифенилфосфо-нийхлоридом в присутствии бутиллития дает но-вый криптофицин (Схема 9; Фигура 13). Используя эту процедуру, были получены Криптофицин 110 (Ar=п-фторфенил), Криптофицин 111 (Ar=п-толил), Криптофицин 112 (Ar=2-тиенил) и Криптофицин 124 (Ar=п-хлорфенил). Криптофицин 110 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофици-нов 115 и 116. Криптофицин 111 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофицинов 117 и 118 и хлоргидринов Криптофицинов 128, 130 и 131. Криптофицин 112 служил в качестве предшествен-ника эпоксидов Криптофицинов 119 и 120. Крип-тофицин 124 служил в качестве предшественника эпоксидов Криптофицинов 125, 126 и хлоргидри-нов Криптофицинов 132, 133 и 134.
Другой стратегией при синтезе криптофицина является создание узла макроцикла из трех пред-шественников, например, А-В предшественника (е), содержащего -окси или аминокислотное звено А, предшественника, содержащего -окси или амино-кислотное звено D, и предшественника, содержаще-го -аминокислотное звено С. В способе, описан-ном здесь, криптофицин составляет узел из А-В, С и D предшественников в три стадии за счет (1) соеди-нения концевых А и D в А-В и D предшественниках с образованием ациклического D-A-B интермедиа-та, (2) соединения концевых звеньев D и С в D-А-В и С предшественниках с образованием ациклическо-го С-D-A-B интермедиата и (3) соединения конце-вых звеньев В и С с образованием циклического продукта.
В синтезе Криптофицина 121, описанном в Экспериментальной части, эфирная связь образу-ется между -окси группой звена А в А-В остатке и группой карбоновой кислоты звена D в D фрагмен-те с образованием ациклического D-A-B интерме-диата. Затем образуется амидная связь между группой карбоновой кислоты звена С и -аминогруппой звена D в D-A-B фрагменте. Наконец, амидная связь образуется между группой карбоно-вой кислоты звена В в А-В остатке и -амино груп-пой звена С в C-D остатке. Соединение К является предшественником с А-В остатком, ВОС-L-лейцинальдегид является предшественником звена D и соединение AL является предшественником звена С. Соединение АК является ациклическим С-D-A-B предшественником Криптофицина 121 (Схе-ма 10; Фигура 14). Соединения К и ВОС-L-лейцинальдегида содержат защищающие группы на группе карбоновой кислоты звена В и -аминогруппе звена D для ограничения реакции сочетания с образованием эфира между звеньями А и D в стадии 1. Защищающая группа удаляется из -амино группы звена D в D-A-B интермедиате, таким образом, что может происходить образова-ние амида между амино группой звена С и карбо-новой кислотой С в стадии 2. Эти защищающие группы удаляются из С-D-A-B интермедиата таким образом, что может происходить образование ами-да между звеньями В и С в стадии 2.
Новые криптофициновые соединения настоя-щего изобретения содержат эпоксидные кольца, которые раскрываются с помощью нуклеофилов с другими скоростями, чем эпоксидное кольцо Крип-тофицина 1, или содержат хлоргидриновые функ-циональные группы, которые образуют эпоксид-ные кольца с другими скоростями, чем хлоргидри-новые функциональные группы Криптофицина 8, превращаясь в эпоксидное кольцо Криптофицина 1. Эпоксидное кольцо Криптофицина 1 или хлор-гидриновая функциональная группа (замаскиро-ванное эпоксидное кольцо) Криптофицина 8 явля-ется существенной для оптимальной активности in vivo. Если эпоксидный кислород удаляется (так как найдено в Криптофицине 3) или эпоксидное кольцо гидролизуется до диода (так как найдено в Крип-тофицине 15), антиопухолевая активность сильно снижается. Криптофицин 1 обнаруживает замет-ную токсичность у животных, по сравнению с Криптофицином 8. Это отражается в отношении Т/С (в большей части выше 0%) и суммарных вели-чинах Log уничтожения (в большей части ниже 2.0) для Криптофицина 1, по сравнению с этими вели-чинами для Криптофицина 8 (в большей части Т/С величин 0% и суммарных величин Log уничтоже-ния выше 2.8). Криптофицин 25, соответствующий бромгидриновому аналогу, показывает отношение Т/С и суммарные величины Log уничтожения, ко-торые являются сравнимыми с этими величинами для Криптофицина 1. Это поразительное различие в активности in vivo подтверждает, что бромгидрин Криптофицина 25 превращается более быстро в Криптофицин 1 in vivo, чем Криптофицин 8. Это дальнейшее подтверждение того, что менее ток-сичный Криптофицин 8 может иметь больше вре-мени для аккумулирования в участке опухоли до превращения в активное соединение Криптофицина 1. Эпоксидная группа Криптофицина 1, вероятно, связывается ковалентно с его рецептором мишенью в опухолевой клетке. Новые криптофицины в настоящем изобретении могут потенциально обла-дать лучшей активностью in vivo, чем Криптофи-цин 1 и Криптофицин 8 за счет проявления более благоприятных скоростей образования эпоксида in vivo из соответствующих хлоргидриновых про-лекарств и ковалентного связывания с рецетором-мишенью в опухолевой клетке.
Соединения настоящего изобретения являются более устойчивыми по отношению к гидролизу и сольволизу, чем Криптофицины 1 и 21. Эфирная связь, соединяющая звенья С и D в Криптофицине 1, является относительно чувствительной к мягкому основному гидролизу, расщеплясь при рН 11 до гидрокси кислоты с периодом полу-жизнеспособности 0.83 часа. C-D эфирная связь в Криптофицине 21, в котором недостает метильной группы С-2 на атоме звена С, раскрывается с большей скоростью с периодом полу-жизнеспособности 0.25 часа. C-D эфирная связь является также чувствительной к сольволизу. Если в схеме выделения используют метанол, имеет ме-сто значительный метанолиз Криптофицинов 1 и 21. Криптофицин 21 является гораздо более вос-приимчивым к метанолизу, чем Криптофицин 1. Криптофицин 1 проявляет противоопухолевую активность, тогда как Криптофицин 21 является неактивным, вероятно, потому, что C-D эфирная связь Криптофицина 21 гидролизуется быстрее, чем C-D эфирная связь Криптофицина 1 in vivo. Гидро-лизом C-D эфирной связи можно также объяснить частичное снижение активности in vivo Криптофи-цина 1 при внутрибрюшинном и подкожном путях введения лекарства. C-D эфирная связь криптофи-цинов, содержащих две метильные группы на С-2 атоме звена С, такая как найдена в Криптофицине 52, является устойчивой при рН 11.
Соединения настоящего изобретения и ранее открытые криптофициновые соединения могут быть применены терапевтически в качестве проти-воопухолевых агентов и тем самым использоваться в способах лечения опухолевых заболеваний. Тер-мин “неопластический”, как он использован здесь, относится к опухоли, которая подвергается ано-мальному росту, такому росту, который имеет ме-сто из-за пролиферации клеток, которые не подвер-гаются обычным ограничениям роста. Термин “ан-ти-неопластический агент” (противоопухолевый агент), как он использован здесь, относится к лю-бому соединению, композиции, смеси, совместной смеси или комбинации, которые ингибируют, уда-ляют, замедляют или меняют неопластический фенотип клетки.
Химиотерапия, хирургия, радиационная тера-пия, терапия с биологическими модификаторами ответа и иммунотерапия используются в настоящее время при лечении рака. Каждый вид терапии име-ет специфические указания, которые известны спе-циалистам в этой области, и один из видов терапии или все могут быть применены для достижения полного разрушения неопластических клеток. Хи-миотерапия, использующая один или больше крип-тофицинов, обеспечивается настоящим изобрете-нием. Кроме того, комбинация процессов химиоте-рапии, химиотерапии, использующей криптофици-ны в комбинации с другими неопластическими агентами, также обеспечивается объектом изобре-тения в виде комбинированной терапии, которая является обычно более эффективной, чем использо-вание единственных неопластических агентов. Таким образом, дальнейший аспект настоящего изобретения обеспечивает композиции, содержа-щие терапевтически эффективное количество, по крайней мере, одного нового криптофицинового соединения настоящего изобретения, включающего их нетоксичные соли присоединения, которые слу-жат для обеспечения вышеперечисленного тера-певтического благотворного влияния. Такие компо-зиции могут быть также обеспечены вместе с фи-зиологически подходящей жидкостью, гелем или твердыми носителями, разбавителями, адъюванта-ми и наполнителями. Такие носители, разбавители, адъюванты и наполнители могут быть найдены в United States Pharmacopeia Vol. XXII and National Formulary Vol.XVII. U.S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989), содержание которой вводится здесь ссылкой. Дополнительные формы обработки обеспечиваются в AHFS Drug Information, 1993 ed. by American Hospital Formulary Service, pp.522-660, содержание которой вводится здесь ссылкой.
Настоящее изобретение далее обеспечивает то, что фармацевтическая композиция, использо-ванная для лечения неопластического заболевания, содержит, по крайней мере, одно криптофициновое соединение и, по крайней мере, один дополнитель-ный противо-опухолевый агент. Противо-опухолевые соединения, которые могут быть ис-пользованы в комбинации с криптофицином, вклю-чают такие соединения, которые обеспечены в The Merck Index. 11th ed. Merck and Co., Inc. (1989) pp.Ther 16-17, содержание которой вводится здесь ссылкой. В другом варианте изобретения, противо-опухолевые агенты могут быть антиметаболитами, которые могут включать, но не ограничиваются ими, метотриксан, 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, цитозин арабинозид, гидроксимочевину и 2-хлордеоксиаденозин. В другом варианте настояще-го изобретения, противо-опухолевые агенты рас-сматривают алкилирующие агенты, которые могут включать, но не ограничиваются ими, циклофосфа-мид, мельфалан, бусульфан, параплатин, хлорам-буцил и азотную горчицу (nitrogen mustard). В дру-гом варианте объекта изобретения, противо-опухолевые агенты представляют растительные алкалоиды, которые могут включать, но не ограни-чиваются ими, винкристин, винбластин, таксол и этопсид. В другом варианте настоящего изобрете-ния, рассмотренные противо-опухолевые агенты представляют антибиотики, которые могут вклю-чать, но не ограничиваются ими, доксорубицин (адриамицин), даунорубицин, митомицин с и блео-мицин. В другом варианте объекта изобретения, рассмотренные противо-опухолевые агенты пред-ставляют гармоны, которые могут включать, но не ограничиваются ими, калустерон, диомоставолон, проипонат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолак-тон, тамоксифен, полиэстрадиол фосфат, мегесте-рол ацетат, флутамид, нилутамид и трилотан. В другом варианте объекта изобретения, рассмот-ренные противо- опухолевые агенты включают ферменты, которые могут включать, но не ограни-чиваются ими, L-Аспарагиназу или аминоакриди-новые производные, которые могут включать, но не ограничиваются ими, амсакрин. Дополнительные противо-опухолевые агенты включают те агенты, которые обеспечены в Skeel, Roland Т., “Противо-опухолевые лекарства и модификатор биологиче-ского ответа: классификация, применение и ток-сичность клинически полезных агентов”, Handbook of Cancer Chemotherapy (3rd ed.), Little Brown and Co. (1991), содержание которой вводится здесь ссылкой.
Криптофициновые соединения настоящего изобретения и композиции могут быть введены млекопитающим для ветеринарного использования, таким как домашние животные, и клинического использования для человека, способом аналогич-ным другим терапевтическим агентам. В основном, доза, требуемая для терапевтической эффективно-сти будет меняться в соответствии с типом исполь-зования и формой введения, а также конкретными требованиями индивидуальных хозяев. Обычно дозы будут находиться в области от около 0.001 до 1000 мг/кг, более обычно от 0.01 до 10 мг/кг веса тела хозяина. Или же дозы в пределах этих обла-стей могут быть введены путем постоянного влива-ния в течение более протяженного периода време-ни, обычно превышающего 24 часа, до того момен-та, когда будет достигнуто желаемое терапевтиче-ское воздействие. Действительно, лекарственная доза, а также путь введения должны быть выбраны на основании относительной эффективности, отно-сительной токсичности, характеристик роста опу-холи и влияния криптофицинов на клеточный цикл, лекарственные фармакокинетические характери-стики, возраст, пол, физическое состояние пациента и прежнее лечение.
Криптофициновые соединения с или без до-полнительных противоопухолевых агентов, могут быть составлены в терапевтические композиции в натуральном виде или в солевой форме. Фармацев-тически приемлемые, нетоксичные соли включают основные соли присоединения (полученные со свободными карбоксильными или другими анион-ными группами), которые могут быть получены из неорганических оснований таких как, например, гидроокиси натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изо-пропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и им подобных. Такие соли мо-гут быть также получены в виде кислых солей при-соединения с любыми свободными катионными группами и будут обычно образовываться с неор-ганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или органически-ми кислотами, такими как уксусная, щавелевая, винная, миндальная кислота и им подобными. До-полнительные наполнители, которые далее обес-печивает изобретение, представляют те наполни-тели, которые доступны специалистам в этой обла-сти, например, те, которые найдены в United States Pharmacopeia Vol. XXII and National Formulary Vol.XVII. U.S. Pharmacopeia Convention, Inc., Rockville, MD (1989), содержание которой вводится здесь ссылкой.
Пригодность конкретного носителя для вклю-чения в данную терапевтическую композицию за-висит от предпочтительного пути введения. Например, противоопухолевые композиции могут быть составлены для орального введения. Такие композиции обычно готовятся либо в виде жидкого раствора, либо в виде суспензий или в виде твер-дых форм. Оральные композиции, обычно, вклю-чают такие обычно применяемые добавки, как свя-зующие, наполнители, носители, консерванты, стабилизирующие агенты, эмульгаторы, буферы и наполнители, такие как, например, фармацевтиче-ской марки маннитол, лактоза, крахмал, стеарат магния, натрий сахарин, целлюлоза, карбонат маг-ния и им подобные. Эти композиции готовятся в форме растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, подвергающихся высвобождению компози-ций, или порошков, и обычно содержат 1-95% ак-тивного ингредиента, предпочтительно, 2-70%.
Композиции настоящего изобретения могут быть также приготовлены в виде инъецируемых, либо в виде жидких растворов, суспензий, или эмульсий; твердых форм, пригодных для растворе-ния в, суспендирования в, или могут быть приго-товлены жидкими до инъецирования. Такие инъек-ции могут быть введены подкожно, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, внутритрахе-ально или внутриплеврально. Активный ингреди-ент или ингредиенты часто смешиваются с разба-вителями или наполнителями, которые являются физиологически толерантными или совместимыми с активным ингредиентом(тами). Пригодные разба-вители и наполнители являются, например, водой, солевым раствором, декстрозой, глицерином или им подобными и их комбинациями. Кроме того, если желательно, композиции могут содержать минимальные количества вспомогательных ве-ществ, таких как смачивающие или эмульгирую-щие агенты, стабилизирующие или рН буферные агенты.
Изобретение далее обеспечивает способы для использования криптофициновых соединений, объ-единенных общим типом структуры, для ингибиро-вания пролиферации клеток млекопитающего за счет контактирования этих клеток с криптофицино-вым соединением в количестве, достаточном для ингибирования пролиферации клетки млекопита-ющего. Предпочтительный вариант представляет способ ингибирования пролиферации гиперпроли-феративных клеток млекопитающего. Для целей этого изобретения, “гиперпролиферативные клетки млекопитающего” представляют клетки млекопи-тающего, которые не подвергаются характерным ограничениям роста, например, запрограммиро-ванной клеточной смерти (апоптозу). Другой пред-почтительный вариант представляет вариант, ко-гда клетка млекопитающего является человеческой. Изобретение далее обеспечивает контактирование клетки млекопитающего с, по крайней мере, одним криптофициновым соединением и, по крайней мере, с одним дополнительным противоопухолевым агентом. Типы рассмотренных противоопухолевых агентов являются такими же как те, которые рас-крывались здесь выше.
Изобретение далее обеспечивает способы ис-пользования криптофициновых соединений, объ-единенных общим типом структуры, для ингибиро-вания пролиферации гиперпролиферативных кле-ток с фенотипами сопротивления лекарству, вклю-чающему соединения с множеством фенотипов сопротивления лекарству, за счет контактирования указанной клетки с криптофициновым соединением в количестве, достаточном для ингибирования про-лиферации гиперпролиферативных клеток млеко-питающего. Предпочтительный вариант представ-ляет вариант, когда клетка млекопитающего явля-ется человеческой. Изобретение далее обеспечива-ет контактирование клетки млекопитающего с криптофициновым соединением и, по крайней мере, одним дополнительным противоопухолевым аген-том. Типы рассмотренных противоопухолевых агентов представляют такие как те, которые рас-крыты здесь выше.
Изобретение далее обеспечивает способ об-легчения патологических состояний, вызванных гиперпролиферирующими клетками млекопитаю-щего, например, неоплазии, путем введения субъек-ту эффективного количества фармацевтической композиции, обеспеченной здесь выше, для ингиби-рования пролиферации гиперпролиферирующих клеток. Термин “патологическое состояние”, как он использован здесь, относится к любой патологии, возникающей при пролиферации клеток млекопи-тающего, которые не подвергаются нормальным ограничениям клеточного роста. Такая пролифера-ция клеток может быть обусловлена опухолями, включающими, но не ограничивающимися ими, следующие опухоли: молочной железы, мало- ка-мерного легкого, не-мало-камерного легкого, кало-ректальной лейкемии, меланомы, панкреатической аденокарциномы, центральной нервной системы (CNS), яичниковой простаты, саркомы мягкой ткани или кости, головы и шеи, гастрита, который вклю-чает панкреатический гастрит и желудочный га-стрит, желудка, миеломы, мочевого пузыря, ре-нальной нейроэндокринии, которая включает щи-товидную железу и неоплазмы, не связанные с за-болеванием Ходкинса, и неоплазмы, связанные с заболеванием Ходкинса. В другом варианте изоб-ретения, опухолевые клетки являются человече-скими. Настоящее изобретение обеспечивает далее способы облегчения таких патологических состоя-ний, используя криптофицин в комбинации с другой терапией, а также с другими противоопухолевыми агентами. Такие терапии и их соответствие различ-ным опухолям могут быть найдена в Cancer Principles and Practice of Oncology. 4th.ed/, Editors De Vita, V.,Hellmann,S. and Rosenberg,S., Lippincott Co. (1993), содержание которой вводится здесь ссыл-кой.
В настоящем изобретении криптофициновые соединения проявляются в сильно нарушенной микротрубочковой структуре в культивированных клетках. Кроме того, в противоположность алкало-идам Vinca криптофициновые соединения являются очевидно, плохими субстратами для оттока лекар-ства из Р- гликопротеина. Криптофицин 1 является наиболее цитотоксичным для штамма зелено-голубых водорослей (цианобактерий) Nostoc sp., обозначенного как GSV 224 и проявляет превос-ходную активность по отношению к опухолям, имплантированным мышам. Этот циклический дидепсипептид был ранее выделен из Nostoc sp. АТСС №.53789 в качестве противогрибкового аген-та и его полная структура была определена ранее. Относительная и абсолютная стереохимия этого потенциально важного лекарства была установле-на с использованием комбинации химических и спектральных методов. Двадцать четыре дополни-тельных криптофициновых соединения, Криптофи-цины 2-7, 16-19, 21, 23, 24, 26, 28-31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, также были выделены из GSV 224 и опре-делены их полные структуры и цитотоксичность. Некоторые производные и продукты деструкции описываются с химической и фармацевтической точки зрения.
Следующие примеры служат для иллюстра-ции определенных предпочтительных вариантов и аспектов настоящего изобретения и не рассматри-ваются, как ограничивающие объем изобретения.
Экспериментальная часть.
В описании экспериментальной части, кото-рая следует далее, все веса даются в граммах (г), миллиграммах (мг), микрограммах (мкг), нанограм-мах (нг), пикограммах (пкг), молях (моль) или мил-лимолях (ммоль), все концентрации даются в виде объемных процентов (%), молярных (М), миллимо-лярных (мM), микромолярных (мкМ), наномоляр-ных (нМ), пикомолярных (пкМ) или нормальных (н), все объемы даются в литрах (л), миллитри-ах(мл) или микролитрах (мкл) и линейные измере-ния в миллиметрах (мм), если не оговорено особо.
Следующие примеры иллюстрируют выделе-ние и синтез криптофициновых соединений, а также их применение в качестве терапевтических агентов в соответствии с изобретением.
В экстрактах около 1000 зелено-голубых во-дорослей (цианобактерий), подвергнутых испыта-нию на противоопухолевую активность, было найдено, что липофильный экстракт Nostoc sp. GSV 224 обладает наиболее сильной цитотоксично-стью3, проявляя минимальные ингибирующие кон-центрации (MICs) 0.24 нг/мл против КB, против человечесокй линии клеток назофарингиальной карциномы, и 6 нг/мл против LoVo, человечесокй линии клеток калоректальной аденокарциномы. Более важно, что этот экстракт проявляет значи-тельную селективную цитотоксичность к опухоли в анализе Corbett. Биоанализ, регистрируемый с помощью хроматографии с обращенной фазой, водорослевого экстракта приводил к фракции, ко-торая преимущественно представляла Криптофи-цин 1, мощный фунгицид, который быыл выделен ранее из Nostoc sp. АТСС 53789 исследователями фирмы Merck и было найдено, что он является очень активным против штаммов Cryptococcus.
Криптофицин 1 являлся ответственным за большую часть цитотоксичной активности неочи-щенного водорослевого экстракта Nostoc sp. GSV 224 и чистого соединения, показывая величины IC50 3 и 5 пкг/мл против КB и LoVo, соответственно. В анализе Corbett было найдено, что Криптофицин 1 являлся высоко селективным к опухоли и в равной степени цитотоксичным против чувствительности к лекарству и против сопротивления лекарству опу-холевых клеток. Иммунофлуоресцентный анализ показывает, что Криптофицин 1 взаимодействует с клеточной мишенью подобно тому, как это имеет место с винбластином, но отличается от последне-го лекарства тем, что обладает более продолжи-тельным временем действия и не образует паракри-сталлических тел. В предварительных эксперимен-тах in vivo Криптофицин 1 проявляет очень обе-щающую активность против опухолей, импланти-рованных мышам.
Минимальные количества некоторых других криптофициновых соединений присутствовали в Nostoc sp. GSV 224. Двадцать одно из этих соеди-нений может быть выделено в достаточных коли-чествах для определения структуры и противоопу-холевой оценки in vitro путем экстракции водорос-лей смесью 1:5 дихлорметана/ацетонитрила и жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой экстракта. Криптофицины 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 24, 26, 28, 29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, сопровождающие Криптофицин 1, в фракции, элюированной из флеш колонки с обра-щенной фазой смесью 65:35 ацетонитрил/вода. Криптофицины 2, 3, 4, 5, 6 и 7 были найдены толь-ко, если водоросли экстрагировали метанолом и хроматографию с обращенной фазой проводили в смеси метанол/вода. Криптофицины 2, 3, 4, 5 и 6 были элюированы смесью 3:1 метанол/вода и Криптофицин 7, найденный в более ранней, менее токсичной фракции, элюировали смесью 1:3 мета-нол/вода. Ациклические Криптофицины 5, 6 и 7 являлись случайными продуктами, генерирован-ными за счет разложения Криптофицина 1 в про-цессе процедуры выделения.
Криптофицины 3 и 5 были идентичными с фунгицидными полу- синтетическими соединения-ми, приготовленными из Криптофицина 1, исследо-вателями фирмы Merck8,9. Криптофицин 3 был при-готовлен обработкой Криптофицина 1 цинк-медной парой или дифосфортетраиодидом8. Криптофицин 5 был приготовлен метанолизом Криптофицина 19.
Пример 1 Определение структуры
Определение структур новых соединений, а именно Криптофицинов 2, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 23, 24, 26, 28, 29, 30, 31, 40, 43, 45, 49, 50 и 54, а также тех, которые были раскрыты ра-нее, было проведено прямым способом с использо-ванием методологии, которая является хорошо известной специалистам в этой области. Масс спектральные данные согласовывались с молеку-лярными составами. Данные протонного магнитно-го резонанса и углеродного ядерного магнитного резонанса, полученные из COSY, HMQC, НМВС и NOESY спектров позволяют собрать все основные структуры этих депсипептидного типа соединений. Присутствие различных гидроксильных и амино-кислотных звеньев в каждом соединении были под-тверждены с помощью газохроматографического масс спектрального анализа. Полные структуры, включающие абсолютную стереохимию, были определены с использованием комбинации методов химической деструкции и спектрально аналитиче-ских методов соответствующих производных крип-тофициновых соединений.
Пример 2 Зависимости структура-активность (SAR)
Для изучения структурных характеристик Криптофицина 1, необходимых для оптимальной активности, все соединения, описанные здесь, были оценены на цитотоксичность по отношению к ли-нии клеток KB (человеческой назофарингиальной карциномы), по отношению к LoVo, (человеческой карциномы ободочной (толстой) кишки) и SKOV3 (яичниковой человеческой карциномы). Величины IC50 приведены в Таблицах 1 и 2. Сравнение цито-токсичности показывает, что интактное (неактив-ное) макролидное кольцо, эпокси и метильные группы и двойная связь в 7,8-эпокси-5-гидрокси-6-метил-8-фенил-2-октеновом кислотном звене (смот-ри звено А на Фигуре 1), хлор и O-метильных груп-пах в 3- (3-хлор-4-метоксифенил)аланиновом звене (звено В), метильной группе в звене 3-амино-2-метилпропионовой кислоты (звено С), и изобутиль-ной группе в звене лейциновой кислоты (звено D) Криптофицина 1, являются необходимыми для оптимальной цитотоксичности. Сильная цитоток-сичность Криптофицина 8, наиболее вероятно, обусловлена хлоргидриновой функциональностью, которая выступает в качестве маскирующего аген-та эпоксида.
Наиболее активные соединения были также оценены на селективную цитотоксичность против четырех различных типов клеток, а именно, мыши-ной лейкемии (L1210 или Р388), мышиной твердой опухоли (аденокарциномы толстой кишки 38, пан-креатической аденокарциномы протоки 03, адено-карциномы молочной железы М16/М17), человече-ской твердой опухоли (толстой кишки СХ-1, НСТ8, H116; легкого Р125; молочной железы МХ-1, MCF-7) и фибробласта (LML) со слабым злокачествен-ным развитием с использованием анализа Corbett4, диффузного дискового анализа, смоделированного после анализа, обычно используемого в противо-грибковом и противобактериальном испытании.
Результаты, показанные в Таблице 1, свиде-тельствуют о том, что Криптофицины 1-5 и 8 не являются селективными ни по отношению к твер-дой опухоли, ни по отношению к лейкемии, но го-раздо более активны против линий клеток опухоли, включая те линии клеток опухоли, которые оказы-вают сопротивление лекарству. такие как М17. Ни одно из соединений не проявляет зоны ингибирова-ния для любых линий клеток твердой опухоли, такой зоны, которая составляла бы зону из 250 единиц, т.е. 7.5 мм, больше чем зона ингибирования для линии клеток лейкемии. Криптофицины 1-5 и 8, однако, проявляют заметно большие зоны ингиби-рования (зону из 400 единиц) для всех линий клеток опухоли, по сравнению с зоной ингибирования для фибробласта LML.
Диагностически было найдено, что LML ведет себя в большей степени как нормальная клетка, а не как опухолевая клетка по отношению к клиниче-ски полезным цитотоксичным агентам (смотри данные анализа Corbett для 5-фторурацила, этоп-сида и таксола в Таблице 1). Так как различные цитотоксичности были для зоны больше 250 еди-ниц, Криптофицины 1-5 и 8 были селективны к опу-холи. Поэтому эти соединения стали кандидатами для испытания in vivo.
Криптофицин 1 является активным против ши-рокого спектра мышиных и человеческих опухо-лей, имплантированных мышам, включая опухоли сопротивления лекарству (Таблица 3). Криптофи-цин 1 проявляет превосходную активность против пяти ранних стадий мышиных опухолей, а именно, аденокарцином слепой кишки #38 и #51, опухоли молочной железы, чувствительной к таксолу и ока-зывающей сопротивление таксолу #16/C/RP, и панкреатической двойной аденокарциномы #03 и двух ранних стадий человеческих опухолей, испы-танных у мышей с (SCID)-тяжелым комбинирован-ным иммунодефицитом, а именно МХ-1 груди и Н125 аденосаркомы легкого, проявляющих вели-чины опухолевого предрасположения Т/С (среднее опухолевое предрасположение у обработанных животных/среднее опухолевое предрасположение у необработанных животных), которые составляют меньше чем 10%.
Величины Т/С, которые составляют меньше, чем 42% считаются активными согласно NCI стан-дартам; величины Т/С, которые составляют мень-ше, чем 10% считаются что имеют превосходную активность и потенциальную клиническую актив-ность согласно NCI стандартам4. Два из трех испы-таний показывают суммарные величины Log уни-чтожения (опухолевой клетки) 2.0. Суммарную величину Log уничтожения определяют в виде Т-С/3,2 Td, где Т представляет среднее время в сутках для опухолей обработанной группы для достиже-ния опухоли в 750 мг, С представляет среднее вре-мя в сутках для опухолей контрольной группы для достижения опухоли в 750 мг, и Td представляет время удвоения объема опухоли. Суммарные вели-чины Log уничтожения выше 2.8, 2.0-2.8, 1.3-1.9, 0.5-0.8 и ниже 0.5 с продолжительностью обработ-ки лекарством 5-20 суток считает ++++, +++, ++, + и - (неактивный), соответственно. Характеристика активности от +++ до ++++, которая является ука-занием клинической активности, является необхо-димой для частичного влияния или полной регрес-сии масс размером 100-300 мг большинства транс-плантированных твердых опухолей мышей.
Криптофицин 8 также является активным про-тив широкого спектра опухолей, трансплантиро-ванных мышам (Таблица 4). Он проявляет превос-ходную активность против всех испытанных на сегодняшний день опухолей, показывая величины опухолевого предрасположения Т/С меньше 10%, но более важно, суммарные характеристики актив-ности Log уничтожения от +++ до ++++ и в некото-рых случаях вылечивание.
Хорошая активность in vivo была также обна-ружена с Криптофицином 35 в одном испытании, которое было проведено на сегодняшний день.
Летальная токсичность, наблюдавшаяся в процессе испытаний Криптофицинов 1 и 8, была приписана лейкопении, которая является обычной для всех клинически используемых противоопухо-левых лекарств.
Пример 3 Состояния культуры
Nostoc sp. GSV 224 был получен от профессо-ра C.P.Wolk, MSU-DOE Plant Research Laboratory, Michigan State University. Nostoc sp. ATCC 53789 был куплен у American Туре Culture Collection. Бы-ла использована 1 л склянка культуры водорослей для инокулирования автоклавированной 20 л стек-лянной емкости, содержащей неорганическую сре-ду, обозначенную BG-113, рН которой была дове-дена до 7.0 NaOH. Культуры непрерывно облучали светом с интенсивностью падающего света 200 мкмолей фотонов м-2 сек-1 (фотосинтетически ак-тивного излучения) от скамьи флуоресцентных трубок холодного белого свечения и аэрировали со скоростью ил/мин смесью СО2 и воздуха при тем-пературе 24° +/- 1°С. Обычно культуру собирали фильтрованием через 21 день. Выходы лиофилизо-ванного Nostoc sp. GSV 224 и АТСС 53789 в сред-нем составляли 0.61 и 0.3 г/л культуры, соответ-ственно.
Пример 4 Выделение
Способ А: Лиофилизованный Nostoc sp. GSV 224 экстрагировали 2 л смеси 1:5 CH2CI2/CH3CN в течение 48 часов и экстракт концентрировали в вакууме, получая темно-зеленое твердое вещество. Остаток (1 г; KB MIC 0.24 нг/мл) был помещен в кремниевую колонку, покрытую ODS (55 г, 7х5 см) и подвергнут флеш хроматографии смесью 1:3 CH3CN/H2O (0.8 л), 1:1 CH3CN/H2O (0.8 л), 65:35 CH3CN/H2O (1.0 л), МеОН (0.8 л) и СН2СI2 (0.5 л). Фракция, которая была элюирована 65:35 CH3CN/H2O (420 мг KB MIC 14 пкг/мл) была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil С18, 10 мк, 25 см х 21.5 мм, УФ детектиро-вание при 250 нм, 65:35 CH3CN/H2О, скорость по-тока 6 мл/мин) с получением Криптофицина 1 (tR 49.3 мин, 220 мг) и ряда примесных фракций. Фрак-ция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 28.8 мин, была далее очищена с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии с нор-мальной фазой (силикагель Econosil 5 мк картридж, 250 х 4.6 мм, 6:4 этилацетат/гексан, 3 мл/мин) с получением Криптофицина 16 (3.0 мг). Фракция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 32.5 мин, была подвергнута обработке с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии на ко-лонке силикагель Econosil с использованием смеси 55:45 этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 24 (0.8 мг). Фракция, элюированная из Econosil С18 колонки при tR 35.5 мин, была дважды подвергнута обработке с помо-щью жидкостной гель проникающей хроматогра-фии на колонке силикагель Econosil сначала с ис-пользованием 1:1 смеси этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин и затем с использованием смеси 4:6 этилацетат/метиленхлорид при скорости 2.5 мл/мин с получением Криптофицина 23 (1.2 мг) и Криптофицина 43 (0.1 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 39.5 мин, была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии на колонке силика-гель Econosil с использованием 1:1 смеси этилаце-тат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 2 (6 мг) и Криптофицина 21 (14 мг) и комплексной смеси криптофицинов, элюированных при tR 32.5 мин. Эта последняя фракция, собранная из 400 г сухих водорослей, была подвергнута хро-матографированию на селективной полупрепара-тивной колонке (partisil C18, 250 х 9.4 мм, 10 мк) смесью 65:35 вода/ацетонитрил и аналитической колонке с обращенной фазой (Econosil, 150 х 4.6 мм, 5 мк) смесью 5:4:1 вода/ацетонитрил/метанол при скорости 1.3 мл/мин с получением Криптофи-цина 50 (tR 34.8, 0.4 мг) и Криптофицина 40 (tR 38.8 мин, 0.3 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 44.5 мин, была дважды под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии на колонке силика-гель Econosil 1:1 смесью этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин с получением Криптофицина 17 (0.3 мг). Очистка с помощью жидкостной гель про-никающей хроматографии с нормальной фазой, фракции, элюированной из Econosil C18 колонки при tR 54.5 мин, в виде плеча к Криптофицину 1, давала Криптофицин 45 (tR 6.7 мин, 0.1 мг), Крип-тофицин 26 (tR 8.9 мин, 0.5 мг) и Криптофицин 54 (tR 19.8 мин, меньше 0.1 мг) с элюированием смесью 1:1 этилацетат/гексан. Фракцию, элюированную из Econosil C18 колонки в виде широкого пика (tR 58 до 70 минут) подвергали анализу с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии на Econosil силикагелевой колонке с 43:57 этилаце-тат/гексан при 2,5 мл/мин, с получением Крипто-фицина 4 (tR 19.6 мин., 1,5 мг), Криптофицина 31 (tR 9.4 мин., 0.8 мг), Криптофицина 19 (tR 25/8 мин., 1,5 мг), Криптофицина 40 (tR 28 мин., 0,1 мг), Крипто-фицина 28 (tR 29.0 мин., 0,5 мг) и примеси Крипто-фицина 29 (tR 52.5 мин., 2,0 мг) и Криптофицина 30 (tR 49 мин., 3.0 мг). Чистые Криптофицины 29 и 30 получали после обработки с помощью гель прони-кающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil C18, 10 мк, 250 х 10 мм, 3:1 метанол/ во-да). Фракция, элюированная из Econosil C18 колон-ки при tR 78.9 мин., была подвергнута обработке с помощью гель проникающей хроматографии на Econosil силикагелевой колонке с получением Криптофицина 3 (tR 16.4 мин., 3.0 мг). Фракция, элюированная из Econosil C18 колонки при tR 82.8 мин, была подвергнута обработке с помощью гель проникающей хроматографии на Econosil силика-гелевой колонке с 45:55 этилацетат/гексан при скорости 3 мл/мин, и давала Криптофицин 18 (tR 19.2, 0.8 мг).
Способ Б:
Лиофилизованный Nostoc sp. GS V 224 (12.23 г) был дважды проэкстрагирован 700 мл и 400 мл порциями МеОН в течение 12 и 5 часов (h), соот-ветственно. Экстракты объединяли и концентриро-вали в вакууме с получением 1,84 г темнозеленого твердого вещества, которое было распределено между водой и CH2Cl2. Липофильную часть (0,65 г, КB MIС 0,24 нг/мл) загружали в ODS - покрытую силикагелевую колонку (55 г, 7 х 5 см) и подверга-ли флеш хроматографированию с 1:3 МеОН/Н2О, 1:1 МеОН/Н2О (0,8 л), 3:1 МеОН/Н2О (0,8 л), МеОН (0,8 л) и СН2Cl2 (0,5 л). Фракция, которая была элюирована 3:1 МеОН/Н2О (22 мг, KB MIC 14 пкг/мл), которая считалась, по существу, вся обла-дающая цитотоксической активностью, была под-вергнута обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil C18, 10 мк, 250х10 мм, обнаружение с помощью УФ при 250 нм, скорость потока 3 мл/мин) с использованием 1:5 МеОН/Н2О в каче-стве элюэнта, давала Криптофицины 7 (tR 7.6 мин., 0,2 мг), 5 (tR 15.4 мин., 2,3 мг), 2 (tR 16.0 мин., 1,0 мг), 1 (tR 19.0 мин., 12.0 мг), 4 (tR 26.5 мин., 1,2 мг) и 3 (tR 30.2 мин., 1,4 мг). Фракция (8.1 мг), которая элюи-ровалась из флеш колонки с помощью 1:3 Ме-ОН/Н2О, из одной из культур, проявляла среднюю цитотоксичность (KB MIC 2 мкг/мл). Очистка с помощью жидкостной гель проникающей хромато-графии с использованием 2:3 МеОН/Н2О в качестве элюэнта давала Криптофицин G (7., tR 6.0 мин., 2.4 мг).
Пример 5.
Spectral data for Cryptophycins 1-7
The bold italicized letters in the spectral data refer to the units A-D in Figure 1.
Криптофицин 1
[]D + 33,8 (MeOH, c 1.83); УФ max () 208 (42,400), 218 (33,700), 228 (23,800), 280 (2,210); CD[]202 + 15,900, []206 + 64,900 + 64,900 []214 + 26,900, []224 + 46,300, []237 + 10,500, ИК (CHCI3) max 3425, 2963, 1751, 1719, 1677, 1502, 1259 cм-1. EIMS m/z (относит. интенсивность) 654/656 (20/9), 412/414 (33/12), 280/282 (31/12), 227 (80), 195/197 (92/44), 91 (100), высокого разрешения EIMS m/z 654,2665 (рассчитано для С35H43CIN2O3, 4.3 mmu ошибки). 1H NMR (CDCl3): амино или окси кислот-ное звено (положение углерода, мулиплетность 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5,74 (2, dt; 15,5 и 0,9), 6,68 (3, ddd; 15,5, 9,6 и 5,2), 2,45 (4, ddd; 14.2, 11.1 и 9.6), 2,55 (4, brdd; 14.2 и 5.2), 5,16 (5 ddd; 11.1, 4.9 и 1.9), 1.80 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.1), 2.92 (7, dd, 7.5 и 2.0), 3,69 (8, d; 2.0), 7,25 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); лейци-новая кислота (D) 4.83 (2, dd: 6.8 и 3.3), 1.70 (3, m), 1.36 (3, m), 1.70 (4, m), 0.86 (5, d; 6.6), 0.85 (4-Me, d; 6.6); 3-амино-2-метилпропиленовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.30 (3, ddd; 13.4, 5.8 и 3.8), 3.48 (3, ddd; 13.4, 6.3 и 5.8), 6.93 (3-NH, brt; 5.8); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4,80 (2, ddd; 8.7, 7.3 и 5.4), 5.61 (2-NH, d; 8.7), 3.03 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3.13 (3, dd; 14.4 и 5.4), 7.21 (5, d; 2.1), 3,87 (7-OCH1, s), 6.83 (8, d; 8.5), 7.07 (9, dd; 8.5 и 2/1). 13C NMR (CDCl3): звено (положение углерода) А 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.2 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); D 170.7 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Me); C 175.6 (1), 38.2 (2), 14.1 (2-Me), 41.1 (3); B 170.9 (1), 53.6 (2), 35.0 (3), 129.7 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-OCH3), 112.2 (8), 128.4 (9).
Криптофицин 2
[]D + 20,4 (MeOH, c 0,54); УФ max () 206 (43,800), 218 (37,500), 232 (22,900), 278 (2,410); CD []203 +54.100, []212 + 16,500, []225 + 53,600, []236 - 14,000, ИК (СHCl3) max 3423, 3029, 2961, 1742, 1724, 1678, 1512, 1258 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 620 (11, М+), 431 (3), 378 (8), 377 (6), 311 (11), 246 (10), 244 (8), 227 (14), 195 (17), 161 (84, CH3O-C6H4-CH=CH=CO+), 121 (79, CH3O - C6H4-CH2+), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 620.3094 (рассчи-тано для С55H44N2O8, 0,3 mmu ошибки); 161,0605 (рассчитано для С10Н9О2, - 0,2mmu ошибки); 121,0658 (рассчитано для C8H9O, - 0,4 mmu ошиб-ка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.71 (2, dd; 15.4 и 1.3), 6.70 (3, ddd; 15.4, 10.2 и 5.0), 2.45 (4, m), 2.55 (4, m), 5.18 (5, ddd; 11.3, 4.8 и 2.0), 1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.7 и 2.0), 3.68 (8, d; 2.0), 7.24 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); лейциновая кислота (D) 4,82 (2, dd; 10.1 и 3.7), 1.70 (3, m), 1.33 (3, m), 1.70 (4, m), 0.86 (5, d; 6.4), 0.84 (4-Me, d; 6.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.68 (2, m), 1.23, (2-Me, d; 7.3), 3.39 (3-H2, m), 7.02 (3-NH, brt; 6.0); O-метилтирозин (В) 4.79 (2, ddd; 8.1 7.0 и 5.7), 5.55 (2-NH, d; 8.1), 3.07 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.7), 7.10 (5/9, d; 8.6), 6.81 (6/8, d; 8.6), 3.78 (7-OCH3, s). 13C NMR (CDCl3): звено (положение углерода) А 165.1 (1), 125.1 (2), 141.1 (3), 36.7 (4), 76.0 (5), 40.7 (6), 13.6 (6-Ме), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 21.3 (5), 22.9 (4-Me); C 176.0 (1), 38.1 (2), 14.2 (2-Me), 40.7 (3); B 171.1 (1), 53.9 (2), 35.3 (3), 131.0 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6,8), 158.6 (7), 55.2 (7-OCH3).
Криптофицин 3
[]D + 20,3 (MeOH, с 1,13); УФ max () 206 (51,700), 218 (31,200), 230
(22,900), 246 (18,800), 280 (3,230); CD []205 +50.000, []212 -390, []218 -47,200, []233-100, []251 +33,400, []271 +4,310. ИК (СНСl3) max 3417, 2926, 1742, 1721, 1676, 1499, 1336 cм-1. EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 638/640 (2/0.7, M+), 412/414 (63/19), 280/282 (15/5), 227 (100), 195 (63), 91 (98), высокое разрешение EIMS m/z 638.2764 (рассчи-тано для C35H43CIN2O7, -0.5mmu ошибка), 412.1516 (рассчитано для C20Н27CINO6, 1.1 mmu ошибка), 227.1293 (рассчитано для С15Н17NO, 1.0 mmu ошибка). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.77 (2, d, 15.5), 6.68 (3, ddd; 15.5, 9.5 и 5.3), 2.37 (4, m), 2.54 (4, m), 5.01 (5, ddd; 11.4, 6 и 1.5), 2.56 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 6.01(7, dd, 15.8 и 8.8), 6.41 (8, d; 15.8), 7.28-7.34 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.1 и 3.6), 1.62 (3, m), 1.36 (3, m). 1.62 (4, m), 0.77 (5, d; 6.5), 0.73 (4-Me, d; 6.3), 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71(2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.28 (3, dt; 13.5 и 7.0), 3.50 (3, ddd; 13.5, 4.9 и 4), 6.93 (3-NH, brt; 6.3); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.8), 3.05 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.5), 7.22 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОСН3, s). 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 и 2.2). 13С NMR (CDCl3): звено (положе-ние углерода) A 165.4 (1), 125.2 (2), 141.4 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Ме), 130.0 (7), 130.0 (8), 136,7 (9), 126.1 (10/14), 128.6 (11/13), 128.4 (12), D 170.1 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Ме); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме), 41.2 (3); В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.1 (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-ОСН3), 112.2 (8), 127.6 (9).
Криптофицин 4
[]D + 36.7 (MeOH, с 1.93); УФ max () 206 (41,800), 228 (25,000), 240 (21,200), 248 (22,500), 280 (3,000), 290 (1,230); CD []205 + 63.900, []711 +3,040, []218 -71,900, []229 -11,700, []234 -130, []252 + 47,500, []270 + 5,400. ИК (СНСI3) max 3410, 2962, 2917, 1741, 1718, 1678, 1511, 1251 cм-1. EIMS m/z (относит.интенсивность) 604 (2, M+), 378 (74), 246 (11), 227 (46), 161 (100), 91 (96), высокое разреше-ние EIMS m/z 604.3127 (рассчитано для C35H44N2O7, 2,2 mmu ошибка), 378.1910 (рассчитано для С20Н28NO6, 0,7mmu ошибка), 227.1293 (рассчитано для C15H17NO, l,7mmu ошибка), 161.0605 (рассчи-тано для С10Н9О2, - 0.2mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (А) 5.74 (2, dd; 15.3 и 1.2), 6.71 (3, ddd; 15.3, 10.3 и 5.0), 2,37 (4, m), 2.53 (4, m), 5.03 (5, ddd; 11.2, 6.4 и 2.0), 2.55 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.8), 6.01 (7, dd; 15.8 и 8.8), 6.40 (8, d; 15.8), 7.28-7.37 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.1 и 3.6), 1.65 (3, m), 1.34 (3, m), 1.65 (4, m), 0.75 (5, d; 6.5), 0.72 (4-Me, d; 6.3); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.69 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.5), 3.39 (3-H2, m), 7.03 (3-NH, brt; 6.0); O-метилтирозин (В) 4.79 (2, m), 5.61 (2-NH, d; 7.8), 3.08 (3, dd; 14.5 и 7.0), 3.13 (3, dd; 14.5 и 5.3), 7.11 (5/9, d; 8.8), 6.81 (6/8, d; 8.8), 3.78 (7-ОСН3, s). 13С NMR (CDCl3): звено (положе-ние углерода) A 165.3 (1), 125.1 (2), 141.5 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.7 (11/13), 127.6 (12), D 170.8 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Me); С 175.9 (1), 38.2 (2), 14.2 (2-Me), 40.9 (3), В 171.2 (1), 53.8 (2), 35.3 (3), 131.0 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6/8), 158.6 (7), 55.2 (7-ОСН3).
Криптофицин 5
[]D + 36,0 (MeOH, с 0,55); УФ max () 206 (45,600), 218 (37,700), 280 (3,790), 286 (3,480), 325 (2,080), CD []203 +7,710, []206 +29,000, []210 +21.400, []222 +59.800, []234 +12.800, []241 +13.700. ИК (СНСl3) max 3426, 2958, 1728, 1672, 1502, 1259 cм-1. EIMS m/z (относит.интенсивность) 686/688 (0.15 10.05), 655/657 (1/0,3), 654/656 (1,5/0,5), 311/313 (75/27),195 (66), 155 (54), 121 (51), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 686.2983 (рассчи-тано для C36H47CIN2O9, - 1,3 mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода; мультиплетность J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.87 (2, d; 15.3), 6.72 (3, dt; 15.3 и 6.8), 2.60 (4, m), 2.52 (4, ddd; 15.2, 7.8, и 6.8), 5.11 (5, ddd; 12.3, 7.8, и 7.1), 1.87 (6, m), 1.12 (6-Me, d; 7.1), 2.91 (7, dd; 7.3 и 2.1), 3.70 (8, d; 2.1), 7.24 (10/14, brd; 7.4), 7.29-7.36 (11/12/13, m); лейциновая кислота (D) 4.09 (2, m), 2.86 (2-OH, brd, 6.1), 1.83 (3, m), l.42 (3, m), 1.86 (4, m), 0.90 (5, d; 6.6), 0.87 (4-Me, d; 6.8); 3-амино-2-метилпропленовая кислота (С) 3.64 (1-ОСН3, s), 2.60 (2, m), 1.07 (2-Me, d; 7.3), 3.27 (3, ddd; 13.5, 8.0 и 5.5), 3.39 (3, m), 6.32 (3-NH, t; 5.4); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.59 (2, dt; 6 и 7.5) 6.30 (2-NH, d; 7.5), 2.95 (3, dd; 13.6 и 7.5), 3.0 (3, dd; 13.6 и 6.0), 7.2 (5, d; 2.1), 3,86 (7-ОСH3, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.05 (9, dd; 8.5; 2.1). 13С NMR (CDCl3): звено (по-ложение углерода) A 164.8 (l), 126,5 (2),139.2 (3), 34.4 (4), 75.5 (5), 39.2 (6), 12.9 (6-Me), 63.3 (7), 58.7 (8), 136.8 (9), 125.7 (10/14), 128.6 (11/13), 128.4 (12); D 175.1 (1), 69.2 (2), 43.2 (3), 24.3 (4), 21.2 (5), 23.2 (4-Me); С 175.4 (1), 51.9 (1-OMe), 39.1 (2), 14.7 (2-Me), 41.6 (3); B 170.6 (1), 54.6 (2), 37.4 (3),129.5 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.1 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.2 (8), 128.4 (9).
Криптофицин 6
[]D + 17,1 (MeOH, с 1,1); УФ max () 206 (40,000), 218 (30,100), 228 (21,400), 282 (2,430); CD []203 +37,700, []210 - 5,430, []213 -1,260, []221 +24,100, []232 +8,480, []240 +13,400, []254 +790, ИК (CHCl3) max 3425, 3006, 2956,1726, 1672,1641,1502,1462,1259 см-1, FABMS (тиоглице-рин) m/z, (относит.интенсивность) 573/575 (13/6) [M-H2O]+, 217 (26), 91 (100). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислотное зевно (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 5, 7,8-триокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.92 (2, dt, 15.0 и 1.5), 6.94 (3, dt; 15 и 7.5), 2.51 (4, m), 2.64 (4, m), 3.97 (5, ddd; 9.3, 6.5 и 4.5), 2.03 (6, m), 1.10 (6-Me, d; 6.5), 3.70 (7, dd; 9.0 и 7.5), 4.64 (8, d; 7.5), 7.33-7.39 (10/11/13/14, m), 7.28 (12, tt; 6.5 и 2.0); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.60 (2, td; 8.0 и 6.0), 6.09 (2-NН, brd; 8.0), 2.96 (3, dd; 13.8 и 8,0), 3.02 (3, dd; 13.8 и 6.0), 7.22 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОСН3 s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.07 (9, dd; 8.5 и 2.0) 3-амино-2-метилпропионовая кислота (C) 3.63 (1-OCH3, s), 2,58 (2, m), 1,07 (2-Me, d; 7,0), 3.24 (3, ddd; 13.8, 8 и 6.5), 3.41 (3, ddd; 13.8, 6.5 и 4.8), 6.21 (3-NH, brt; 6,5). 13С NMR (CDCl3): звено (положение углеро-да) А 165.2 (1), 125.6 (2), 141.3 (3), 36.9 (4), 82.5 (5). 46.3 (6), 14.3 (6-Ме), 85.1 (7), 84.8 (8), 140.9 (9), 125.8 (10/14), 128.6 (11/13). 127.8 (12); В 170.6 (1), 54.5 (2), 37.3 (3), 129.6 (4),131.0 (5), 122.5 (6), 154.1 (7), 56.1 (7-ОСН3), 112.2 (8), 128.5 (9) С 52.0 (1-ОСН3), 175.4 (1), 39.2 (2), 14.7 (2-Ме), 41.6 (3).
Криптофицин 7
[]D + 51,9 (MeOH, с 0,89); УФ max () 206 (23,400), 220 (14,900), 282 (1,670), CD []202 +35,400, []206 -1,730, []211 -19,200, []220 -15,800, []232 +29,000, []263 +2,040. ИК (СНСl3) max 3426, 2946, 1732, 1675, 1501, 1258 cm-1. EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 455/457 (1/0.3, [М-2Н2О]+), 105 (100), 77 (98); FAВMS m/z (magic bullet matrix) 496/498 [M-H2O+Na]+, (тиоглицериновая матрица) 474/476 [M-H2O1+H]+. 1H NMR (CD3OD): амино или оксикислотное звено (положение углерода, муль-типлетность; J in Hz) 5,7,8-триокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 6.06 (2, ddd; 15.5, 1.3 и 1.0), 6.80 (3, dt, 15.5 и 7.5), 2.49 (4, m), 2.59 (4, m), 3.92 (5, ddd; 9,5, 6.3 и 4.7), 1.95 (6, m), 1.08 (6-Me, d; 6.7), 3.59 (7, dd; 9.0 и 7.8), 4.56 (8, d; 7.8), 7.37 (10/14, brd; 7.3), 7.31 (11/13, brt; 7.3), 7.24 (12, tt, 7.3 и 1.5), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.52 (2, dd; 6.9 и 5.0), 2.93 (3, dd; 13.8 и 6.9), 3.15 (3, dd; 13.8 и 5.0), 7.20 (5, d; 2.2), 3.78 (7-ОСН3, s), 6.88 (8, d; 8.4), 7.08 (9, dd; 8.4 и 2.2). 13С NMR (CD3ОD): звено (положение углерода) A 167.4 (1), 127.6 (2), 140.9 (3), 37.9 (4), 84.0 (5), 47.6 (6), 14.4 (6-Me), 86.0 (7), 85.8 (8), 142.9 (9), 127.1 (10/14), 129.3 (11/13), 128.5 (12), В 177.6 (1), 57.3 (2), 38.2 (3), 132.8 (4), 132.1 (5), 122.9 (6), 155.0 (7), 56.5 (7-ОСН3), 113.2 (8), 130.1 (9).
Криптофицин 16
[]D + 41,3 (MeOH, с 5,2); УФ max () 242 (4963), 280 (2430), 286 (2212), ИК (neat) max 3402, 3270, 2960, 1748, 1724, 1676, 1514, 1466, 1343, 1239, 1177 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 640/642 (66/27), 398/400 (47/16), 265 (55), 227 (93), 181 (100); высокое разрешение EIMS m/z 640.25676 (рассчитано для C34Н41CIN2O8, -l.6 mmu ошибка). 1Н NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.74 (2, d; 16), 6.67 (3, ddd; 15.3, 9.7 и 5.5), 2.45 (4, dt; 14.3 и 10.4), 2.55 (4, brdd; 14.3 и 5.3), 5.15 (5, ddd; 11.2, 4.8 и 1.8), 1.8 (6, m), 1.14 (6-Me.d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.69 (8, d; 2.0). 7.24-7.26 (10/14, m), 7.33-7.39 (11/12/13, m), 3-хлор-4-оксифенилаланин (В) 4.8 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.8), 3.03 (3, dd, 14.5 and 7.0), 3.11 (3, dd; 14.4 и 5.6). 7.17 (5, d; 2.2), 5.61 (7-OH, s), 6.91 (8, d; 8.3), 7.0 (9, dd; 8.3 и 2.2); 3-амино-2-метилпропионовая кис-лота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.28 (3, dt; 13.6 и 6.8), 3.49 (3, ddd; 13.6, 5 и 4.1), 6.92 (3-NH, br t; 6.l) лейциновая кислота (D) 4.83 (2, dd; 10.1 и 3.3), 1.36 (3, m), 1.67-1.75 (3, m), 1.67-1.75 (4, m), 0.85 (5, d; 7.5), 0.86 (4-Me, d; 6.8). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.2 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7). 59.0 (8), 136.8 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1 (3), 129.9 (4), 129.6 (5), 120.0 (6), 150.4 (7), 116.4 (8), 129.2 (9); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.1 (3), D 170.8 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 21.3 (5), 22.9 (4-Ме).
Криптофицин 17
[]D + 27,8 (CHCl3, с. 0,37); УФ max () 248 (14740), 268 (8100), 278 (3400), 284 (2840), ИК (neat) max 3412, 2958, 1750, 1723, 1668, 1504, 1463, 1290, 1177, 751 cm-1, EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (10/3), 398/400 (95/35), 284 (100), 149 (95); высокое разрещение EIMS m/z 624.26161 (рассчитано для С34Н41CIN2O7 -1.4 mmu ошибка). 1H NMR (CDCl3): амино или оксикислот-ное звено (положение углерода; мультиплетность J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (А) 5,77 (2, d; 15.4), 6.67 (3, ddd; 15.4, 9.5, и 5.3), 2.37 (4, m), 4.99 (5, ddd; 11.2, 6.3, и 1.6), 2.54 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.7), 6.01 (7, dd; 15.7, и 8.7), 6.41 (8, d; 15.9), 7.28-7.34 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-4-oксифенилланин (В) 4.82 (2, m), 5.63 (2-NH, d; 8.7), 3.12 (3, dd; 14.7, и 5.6), 3.03 (3', dd, 14.7, и 7.1), 7.18 (5, d; 2.0), 5.47 (7-OH, br s), 6.91 (8, d; 8.3), 7.02 (9, dd; 8.3, и 2.0); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.21 (2-Me, d’ 6.9), 3.25 (3, m), 3.52 (3’, m), 6.89 (3-NH, br t; 6.1), дейциновая кислота (D) 4,84 (2, dd; 9.6, и 3.1), 1.62 (3, m), 1.36 (3', m), 1.62 (4, m), 0.77 (5, d' 6.5), 0.73 (4-Me, d; 6.5); 13С NMR (CDCl3) звено (поло-жение углерода) А 165.4 (1), 125.3 (2), 141.3 (3), 36.5 (4), 77.1 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 129.9 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.1(3), 129.6 (4), 131.9 (5), 126.2 (6), 150.3 (7), 116.3 (8), 127.6 (9), С 175.9 (1), 38.4 (2), 13.9 (2-Ме), 41.3 (3), D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.7 (4-Ме).
Криптофицин 18
[]D + 54,9 (MeOH, с 0,93); УФ max () 250 (20518), 284 (3857). ИК (neat) max 3411, 3271, 2966, 1746, 1728, 1668, 1505, 1463, 1258, 1178 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 638/640 (4.5/1.1), 412/414 (59/19), 280(17), 227 (100); высокое разре-шение EIMS m/z 638.272934 (рассчитано для С35Н43СIN2O7, 2.9 mmu ошибка). 1H NMR (CDCI3): амино или оксикислотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2.7-октадиеновая кислота (А) 5.76 (2, d; 15.5), 6.65 (3, ddd; 15.4, 9.2 и 6.2), 2.38-2.47 (4, m), 5.08 (5, ddd; 10.6, 4.9 и 2.2), 2.58 (6, m), 1.15 (6-Me, d; 6.8), 6.07 (7, dd; 15.9 и 8.5), 6.43 (8, d; 15.9), 7.21-7.35 (10/11/12/13/14, m); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4,83 (2, m), 3.05 (3, dd; 14.5 и 7.1), 5.65 (2-NH, d; 8.7), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.5), 7.21 (5, d; 2.4), 3.86 (7-ОСН3, s), 6.83 (8, d; 8.3), 7.08 (9, dd; 8.3 и 2.2), 3-амино-2-метилпропионовая кис-лота (С) 2.73 (2. m), 1.23 (2-Me, d; 7.2), 3.23 (3, dt; 13.5 и 6.8), 3.56 (3, ddd; 13.5, 5.7 и 4.0), 6.85 (3-NH, dd; 7.1 и 6.2); лейциновая кислота (D) 4.8 (2, d; 4.6), 1.86-1.89 (3, m), 0.94 (3-Me, d; 7.0), 1.20-1.26 (4, m), 1.39-1.44 (4, m), 0.77 (5, d; 7.4). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.2 (2), 141.5 (3), 36.4 (4), 77.7 (5), 41.9 (6), 17.1 (6-Me), 129.8 (7), 131.9 (8), 136.8 (9), 128.6 (10/14), 126.2 (11/13), 127.6 (12); В 170.0 (1), 53.5 (2), 35.1(3), 129.9 (4), 131.1(5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1(7-ОСН3), 112.2 (8), 128.5 (9); С 175.3 (1), 38.6 (2), 14.0 (2-Ме), 41.4 (3), D 169.5 (1), 76.6 (2), 36.2 (3), 15.5 (3-Ме), 24.2 (4), 14.0 (5).
Криптофицин 19
[]D + 62.6 (MeOH, с 0,67); УФ max () 204 (44900), 230 (17000), 248 (15600), 280 (2500); ИК (neat) max 3413, 3272, 2966, 1745, 1726, 1672, 1504, 1258, 1199, 1178, 1066, 692 cm-1; EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (3.0/1.4), 398/400 (58/21), 280/282 (15/5), 227 (100), 195/197 (57/22); высокое разрешение EIMS m/z 624.2585 (рассчи-тано для С34Н41CIN2O7, 1.8 mmu ошибка). 1Н-NMR (CDCl3): амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислотa (A) 5.76 (2, d; 15.2), 6.64 (3, ddd; 15.4, 9.1 и 6.2), 2.38 (4, m), 2.47 (4, m), 5.04 (5, ddd; 7.1, 5.1 и 1.8), 2.57 (6, m), 1.15 (6-Me, d, 6.9), 6.05 (7, dd; 15.8 и 8.5), 6.43 (8, d; 15.8), 7.29-7.35 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.84 (2, m), 5.67 (2-NH, d; 8.9), 3.04 (3, dd; 14.3 и 7.1), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.3), 7.22 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОСН3, s), 6.83 (8, d; 8.2), 7.08 (9, dd; 8.2 и 2.0), 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.75 (2, m), 1.23 (2-Ме, d; 7.1), 3.19 (3, m), 3.59 (3, m), 6.80 (3-NH, brt; 6.7); 2-оксиизовалерьяновая кислота (D) 4.73 (2, d; 4.2), 2.09 (3, m), 0.84 (4, d; 6.9), 0.95 (3-Me, d; 6,9). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.3 (2), 141.3 (3), 36.3 (4), 77.7 (5), 42.0 (6), 17.1 (6-Me), 129.9 (7), 131.9 (8), 136.8 (9), 126.1 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 171.0 (1), 53.4 (2), 35.1(3), 130.0 (4), 131.1(5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.2 (8), 128.5 (9); С 175.1(1), 38.7 (2), 13.9 (2-Ме), 41.5 (3), D 169.6 (1), 76.9 (2), 29.8 (3), 19.0 (4), 16.7 (3-Ме).
Криптофицин 21
[]D + 40,2 (СHСl3, с 0,72); УФ max () 240 (6700), 280 (2400), 288 (2100), ИК (neat) max 3403, 3279, 2957, 1731, 1673, 1503, 1464, 1409, 1372, 1258, 1174, 1065, 1023, 889 cm-1; EIMS m/z (отно-сит. интенсивность) 640/642 (10/4), 612 (5), 478 (15), 398 (40), 266 (33), 227 (76), 195 (95), 155 (100), 127 (90), высокое разрешение EIMS m/z 640.2550 рас-считано для C34Н41CIN2O8, 0.2mmu ошибка); 1H NMR (CDCI3) амино или окси-кислотное звено (положение углерода, мультиплетность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенилоктановая кис-лота (А) 5.73 (2, d; 15.4), 6.68 (3, ddd; 15.0, 9.9 и 4.9), 2.45 (4, m), 2.56 (4, m), 5.19 (5, ddd; 11.2, 5.1 и 1.5), 1.80 (6, m), 1.14 (6-Me, d, 7.1), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.68 (8, d; 1.8), 7.25 (10/14, m), 7.33-7.38 (11/12/13, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.74 (2, ddd; 8.2, 6.8 и 6.2), 5.68 (2-NH, d; 8.6), 2.98 (3, dd; 14.3 и 7.7), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.6), 7.21 (5, d; 2.0), 3.86 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4 и 2.0), 3-аминопропионовая кислота (С) 2.56 (2, m), 3.51 (3, m), 3.45 (3, m), 6.90 (3-NH, br t; 5.8), лейциновая кислота (D) 4.89 (2, dd; 10.0 и 3.3), 1.67 (3, m), 1.31 (3, m), 1.67 (4, m), 0.84 (5, d; 6.4), 0.83 (4-Me, d; 6.4); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 75.9 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.7 (1), 53.9 (2), 35.0 (3), 129.8 (4), 130.9 (5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1(7- ОMе), 112.2 (8), 128.3 (9), С 172.6 (1), 32.4 (2), 34.4 (3), D 170.5 (1), 71.2 (2), 39.5 (3), 24.4 (4), 22.8 (5), 21.2 (4-Ме).
Криптофицин 23
[]D + 47 (MeOH, с 1,55); УФ max () 240 (4571), 282 (2174), 290 (2177); ИК (neat) max 3284, 2960, 1747, 1724, 1653, 1540, 1490, 1339, 1272, 1174 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 674/675/678 (47/35/8), 432/434/436 (11/5/2), 299/301/303 (39/30/7), 227 (64), 215/217/219 (31/20/8), 141 (100), высокое разрешение EIMS m/z 674.21643 (рассчитано для С34Н4CI2N2O8, -0.3mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.77 (2, d; 15.4), 6.65 (3, ddd; 15.4, 9.3 и 6.0), 2.47 (4, dt; 14.2 и 10.2), 2.55 (4, br dd; 14.2 и 5.6), 5.13 (5, ddd; 11.0, 4.6 и 1.6), 1.81 (6, m), 1.15 (6-Me, d; 6.9), 2.93 (7, dd; 7,6 и 2.0), 3.7 (8 d; 2.0), 7.22-7.26 (10/14, m), 7.32-7 .39 (11/12/13, m), 3.5-дихлор-4-оксифенилаланин (В) 4.81 (2, m), 5.69 (2-NH, d; 8.6), 3.11 (3, dd; 14.5 и 5.6), 3.50 (3, dd; 14.3 и 7.0), 7.13 (5/9, s), 5.78 (7-ОН, s) 3-амино-2-метилпропионовая кислота (C), 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.19 (3, dt; 13.4 и 6.9), 3.58 (3, ddd; 13.6, 5.8 и 4.1), 6.82 (3-NH, br t; 5.9); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 9.9 и 3.2), 1.38 (3, m), 1.68-1.75 (3, m), 1.68-1.75 (4, m), 0.86 (4-Me, d; 6.7), 0.87 (5, d, 6.7). 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.4 (2), 140.9 (3), 36.7 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.5 (6-Me), 63.0 (7), 58.9 (8),136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.7 (1), 53.3 (2), 35.0 (3), 130.3 (4), 129.0 (5/9), 121.0 (6/8), 146.7 (7); С 175.3 (1), 38.4 (2), 13.9 (2-Ме), 41.5 (3), D 170.8 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 21.3 (4-Ме), 22.9 (5).
Криптофицин 24
[]D + 48,8 (CHCl3, с 0,63); УФ max () 228 (19006), 242 (8249), 274 (2351), ИК (neat) max 3400, 3284, 2959, 1732, 1678, 1652, 1514, 1248, 1178 cm-1; EIMS m/z (относит. интенсивность) 606 (2, M+), 364 (7), 161(55, СH3О-C6H4-CH=CH=CO+), 121 (100, СH3О-С6H4-CH2+), 91(68); высокое разрешение EIMS m/z 606.2954 (рaссчитано для C34H42N2O8, -l.3 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикис-лотное звено (положение углерода, мультиплет-ность, J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (A) 5.70 (2, dd; 15.2 и 1.3), 6.70 (3, ddd; 15.2,10.3 и 4.7). 2.43 (4, dt; 14.3 и 10.9), 2.56 (4, m), 5.20 (5, ddd; 11.3, 5.1 и 2.0),1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 7.0), 2.92 (7, dd; 7.5 и 2.0), 3.68 (8, d; 2.0), 7.23 -7.38 (10/11/12/13/14, m); О-метилтирозин (В) 4.73 (2, m), 5.58 (2-NH, d; 8.3), 3.03 (3, dd; 14.5 и 7.5), 3.14 (3, dd; 14.5 и 5.7), 7.11 (5/9, d; 8.6), 6.81 (6/8, d; 8.6), 3.78 (7-OMe, s), 3-аминопропионовая кислота (С) 2.55 (2-Н2, m), 3.42 (3, m), 3.53 (3, m), 6.97 (3-NH, br t; 5.7), лейциновая кислота (D) 4.89 (2, dd; 9.9 и 3.5), 1.29 (3, m), 1.62 - 1.70 (3/4, m), 0.83 (5, d; 5.9), 0.84 (4-Me, d; 6.l); 13С NMR (CDCl3); звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125,3 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 75.9 (5), 40.6 (6), 13.4 (6-Me), 63.0 (7), 59.0 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.7 или 170.6 (1), 54.1 (2), 35.2 (3), 128.5 (4), 130.2 (5/9), 114.1 (6/8), 158.6 (7), 55.2 (7-ОМе); С 172.8 (1), 32.5 (2), 34.2 (3); D 170.6 или 170.7 (1), 71.2 (2), 39.5 (3), 24.4 (4), 21.3 (5), 22.8 (4-Ме).
Криптофицин 26
[]D + 28,2 (СHСl3, с 1.31); УФ max () 254 (14615), 284 (2949), ИК (neat) max 3299, 2960, 1732, 1644, 1504, 1258, 1209 cm-1; EIMS m/z (относит интенсивность) 656/658 (0.5/0.1, М+), 638/640 (1.7/1.0), 525/527 (3.7/1.8), 412/414 (10/4), 280/282 (12/11), 227 (20), 195 (48), 131 (68); высокое разре-шение EIMS m/z 656.2836 (рассчитано для C35H45СIN2О8, 2,8 mmu ошибка), 638.2712 (рассчи-тано для С35Н43CIN2O7, 4.7mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3), амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода; мультиплетность, J in Hz) 3,5-диокси-6-метил-8-фенил-7-октеновая кислота (A) 2.46 (2, dd; 14.8 и 7.8), 2.58 (2, dd; 14.8 и 3.0), 5.46 (3, m), 1.86 - 1.90 (4-Н2, m), 3.61 (5, m), 2.37 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 6.06 (7, dd; 16 и 8.7), 6.47 (8, d; 16), 7.37 (10/14, br d; 7.9), 7.32 (11/13, br t; 7.6), 7.22 - 7.28 (12, m), 3-хлор-4-метилоксифенилаланин (В) 4.73 (2, br dt; 6.4 и 8.1), 6.14 (2-NH, d; 8.6), 2.84 (3, dd; 14.4 и 8), 3.18 (3, dd; 14.4 и 6.3), 7.21 (5, d; 2.2), 3.85 (7-ОМе, s), 6.82 (8, d; 8.6), 7.08 (9, dd; 8.6 и 2.2), 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.87 (2, m), 1.19 (2-Me, d; 7.0), 3.01 (3, ddd; 13.4, 10.6 и 4.9), 3.73 (3, ddd; 13.4, 8.2 и 4.7), 6.72 (3-NH, br dd; 7.3 и 5.2); лейциновая кислота (D) 4.95 (2, dd; 9.7 и 4.2), 1.62 - 1.72 (3, m), 1.79 - 1.84 (3, m), 1.62 - 1.72 (4, m), 0.90 (4-Ме, d; 6.4), 0.95 (5, d; 6.4). 13С NMR (CDCl3): звено (положение углерода) A 170.0 (1), 41.5 (2). 71.4 (3), 37.3 (4), 71.9 или 71.8 (5), 43.6 (6), 16.6 (6-Me), 130.8 (7), 132.5 (8), 136.8 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.2 (2), 34.7 (3), 130.3 (4), 131.1(5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.2 (8), 128.5 (9), С 174.3 (1), 40.1(2), 14.4 (2-Ме), 42.5 (3); D 170.7 (1), 71.8 или 71.9 (2), 38.9 (3), 24.6 (4), 21.6 (4-Ме), 22.9 (5).
Криптофицин 28
[]D + 65.6 (MeOH, с 0,93); УФ max (МеОН) 204 (48000), 230 (19300), 248 (18700), 280 (3400), ИК (neat) max 3413, 3270, 2958, 1745, 1726, 1665, 1504, 1258, 1197, 1175, 1066, 694 cm-1, EIMS m/z (относит.интенсивность) 624/626 (3.0/1.3), 412/414 (70/24), 280/282(13/6), 213 (100), 195/197 (86/40); высокое разрешение EIMS m/z 624.2626 (рассчи-тано для C34H41CIN2O7, - 2.4 mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положе-ние углерода, мультиплетность, J in Hz) 5-окси-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.78 (2, d; 15,6), 6.71 (3, ddd; 15.6, 9.9 и 5.4), 2.40 (4, m), 2.53 (4, m), 5.17 (5, m), 2.53 (6-H2, br t; 6.7), 6.07 (7, dt; 15,8 и 7.4), 6.44 (8, d; 15.8), 7.27-7.38 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.72 (2-NH, d; 8.5), 3.04 (3, dd; 14.5 и 7.2), 3.14 (3, dd; 14.5 и 5.4), 7.22 (5, d; 2.0), 3.87 (7-ОМе, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 и 2.0); 3-aмино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1.21 (2-Me, d; 7.2), 3.29 (3, dt; 13.5 и 7.0), 3.49 (3, ddd; 13.5, 4.9 и 3.8), 6.97 (3-NH, br t; 5.6), лейцино-вая кислота (D) 4.82 (2, m), 1.40 (3, m), 1.62 (3, m), 1.62 (4, m). 0.76 (4-Me, d; 6.3), 0.74 (5, d; 6.3); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.2 (2), 141.2 (3), 38.5 (4), 73.5 (5), 38.6 (6), 124.1(7), 133.8 (8), 136.7 (9), 126.1(10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1 (3),129.8 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 154.0 (7), 56.1(7-ОМе), 112.3 (8), 128.4 (9), С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме), 41.2 (3), D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 21.5 (4-Ме), 22.6 (5).
Криптофицин 29
[]D + 22.2 (СHСl3, с 1,13); УФ max () 250 (17000), 284 (3300), ИК (neat) max 3415, 3272, 2960, 1744, 1734, 1674, 1504, 1259, 1197, 1174, 1067, 694 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 624/626 (2.6/1.1), 398/400 (44/15), 227 (100), 195/197 (50/16), 155/157 (59/20), 131 (63), 91(95); высокое разреше-ние EIMS m/z 624.2607 (рассчитано для C34H41CIN2О7, -0.5 mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода; мультиплетность, J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.75 (2, dd; 15.3 и 1.1), 6.69 (3, ddd; 15.3, 10.1 и 5.3), 2.36 (4, m), 2.54 (4, m), 5.03 (5, ddd; 11.0, 6.4 и 1.8), 2.56 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 6,01 (7, dd; 15.8 и 8.8), 6.41(8, d; 15.8), 7.28-7.33 (10/11/13/14, m), 7.22 (12, m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.76 (2, m), 5.67 (2-NH, d; 8.6), 3.0 (3, dd; 14.4 и 10.2), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.9), 7.22 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОМе, s). 6.83 (8, d; 8.4), 7.08 (9, dd; 8.4 и 2.2) 3-аминопропионовая кислота (С) 2.55 (2-H2, m), 3.44 (3, m), 3.55 (3, m), 6.89 (3-NH, br t; 5.7), лейциновая кислота (D) 4.90 (2, dd; 9.9 и 3.5), 1.34 (3, ddd; 15.4, 10.3 и 3.5). 1.63 (3, m), 1.63 (4, m). 0.76 (4-Me, d; 6.4), 0.72 (5, d; 6.4), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.6 (1), 125.2 (2), 141.5 (3), 36.4 (4), 77.1(5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.9 (1), 53.8 (2), 34.9 (3), 129.9 (4), 131.0 (5), 122.4 (6), 153.9 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.2 (8), 128.4 (9); С 172.6 (1), 32.4 (2), 34.5 (3); D 170.4 (1), 71.5 (2), 39.7 (3). 24.4 (4), 21.2 (4-Ме), 22.6 (5).
Криптофицин 30
[]D + 12.3 (СHСl3, с 1,53); УФ max () 254 (17200), 284 (3600); ИК (neat) max 3414, 3306, 2961, 1738,1729, 1660, 1504, 1258, 1205, 1183, 1066, 695 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 656/658 (1.0/0.3), 638/640 (3.0/1.0), 525/527 (3.8/1.3), 412/414 (10.5/3.6), 280/282 (10.3/3.8), 227 (29), 195/197 (48/17), 155/157 (74/21), 131 (100); высокое разрешение EIMS m/z 656.2852 (рассчитано для C35H45CIN2O8, l.3 mmu ошибка); 1H-NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода мультиплетность; J in Hz) 3,5-диокси-6-метил-8-фенил-7-октеновая кислота (A) 2.25 (2, dd; 16.0 и 9.6), 2.64 (2, brd; 16.0), 3,89 (3, m), 2.51 (3-OH, d; 6.4), 1.77 (4, ddd; 14.3, 9.8 и 2.1), 1.88 (4, ddd; 14.3, 11.3 и 3.8), 4.88 (5, ddd; 11.3, 6.2 и 2.1), 2.53 (6, m), 1.10 (6-Me, d; 6.8), 5.99 (7, dd; 15.9 и 9.0), 6.40 (8, d; 15.9), 7.28-7.33 (10/11/13/14, m), 7.23 (12, m), 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.60 (2, m), 6.61 (2-NH, d; 8.1), 3.09 (3, dd; 14.2 и 5.6), 3.15 (3, dd; 14.2 и 7.3), 7.22 (5, d; 2.1), 3.86 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d, 8.3), 7.07 (9, dd; 8.3 и 2.1), 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.67 (2, m), 1.21 (2-Me, d; 7.3), 3.26 (3, ddd; 13.6, 7.3 и 6.4), 3.63 (3, ddd; 13.6, 6.2 и 3.9), 6.75 (3-NH, br t; 6.3); лейциновая кислота (D) 4.83 (2, dd; 9.6, 4.1), 1.42 (3, m), 1.64 (3, m), 1.64 (4, m). 0.79 (4-Ме, d; 6.4), 0.76 (5, d; 6.4), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 171.6 (1), 42.4 (2), 66.0 (3), 41.3 (4), 76.0 (5), 42.0 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 131.9 (8), 136.7 (9), 126.1(10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 170.8 (1), 54.3 (2), 35.1 (3), 130.1(4), 131.1(5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.1(8), 128.7 (9), С 175.6 (1), 39.7 (2), 13.8 (2-Ме), 41.5 (3), D 171.9 (1), 72.1(2), 39.1 3), 24.6 (4), 21.4 (4- Me), 22.7 (5).
Криптофщнн 31
[]D + 50.6 (МеОH, с 1,13); УФ max () 242 (3800), 284 (700); ИК (neat) max 3412, 3272, 2961, 1745, 1725, 1678, 1537, 1481, 1270, 1196, 1176, 1000, 698 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 688/690/692 (1.2/1.0/0.4), 446/448/450 (7.9/6.7/3.1), 314/316/318 (17/11/3), 91 (100), высокое разреше-ние EIMS m/z 688.2336 (рассчитано для C35H42CI2N2O8, - 1.8 mmu ошибка 1H-NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.78 (2, d; 15.5), 6.66 (3, ddd; 15.5, 9.4 и 6.0), 2.47 (4, ddd; 14.1, 10.8 и 9.4), 2.56 (4, m), 5.14 (5, ddd; 10.8, 4.7 и 1.7), 1.82 (6, m). 1.15 (6-Me, d; 7.1), 2.93 (7, dd, 7.5 и 1.9), 3.70 (8, d; 1.9), 7.24-7.26 (10/14, m), 7.34-7.39 (11/12/13, m); 3,5-дихлор-4-метоксиофенилаланин (В) 4.83 (2, m), 5.68 (2-NH. d; 9.0), 3.0 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3.14 (3, dd; 14.4 и 5.6), 7.16 (5/9, s), 3.87 (7-ОМе, s), 3-амино-2-метил-пропионовая кислота (С) 2.74 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.1), 3.20 (3, m), 3.58 (3, ddd; 13.5, 5.6 и 4.1), 6.82 (3-NH, br t; 5.6) лейциновая кислота (D) 4.83 (2, m), 1.38 (3, m), 1.72 (3, m), 1.72 (4, m). 0.87 (4-Me, d; 6.8), 0.86 (5, d; 6.8), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.4 (1), 125.4 (2), 141.0 (3), 36.7 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.5 (6- Me), 63.0 (7), 58.9 (8), 136.7 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.8 (1), 53.3 (2), 35.2 (3), 129.3 (4), 129.6 (5/9), 134.5 (6/8), 151.2 (7), 60.6 (7-ОМе); С 175.3 (1), 38.3 (2), 13.9 (2-СН3), 41.5 (3), D 170.6 (1). 71.3 (2), 39.4 (3), 24.6 (4), 22.9 (4-Ме), 21.3 (5).
Криптофицин 40
[]D + 41.6 (СHСl3, с 0,31); УФ max () 242 (4974), 266 (3911), 274 (3666), 286 (2359), 328 (511); ИК (neat) max 3415, 2959, 1748, 1723, 1667,1505, 1463, 1289, 1176 cm-1; EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 640/642 (5/2), 280/282 (7/3), 213 (13),195/197 (51/17), 155 (29), 141(32), 121(28), 91 (100), 69 (47); высокое разрешение EIMS m/z 640.2570 (рассчитано для С34Н41CIN2O8, - l.8mmu ошибка); 1H NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.77 (2, d; 15.1), 6.72 (3, ddd; 15.1, 9.7 и 4.9), 2.42 (4, m), 2.58 (4, m), 5.33 (5, m), 1.89 (6, ddd; 12.9, 8.1 и 5.0), 2.13 (6, ddd; 12.9, 9.3 и 5.0), 2.98 (7, ddd; 6.7, 4.5 и 1.9), 3.64 (8, d; 1.9), 7.31-7.39 (10/11/13/14, m); 7.22 (12, 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.83 (2, m), 5.64 (2-NH, d, 8.6), 3.03 (3, dd; 14.3 и 7.5), 3.14 (3, dd; 14.3 и 5.4), 7.21(5, d; 2.0), 3.87 (7-ОМе, s), 6.84 (8, d 8.3), 7.08 (9, dd; 8.3 и 2.0); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1,23 (2-Me, d; 7.3), 3.31 (3, dt; 13.8 и 6.9), 3.50 (3. ddd; 13.6, 5.7 и 3.9), 6.96 (3-NH, br t; 6.0); лейциновая кислота (D) 4.85 (2, dd; 6.7, 3.4), 1.42 (3, m), 1.72 (3, m), 1.72 (4, m), 0.86 (4-Ме, d, 3.7), 0.87 (5, d, 3.7); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.2 (2), 140.9 (3), 39.0 (4), 72.0 (5), 37.3 (6), 59.0 (7), 58.7 (8), 140.9 (9), 125.6 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (12); В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.l (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.5 (6), 157.0 (7), 56.1(7-ОМе), 112.3 (8), 128.4 (9); С 175.6 (1), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.1 (3), D 170.9 (1), 71.4 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 21.5 (4-Ме), 22.8 (5).
Криптофицин 43
[]D + 20 (СHСl3, с 0,2); УФ max () 250 (20512), 282 (4083), 294 (1734); ИК (neat) max 3400, 3272, 2927, 1727, 1660, 1516, 1455, 1242, 1175 cm-1 EIMS m/z (относит.интенсивность) 533 (24), 484 (3), 445 (14), 398 (9), 364 (29), 227 (59), 149 (67), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 590.3044 (рассчитано для С34Н41N2O7, -5.2mmu ошибка), 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность; J in Hz.) 5-oкси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.75 (2, d; 15.3), 6.69 (3, ddd; 15.3, 9.9 и 5.3), 2.37 (4, dt; 14.2 и 10.4), 2.52 (4, m), 5.01 (5, ddd; 11.2, 6.4 и 1.8), 2.55 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.9), 6.01 (7, dd; 15.8 и 8.9), 6.41 (8, d; 15.8), 7.21-7.34 (10/11/12/13/14, m); 4-метоксифенилаланин (B) 4.80 (2, m), 5.64 (2-NH, d; 8.4), 3.06 (3, dd; 14.5 и 7.2), 3.13 (3, dd; 14.4 и 5.3), 7.06 (5/9, d; 8.4), 6.74 (6/8, d; 6.74 (6/8, d; 8.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота c 2.69 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.33 (3, m), 3.44 (3, dt; 14.0 и 4.7), 7.0 (3-NН, m); лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.0 и 3.6), 1.60-1.67 (3, m). 1.35 (3, m), 1.60-1.67 (4, m), 0.76 (5, d; 6.4), 0.73 (4-Me, d; 6.7); 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 125.2 (2), 141.5 (3), 36.5 (4), 77.5 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.1 (7), 131.8 (8), 136.8 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12), В 53.8 (2), 35.3 (3),129.8 (4), 130.5 (5/9), 115.6 (6/8), 154.6 (7), С 38.3 (2), 14.1 (2-Ме), 41.0 (3), D 71.6 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 21.2 (5), 22.9 (4-Ме). Из-за небольшого размера образца, сигналы карбонильного углерода не могут быть видны.
Криптофицин 45
[]D + 72.0 (МеОН, с 0,12); УФ max () 250 (25500), 284 (5300), ИК (neat) max 3407, 3239, 2958, 1743, 1727, 1667, 1538, 1469, 1242, 1196, 1177, 694 cm-1; EIMS m/z (относит.интенсивность) 658/660/662 (2.1/1.4/0.3), 483 (7.6) 432/434/436 (9.5/6.4/1.8), 300/302/304 (8.0/5.5/1.2), 227 (100) 91 (87), высокое разрешение EIMS m/z 658.2207 (рас-считано для С34Н40CI2N2O7, 0.6 mmu ошибка); 1H NMR (СDСl3) амино или оксикислотное звено (положение ушлерода, мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-oктадиеновая кислота (A) 5.80 (2, d; 14.7), 6.66 (3, ddd; 14.7, 8.5 и 5.5), 2.38 (4, m), 2.53 (4, m), 4.97 (5, br dd; 10.4 и 6.2), 2.57 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.7), 6.01 (7, dd; 15.9 и 8.7), 6.42 (8, d; 15.9), 7.28-7.34 (10/11/1314, m), 7.22 (12, m), 3,5-дихлор-4-оксифенилaланин (В) 4.82 (2, m), 5.73 (2-NH, br d; 8.7), 3.02 (3, dd; 14.3 и 6.2), 3.10 (3, dd; 14.3 и 5.2). 7.14 (5/9, s), 5.79 (7-OH, s), 3-амино-2-метилпропиoновая кислота (С) 2.73 (2, m), 1.21 (2-Ме, d; 7.0), 3.17 (3, m), 360 (3, m), 6.81 (3-NH, br t; 6.7), лейциновая кислота (D) 4.84 (2, dd; 10.0 и 3.2), 1.38 (3, ddd; 14.9, 10.2 и 3.2), 1.65 (3, m), 1.65 (4, m). 0.78 (4-Me, d; 6.5), 0.73 (5, d; 6.5), 13С NMR (CDCl3) звено (положение углерода) А 165.5 (1), 125.4 (2), 141.2 (3), 36.4 (4), 77.6 (5), 42.3 (6), 17.3 (6-Me), 130.0 (7), 131.9 (8), 136.7 (9), 126.2 (10/14), 128.6 (11/13), 127.6 (12); B 171.0 (1), 53.2 (2), 35.0 (3), 130.4 (4), 129.1 (5/9), 121.0 (6/8), 146.7 (7); С 175.2 (1), 38.5 (2), 13.9 (2-Me), 41.6 (3), D 170.7 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Криптофицин 49
[]D + 68.1 (МеОН, с 0,075); УФ max () 246 (25500), 284 (5200); ИК (neat) max 3401, 3282, 2962, 1744, 1728. 1668, 1540, 1505, 1464, 1258, 1198, 1177, 1066, 694 cm-1 EIMS m/z (отно-сит.интенсивность) 624/626 (0.8/0.3) 398/400 (43/14), 227(78), 195/197 (58/26) 91 (l00); высокое разрешение EIMS m/z 624.2650 (рассчитано для C34Н41CIN2О7, -4.8mmu ошибка), 1H NMR(CDCl3) амино или oксикислотное звено (положение угле-рода мультиплетность; J in Hz) 5-окси-6-метил-8-фенил-2,7-октадиеновая кислота (A) 5.77 (2, d; 14.1), 6.67 (3, m), 2.38 (4, m), 2.50 (4, m), 5.01 (5, m), 2.56 (6, m), 1.13 (6-Me, d; 6.5), 6.03 (7, dd; 15.8 и 8.6), 6.42 (8, d; 15.8), 7.29-7.35 (10/11/13/14, m), 7.23 (12; m), 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, m), 5.64 (2-NH, m), 3.06 (3, m), 3.13 (3, m), 7.22 (5, m), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, m), 7.08 (9, m); 3-aминo-2-метилпропионовая кислота (С) 2.72 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 6.7), 3.26 (3, m), 3.53 (3, m), 6.90 (3-NH, m); 2-оксивалерьяновая кислота (D) 4.81 (2, dd; 8.8 и 3.9), 1.63 (3, m), 1.68 (3, m), 1.33 (4-H2, m). 0.74 (5, t; 7.3).
Криптoфицин 50
[]D + 32.0 (СHСl3, с 0.44); УФ max () 242 (4933), 262 (3996, 274 (3719), 286 (2430), 332 (359); ИК (neat) max 3412, 3274, 2958, 1752, 1724, 1676, 1648, 1503, 1465, 1258, 1177, 1066, 753; EIMS m/z (относит.интенсивность) 640/642 (4/2), 398/400 (11/4), 280/282 (10/3), 227 (17), 195/197 (57/18), 157 (20), 141(31), 91 (100); высокое разрешение EIMS m/z 640.2531 (рассчитано для C34Н41CIN2O8, 2.1 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3) амино или оксикис-лотное звено (положение углерода, мультиплет-ность; J in Hz) 7,8-эпокси-5-окси-6-метил-8-фенилоктановая кислота (A) 5.73 (2, d; 15.7), 6.67 (3, ddd; 15.7, 9.7 и 5.4), 2.45 (4, m), 2.55 (4, m), 5.13 (5, ddd; 11.2, 5.0 и 1.7), 1.78 (6, m), 1.15 (6-Me, d, 6.9), 2.91 (7, dd, 7.5 и 1.9), 3.68 (8, d;, 1.7), 7.25 (10/14, m), 7.33-7.38 (11/12/13, m); 3-хлор-4-метоксифенилаланин (В) 4.80 (2, ddd, 8.3, 7.1 и 5.4), 5.61 (2-NH. d; 8.3), 3.03 (3, dd; 14.4 и 7.3), 3,13 (3, dd; 14.4 и 5.6), 7.2l (5, d; 1.9), 3.87 (7-ОМе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4 и 2.2); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.71 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.29 (3, dt; 13.6 и 6.9), 3.49 (3, ddd; 13.6, 6.7 и 5.0), 6.92 (3-NH, br t; 6.7) 2-оксипентановая кислота (D) 4.75 (2, dd; 9.2 и 3.7), 1.55 (3, m), 1.65 (3, m), 1.33 (4-Н2, m), 0.84 (5, t; 7.3), 13С NMR (CDCl3) звено values (положения углерода) А 165.3 (1), 125.3 (2), 141.0 (3), 36.9 (4), 76.3 (5), 40.8 (6), 13.6 (6-Me), 63.2 (7), 59.1 (8), 136.8 (9), 125.5 (10/14), 128.7 (11/13), 128.5 (11). В 170.9 (1), 53.6 (2), 35.1(3), 129.8 (4), 131.0 (5), 122.5 (6), 154.0 (7), 56.1 (7-ОМе), 112.3 (8), 128.5 (9), С 175.6 (1), 38.4 (2), 14.1(2-Ме), 41.2 (3); D 170.4 (1), 72.4 (2), 32.7 (3), 18.4 (4),13.5 (5).
Криптофицин 54
EIMS m/z (относит.интенсивность) 654/656 (17/10), 493 (5), 411/413 (12/4), 280 (16), 227 (25), 195/197 (45/25), 141(30), 91 (100); высокое разре-шение EIMS m/z 654.2686 (рассчитано для C35H43CIN2О8, 2.2 mmu ошибка); 1Н NMR (CDCl3): амино или оксиксилотное звено (положение угле-рода, мультиплетность; J in Hz) (A) 5.73 (2, d; 15.4), 6.66 (3, ddd; 15.4, 9.7, 5.7), 2.46 (4, m), 2.53 (4, m), 5.16 (5, ddd; 11.0, 4.2, 1.7), 1.79 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.8), 2.89 (7, dd, 7.4, 1.8), 3.69 (8, d, 1.9), 7.25 (10/14, m), 7.30-7.38 (11/12/13, m); (В) 4.81 (2, m), 5.63 (2-NH, d; 8.6), 3.03 (3, dd; 14.5, 7.3), 3.13 (3, dd, 14.5, 5.5), 7.21 (5, d, 2.2), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, d; 8.4), 7.07 (9, dd; 8.4, 2.2); (С) 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.3), 3.26 (3, ddd; 13.4, 6.8, 6.8), 3.51 (3, ddd, 13.4, 6.8, 5.3), 6.88 (3-NH, br t; 6.8); (D) 4.73 (2. d; 4.2), 1.78-1.82 (3, m), 0.92 (3-Me, d; 6.8), 1.36-1.41 (4, m), 1.18-1.20 (4, m), 0.80 (5, t; 7.5); 13С NMR (CDCl3): звено (положение углерода) A 165.3 (1), 125.4 (2), 141.0 (3), 36.6 (4), 76.3 (5), 40.6 (6), 13.2 (6-Me), 63.1(7), 58.7 (8), 136.7 (9), 125.4 (10/14), 128.6 (11/13), 128.5 (12); В 170.9 (1), 53.5 (2), 35.0 (3), 129.8 (4), 131.0 (5), 125.2 (6), 153.9 (7), 56.1(7-ОМе), 112.2 (8), 128.4 (9), С 175.4 (1), 38.5 (2), 14.0 (2-Ме), 41.3 (3), D 169.4 (1), 76.5 (2), 36.1(3), 15.6 (3-Ме), 24.0 (4), 11.2 (5).
Пример 6 Синтез производных Криптофицина
Криптофицин 8
К раствору 3.8 мг Криптофицина 1 в 1.5 мл 2:1 смеси 1,2- диметоксиэтана/воды было добавлено 9 мкл 1N Hcl. Раствору позволяли перемешиваться в течение 4 часов, нейтрализовали карбонатом калия и упаривали. Остаток был в виде перегородки меж-ду водой и СН2Сl2. СН2Сl2 - растворимая часть бы-ла очищена с помощью жидкостной гель проника-ющей хроматографии с обращенной фазой с полу-чением 3.3 мг чистого Криптофицина 8.
(Здесь и далее во всех последующих приме-рах)
Данные EIMS-электронной эмиссионной спек-троскопии m/z (относительная интенсивность) 690/692/694 (0.8/0.5/0.2). EIMS высокого разреше-ния m/z 690.2533 (расcчитано для C35H44N2O8 -5.8 mmu oшибка). 1Н-ЯМР (СDCl3)-данные протонного магнитного резонанса; амино или оксикислотное звено (положение углерода, мультиплетность, J в Гц) 8-хлор-5,7-диокси-6-метил-8-фенил-2-октеновая кислота (А) 5.79 (2d-дублет; 15.4), 6.69 (3, ddd-тройной дублет; 15.4, 9.7 и 5.6), 2.68 (4 ddt-двойной дублет триплет; 14.0, 5.5 и 1.8), 2.38 (4 m- мульти-плет); 5.11 (5ddd-тройной дублет; 10.8, 8.6 и 1.8), 2.51 (6 m-мультиплет), 1.05 (6-Ме, d-дублет; 7.0), 4.01 (7dd-двойной дублет; 9.6 и 1.4), 4.65 (8 d-дублет; 9.6), 7.36-7.41 (10/11/12/13/14, m), лейци-новая кислота (D) 4.92 (2, dd; 10.1 и 3.5), 1.76 (3/4, m), 1.45 (3, m), 0.94 (5, d; 6.6), 0.94 (4-Me, d; 6.4); 3-амино-2-метилпропионовая кислота (С) 2.73 (2, m), 1.22 (2-Me, d; 7.2), 3.25 (3, ddd; 13.6, 6.8 и 6.l), 3.54 (3, ddd; 13.5, 6.1 и 3.4), 6.91 (3-NH, brt; 6.l); 3-хлор-метоксифенилаланин (В) 4.82 (2, ddd; 8,8, 7.2 и 5.6), 5.64 (2-NH, d; 8.8). 3.03 (3, dd; 15.4 и 7.2), 3.16 (3, dd; 15.4 и 5.6), 7.23 (5, d, 2.2), 3,88 (7-ОСН3, s), 6.85 (8, d; 8.5), 7.09 (9, dd; 8.5 и 2.2).
Криптофицин 9
К раствору 10 мг Криптофицина 1 в 1 мл сухо-го метанола было добавлено 10 мкл НСl (получен-ного путем обработки 1.25 г тионилхлорида 25 мл МеОН). После перемешивания в течение 4 часов, растворитель удаляли в вакууме и образец остав-ляли в вакууме на 12 часов. Очистка с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой давала 8 мг чистого. Криптофи-цина 9.
1H NMR (CDCl3): amino or hydroxy acid unit (catbon position, multiplicity, J in Hz), 5.7-dihydroxy-8-methoxy-8-methoxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 5.76 (2, d; 15.5), 6.67 (3, ddd; 15.5, 9.5 and 5.6), 2.34 (4, ddd; 14.1, 11.1 and 9.5), 2.62 (4, dddd; 14.1, 5.6, 1.8 and 1.5), 5.09 (5, ddd; 11.1, 7.8 and 1.8), 2.24 (6, dqd; 7.8, 7.0 and 2.2), 1.03 (6-Me, d; 7.0), 3.71 (7, dd; 8.3 and 2.2), 4.03 (8, d; 8.3), 3.20 (8-ОСН3, s), 7.31-7.40 (10/11/12/13/14, m), leucic acid (D) 4.86 (2, dd, 9.8 and 3.5), 1.71 (3/4, m). 1.41(3, m), 0.89 (5/4-Me, d; 6.4); 3-amino-2-methylpropionic acid (C) 2.71 (2, ddq; 6.8, 3.9 and 7.2), 1.21 (2-Me, d; 7.2); 3.23 (3, ddd; 13.5, 6.8 and 6.0), 3.52 (3, ddd; 13.5. 6.0 and 3.9), 6.90 (3-NH, brt; 6.0); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.82 (2, ddd; 8.8, 7.4 and 5.7), 5.66 (2-NH, d; 8.8), 3.02 (3, dd; 14.4, 7.4), 3.15 (3, dd; 14.4 and 5.5), 7.23 (5, d; 2.2), 3.87 (7-ОСН3, s), 6.84 (8, d; 8.5), 7.08 (9, dd; 8.5 and 2.2).
Криптофицин 10
К перемешиваемому раствору 7 мг Криптофи-цина 9 в 1 мл ацетона и 0.3 мл воды было добавле-но 8 мкл 2N раствора NaOH. После перемешивания в течение 4 часов, раствор подвергали нейтрализа-ции до рН 7 1N раствором НCl и растворитель уда-ляли при пониженном давлении. Остаток подверга-ли обработке с помощью жидкостной гель прони-кающей хроматографии с обращенной фазой с использованием смеси 7:3 MeOH/H2O с получением чистого Криптофицина 10 (5 мг).
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity; J in Hz); .5,7-dihydroxy-8-methoxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 5.99 (2, dt; 15,4 and 1.3), 6.82 (3, dt, 15.4 and 7.3), 2.30 (4, m), 2.50 (4, m), 3.66 (5, td; 7.8 and 3.5), 2.05 (6, d pentet; 1.8 and 7.0), 0,96 (6-Me, d; 7.0), 4.04 (7, dd; 8.8 and 2.0), 4.01 (8, d; 8.8), 3.12 (8-ОСН3, s), 7.26-7.36 (10/11/12/13/14, m), 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.50 (2, m), 1.02 (2-Me, d; 7.3), 3.16 (3, dd; 13.4 and 6.9), 3.82 (3, dd; 13.4 and 6.6), 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.57 (2, dd; 8.5 and 6.5), 2.82 (3, dd; 13.9 and 8.6), 3.03 (3, dd, 13.9 and 6.5), 7.25 (5, d; 2.2), 3.82 (7-ОСН3, s), 6.96 (8, d; 8.6), 7.13 (9, dd; 8.6 and 2.2). 13С NMR (CD3OD): 179.5, 173.4, 168.2, 155.4, 143.7, 141,7, 131.9, 131.7, 129.8, 129.3 (2C, 129.2 (2C), 128.8, 126.2, 123.2, 113.4, 85.9, 74.5, 74.1, 56.8, 56.6, 56.3, 43.3, 41.2, 40.2, 38.8, 38.0, 15.5, 9.9.
Криптофицин 12
К раствору 5 мг Криптофицинов 1, 5 или 8 в 1 мл 4:1 смеси ацетон/вода было добавлено 15 мкл 2N раствора NaOH. После перемешивания при комнатной температуре в течение 5 часов, реакци-онную смесь подвергали нейтрализации до рН 7 1N раствором НСl и растворитель упаривали. Веще-ство, растворимое в СН2Cl2 пропускали через не-большой кремниевый картридж с СН2Сl2, 1:1 EtOAc/CH2Cl2, и EtOAc. Фракция, элюированная EtOAc, содержала чистый. Криптофицин 12.
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity, J in Hz); 5,7,8-trihydroxy-6-methyl-8-phenyl-2-octenoic acid (A) 6.07 (2, ddd; 15.5, 1.3 and 1.2), 6.40 (3, dt; 15.5 and 7,3), 2.49 (4, m), 2.60 (4, m). 3.92 (5, ddd; 9.3, 6.7 and 4.5), 1.94 (6, m), 1.07 (6-Me, d, 6.6), 3.61 (7, dd; 8.9 and 7.6), 4.56 (8, d; 7.6), 7.36 (10/14, dd; 7.4 and 1.5), 7.32 (11/13, brt; 7.5), 7.25 (12, m), 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.54 (2, ddq; 7.0, 6.6 and 7.0), 1.02 (2-Me, d; 7.0), 3.14 (3, dd; 13.5 and 7.0), 3.42 (3, dd; 13.4 and 6.6), 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.57 (2, dd, 8.4 and 6.7), 2.83 (3, dd; 13.8 and 8.4), 3.02 (3, dd; 13.8 and 6.6), 7.25 (5, d; 2.1), 3.82 (7- ОСН3, s), 6.95 (8, d; 8.5), 7.12 (9, dd; 8.5 and 2.1).
Метилирование Криптофицина 12 диазомета-ном давало Криптофицин 6.
Криптофицин 14
К раствору 3 мг Криптофицина 6 в 1 мл 3:1 смеси ацетон/вода было добавлено 5 мкл 2N рас-твора NaOH. После перемешивания в течение 5 часов, реакционную смесь подвергали нейтрализа-ции до рН 7 1N раствором НСl и затем упаривали досуха. Остаток подвергали обработке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой с получением 2.4 мг. Криптофи-цина 14.
1H NMR (CD3OD): amino or hydroxy acid unit (carbon position, multiplicity; J in Hz); 5-hydroxy-6-methyl-8-phenyl-2,7-octadienoic acid (A) 5.98 (2, d; 15.3), 6.78 (3, dt; 15.3 and 7.5), 2.35 (4, m), 3.64 (5, td; 7.2 and 4.8), 2.47 (6, m), 1.14 (6-Me, d; 6.9), 6.22 (7, dd; 15.9 and 8.1), 6.39 (8, d, 15.9), 7.24-7.36 (10/11/12/13/14, m); 3-amino-2-methylpropionic acid (C) 2.35 (2, m), 1.02 (2-Me, d; 6.9), 3.18 (3, dd; 13.2 and 6.6), 3.36 (3, dd; 13.2 and 4.5); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (B) 4.58 (2, dd; 8.7 and 6.3), 2.80 (3, dd; 13.8 and 9.0), 3,05 (3, dd; 13.8 and 6.3), 7.25 (5, d, 2.l), 3.82 (7-ОСH3, s), 6.95 (8, d; 8.4), 7.13 (9, dd; 8.4 and 2.1).
Криптофицин 35
Каталитическое количество PtO2 было добав-лено в колбу, содержащую 0.5 мл СН2Сl2. Колба была подвергнута вакуумированию, был введен H2 и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Раствор 10 мг Криптофицина 1 в минимальном количестве СН2Cl2 был добавлен и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут. Катализатор удаляли фильтро-ванием через целит/хлопковую ткань и раствори-тель упаривали. Обработка остатка с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии с обращенной фазой с использованием С18 колонки давала 6.5 мг Криптофицина 35
EIMS m/z (relative intensity) 656/658 (25/10), 412/414 (25/12), 280/282 (20/10), 195/197 (78/25), 141(58), 91 (100); high resolution EIMS m/z 656.2864 (calcd for С35Н45CIN2О8, 0.0 mmu error); 1H NMR (CDCl3) amino or hydroxy acid unit values (carbon positions, multiplicities, J in Hz) 2,3-dihydro-7,8-epoxy-5-hydroxy-6-methyl-8-phenyl octanoic acid (A) 2.32 (2, ddd; 14.5, 9.2, 5.8), 2.10 (2, ddd; 14.5, 9.2, 6.2), 1.5-1.8 (3/4 overlapping m), 5.07 (5, ddd; 12.5, 5.6, 2.0), 1.80 (6, m), 1.12 (6-Me, d; 7.0), 2.90 (7, dd; 7.4, 1.8), 3.67 (8, d; 1.8), 7.24 (10/14, m), 7.32-7.38 (11/12/13, m); 3-chloro-4-methoxyphenylalanine (В) 4.71 (2, ddd; 8.7, 6.4, 6.3), 5,62 (2-NH, d; 8.7), 3.08 (2H-3, br d; 6.4), 7.19 (5, d; 2.0), 3.87 (7-ОMе, s), 6.83 (8, d, 8.5), 7.07 (9, dd; 8.4, 2,0); 3-amino-2-methylpropionic acid (С) 2.72 (2, m), 1.18 (2-Me, d, 6.9), 3.12 (3, ddd; 11.4, 10.6, 5.6). 3.70 (3, ddd), 6.76 (3-NH, br t, 6.0); leucic acid (D) 4.83 (2, dd; 9.9, 3.8), 1.39 (3, m), 1.70 (3, m), 1.72 (4, m), 0.87 (4-Me, d; 5.3), 0.86 (5, d; 5.3), 13С NMR (CDCl3) unit values (carbon positions) A 172.4 (1), 36.2 (2), 32.0 (3), 21.1 (4), 76.6 (5), 40.2 (6),13.6 (6-Me), 63.3 (7), 59.2 (8), 136.8 (9), 125.6 (10/14),128.7 (11/13), 128.6 (12); В 170.7 (1), 53.7 (2), 35.5 (3), 130.0 (4), 131.1 (5), 122.2 (6), 153.8 (7), 56.1 (7-ОMе), 112.1 (8), 128.5 (9), С 175.2 (1), 38.2 (2), 13.6 (2-Ме), 42.1 (3); D 171.9 (1), 71.7 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 22.9 (4-Ме), 21.4 (5).
Пример 7 Анализ активности криптофицино-вых соединений в микротрубочковой деполимери-зации.
Винбластин, цитохалазин В, тетраметилрода-мин изотиоцианат (TRITC)- фалоидин, сульфоро-дамин В (SRB) и антитела против -тубулина и виментина были получены из Sigma Chemical Company. Базальная среда орла, содержащая соли Earle (ВМЕ), была из Gibco и фетальная бычья сы-воротка (FBS) была куплена у Halcone Laboratories.
Линии клеток.
Jurkat Т линия клетки лейкемии и клеток А-10 гладкой мышцы крысиной аорты были получены из American Туре Culture Collection и культивированы в ВМЕ, содержащем 10% FBS и 50 мкг/мл гентами-цин сульфата. Клетки яичниковой человеческой карциномы (SKOV3) и суб-линия, которая выбрана для сопротивления винбластину (SKVLB1), были великодушным подарком от Dr.Victor Ling из Ontario Cancer Institute. Обе линии клеток содержа-ли в ВМЕ, содержащем 10% FBS и 50 мкг/мл гента-мицин сульфата. Винбластин добавляли с конеч-ной концентрацией 1 мкг/мл в SKVLB1 клетки через 24 часа после пассажа для поддержания выбран-ного давления для Р-гликопротеин-сверхэкспрессирующих клеток.
Анализы клеточной пролиферации и задержки цикла.
Анализы клеточной пролиферации были вы-полнены, как описано Skehan et.al.11. Для Jurkat клеток, культуры обрабатывали инкубированными лекарствами, как описано в Skehan et.al.11, и общие клеточные наборы определяли с помощью подсче-та клеток в гемацитометре. Процентное содержа-ние клеток в митозе определяли с помощью окра-шивания 0.4% Giemsa в PBS с последующими тремя быстрыми промывками PBS. По крайней мере, 1000 клеток на обработку были подсчитаны на присут-ствие миотических структур и миотического индек-са, рассчитанного в виде отношения клеток с мио-тическими структурами к общему числу подсчи-танных клеток.
Влияние криптофицинов и винбластина на пролиферацию клеток Jurkat и клеточного цикла.
Кривые доза-ответ для эффектов криптофици-новых соединений и винбластина на клеточную пролиферацию и процентное содержание клеток в митозе показываются на Фигурах 2А и 2В, соответ-ственно. Меньше, чем 3% необработанных клеток, обнаруживают митотические структуры. И крип-тофициновые соединения и винбластин вызывают зависимое от дозы увеличение процента клеток, наблюдавшихся в митозе. Увеличение в митотиче-ском индексе близко коррелировало с уменьшением клеточной пролиферации, т.е. концентрации и криптофициновых соединений и винбластина, ко-торые заставляли 50% клеток аккумулироваться в митозе, были фактически такими же, как концен-трация, которая ингибировала клеточную проли-ферацию на 50%. Величины IC50 для криптофици-новых соединений и винбластина для этих эффек-тов составляли 0.2 и 8 нМ соответственно.
Влияние цитохалазина В, винбластина и криптофицинов на цитоскелет.
Клетки (А-10) гладкой мышцы аорты были выращены на стеклянных покровных стеклах и обработаны РBS, 2 мкМ цитохалазина В, 100 нМ винбластина или 10 нМ криптофициновых соеди-нений. Спустя 24 часа, микротрубочковые и ви менти новые промежуточные волокна были визуа-лизованы с помощью непрямого иммунофлуорес-центного анализа и микроволокна были окрашены с использованием TRITC-фаллоидина. Были иссле-дованы морфологические эффекты каждого лекар-ства. Необработанные клетки проявляли полно-стью расширенные микротрубочковые сетки с окружающими ядро микротрубочковыми органи-зующими центрами. Виментиновые промежуточ-ные волокна были также равномерно распределен-ными по всей цитоплазме, в то время как пучки микроволокон были сконцентрированы вдоль большой оси клетки. Цитохалазин В вызывал пол-ную деполимеризацию микроволокон наряду с аккумулированием паракристаллических остатков. Это соединение не оказывало влияния ни на рас-пределение микротрубочек, ни на распределение промежуточных волокон. И винбластин и крипто-фициновое соединение вызывали заметное опусто-шение микротрубочек. Ни одно из соединений не оказывало влияния на организацию микроволокна; однако, виментиновые промежуточные волокна сплющивались, образуя концентрические кольца вокруг ядра клеток, обработанных либо винбла-стином, либо криптофициновым соединением.
Влияние криптофицинов и винбластина на таксол-стабилизированные микротрубочки.
Клетки А-10 были обработаны в течение 3 ча-сов 0 или 10 мкМ таксола до добавления PBS, 100 нМ винбластина или 10 нМ криптофицинового соединения. Спустя 24 часа, организация микро-трубочек была исследована с помощью иммуно-флуоресцентного анализа, как описано выше. По сравнению с контрольными клетками, микротру-бочки в таксол-обработанных клетках были интен-сивно связаны, особенно в клеточных полярных областях. Как и прежде, винбластин вызывал пол-ную деполимеризацию микротрубочек в необрабо-танных предварительно клетках. Однако, предва-рительная обработка таксолом предотвращала микротрубочки от деполимеризации в ответ на винбластин. Аналогично, предварительная обра-боткa таксолом полностью стабилизировала мик-ротрубочки против криптофицин-индуцированной деполимеризации.
Обратимость деполимеризации микротрубо-чек за счет винбластина и криптофицина.
Клетки А-10 были обработаны либо 100 нМ винбластина, либо 10 нМ криптофицинов в течение 24 часов, приводя в результате к полной деполиме-ризации микротрубочек. Затем клетки были про-мыты и проинкубированы в среде свободной от лекарства в течение 1 часа или 24 часов. Микро-трубочки подвергались быстрой повторной поли-меризации после удаления винбластина, показывая значительные уровни микротрубочек спустя 1 час и полное морфологическое восстановление за 24 часа. Напротив, микротрубочки не появляются повторно в клетках обработанных криптофицино-выми соединениями ни через 1 час, ни через 24 часа после удаления соединения.
Обратимость ингибирования клеточной про-лиферации криптофицинами. винбластином и так-солам.
SKOV3 клетки были обработаны в течение 24 часов ранее установленными IC50 дозами винбла-стина, криптофициновых соединений или таксола (т.е. величинами определенными в опытах сумми-рованных в Таблице 5). В течение этого времени плотность клетки увеличивалась от 0,4 до 0.5 ± 0.05 единиц поглощения (Фигура 3), указывал на 25% увеличение количества клеток для всех трех обработок. Удаление лекарства приводило к быст-рому росту клеток, обработанных винбластином, так что их количество увеличивалось приблизи-тельно в три раза в течение 24 часов. Напротив, клетки обработанные криптофициновыми соедине-ниями или таксолом оставались блокированными, увеличиваясь только в 0,2 - 0,4 раза в течение 24 часов после удаления лекарства. Пролиферативная способность клеток, обработанных криптофицина-ми или таксолом, впоследствии восстанавливалась, так как клетки затем удваивались в следующие 24 часа.
Влияние комбинаций винбластина и крипто-фицинов на клеточную пролиферацию.
SKOV3 клетки были обработаны комбинация-ми криптофицинов и винбластина в течение 48 часов. Затем было определено процентное содер-жание выживших клеток и были рассчитаны вели-чины IC50 для каждой комбинации. Влияние этих обработок указанными комбинациями, а также обработок одним лекарством, изображается в виде изоболограм. (Фигура 4). Величины IC50 для ком-бинаций криптофициновых соединений и винобла-стина очень близко приближается к линии адди-тивности, указывая на то, что эти два лекарства индуцируют только аддитивное ингибирование клеточной пролиферации.
Токсичность криптофицинов, винбластина и таксола по отношению к SKOV3 и SKVLB1 клет-кам.
SKVLB1 клетки оказывают сопротивление противораковым лекарствам натурального проис-хождения из-за их сверх экспрессии Р-гликопротеина 12. Способности таксола, винбла-стина и криптофициновых соединений к ингибиро-ванию роста SKOV3 и SKVLB1 клеток суммируется в таблице 5. Таксол вызывает зависимое от дозы ингибирования пролиферации обеих линий клеток с величинами IC50 для SKOV3 и SKVLB1 клеток 1 и 8000 и М, соответственно. Винбластин также инги-бирует рост обеих линий клеток, с величинами IC50 0,35 и 4200 нМ для SKOV3 и SKVLB1 клеток, соот-ветствно. Криптофицины демонстрируют величины IC50 7 и 600 пкМ для SKOV3 и SKVLB1 клеток, со-ответственно. Результатирующие факторы сопро-тивления для SKVLB1 клеток соединениям рассчи-тываются в виде IC50 для SKVKB1. IC50 для SKOV3 клеток также указываются в таблице 5.
Таким образом, это демонстрирует, что насто-ящее изобретение обеспечивает новые криптофи-циновые соединения, а также ранее описанные криптофициновые соединения, которые являются мощными ингибиторами клеточной пролиферации, действующими за счет разрыва сетки микротрубо-чек и ингибирования митоза. Криптофициновые соединения разрушают организацию микротрубо-чек и, таким образом, нормальные клеточные функции, включающие функции митоза.
Классические антимикротрубочковые агенты, такие как колхицин и алкалоиды Винка, задержи-вают клеточное деление при митозе. Кажется уместным сравнить эффект одного из этих агентов на клеточную пролиферацию с криптофициновыми соединениями. Для этой цели винбластин алкалои-да Винка был выбран в качестве представителя антимикротрубочковых агентов. Таким образом, было проведено сравнение влияния криптофицино-вых соединений и винбластина на пролиферацию и развитие клеточного цикла клеточной линии Jukart Т-клеток лейкемии. Оба соединения вызывали па-раллельное зависимое от дозы ингибирование кле-точной пролиферации и аккумулирование клеток в митозе.
Так как антимитотические эффекты обычно опосредуются разрушением микротрубочек в ми-тотических веретенах, эффекты криптофициновых соединений на цитоскелетные структуры были охарактеризованы с помощью флуоресцентной спектроскопии. Иммунофлуоресцентное окрашива-ние клеток, обработанных либо криптофициновым соединением, либо винбластином, четко демон-стрирует, что оба соединения вызывают полную потерю микротрубочек. Аналогичные исследова-ния с SKOV3 клетками демонстрируют, что анти-микротрубочковые эффекты криптофициновых соединений не являются уникальными для линии клеток гладкой мышцы. Ни одно лекарство оказы-вает влияние на уровни или распределение микро-волокнистых пучков, что было легко проиндуциро-вано цитохалазином В, указывая на то, что потеря микротрубочек не может быть обусловлена неспе-цифическим механизмом, например, активацией протеаз или потерей энергетического заряда. И винбластин и криптофициновые соединения также заметно ускоряют схлопывание виментиновых промежуточных волокон так, что яркоокрашенные кольца образуются вокруг клеточных ядер.
Удаление винбластина из культурной среды приводит к быстрой повторной полимеризации микротрубочек. Напротив, клетки, обработанные криптофициновыми соединениями, оставались истощенными по отношению к микротрубочкам в течение, по крайней мере, 24 часов после того как соединение было удалено из культур.
Настоящее изобретение демонстрирует, что криптофициновые соединения нарушают Р-гликопротеин-опосредованное многократное со-противление лекарству. Транспорт за счет Р-гликопротеина ограничивает способность проти-вораковых лекарств натурального продукта к ин-гибированию роста опухолевых клеток с требуе-мым или de novo сопротивлением лекарству13-15. Алкалоиды Винка, хотя и очень полезные как начальный источник химиотерапии, являются чрезвычайно хорошими сусбтратами для транс-порта Р-гликопротеина и, таким образом, являются очень ограниченно полезными против Р-гликопротеин- опосредованных MDR опухолей.
Поэтому, идентификация агентов, которые мо-гут перекрывать многократное сопротивление ле-карству, должна приводить к развитию полезных и новых противораковых агентов. Криптофициновые соединения настоящего изобретения оказывается являются такими агентами, так как они являются плохими субстратами для Р-гликопротеин-опосредованного транспорта. Этот факт отражает-ся в низком факторе клеточного сопротивления для криптофициновых соединений, по сравнению с винбластином, таксолом и другими натуральными лекарственными продуктами. Полный синтез крип-тофицинов.
Структуры новых синтезированных соедине-ний, а именно Криптофицинов 51, 52, 53, 55, 56, 57, 58 и 61 были подтверждены непосредственным образом с использованием методологии, которая является хорошо известной специалистам в этой области. Масс спектральные данные согласовыва-лись с молекулярными составами. Данные протон и углерод ЯМР-спектров были аналогичны данным для криптофицина 1 и соответствующих аналогов природного происхождения и полусинтетических аналогов.
Следующие примеры демонстрируют полный синтез криптофициновых соединений, а также их применение в качестве терапевтических агентов в соответствии с изобретением.
Пример 8 Синтез Криптофицина 51
S-транс-3-пентен-2-ол (A)
Смесь рацемического транс-3-пентен-2-ола (933 мг, 11 ммолей), трифторзтиллаурата (4.14 г, 15 ммолей) и свиной панкретит липазы (PPL, 2.0 г) в 25 мл безводного диэтилового эфира перемешивали в течение 80 часов. Затем PPL отфильтровывали и промывали три раза. Эфирные фильтраты упари-вали и липкое масло затем подвергали вакуумной разгонке с коротким дефлегматором. S-транс-3-пентен-2-ол (А) конденсировался в ловушке, охла-ждаемой жидким азотом (338 мг).
1Н-ЯМР (CDCl3) 5.57 (4-Н; dq, -15.3/6.0), 5.47 (3-Н; ddd, -15.3/6.4/1.2), 4.19 (2-Н, 1:4:6:4:1 реntuplet, 6.4), 2.24 (ОН, bs), 1.63 (5-H3; d, 6.0), 1.19 (1-Н3, d; 6.4). 13С NMR (CDCl3) 135.5 (3), 125.5 (4), 68.7 (2), 23.3 (5), 17.5 (1).
S-транс-2-(2-пропинилокси)-3-пентен (В)
К интенсивно перемешиваемой смеси S-энантиомера А (628 мг, 7.3 ммоля), тетрабутилам-моний гидросульфата (138 мг, 0.41 ммоля) и 40% NaOH в воде (5 мл) при 0°С добавляют по каплям хлористый пропаргил (767 мг, 10.3 ммоля, 745 мкл). Интенсивное перемешивание продолжают в тече-ние ночи после чего смесь нейтрализуют НСl при 0°С и пропаргиловый эфир экстрагируют в пентан. Экстракт упаривают и пропаргиловый эфир очи-щают на короткой колонке с силикагелем (2% ди-этиловый эфир/пентан) с получением 778 мг про-паргилового эфира В,
[]D -118.9° (с 2.0, СHCl3); 1H NMR (СDCl3) 5.70 (4-H; dq, 18.5/6.5), 5.31 (3-Н, ddd, 18.5/7.2/1.4), 4.15 (1’-Н; dd, -15.6/2.1), 4.01 (1’-Н; dd, -15.6/2.1), 4.01 (2-H; m), 2.38 (3’-H, t, 2.1), 1.73 (5-H; dd, 6.5/l.4), l.25 (1H; d, 6.3).
(3R,4R)-4-Метилгепт-5(Е)-ен-1-ин-3-ол (С)
Аликвоту гексанового раствора бутиллития (2.5 М, 5.1 мл, 12.8 ммоля) упаривают в вакууме и остаток охлаждают до -90°С. Медленно добавляют раствор пропаргилового эфира В (454 мг, 3.66 ммоля) в 10 мл ТГФ. После этого позволяют темпе-ратуре подняться в течение ночи до комнатной температуры, реакционную смесь гасят раствором NH4Cl. Экстракция эфиром три раза, выпаривание высушенного экстракта и очистка остатка на ко-лонке с силикагелем (:% ЕtOАс/гексан) дает 332 Mr спирта С (выход 71%),
[]D +32.9° (с 3.0, СHCl3); IR (NaCl) max 3306, 2968, 1455, 1379, 1029, 975 cm-1. 1H NMR (CDCl3) 5.61 (6-H, dq, 15.3/6.3), 5.38 (5-H; dd, 15.3/7.7), 4.13 (3-H; bs), 2.45 (1-H; d, 1.5), 2.38 (4-H; m), 2.20 (ОН; bd, 3.3), 1.68 (7-Н; d, 6.2), 1.09 (4-CH3; d, 6.8). 13С NMR (CDCl3) 131.5 (5), 127.9 (6), 83.5 (2), 73.6 (1), 66.2 (3), 43.4 (4), 18.1(7), 15.7 (4-Me).
(3S,4R)-3-трет-Бутилдиметилсилилокси-4-метилгепт-5Е-еналь (D).
К перемешиваемому раствору спирта С (248 мг, 2 ммоля) и имидазола (340 мг, 5 ммолей) в 3 мл сухого ДМФА добавляют трет-бутилдиметилсилил хлорид (452 мг, 3 ммоля). После перемешивания смеси в течение ночи, добавляют 10 мл 10% рас-твора NaOH для разрушения избытка трет- бутил-диметилсилил хлорида. Продукт экстрагируют в эфир и экстракт промывают последовательно во-дой, 0.5 N НCl, и водой, сушат и выпаривают. Очистка остатка с помощью хроматографии на силикагеле с гексаном дает 457 мг (3R,4R)-3-трет-бутилдиметилсилилокси-4-метилгепт-5Е-ен-1-ина (выход 96%).
1Н-ЯМР (СDCl3) 5.50 (6-Н; dq, 15.3/6.1), 5.38 (5-H; dd, 15.3/7.5), 4.16 (3-Н; dd, 5.7/1.7), 2.37 (1-Н; d, 1.7), 2.35 (4-H; m), 1.68 (7-H; d, 6.1), 1.07 (4-Me, d, 6.8), 0.90 (CMe3; s), 0.12 (SiMe; s), 0.09 (SiMe; s).
Используя ту же процедуру, соответствующее TBDPS производное (3R,4R)- 3-трет-бутилдифенилсилилокси-4-метилгепт-5Е-ен-1-ина было получено с выходом 92%,
[]D -32.9° (с 3.0, СHCl3);. 1Н NMR (CDCl3) 7.72/7.38 (2Ph-H5), 5.32 (6-Н; m), 5,25 (5-Н; dd, 16.2/7.3), 4.29 (3-Н; dd, 5.2/2.0), 2.38 (4-H; m), 2.33 (1-Н, d, 2.0), 1.64 (7-H; d, 5.3), 1.11 (4-Me; d, 6.9), 1.06 (CMe3). 13С NMR (CDCl3) 136.l/ 135.9 /133.6 /129.7/129.6/127.5/127.3 (Ph), 132.4 (5), 126.1 (6), 83.3 (2), 73.5 (1), 68.0 (3), 43.6 (4), 26.9 (СMe3), 19.4 (CМе3), 18.0 (7), 14.7 (4-Ме).
2-Метилбутен (1.15 мл, 2М раствор в ТГФ, 2.3 ммоля) был добавлен к 1.1 мл раствора BF3 в ТГФ (1М, 1.1 ммоля) при -25°С и смесь перемешивали в бане со льдом в течение двух часов. Затем темпе-ратуру понижали до -50°С и сразу добавляли рас-твор ТВS производного (238 мг, 1 ммоль) в 1 мл ТГФ. Охлаждающую баню удаляли и реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной темпера-туры и оставляли при комнатной температуре в течение одного часа. Затем добавляли 2.2 М рас-твор КН2РО4/К2НРО4 (4.8 мл) и 30% H2O2 (0.8 мл) при 0°С. Спустя 1 час, ТГФ упаривали и остаток экстрагировали в эфир. Сухой эфирный экстракт выпаривали, остаток хроматографировали на си-ликагеле (1% EtOAc/reкcaн) с получением 194 мг альдегида D (выход 76%).
1H NMR (CDCl3) 9.78 (1-Н; t, 2.3), 5.46 (6-Н, dq, 15.3/6.1), 5.34 (5-Н; dd, 15.3/7.5), 4.13 (3-Н; m), 2.47 (2-Н; m), 2.31 (4-Н; m), 1.66 (7-Н; br d, 6.1), 0.99 (4- Me; d, 6.8), 0.87 (СМе3; s), 0.07 (SiMe; s), 0.04 (SiMe; s).
Производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (ТВDРS) альдегида получали с 83% выхо-дом, 1Н-ЯМР (СDСl3)
9.52 (1-Н; t, 2.4), 7.69/7.40 (2Ph-H5), 5.28 (6-Н; m), 5,22 (5-H, dd, 16.2/6.2), 4.19 (3-Н; m), 2.42 (2-H; m), 2.29 (4-H; m), 1.60 (7-H; d, 5.4), 1.07 (СМе3). 1,02 (4-Me; d, 6.9). 13С NMR (CDCl3) 202,0 (1), 136.l/133.6/ 133.3 /130.2/129.7/127.7/127.6 (Ph), 132.3 (5), 126.2 (6), 72.8 (3), 47.6 (2), 42.2 (4), 27.1 (СMe3), 19.6 (CМе3), 18.3 (7), 14.9 (4-Ме).
Метил(5S,6R)-5-трет-Бутилдиметилсилилокси-6-метил-7-оксонона-2Е,7Е-диеноат (E)
К перемешиваемому раствору альдегида D (0.74 г, 2.9 ммоля) и триметилфосфонацетата (632 Mr, 3.5 ммоля) в 5 мл ТГФ, охлажденного до -78°С, добавляли тетраметилгуанидин (435 мкл, 3.5 ммо-ля). Через 30 минут охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали дополнительно четыре часа. Смесь нейтрализовали 1 N HCl и продукт экстраги-ровали в эфир. Выпаривание высушенного эфирно-го экстракта оставляло остаток, который хромато-графировали на силикагеле (5% ЕtoАс/гексан) с получением 0.814 г Е (выход 96%). 1Н-ЯМР (СDCl3)
6.93 (3-H; dt, 15.6/7.8), 5.62 (2-H; dd, 15.6/1.2), 5.37 (8-Н, m), 5.37 (7-Н, m), 3.71 (ОСН3, s), 3.61 (5-Н, m), 2.29 (4-Н2, m), 2.22 (6-H, m), 1.66 (9-Н3; br d, 6.1), 0.99 (6-Me; d, 6.8), 0.88 (СМе3: s), 0.03 (SiMe; s), 0.01 (SiMe; s).
Производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (TBDPS) альдегида получали с 90% выхо-дом, 1Н-ЯМР (СDCl3)
7.68/7.38 (2Ph-Н5), 6.75 (3-Н; dt, 15.6/7.4), 5.62 (2, Н; d, 15.6), 5.34 (8-Н, m), 5.29 (7-Н, m), 3.70 (5-H, m), 3.68 (ОСH3, s), 2.28 (4-H2, m), 2.20 (6-Н, m), 1.62 (9-H3; d, 5.3), 1.08 (СМe3), 099 (6-Me; d, 6.9). 13C NMR (CDCl3) 166.7 (1), 146.4 (3). 136.0/134.2/133.8/129.62/129.56/127.5/1274 (Ph) 132.5 (7), 125.8 (8), 122.6 (2), 76.2 (5), 51.3 (ОСH3) 41.7 (6), 36.8 (4), 27.0 (СMe3) 19.4 (CМе3), 18.1 (9), 14.7 (6-Ме).
Метил(5S,6Н)-5-трет-Бутилдиметилсилилокси-6-метил-7-оксогепт-2(Е)-7-еноат (F)
Озон пропускали через раствор метилового эфира Е (328 мг, 1.0 ммоля) и 97 мкл пиридина в 15 мл CH2Cl2 при -78°С и за протеканием озонолиза наблюдали с помощью тонкослойной хроматогра-фии. После того как был израсходован метиловый эфир, добавляли около 500 мг цинковой пыли и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Температуру мед-ленно повышали до 25°С. Смесь отфильтровывали и фильтрат последовательно промывали насыщен-ными растворами CuSO4 и NaHCO3. После упари-вания растворителя, неочищенный альдегид F (249 мг, 83%) использовали в следующей стадии без дальнейшей очистки. 1Н-ЯМР (СDCl3)
9.96 (7-Н; t, 2.3). 6.96 (3-Н; dt, 15.7/7.6), 5.90 (2-H; dd, 15.7/0.7), 4.05 (5-Н; m), 3.74 (ОMе; s), 2.51 (6-H; m), 2.45 (4-Н2; m), 1.09 (6-Ме; d, 6.9), 0.88 (СМе3; s), 0.04 (SiMe; s), 0.03 (SiMe; s).
Метил(5S,6R)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2(Е),7Е- диеноат (G)
К перемешиваемому раствору альдегида F (25.0 мг, 0.08 ммоля) в 1.5 мл ТГФ при -78°С добав-ляли 0.80 мл охлажденной (-78°С) смеси бензи-лтрифенилфосфонийхлорида (268 мг, 0.69 ммоля, в 6.9 мл ТГФ) и н- бутиллития (280 мкл, 2.5 М в гек-сане). Через 15 минут охлаждающую баню удаля-ли и перемешивание продолжали в течение двух часов. Реакцию гасили насыщенным раствором хлористого аммония и ТГФ упаривали. Концентрат экстрагировали в гексан дважды и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили и выпаривали. Оставшееся масло, 5:1 смесь Е и Z изомеров, растворяли в 1.5 мл бензола, содержаще-го тиофенол (0.02 М) и 1.1'- азо6ис(циклогексанкарбонитрил) (VAZO, 0.006 М), и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 5 часов. После охлаждения до комнатной температуры, добавляли гексан (15 мл) и органиче-ский раствор последовательно промывали 10% раствором NaOH и солевым раствором, сушили (MgSO4) и выпаривали. Хроматографирование остатка на силикагеле (2% EtOAc/гексан) приводи-ло к получению 24 мг (выход 80%) продукта G.
[]D + 68.2 (с 1,5, CHCl3); EIMS m/z 374 (<1%; М+), 359 (1; М+ -СН3), 317 (10; М+ -Bu), 275 (10), 243, (73), 143 (20), 115 (10), 97 (64), 89 (31), 73 (100), HREIMS m/z 374.2232 (C22H34О3Si, +4.5mmu), 359.2031 (С21H31O3Si, + l.l mmu), 317.1579 (C18H25O3Si, -0.6mmu); UV (МеОН) max () 206 (33500), 252 (20100) nm; IR max 2952, 2855, 1725, 1657, 1435, 1257, 1168, 1097, 970, 836, 775 cm-1; 1H NMR 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.96 (3-H; ddd, 15.6/7.8/7.5), 6.37 (8-H; d, 15.9), 6.16 (7-H; dd, 15.9/8.1), 5.84 (2-H; d, 15.6), 3.75 (5-H; ddd, 10.2/6.0/4.2), 3.72 (ОMе, s), 2.44 (6-H; m), 2.36 (4-Н2; m), 1.10 (6-Me; d, 6.9), 0.91 (Si-СМе3; s), 0.06 (Si-Me; s), 0.05 (Si- Me; s); 13С NMR 166.8 (1), 146.4 (3), 137.6 (Ph 1’), 131.9 (8); 130.4 (7), 128,5 (Ph 3’/5’). 127.0 (Ph 4’), 126.0 (Ph 2’/6’), 122.9 (2), 75.0 (5), 51.4 (ОМе), 42.8 (6), 37.6 (4), 25.9 (Si-CМе3), 18.1 (Si-СМе3), 16.2 (6-Me), -4.4 (Si-Me), -4,5 (Si-Me). Calcd for C22Н34О3Si: С, 70.52; H, 9.17. Found: С, 70.72; H, 9.42.
(5S,6R)-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенилокта-2Е,7Е-диеновая кислота (Н)
К раствору сложного эфира Cr (159 мг, 0,43 ммоля) в 7 мл ацетона было добавлено 5 мл 1N LiOH. Смесь перемешивали при температуре 25С в течение 3 часов, разбавляли 20 мл Et2O и окисляли 1N Hcl до ~ рН4. Органический слой отделили и промывали порциями по 20 мл рассола и воды, сушили (Mq SO4) и выпаривали. Оставшееся масло подвергали хромотографии на силикагеле (40% EtOAc в гексане, содержащем 0,5% АсОН с получе-нием чистой кислоты Н в виде бледножелтого ма-ловязкого масла (145 мг, с выходом 95%).
[]D + 87.0 (с 1.4, CHCl3); EIMS m/z 343 (1; М+-ОН), 303 (5), 275 (9), 257 (4), 229 (62), 213 (16), 171 (22), 143 (37), 131(16), 115 (23), 97 (100), 91 (44); HREIMS m/z 343.2107 (С21H31O2Si, -l.3mmu), 229.1220 (С15Н17O2, +0.9mmu); UV max () 206 (24500), 252 (15600) nm; IR mx 3300-2800 (br), 2956, 2856, 1697, 1651, 1419, 1256, 1097, 836, 693 cm-1; 1Н NMR 10.4 (СО2H; bs, W1/2 100), 7.2-7.4 (Ph-Н5; m), 7.09 (3-Н; ddd, 15.6/7.6/7.6), 6.39 (8-Н; d, 15.9), 6.16 (7-H; dd, 15.9/8.1), 5.85 (2-Н; d, 15.6), 3.78 (5-Н; ddd, 6.0/6.0/4.2), 2.46 (6-Н; m), 2.40 (4-H2; m), 1.12 (6-Me; d, 6.9), 0.92 (Si-CMe3; s), 0.07 (SiMe2; s); 13С NMR 171.6 (1), 149.1 (3), 137.5 (Ph 1’), 131.8 (8), 130.5 (7), 128.5 (Ph 3’/5’), 127.1 (Ph 4’), 126.1 (Ph 2’/6’), 122.7 (2), 74.9 (5), 42.9 (6), 37.6 (4), 25.8 (Si-CMe3), 18.1 (Si-CMe3), 16.1 (6-Me), -4.4 (Si-Me), -4.5 (Si-Me).
2.2.2-трихлорэтиловый эфир 3-(3-хлор-4-метоксифенил)-D-аланина (I)
Образец производного D-хлор-тирозина BОС (160 Mr, 0.35 ммоля) растворяли в 3 мл чистой три-фторуксусной кислоты и оставляли при комнатной температуре на 1 час. Избыток реагента удаляли при пониженном давлении, возвращая желаемый амин 1 в виде трифторацетатной соли (165 мг, 100% выход),
[]D + 1.7 (с 5.2, CHCl3); IR max 3400-2500 (br), 1760, 1680, 1500, 1200, 1130, 1070, 805, 710 cm-1, 1H NMR 8.07 (NH2; br m, W1/2 45), 7.27 (5-H; s), 7.12 (9-H; d, 8.1), 6.88 (8-H; d, 8.1), 4.86/4.67 (СH2CCl3; AB q, -12.0), 4.41 (2-H; bs, W1/2 20), 3.86 (ОMе; s), 3.33 (3-H; dd, -14.4/3.6), 3.22 (3-H’; dd, -14.4/6.6); 13С NMR 167.6 (1), 155.0 (7). 130.9 (5), 128.8 (9), 125.4 (4), 123.1(6), 112.7 (8). 93.4 (ССl3), 75.3 (CН2ССl3), 56.1 (ОMе), 54.2 (2), 34.9 (3).
Соединение J
К перемешиваемому раствору Н (25 мг, 0.07 ммоля) в 3 мл безводного ДМФА в атмосфере арго-на последовательно добавляли пентафордифенил-фосфинат (FDPP, 32 мг, 0.08 ммоля), трифтораце-татную соль (35 мг, 0.07 ммоля) и диизопропилэти-ламин (DIEA, 27 мг, приблизительно 36 мкл, 0.21 ммоля, приблизительно 3 эквивалента). Перемеши-вание продолжали в течение одного часа при 25°С и затем реакционную смесь экстрагировали 20 мл Et2O. Эфирный экстракт промывали 10 мл 1 N НCl, с последующей промывкой 10 мл насыщенного раствора NaHCO3, 20 мл рассола и 20 мл воды, сушили (MgSO4) и выпаривали. Оставшееся бледно желтое масло подвергали хроматографии на сили-кагеле (15% EtOAc в гексане) с получением J в виде бесцветного масла (32 мг, с выходом 65%):
[]D + 11.8 (с 1.2, CHCl3); EIMS m/z; 644/646/648/650 (7/8/6/3; М+-Вu), 570/572/574 (46/100/21), 536/538 (18/15), 394/396 (67/29), 275 (20), 155/157 (29/9), HREIMS m/z 644.0981 (C29H34Cl4NO5Si, -2.13mmu); UV max () 204 (54900), 230 (23200), 248 (19200),184 (3500) nm; IR max 3290, 2980, 2850, 1760, 1680, 1640, 1505, 1380, 1270, 1169, 990, 720 cm-1, 1H NMR unit A 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.87 (3- H; ddd, 15.0/7.8/7.5), 6.37 (8-H; d, 16.2), 6.18 (7-H; dd, 16.2/8.1), 5.82 (2-H; d, 15.0), 3.75 (5-H; ddd, 9.9/6.0/4.8), 2.46 (6-H; m), 2.36 (4-H2; m), 1.11 (6-Me; d, 6.9), 0.91 (SiCMe3; s), 0.07 (SiMe; s), 0.06 (SiMe; s); unit В 7.19 (5-Н; d, 2.1), 7.04 (9-H; dd, 8.4/2.1), 6.85 (8-H; d, 8.4), 5.85 (NH; d, 7.8). 5.08 (2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.81/4.74 (CH2CCl3; AB q, -11.7), 3.87 (ОMе; s). 3.22 (3-H; dd, -14.l/5.7), 3.l2 (3- H’; dd, -14.1/6.0). 13С NMR unit A 165.1 (1), 143.0 (3), 137.6 (9), 132.0 (8), 130.4 (7), 128.5 (11/13), 127.0 (12), 126.0 (10/14), 124.7 (2), 75.0 (5). 42.6 (6). 37.6 (4), 25.9 (Si-CMe3), 18.1 (Si-CМе3), 16.5 (6-Me), -4.3 (Si-Me). -4.6 (Si-Me); unit B 170.1 (1), 154.3 (7), 131.1 (5). 128.5 (4/9), 122.6 (6), 112.2 (8), 94.2 (CCl3), 74.8 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
(1',R,5S,6R)-N-l’-(кар6о-2'',2",2"-трихлорэтокси)-2’-(3-хлор-4- метоксифенил)этил-5-трет-бутилдиметилсилилокси-6-метил-8-фенил-окта-2Е,7Е-диенамид (К)
К раствору J (50 мг, 0.07 ммоля) в 4 мл MeCN добавляли 400 мкл 50% водного раствора HF и смесь перемешивали в течение 1 часа при 25°С. Экстракция в 30 мл Et2O с последующим промыва-нием эфирного экстракта 30 мл порциями насы-щенного раствора NaHCO3, рассола и воды, высу-шиванием (MgSO4) и выпариванием давала спирт К в виде бесцветной пены (40 мг, выход 95%)
[]D - 6.1 (с 1.3, CHCl3); EIMS m/z (rel intensity) 587/589/591/593 (M+, < 1%), 552/554/556 (1/2/0.5), 456/458/460/462 (1/2/1/0.2), 342/344/346 (7/8/4), 212/214 (15/5), 195/197 (6/2), 155/157 (99/34), 131 (100), 91 (77); HREIMS m/z 587.0721 (C27H2935Cl4NO5, +7.9mmu); UV max 204 (56500), 230 (22100), 248 (18100), 284 (3600) mm; IR max 3400, 3300, 2980, 1780, 1680, 1640, 1505, 1270, 1180, 1090, 1000, 770 cm-1. 1H NMR unit A 7.2-7.4 (Ph-H5; m), 6.92 (3-H, ddd, 15.3/7.8/7.5), 6.46 (8-H; d, 15.9), 6.14 (7-H; dd, 15.9/8.4), 5.90 (2-H; d, 15.3), 3.65 (5-H; ddd 7.8/5.6/4.0), 2.39 (6-H/4-H2; bm), 1.78 (OH; bs, W1/2 40 Hz), 1.14 (6-Me; d, 6.9), unit В 7.18 (5-Н; d, 1.8), 7.03 (9-Н; dd, 8.4/1.8), 6.84 (8-Н; d, 8.4), 5.97 (NH; d, 7.8), 5.06 (2-H; ddd, 7.8/6.0/5.7), 4.79/4.72 (CH2CCl3; AB q, -12.0), 3.86 (ОMе; s), 3.20 (3-H; dd, - 14.1/5.7), 3.10 (3-H’; dd. -14.1/6.0). 13С NMR unit A 165.3 (1), 142.6 (3), 137.0 (9), 131.7 (8), 131.0 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (12), 126.1(10/14), 125.0 (2), 73.8 (5), 43.2 (6), 37.2 (4), 16.8 (6-Me), unit B 170.2 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (9), 128.3 (4), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (CCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
3-(трет-Бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропановая кислота (М).
К раствору 3-амино-2.2-диметилпропан-1-ола (L) (3 г, 29 ммолей) в 51 мл 10% раствора триэта-ноламина в МеОН добавляли ди-трет-бутил дикар-бонат (6.7 г, 31 ммоль) и смесь перемешивали при 25°С в течение 1 часа. После удаления растворите-ля, остаток растворяли в СН2Сl2 (30мл) и раствор дважды промывали 1М раствором КНSO4 (рН 2) и один раз насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало 5.8 г, (выход 93%) 3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропанола в виде белого твердого ве-щества, которое непосредственно использовали для следующей стадии без дальнейшей очистки (выше 95% чистоты по данным ЯМР анализа), т.пл 70.5-71.5 C;
IR max 3350, 1685, 1456 cm-1; 1H NMR 4,87 (NH;, br s), 3.72 (ОН; br s), 3.19 (1-H2; d, 5.1), 2.95 (3-H2; d, 6.0), 1.44 (CMe3; s), 0.85 (2-Me2; s); 13С NMR (CDCl3) 157.6 (BОС CО), 79.7 (CMe3), 68.1(1), 47.1 (3), 36.7 (2), 28.3 (СMe3), 22.4 (2-Ме2).
К раствору спирта 3-(трет-бутоксикарбонил)амино-2,2-диметилпропанола (5.3 г, 25.9 ммоля) и периодата натрия (16.6 г, 77.7 ммоля) в четыреххлористом углероде (52 мл) аце-тонитриле (52 мл) и воде (78 мл) добавляли гидрат треххлористого рутения (122 мг) и смесь переме-шивали при 25°С в течение 1 часа. Смесь отфиль-тровывали через целит и добавляли насыщенный раствор карбоната калия в воде (50 мл). Водный слой отделяли, промывали эфиром (20 мл), подкис-ляли НCl до рН 2 при 0°С и экстрагировали СН2Сl2 (и экстрагировали 3 раза по 30 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало остаток, который сначала подвер-гали флеш хроматографии с обращенной фазой на С18 кремниевой колонке (ODS 120 А, 50 до 90% МеОН) и затем кристаллизовали из эфира с полу-чением 3.7 г, (выход 66%) М в виде белого твердого вещества. т.пл. 106-108°С;
EIMS m/z (геl intensity) 217 (0.1), 161(11), 98 (25), 88 (71), 57 (100); HREIMS m/z 217.1292 (С10Н19NO4, +2.2mmu); IR max 3450-2500, 1710, 1694, 1510 cm-1; 1H NMR of major conformer 5.03 (NH; br s), 3.26 (3-H2; m), 1.45 (СМе3; s), 1.24 (2-Me2; s); 13С NMR (CDCl3) 183.2 (l), 156.3 (BОС CО), 79.6 (CМе3), 49.5/47.9 (2/3), 28.4 (СMe3), 22.9 (2-Ме2).
Аллил (2S)-2-гидрокси-4-метилпентаноат (N).
К раствору 2.66 г L-лейциновой кислоты (20 ммолей) и 1.74 г бикарбоната натрия (20 ммолей) в 30 мл воды при 0°С добавляли 30 мл раствора 6.44 г тетрабутиламмоний хлорида (20 ммолей) и 1.74 мл аллилбромида (20 ммолей) в CH2Cl2. После ин-тенсивного перемешивания смеси в течение 24 ча-сов, СН2Сl2 выпаривали. Добавляли около 50 мл воды и водный слой экстрагировали четыре раза Еt2О. Эфирный раствор сушили над безводным сульфатом натрия и затем выпаривали. Остаток пропускали через короткую Si колонку с получени-ем 3.21 г аллилового эфира N (выход 93%) в виде бесцветного масла,
[]D - 8.4 (с 1.1, CHCl3); IR max 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm-1; 1Н NMR 5.92 (allyl 2-Н; m), 5.34 (allyl 3-Hz; dd, 17.4/1.1), 5.28 (allyl 3-HE; dd, 10.5/1.1), 4.67 (allyl 1-H2; d, 5.7), 4.23 (2-H; br s), 2.64 (ОН; br s), 1.89 (4-H; m), 1.57 (3-Н2; m), 0.96 (5-H3; d, 6.5), 0.95 (4-Me; d, 6.7), 13С NMR 175.3 (1), 131.4 (allyl C-2), 118.6 (3), 68.9 (2), 65.7 (allyl C-1), 43.2 (3), 24.1 (4), 23.0 (5), 21.3 (4-Me).
Аллил (2S)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил) ами-но-2',2'-диметилпропаноилокси]-4-метилпентаноат (О).
К раствору 0.8 г М (3.7 ммоля), 0.76 г N (4.4 ммоля) и 92 мг DМАР в 10 мл сухого СН2Cl2 при 0С добавляли 0.84 г DDС (4.1 ммоля) в СН2Сl2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 3 часов и фильтровали. Фильтрат промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили (Na2SO4) и выпаривали в вакууме. Флеш хромато-графия (силикагель, 5% ЕtOАс/гексан) давала 1.0 г (выход 92°/о) чистого О в виде бесцветного масла, Rf 0.68 (17:83 ЕtOАс/гексан),
[]D - 29.4 (с 18.1, CHCl3); EIMS m/z (rel inten-sity) 371 (2, M+), 242 (13), 184 (12), 126 (20), 84 (100); HREIMS m/z 371.2317 (C19H33NO6, -0.9mmu), IR (neat) max 3385, 2963, 1731, 1720, 1513 cm-1, 1H NMR (300 MHz, CDCl3) unit C 5.39 (NH; obscured br s), 3.33 (3-Н; dd -13.5/7.4), 3.27 (3-Н’, dd, -13.5/5.9), 2.78 (2-Н, m), 1.44 (СМез; s), 1.23 (2-Ме; s), 1.22 (2-Me; s), unit D 5.91 (allyl 2-H, ddt, 16.6/10.3/6.0 Hz), 5.34 (allyl 3-HZ; bd, 16.6), 5.27 (allyl 3-HE; bd, 10.3), 5.08 (2-H; dd, 9.6/3.6), 4.65 (allyl 1-H2; m), 1.6-1.9 (3-H2/4-H; m), 0.94 (5-H3; d, 6.3), 0.94 (4-Me; d, 7,3). 13С NMR unit С 176.5 (1). 156.3 (BОС CО), 79.0 (CМе3), 48.6 (3), 44.0 (2), 28.4 (СMe3). 22.2/23.0 (2-Ме2); unit D 170.6 (1), 131.4 (allyl С-2), 119.1 (allyl С-З), 70.9 (2), 66.0 (allyl C-l), 39.5 (3), 24.8 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме).
(2S)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил)aмино-2’.2’-диметилпропаноилокси]-4-метилпентановая кисло-та (Р).
К 10 мл раствора 180 мг (0.49 ммоля) О и 60 мг (0.05 ммоля) тетракис(трифенилфосфин)палладия в сухом ТГФ (в атмосфере аргона) медленно добав-ляли 470 мкл (5.4 ммоля) сухого морфолина в тече-ние 10 минут. После перемешивания в течение 50 минут, добавляли 40 мл эфира и раствор промыва-ли 1 N НCl (40 мл) и затем экстрагировали насы-щенным раствором бикарбоната натрия (2 раза по 30 мл). Водный экстракт подкисляли раствором 0.5 N НCl и экстрагировали эфиром (40 мл). Эфирный экстракт промывали водой (2 раза по 30 мл), суши-ли (MgSO4) и упаривали в вакууме с получением Р в виде бесцветного подвижного масла (152 мг, выход 95%):
[]D - 22.2 (с 2.2, CHCl3); EIMS m/z (геl intensi-ty) 331 (1, М+), 275 (1), 258 (4), 231 (9), 202 (36), 174 (13), 144 (31). 126 (16), 114 (14), 98 (54), 88 (50), 84 9100); HREIMS m/z 331.2004 (C16H29NO6, -1.0mmu). 1H NMR (CDCl3) unit С 5.41 (NH; dd, 5.7/5.4), 3.30 (3-Н2; m); 2.68 (2-Н; m), 1.43 (CMe3; br s), 1,22 (2-Me, s), 1.21 (2-Me; s); unit D 6.47 (l-OH, br s, W1/2 35), 5.09 (2-Н; dd, 9.3/2.7), 1.7-1.9 (3-H2/4-H; m), 0.97 (5-H3; d, 6.0), 0.94 (4-Me, d, 6.0). 13С NMR (CDCl3) unit С 176.5 (1), 156.5 (BОС СО), 79.3 (CМе3). 48.6 (3), 44.0 (2), 28.3 (СMe3), 23.0 (2-Ме), 22.2 (2-Ме), unit D 175.4 (1), 70.6 (2), 39.5 (3), 24.8 (4), 23.0 (5), 21.4 (4-Ме).
Соединение О.
К раствору спирта К (80 мг, 0.14 ммоля), кис-лоты Р (68 Mr, 0.21 ммоля) и DМАР (4 мл) в сухом CH2Cl2 (4 мл), перемешиваемому при 0°С в атмо-сфере аргона, добавляли DDC (44 мг, 0.21 ммоля) в сухом СН2Сl2 (1 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 минут, время в течение которого обра-зовывался белый осадок, и затем позволяли нагреться до комнатной температуры и перемеши-вали дополнительно еще 4 часа. Осадок офильтро-вывали и фильтрат разбавляли Et2O (40 мл) и про-мывали последовательно разбавленным раствором НCl (1 М, 40 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (40 мл), и рассолом (40 мл). Эфирный слой сушили (Mg2SO4) и выпаривали в вакууме с получением воскообразного твердого вещества. Хроматография (силикагель, ЕtOАс:гексан 1:3) дает чистый Q виде бесцветного вязкого масла (103 мг, выход 84%),
[]D - 3.1 (с 2.9, CHCl3); EIMS m/z 800/802/804/806 (<1, М+-С5Н8O2), 415/417/419/421(5/3/3/2), 342/344/346 (7/9/4), 286/288/290 (2/6/2), 207 (34), 178 (22), 155/157 (66/24), 131 (36), 91(70), 70 (100); HREIMS m/z 800.2179 (С38Н48N2O835Сl4, -1.4mmu): UV (МеОН) max () 204 (51200), 230 (18500), 248 (17200), 282 (2200) nm; IR (NaCl) max 3376, 2965, 1755, 1728, 1712, 1678, 1504, 1258, 1150, 1067, 732 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A: 7.28-7.33 (10-H/14-H/11-H/13-H; m), 7.22 (12-H; m), 6.78 (3-H; ddd, 15,8/6.4/6.3), 6.40 (8-H; d, 15.8), 6.01 (7-H; dd, 15.8/8.7), 5.88 (2-H; d, 15.8), 5.06 (5-H; bm, W1/2 20 Hz), 2.62 (6-H; m), 2.53 (4-Н2; bm. W1/2 15 Hz), 1.12 (6-СН3; d, 6.8); unit B 7.18 (5-Н; d, 2.0), 7.05 (9-Н; dd, 8.5/2.0), 6.83 (8-H; d, 8.5), 6.49 (NH; d, 7.9), 5.06 (2-H; bm, W1/2 20 Hz), 4.79/4.70 (СH2CCl3; AB q, -11.7), 3.85 (ОСH3; s), 3.20 (3-Hb; dd, -14.1/5.8), 3.07 (3-Ha; dd, -14.1/6.7), unit C 5.38 (NH; bt, 6.5), 3.27 (3-H2; d, 6.5), 1.20 (2-СН3; s), 1.15 (2-СН3’; s), unit D 4.92 (2-H; dd, 10.0/3.8), 1.72 (4-H; bm, W1/2 Hz), 1.67 (3-Hb; ddd, -14.l/10.0/5.0/), 1.56 (3-Ha; ddd, - 14.1/9.1/3.8), 1.43 (СО2СМе3, s), 0.86 (4-CH3; d, 6.4), 0.82 (5-H3; d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.4 (1), 139.3 (3), 136.9 (9), 131.7 (8), 130.1(7), 128.6 (11/13), 127.5 (12), 126.2 (10/14), 125.4 (2), 76.5 (5), 41.1 (6), 33.4 (4), 16.7 (6-Me); unit B 170.0 (1), 154.1 (7), 131.2 (5), 128.8 (4), 128.5 (9), 122.3 (6), 112.1 (8), 94.3 (CH2CCl3), 74.6 (CH2CCl3), 56.1 (7-OMе), 53.2 (2), 36.6 (3), unit C 176.9 (1), 156.4 (CO2CMe3), 79.1 (СО2CМе3), 48.7 (3), 44.0 (2), 22.8 (2-Ме’); 22.3 (2-Ме’); unit D 170.7 (1), 71.4 (2), 39.5 (3), 28.4 (СО2CMe3), 24.8 (4), 23.0 (4-Ме), 21.4 (5).
Аминокислота R.
К аминокислоте Q (100 мг, 0.11 ммоля) добав-ляли активированную цинковую пыль (400 мг, из-быток) и АсОН (4 мл). Гетерогенную смесь подвер-гали воздействию ультразвука в течение 45 минут, перемешивали дополнительно в течение 90 минут при комнатной температуре и затем выливали на целитовую подкладку. Органическое вещество смывали с целитовой подкладки СНзСl2. Раствори-тель удаляли в вакууме, оставляя карбоновую кис-лоту в виде бесцветного аморфного твердого ве-щеcтва.
Полученную неочищенную кислоту без очист-ки растворяли в трифторуксусной кислоте (ТФУК, 5 мл) и позволяли оставаться при комнатной тем-пературе в течение 1 часа. Спустя это время, избы-ток ТФУК удаляли в вакууме и получающееся аморфное твердое вещество затем подвергали хро-матографической очистке (Sep-Pak™, силикагель, сначала СН2Сl2, затем 10% МеОН/СН2Сl2) с полу-чением желаемого соединения в виде трифтораце-татаммонийной соли. Повторная лиофилизация водного раствора соли дает свободную аминокис-лоту R в виде бесцветного аморфного твердого вещества (68 мг, выход 91% в двух стадиях); ИК (NaCl)
max 3300, 3200, 2965, 1693, 1606, 1504, 1441, 1259, 1201, 1146, 1066, 727 cm-1. 1H NMR (CD3OD) unit A: 7.33 (10-H/14-H; d, 7.4), 7.28 (11-H/13-H; t, 7.4), 7.18-7.23 (12-H; m), 6.69 (3-H; ddd, 15.6/7.7/7.0), 6.43 (8-Н; d, 15.8), 6.04 (7-Н; dd, 15.8/8.9), 6.00 (2-H; d, 15.6), 5.01 (5-H; ddd, 9.1/6.9/3.1), 2.64 (4-Hb; bm, W1/2 30 Hz), 2.60 (6-H; bm, W1/2 20 Hz), 2.49 (4-Ha; ddd, 15.8/9.1/7.7). 1.13 (6-Me; d, 6.7); unit В 7.18-7.23 (5-H; m), 7.11 (9-H; dd, 8.3/1.6), 6.92 (8-Н; d, 8.3), 4.59 (2-H; bm, W1/2 20 Hz), 3.81 (ОСН3; s), 3.14 (3-Hb; dd, -13.7/4.3), 2.96 (3-H2; m, W1/2 20 Hz), unit C 2.96 (3-Ha; bm, W1/2 20 Hz), 1.31 (2-СН3, s), 1.25 (2-СН3’; s), unit D 4.90 (2-Н; dd, 9.6/4.0), 1.66 (4-H; bm, W1/2 25 Hz), 1.59 (3-Hb; ddd, -14.4/9.6/4.8), 1.53 (3-Ha; ddd, - 14.4/9.1/4.0), 0.81 (4-Me; d, 6.5), 0.74 (5-H3; d, 6.5). 13С NMR (CD3OD) unit A 167.7 (1), 140.7 (3), 138.4 (9). 133.0 (8), 131.7 (7), 129.6 (11/13), 128.5 (12), 127.3 (10/14), 127.1 (2), 78.4 (5), 43.1 (6). 35.7 (4), 17.4 (6-Me), unit B 179.8 (1), 155.2 (7), 132.3 (4), 132.1 (5), 130.1 (9), 123.0 (6), 113.4 (8), 56.6 (7-ОMе), 56.6 (2), 37.8 (3), unit С 176.8 (1), 48.2 (3), 42.2 (2), 23.3 (2-Ме), 23.3 (2-Ме’), unit D 172.0 (1), 73.4 (2), 40.7 (3), 26.0 (4), 23.1 (4-Me), 21.8 (5).
Криптофицин 51
К перемешиваемому раствору аминокислоты Т (75 мг, 0.11 ммоля) в безводном ДМФА (20 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона добавляли диизопропилэтиламин (DIEA, 44 мг, 60 мкл, 0.34 ммоля, приблизительно 3 эквивалента) с последующим добавлением пентафтордифенил-фосфината (FDPP, 55 Mr, 0.14 ммоля, приблизи-тельно 1.3 эквивалента) в ДМФА (2 мл). Смесь пе-ремешивали в течение 12 часов, добавляли Et2O (40 мл) и Н2О (40 мл), сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаточное воскообразное твердое вещество очищали далее с помощью хро-матографии с обращенной фазой (ODC, 10 мкл 30% H2O/MeCN, 3 мл мин-1) с получением Криптофици-на 51 в виде бесцветного аморфного твердого ве-щества (45 мг, выход 61%),
[]D +26.4 (с 0.25, СHCl3); EIМS m/z 652/654 (М+, 3/1), 632/634 (3/2), 426/428 (51/15), 227 (64), 195/197 (64/22), 155/157 (71/15), 131(59), 91(100); HREIMS m/z 652.2936 (С36Н45N2О735Cl, -2.1mmu), UV (МеОН) max () 204 (52000), 228 (20400), 250 (13400), 284 (2800) nm IR (NaCI) max 3376, 3270, 2960, 1747, 1721, 1659, 1536, 1514,1259,1150, 1066, 1013, 980, 694 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.32 (10-H/14-H; dd, 8.0/1.5), 7.29 (11-H/13-H, t, 8.0), 7.24 (12-H; bm, W1/2 15 Hz), 6.77 (3-H; ddd, 15.2/10.8/4.3), 6.40 (8-H; d, 15.8), 6.01 (7-H; dd, 15.8/8.8), 5.76 (2-H; dd, 15.2/1.1), 5.04 (5-H; ddd, 11.1/6.4/1.9), 2.54 (4-Hb/6-H, bm, W1/2 15 Hz), 2.37 (4-Ha; ddd, -14.3/11.1/10.8 ), 1.13 (6-Me; d, 6.8); unit В 7.20 (5-H, d, 2.0), 7.05 (9-H; dd, 8.4/2.0), 6.84 (8-H; d, 8.4), 5.61 (NH; d, 7.8), 4.74 (2-H; ddd, 7.8/7.6/5.4), 3.87 (OMe; s), 3.11 (3-Hb; dd, -14.2/5.4), 3.06 (3-Нa; dd, -14.2/7.6); unit C 7.24 (NH; bm, W1/2 15 Hz), 3.40 (3-Hb; dd, -13.5/8.5), 3.12 (3-Ha; dd, -13.5/3.6), 1.22 (2-Ме, s), 1.15 (2-Ме’, s), unit D 4.85 (2-Н; dd, 10.2/3.6), 1.66 (3-Hb; ddd, - 14.0/10.2/4.6), 1.61 (4-H; bm W1/2 20.0 Hz), 1.33 (3-Ha; ddd, -14.0/9.0/3.6), 0.74 (4- Me; d, 6.6), 0.72 (5-Н3; d, 6.6). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (1), 142.2 (3), 136.7 (9), 131.7 (8), 130.1 (7), 128.6 (11/13), 127.5 (12), 126.1 (10/14), 124.6 (2), 77.0 (5), 42.2 (6), 36.5 (4), 17.3 (6-Me), unit B 170.3 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.5 (4), 128.3 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.2 (2), 35.3 (3); unit С 178.0 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.8 (2-Me), 22.6 (2-Me’), unit D 170.6 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Пример 9 Синтез Криптофицина 52 и Крипто-фицина 53.
К перемешиваемому раствору Криптофицина 51 (75 мг, 0.12 ммоля) в безводном дихлорметане при 0°С в атмосфере аргона добавляли раствор м- хлорпербензойной кислоты (mСРВА, 50 мг, 0.23 ммоля, приблизительно 2 эквивалента на 80% ак-тивный кислород) в дихлорметане (1 мл). Спустя 30 минут реакционной смеси позволяют нагреться до комнатной температуры и перемешивают дополни-тельно в течение 12 часов. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении с получением 1.8:1 смеси Криптофицинов 52 и 53 (по данным ЯМР анализа), соответственно, в виде аморфного твердого вещества. Смесь региоизомерных эпокси-дов растворяли в минимальном количестве ацето-нитрила и подвергали хроматографированию с обращенной фазой (YMCODS, 10 мк, 250 мм х 22.5 мм, 30% H2O/MeCN, 6 мл мин-1) для разделения Криптофицина 52 (37 мг, выход 48%) и Криптофи-цина 53 (19 мг, выход 25°/о).
Спектральные данные для Криптофицина 52
[]D +19.9 (с 0.5, СHCl3), EIMS m/z 668/670 (4/2, М+), 445 (35), 244 (12), 227 (22), 195/197 (66/27), 184 (45),155/157 (38/10), 91 (100), HREIMS m/z 668.2873 (C36H45N2O835Cl, -0.9mmu), 445.2497 (C25H35NO6, -3.3mmu); UV (MeOH) max () 204 (35100), 218 (20900) nm; IR (NaCl) max 3415, 3270, 2960,1748, 1721, 1650, 1536, 1504, 1260, 1192, 1150, 1066, 1013, 800, 698 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.33-7.38 (11-H/12-H/13-H; bm, W1/2 25 Hz), 7.24 (10-H/14-H; m, W1/2; 15 Hz), 6.76 (3-Н; ddd, 15.1/10.8/4.3), 5.71 (2-H; dd, 15.1/1.7), 5.20 (5-H; ddd, 11.0/5.0/1.8), 3.68 (8-H, d. 1.9), 2.92 (7-H, dd, 7.5/1.9), 2.57 (4-Hb; ddd, -14.6/1.8/1.7), 2.45 (4-Ha; ddd -14.6/11.0/10.8), 1.78 (6-Н; bm, W1/2 15 Hz), 1.14 (6-Me; d, 6.9); unit B 7.18 (5-H; d, 2.2), 7.04 (9-H; dd, 8.4/2.2), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.56 (NH; d, 7.9), 4.73 (2-H; ddd, 7.9/7.4/5.3), 3.87 (OMe; s), 309 (3-Hb; dd, -14.6/5.3), 3.05 (3-Ha; dd, - 14.6/7.4); unit C 7.20 (NH; dd, 8.6/3.2), 3.41 (3-Hb; dd, -13.4/.86), 3.10 (3-Ha; dd, -13.4/3.2), 1.22 (2-Me; s), 1.15 (2-Me’, s); unit D 4.82 (2-H; dd, 10.2/3.5), 1.73 (3-Hb; bm, W1/2 20Hz), 1.66 (4-H; bm, W1/2 20 Hz), 1.31 (3-Ha, ddd; -13.8/9.1/3.5), 0.84 (4-Me; d, 6.6), 0.82 (5-H3; d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A 164.9 (1), 141.8 (3), 136.7 (9) 128.7 (11/13), 128.3 (12), 125.6 (10/14),124.7 (2); 75.9 (5), 63.0 (7) 59.0 (8) 40.7 (6), 36.9 (4), 13.5 (6-Me), unit B 170.3 (1), 154.1 (7) 130.9 (9) 129.5 (4), 128.5 (9), 122.6 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-OMe), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С 178.0 (1), 465 (3), 42.8 (2), 22.8 (2-Me), 22.8 (2-M’e), unit D 170.5 (1), 71.2 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.2 (5).
Спектральные данные для Криптофицина 53
[]D +20.8 (с 1.7, СHCl3); EIMS m/z 668/670 (5/4, M+), 445 (32), 244 (15), 227 (24), 195/197 (64/21), 184 (60), 155/157 (33/9), 91 (100); HREIMS m/z 668.2853 (С36Н45O835Сl, 1.1mmu); UV (MeOH) max () 204 (38700), 218 (22900) nm; IR (NaCl) max 3415, 3280, 2917, 2849, 1748, 1722, 1660, 1504, 1465, 1260, 1190, 1150, 1066, 755 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.29-7.36 (11-H/12-H/13-H, bm, W1/2 20 Hz), 7.23 (10-H/14-H; dd, 8.3/1.7), 6.77 (3-H; ddd, 15.1/10.9/4.3), 5.81 (2-H; dd, 15.1/1.3), 5.17 (5-H; ddd, 11.2/4.9/1.8), 3.58 (8-H; d, 1.7), 2.90 (7-H; dd, 7.8/1.7), 2.67 (4-Hb; ddd, 14.7/11.2/10.9), 2.56 (4-Ha; dddd, 14.7/4.3/l.8/l.3), 1.67-1.78 (6-H, bm, W1/2; 45), 1.03 (6-СН3; d, 7.1); unit B 7.21 (5-H; d, 2.1), 7.07 (9-H, dd, 8.5/2.1), 6.84 (8-H; d, 8.4), 5.90 (2-NH; d, 7.9), 4.75 (2-H; ddd, 7.9/7.9/4.9), 3.85 (7-OCH3; s), 3.14 (3-Hb; dd, 14.5/4.9), 3.03 (3-Ha; dd, 14.5/7.9), unit C 7.29-7.36 (3-NH; bm, W1/2 25), 3.43 (3-Hb; dd, 13.7/8.8), 3.10 (3-Нa; dd, 13.7/3.4), 1.23 (2-CH3; s), 1.17 (2-СН3’, s); unit D 4.92 (2-H; dd, 10.3/3.2), 1.67-1.78 (3-Hb/4-H; bm, W1/2 45), 1.48 (3-Нa; ddd, 13.9/8.8/3.2), 0.89 (4-СН3; d, 6.6), 0.86 (5-H3; d, 6.6). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1(1), 142.0 (3), 137.0 (9), 128.5 (11/13), 128.5 (12), 125.3 (10/14), 124.6 (2), 76.7 (5), 63.2 (7), 56.2 (8), 40.8 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.4 (1), 154.0 (7), 130.8 (5), 129.7 (4), 128.2 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.4 (2), 35.3 (3), unit С 177.9 (1). 46.4 (3), 42.7 (2), 23.0 (2-Ме), 22.7 (2-Ме’); unit D 170.5 (1), 71.3 (2), 39.2 (3), 24.7 (4), 22.8 (4-Ме), 21.3 (5).
Пример 10 Синтез Криптофицина 55
К раствору Криптофицина 52 (6 мг, 0.009 ммоля) в 0.6 мл 2:1 смеси 1,2- диметоксиэтан/вода добавляли 2 мкл 12 N раствора НCl. Раствору поз-воляли перемешиваться при комнатной температу-ре в течение 20 часов, нейтрализовали карбонатом калия, фильтровали через 5 мк фильтр и упаривали. Вещество, нерастворимое в ацетонитриле, очища-ли с помощью гель проникающей хроматографии с обращенной фазой на С18 колонке (250 х 10 мм колонка) с использованием 4:1 смеси МеОН/Н2О с получением 3.0 мг Криптофицина 55 (выход 48%).
[]D +42.5 (с 1.1, СHCl3); EIMS m/z 704/706/708 (М+ <1), 668/670 (1.5/0.5, M+-HCl), 445 (6), 226 (8), 195/197 (16/5), 184 (10), 155/157 (33/11), 135 (100), 91 (99), 77 (30); HREIMS m/z 668.2873 (M+-HCl, С36Н45N2O835Cl, - 0.8mmu); UV (МеОН ) max () 204 (48400), 218 (29200), 284 (1600) nm, IR (NaCl) max 3410, 3286, 2959. 1748, 1723, 1666, 1538, 1504, 1455, 1257. 1178, 1066, 753 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.35-7.42 (10-H/11-H/12-H/13-H/14-H; m), 6.78 (3-H; ddd, 15.1/10.6/4.5). 5.78 (2-H; dd, 15.1/1.7), 5.16 (5-H; ddd, 11.1/8.3/2.1), 4.65 (8-H; d, 9.7), 4.01 (7-H; bd, 9.7), 2.69 (4-Hb; dddd, -14.5/4.5/2.1/1.7), 2.50 (6-H; bm, W1/2 15), 2.38 (4-Ha; ddd, -14.5/11.1/10.6), 1.53 (7-OH, s), 1.04 (6-Me, d, 7.1), unit В 7.21 (5-H; d, 2,2), 7.07 (9-H; dd, 8.5/2.2), 6.85 (8-Н; d, 8.5), 5.57 (2-NH; d, 7.8), 4.74 (2-H; ddd, 7.8/7.6/5.2), 3.88 (7-ОСН3, s), 3.13 (3-Hb; dd, 14.5/5.2), 3.05 (3-Ha, dd, 14.5/7.6); unit C 7.21 (3-NH; m), 3.38 (3-Hb; dd, 13.5/8.3), 3.17 (3-Ha; dd, 13.5/4.1), 1.23 (2-СН3; s), 1.17 (2-СН3’; s), unit D 4.93 (2-H; dd, 10.1/3.5), 1.78 (3-Hb; ddd, 13.5/10.1/5.0), 1.72 (4-H; bm, W1/2 20), 1.43 (3-Ha; ddd, 13.5/8.8/3.5), 0.92 (4-СН3; d, 6.6), 0.92 (5-Н3, d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (C-1), 142.4 (C-3), 138.4 (C-9), 129.0 (C-11/13), 128.3 (C-12), 128.0 (C-10/14), 124.6 (C-2), 76.1 (C-5), 74.1 (C-7), 62.0 (C-8), 38.4 (C-6), 36.5 (C-4), 8.6 (6-Me); unit B 170.3 (C-1), 154.1 (C-7), 130.9 (C-5), 129.6 (C-4), 129.2 (C-9), 122.6 (C-6), 112.3 (C-8), 56.1(7-ОMе), 54.3 (C-2), 35.3 (C-3); unit С 177.8 (C-1), 46.5 (C-3), 42.8 (C-2), 22.9 (2-Me), 23.0 (C-2-Me’); unit D 170.3 (C-1), 71.3 (C-2), 39.7 (C-3), 24.8 (C-4), 22.7 (4-Me), 21.6 (C-5).
Получали также соответствующий диол, Криптофицин 56 (2.8 мг, выход 44%).
Пример 11 Синтез Криптофицина 57
Небольшое количество PtO2 (около 1 мг) до-бавляли в склянку, содержащую 0.5 мл СН2НСl2. Удаляли воздух из склянки и вводили H2 и смесь перемешивали при комнатной температуре в тече-ние 20 минут. Добавляли раствор, содержащий 10.2 мг Криптофицина 52 (0.015 ммоля) в CH2HCl2 (0.3 мл), и смесь перемешивали при комнатной тем-пературе в течение 20 минут. Катализатор удаляли фильтрованием через целит/хлопковую ткань и растворитель удаляли в вакууме. Жидкостная гель проникающая хроматография с обращенной фазой (ODS, 10 мк, 250 х 22.5 мм, MeCN/H2O (3:1), 5 мл мин-1) давала чистый Криптофицин 57 (9.1 мг, вы-ход 89%).
[]D +3.4 (c=4.5, СHCl3); EIMS m/z 670/672 (М+, 9/3), 447 (10), 246 (63), 229 (20), 195/197 (78/25), 184 (58), 155/157 (39/13), 128 (21), 91 (100), 77 (23), HREIMS m/z 670.3037 (С36H47N2О835Cl, -1.6mmu); UV (МеОН) max () 204 (31400), 218 (12000), 204 (1200) nm; 1H NMR (CDCl3) unit A: 7.30-7.37 (11/12/13-H, bm), 7.23 (10/14-H, bdd, 7.9, 1.9), 5.03 (5-H, ddd, 9.0, 5.6, 3.4), 3.66 (8-H, d, 2.1), 2.89 (7-H, dd, 7.7, 2.1), 2.27 (2-Hb, ddd, 14.3, 8.7, 6.2), 2.04 (2-Ha, ddd, 14.3. 8.8, 6.8), 1.64-1.75 (6-H/4-H2, bm), 1.61 (3-H2, bm, W1/2 25), 1.11 (6-СН3, d, 7.1), unit B: 7.19 (5-H, d, 2.1), 7.04 (9-H, dd, 8.3, 2.1), 6.83 (8-H, d, 8.3), 5.55 (2-NH, d, 8.3), 4.65 (2-H, ddd, 8.3, 7.3, 5.3), 3.87 (7-OCH3, s), 3.16 (3-Hb, dd, 14.3, 7.3), 3.08 (3-Ha, dd, 14.3, 5.3), unit С: 6.91(3-NH, dd, 6.4, 6.4), 3.41 (3-Hb, dd, 13.5, 6.4), 3,30 (3-Ha, dd, 13.5, 6.4), 1.21 (2-СН3, s), 1.13 (2-СН3’, s), unit D: 4.80 (2-H, dd, 9.8, 4.1), 1.64-1.75 (3-Hb/4-H, bm), 1.34 (3-Ha, ddd. 15.4, 10.1, 4.1), 0.86 (4-СН3, d, 6.5), 0.84 (5-Н3, d, 6.5); 13С NMR (CDCl3) unit A: 172.6 (1), 136.9 (9), 128.7 (11/13), 128.5 (12), 125.6 (10/14), 76.8 (5), 63.4 (7), 59.2 (8), 40.2 (6), 36.2 (2), 32.2 (4), 21.4 (3), 13.6 (6-Me), unit B: 170.4 (1), 154.0 (7), 131.1 (5), 130.0 (4), 128.5 (9), 122.5 (6), 112.2 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.6 (1), 47.0 (3), 43.1 (2), 22.5 (2-Me’), 22.4 (2-Me), unit D: 171.7 (1), 72.0 (2), 39.0 (3), 24.6 (4), 22.8 (4-Me), 21.8 (5).
Пример 12 Синтез Криптофицина 58
К перемешиваемому раствору Криптофицина 57 (5.5 мг, 0.008 ммоля) в 3 мл хлороформа, сво-бодного от этанола, при температуре около -60°С добавляли TMSCI (использовали в таком виде, как получали из Aldrich, около 4.5 мг, около 5.2 мкл, около 0.04 ммоля). Реакционную смесь перемеши-вали в течение 20 минут, время за которое не оста-валось исходного материала. Затем летучие ком-поненты, удаленные при пониженном давлении, оставляли аморфное твердое вещество. Это веще-ство поглощали ацетонитрилом и подвергали об-работке с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии (ODS, 10 мк, 250 х 22.5 мм, MeCN/H2O (3:1), 5 мл мин-1) для выделения чистого Криптофицина 58 (5.4 мг, выход 93%) в виде основ-ного продукта.
[]D +7.2 (c=2.1, СHCl3); EIMS m/z 706/708/710 (М+, 27/23/8), 670/672 (M+ -HCI, 14/13), 583 (54), 581 (53), 485 (23), 483 (21), 447 (34), 294 (21), 282 (39), 246 (57), 195/197 (87/27), 184 (73), 155/157 (45/10), 128 (30), 91(95), 77 (30), 69 (100), HREIMS m/z 706.2844 (С36Н48N2O835Cl2, -5.6mmu), m/z 670.3070 (M+-HCl, С36Н47N2O835Cl, -4.9mmu); UV (МеОН) max () 204 (331900), 218 (11800), 284 (1800) nm; 1H NMR (CDCl3) unit А: 7.34-7.42 (10/11/12/13/14-Н, bm), 5.01 (5-Н, ddd, 9.6, 8.3, 2.5), 4.65 (8-Н, d, 9.6), 4.00 (7-Н, dd, 9.6, 1.9), 2.42 (6-Н, ddq, 8.3, 1.9, 7.0), 2.29 (2-Hb, ddd, 14.3, 9.4, 4.5), 2.06 (2-Ha, ddd, 14.3. 8.3, 7.5), 1.62-1.82 (3-Н2/4-Н2, bm), 0.99 (6-СН3, d, 7.0), unit В: 7.20 (5-H, d, 2.1), 7.06 (9-H, dd, 8.3, 2.1), 6.84 (8-H, d, 8.3), 5.62 (2-NH, d, 8.3), 4.61 (2-H, ddd, 8.3, 7.7, 5.4), 3.87 (7-ОСН3, s), 3.17 (3-Hb, dd, 14.3, 7.7), 3.11 (3-Ha, dd, 14.3, 5.4), unit С: 6.97 (3-NH, dd, 6.4, 6.2), 3.43 (3-Hb, dd, 13.4, 6.2), 3.31 (3-Ha, dd, 13.4, 6.4). 1.23 (2-СН3, s), 1.16 (2-СН3’, s), unit D: 4.93 (2-H, dd, 10.0, 4.0), 1.86 (3-Hb, ddd, 14.0, 10.0, 5,5), 1.58 (3-Ha, ddd, 14.0, 8.3, 4.0), 0.97 (4-СН3, d, 6,8), 0.94 (5-Н3, d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A: 172.8 (1), 138.7 (9), 129.0 (12), 128.9 (11/13), 128.0 (10/14), 76.5 (5), 73.8 (7), 62.1 (8), 38.1 (6), 35.9 (2), 31.8 (4), 21.4 (3), 8.7 (6-Me), unit В: 170.6 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.2 (4), 128.5 (9). 122.4 (6). 112.2 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.4 (2), 35.0 (3) unit С: 177.2 (1), 47.0 (3), 43.2 (2), 22.5 (2-Ме’), 22.4 (2-Ме). unit D: 171.8 (1), 72.0 (2), 39.4 (3), 24.9 (4), 22.9 (4-Ме), 21.7 (5).
Пример 13 Синтез Криптофицина 61
К раствору Криптофицина 53 (5 мг, 0.007 ммоля) в сухом бензоле добавляли сульфид трифе-нилфосфина (4 мг, 0.014 ммоля) с последующим добавлением 0.65 мкл трифторуксусной кислоты в виде раствора в сухом бензоле (100 мкл). Раствору позволяли перемешиваться при комнатной темпе-ратуре в течение 6 часов, нейтрализовали бикар-бонатом натрия, фильтровали и упаривали. Оста-ток разделяли между водой и СH2Сl2. Вещество, растворимое в СН2Cl2, очищали с помощью гель проникающей хроматографии с обращенной фазой на С18 колонке с использованием 4:1 смеси Ме-ОН/Н2О с получением чистого Криптофицина 61 (1.9 мг, выход 37%).
[]D +28.4 (c=0.7, СНСl3), EIMS m/z 684/686 (М+, not observed), 652/654 (M+-S, 5/4), 426/428 (90/29), 294 (10), 227 (100), 195/197 (57/20), 184 (20), 155/157 (34/9), 131 (45), 129 (44), 91 (76), 77 (27), HREIMS m/z 652.2973 (M+-S, С36H45N2O735Cl, -5.8mmu); UV (MeOH) max () 204 (26700), 218 (11600), 284 (820) nm; IR (NaCl) max 3410, 3271, 2958, 1749, 1724, 1670, 1503, 1463, 1258, 1176, 1066, 758 cm-1. 1H NMR (CDCl3) unit A 7.29-7.34 (11/12/13-H; m), 7.25 (10/14-H, bd, 6.6), 6.73 (3-H, ddd, 15.2/10.6/4.5), 5.66 (2-H; dd, 15.2/1.7), 5.22 (5-Н; ddd, 11.2/4.2/2.0), 3.68 (8-H, d, 5.1), 3.01 (7-H, dd, 8.4/5.1), 2.52 (4-Hb, dddd, - 14.4/4.5/2.0/1.7), 2.41 (4-Ha, ddd, -14.4/11.2/10.6), 1.68-1.74 (6-H, m), 1.14 (6-Me, d, 6.9); unit В 7.18 (5-H, d, 2.2), 7.04 (9-H, dd, 8.4/2.2), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.45 (NH, d, 7.8), 4.75 (2-H, ddd, 7.8/7.3/5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.09 (3-Hb, dd, -14.5/5.4), 3.05 (3-Ha, dd, -14.5/7.3); unit C 7.17 (NH, dd, 8.3, 3.9), 3.39 (3-Hb, dd, -13.5/8.3), 3.14 (3-Ha, dd, -13.5/3.9), 1.23 (2-Me, s), 1.16 (2-Me’, s), unit D 4.86 (2-H, dd, 10.2/3.4), 1.77 (3-Hb, ddd, -14.0/10.2/4.9), 1.68-1.74 (4-H, m), 1.42 (3-Ha, ddd, -14.0/8.7/3.4), 0.92 (4-Me, d, 6.6), 0.88 (5-Н3, d, 6.4). 13С NMR (CDCl3) unit A 164.9 (1). 141.7 (3), 138.3 (9), 128.8 (11/13), 128.0 (12), 126.7 (10/14), 124.7 (2), 76.6 (5), 45.8 (7), 43.9 (8), 43.9 (6), 36.6 (4), 16.0 (6-Me), unit В 170.2 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.4 (4), 128.3 (9). 122.8 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.2 (2), 35.3 (3), unit С 177.9 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.9 (2-Ме), 22.8 (2-Ме’). unit D 170.4 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.7 (4), 22.7 (4-Me), 21.4 (5).
Пример 14 Синтез Криптофицина 81
Соединение S
Соединение S представляет трет-бутилдифенилсилиловый эфир (TBDVS) производ-ное F.
Соединение Т
К 10 мл ТГФ раствора п-метоксибензилтрифенилфосфоний хлорида (1 ммо-ля) при -78°С добавляли 400 мкл бутиллития (1 ммоль, 2.5 М в гексане). Смесь перемешивали в течение 30 минут и затем добавляли 2.64 мл алик-воту 3 мл ТГФ раствора альдегида S (75.0 мг, 0.24 ммоля) при -78°С. Спустя 30 минут, охлаждение прекращали, но перемешивание продолжали до-полнительно в течение двух часов, время в течение которого температура медленно поднималась до 25°С. Реакцию гасили насыщенным раствором хлористого аммония и ТГФ упаривали. Продукт экстрагировали в гексан дважды и объединенные органические экстракты промывали рассолом, сушили и затем концентрировали. Остаток перено-сили в флеш колонку с силикагелем (3% ЕtOАс/гексан) и получали 63 мг соединения Т и 40 мг смеси T и Z изомеров.
Соединение Т имело следующие свойства:
[]D +110.5 (СНСl3, с 0.75), IR max 2956, 2857, 1724, 1608, 1511, 1428, 1250, 1173, 1111, 1037, 821, 703, 505 cm-1, EIMS m/z (relative intensity %) 497 (<1, М+-ОMе), 471 (31, М+-Вu), 367 (56), 294 (31), 199 (75), 135 (100); high-resolution EIMS 497.24770 (calcd for C32H37O3Si, +3.5mmu, M+-OMe), 471.19859 (calcd for С29Н31О4Si, +0.6mmu, M+-Bu). 1H NMR 7.71/7.68 (SiPh2, 2'-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H; d; 6.5), 7.45/7.43 (SiPh2, 4'-H/4''-H; t ; 7.4), 7.39/7.38 (SiPh2, 3'-H, 5'-H/3"-H, 5"-H; dd; 7.4, 6.5), 7.24 (10-H, 14-H; d; 8.7), 6.85 (11-H, 13-H; d; 8.7), 6.79 (3-H; dt; 15.7, 7.5), 6.19 (8-H, d, 16.1), 6.00 (7-H, dd, 16.1, 8.1), 5.66 (2-H, dt, 15.7, 1.3), 3.82 (5-H, m), 3.81 (-ОСН3, S). 3.69 (СО2CH3, S), 2.41 (6-H, m), 2.36 (4-H, m), 2.30 (4-H, m), 1.12 (6-СН3, d, 7.0), 1.09 (СМе3, S). 13С NMR 166.7 (1), 158.8 (12), 146.0 (3). 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 134.1/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 130.4 (9), 130.0 (8), 129.7/129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 129.5 (7), 127.6/127.5 (3’, 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 122.8 (2), 113.9 (11, 13), 76.4 (5), 55.2 (ОСН3), 51.3 (СО2CH3), 42.1 (6), 37.1 (4), 27.0 (CMe3), 19.5 (CMe3), 16.2 (6-СН3).
Дополнительно соединение Т получали из смеси Т и Z изомеров. 40 Mr смеси Е и Z изомеров растворяли в 4 мл раствора бензола, содержащего тиофенол (0.002 М) и ACN (0.006 М). Смесь нагре-вали при кипячении с обратным холодильником в течение 5 часов. Обработка и очистка на короткой силикагелевой колонке давала 37.2 мг соединения Т.
Соединение U
К 6 мл ацетонового раствора соединения Т (76 мг, 0.15 ммоля) добавляли 4.4 мл 1 N LiОН в воде. Прозрачный раствор перемешивали в течение но-чи. Ацетон упаривали и водный раствор подкисля-ли 1 N раствором НCl. Продукт три раза экстраги-ровали EtOAc Органический слой сушили и кон-центрировали. Очистка на силикагелевой колонке (20% EtOAc/ гексан с 0.5 % АсОН) давала 62.2 мг кислоты соединения U (выход 81%);
[]D +120.8 (СHCl3, с 3.1), IR max 2960, 2858, 1695, 1650, 1511, 1427, 1250, 1111, 1036, 702 cm-1; 1Н NMR 7.73/7.70 (SiPh2, 2’-Н, 6’-Н/2’’-Н, 6’’-Н, d, 7.0), 7.50 (SiPh2, 4’-Н/4’’-Н, m), 7.44 (SiPh2, 3’-Н, 5’-Н/ 3’’-Н, 5’’-Н, m), 7.29 (10-Н, 14-Н, d, 8.6), 6.96 (3-Н; dt; 15.6, 7.8), 6.89 (11-Н, 13-Н, d, 8.6), 6.22 (8-Н, d, 16.0), 6.03 (7-Н, dd, 16.0, 7.9), 5.70 (2-Н, d, 15.6), 3.88 (5-Н, m), 3.83 (ОСН3, S), 2.43 (6-Н, m), 2.40 (4-Н, m), 1.17 (6-СН3, d, 6.9), 1.14 (СМе3, s); 13С NMR, 171.7 (1), 158.8 (12), 148.8 (3), 135.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 133.9/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 130.3 (9), 130.0 (8), 129.7 (SiPh2, 4’/4’’), 129.4 (7), 127.6 (SiPh2, 3’, 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 122.5 (2), 113.9 (11, 13), 76.2 (5), 55.2 (ОСН3), 42.3 (6), 37.1 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CМе3), 16.0 (6-СН3).
Соединение V
Соединение U (59 мг, 0.12 ммоля), трифтора-цетатную соль соединения 1 (57.2 мг, 0.12 ммоля) и диизопропилэтиламин (DIEA, 62 мкл, 0.36 ммоля) растворяли в 1.5 мл сухого ДМФА. К этому рас-твору добавляли пентафордифенифосфинат (FDPP, 55 мг, 0.14 ммоля) в 0.6 мл ДМФА) и реакционную смесь перемешивали в течение двух часов. Добав-ляли эфир и органический слой последовательно промывали 1 N раствором НCl, насыщенного рас-твора бикарбоната натрия, и рассолом, соответ-ственно. Концентрирование и очистка с помощью хроматографии (силикагелевая колонка, 8% ЕtOАс/гексане) давали 74.2 мг соединения V (выход 72%)
[]D + 53.8C (CHCl3, c. 1.6); IR max 3286, 2959, 1760, 1667, 1640, 1607, 1510, 1253, 1174, 1111, 1067, 1027, 703 cm-1 EIMS m/z (relative intensity %) 798/799/800/801/802/803/804/805 (31/14/44/17/23/10/6/3, M+-Bu), 766 (40), 694/695/696/697/698/699/700/701 (70/31/100/38/58/19/14/5), 662 (67), 622 (71), 544 (70), 518 (83); high-resolution EIMS 798.1443 (calcd for C40H40Cl4NO6Si, -6.4mmu, M+-Bu). 1H NMR unit A 7.69/7.65 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H; d; 6.5), 7.41 (SiPh2, 4’-H/4’’-H, m), 7.35 (SiPh2, 3’-H, 5’-H/3’’-H, 5’’-H, m), 7.24 (10-H, 14-H; d, 8.7), 6.85 (11-H, 13-H, d, 8.7), 6.65 (3-H, dt, 15.3, 7.5), 6.20 (8-H, d, 16.1), 6.03 (7-H, dd, 16.1, 8.0), 5.50 (2-H, d, 15.3), 3.81 (OСН3, S), 3.77 (5-H, m), 2.39 (6-H, m), 2.34 (4-H, m), 2.29 (4-H’ m), 1.11 (6-Me, d, 6.9), 1.06 (СМе3, S); unit В 7.15 (5-Н, d, 1.8), 7.00 (9-Н, dd, 8.4, 1.8), 6.83 (8-H, d, 8.4), 5.65 (NH, d, 7.7), 5.01 (2-H, ddd, 7.7, 6.0, 5.5), 4.78/4.72 (СH2CCl3, ABq, - 11.9), 3.86 (ОMе, S), 3.15 (3-H; dd, 6.1, -14.5), 3.08 (3-H’, dd, 5.8, -14.5). 13С NMR unit A 165.1(1), 158.8 (12), 142.5 (3), 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’). 134.2/133.6 (SiPh2, 1’/1’’), 130.4 (9), 129.9 (8), 129.7/129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 129.5 (7), 127.6/127.5 (SiPh2, 3’ 5’/3’’, 5’’), 127.1 (10, 14), 124.6 (2), 113.9 (11, 13), 76.4 (5), 55.2 (ОMе), 42.1 (6), 37.2 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CMe3) 16.6 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (4/9), 122.5 (6), 112.1 (8), 94.2 (ССl3), 74.7 (CH2ССl3), 56.1 (ОMе), 52.9 (2), 36.4 (3).
Соединение W
К раствору соединения V (55.8 мг, 0.065 ммо-ля) в 5.7 мл ацетонитрила добавляли 0.2 мл 49% гидрофторидной кислоты при 0°С. Баню со льдом удаляли через пять минут и реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 17 часов. Продукт экстрагировали в эфир, промывали после-довательно насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Концентрирование и очистка с помощью хроматографии с нормальной фазой (си-ликагелевая колонка, 25% EtOAc/ гексан) давала 31.6 мг соединения W (выход 79%);
[]D -3.7° (СНСl3, с 1.3), IR max 3286, 2961, 1756, 1668, 1634, 1607, 1510, 1251, 1175, 1066, 812 cm-1. 1H NMR unit А 7.27 (10-H, 14-Н, d, 8.5), 6.93 (3-Н, dt, 15.4, 7.6), 6.83 (11-Н, 13-Н. d, 8.5), 6.34 (8-Н, d, 15.9), 5.88 (7-Н, dd 15.9, 8.2), 5.86 (2-Н, d, 15.4), 3.81 (ОMе, S), 3.80 (5-Н, m), 2.40 (6-Н, m), 2.36 (4-Н, m), 1.13 (6-Ме, d, 6.8); unit B 7.17 (5-Н, d, 1.9), 7.05 (9-Н, dd, 8.5, 1.9), 6.83 (8-Н, d, 8.5), 5.90 (NH, d, 7.7), 5.03 (2-Н, ddd, 7.8, 5.9. 5.6). 4.79/4.72 (СH2CCl3, ABq, -11.9), 3.86 (ОСН3, S), 3.20 (3-Н, dd, 6.0, -14.3), 3.09 (3-Н’, dd, 5.9, -14.3). 13С NMR unit A 165.2 (1), 159.1 (12), 142.6 (3), 131.3 (9), 129.8 (7), 128.7 (8), 127.3 (10, 14), 125.0 (2), 114.0 (11, 13). 73.8 (5), 55.3 (ОMе), 43.3 (6), 37.2 (4), 16.9 (6-Me) unit B 170.1 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.5 (4/9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (СCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.0 (2), 36.5 (3).
(2S,2’R)-2-[3’(трет-Бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4- метилпентановая кислота (АС)
Раствор метил(S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропаноата (Х) (10 г, 85 ммолей) в 300 мл приблизительно 9М аммиака в метаноле нагревали до 50°С в откаченной стеклянной ампуле в течение 168 часов, продували аргоном для удаления из-бытка аммиака и затем выпаривали досуха в ваку-уме. Остаток растертый с эфиром оставлял после себя (S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропанамид (5.7 г, выход 66%) в виде твердого белого вещества, т.пл 85.5-87.5°С
[]D +28.7 (с 3.5, МeOH); EIMS m/z (ге1 inten-sity) 88 (19, М-Ме), 85 (35), 73 (69); HREIMS m/z 88.0397 (С3H6NО2, +0.2mmu); IR max 3384, 2960, 1671, 1473 cm-1; 1Н NMR 5.83 (NH; br s), 5.42 (NH; br s), 3.73 (3-H2; m), 2.25 (2-H; m), 1.19 (2-Me; d, 7.2); 13С NMR 180.7 (1), 65.4 (3), 44.0 (2), 14.5 (2-Me). Anal. Found: С, 46.45; H, 8.83. Calcd for С4Н9NO2: С, 46.59; Н, 8.79.
Суспензию (S)-(+)-3-гидрокси-2-метилпропанамида (2.1 г, 20 ммолей) в безводном ТГФ (20 мл) медленно добавляли к 1М комплексу бор-ТГФ (61 ммоль, 61 мл), охлажденному до 0°С. Смесь кипятили с обратным холодильником в тече-ние 6 часов, охлаждали до 0°С, осторожно разла-гали концентрированной НCl (10 мл) и концентри-ровали в вакууме. Коцентрат насыщали NaOH (20 г), экстрагировали СНCl3 (4 раза по 15 мл) и объ-единенные экстракты сушили (MgSO4). После филь-трования и удаления растворителя, разгонка в ва-кууме давала 1.4 г (выход 77%) (R)-3-амино-2-метилпропан-1-ола (Y) в виде бесцветного масла с т.кип. 110-112°С (40 мм Hg).
[]D +8.9° (с 22.6, МеОН); IR max 3358, 1873, 1598, 1466 cm-1; 1Н NMR 5.18 (NH2; br s), 3.8 (1-H2; m), 2.95 (3-H; m), 2.68 (3-H; m); 1.81 (2-H; m), 0.82 (2-Me; d, 7.2); 13С NMR 66.9 (1), 46.4 (3), 37.1 (2), 14.4 (2-Me).
К раствору аминоспирта Y (2.0 мг, 22 ммоля) в 39 мл 10% раствора триэтиламина в МеОН добав-ляли ди-трет-бутил-дикарбонат (5.4 мг, 25 ммолей) и смесь перемешивали при 25°С в течение 30 ми-нут. После удаления растворителя, остаток рас-творяли в СН2Сl2 и раствор дважды промывали 1 М КНSO4 (рН 2) и один раз насыщенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удаление растворителя в вакууме давало 4.3 г (выход 100%) (R)-3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2-метилпропан-1-ола в виде вязкого масла, которое использовали непо-средственно в следующей стадии без дальнейшей очистки (больше 95 % чистоты, по данным ЯМР анализа);
IR max 3356. 1976, 1686, 1523, 1456 cm-1; 1Н NMR 4.82 (NH; br s), 3.54 (1-Н; dd, -11.4/4.2), 3.31 (1-Н/3-Н; m), 3.25 (3-H; dd, -14.1/6.6), 1.77 (2-Н; m), 1.44 (СМе3; s), 0.87 (2-Ме; d, 6.9).
К раствору спирта (R)-3-(трет-бутоксикар6онил)амино-2-метилпропан-1- ола (2.2 г, 12 ммолей) периодата натрия (7.5 г, 35 ммолей) в четыреххлористом углероде (25 мл), ацетонитриле (25 мл) и воде (38 мл) добавляли гидрат треххлори-стого рутения (51 мг, 0.25 ммоля) и смесь переме-шивали при 25°С в течение 1 часа. Смесь разбав-ляли СН2Сl2 (100 мл) и затем отфильтровывали через целит. Фильтрат подкисляли (рН 9) 2 М рас-твора К2СО3 и водный слой промывали эфиром. Водный слой подкисляли раствором 1 М КНSO4 до рН 2 при 0°С и экстрагировали СН2Сl2 (3 раза по 20 мл). Объединенные экстракты промывали насы-щенным раствором NaCl и сушили (MgSO4). Удале-ние растворителя в вакууме давало 2.0 г (выход 85%) (R)-3-(трет- бутоксикарбонил)амино-2-метилпропановой кислоты (Z) в виде липкого твер-дого вещества. Чистую Z (1.75 г, выход 74%) кри-сталлизовали из эфира, т.пл. 69.5-70.5С.
[]D -18.4° (с 2, МеОН); EIMS m/z (ге1 intensity) 147 (60; М+ -Мe2С=СН2), 130 (12), 74 (29), 57 (100); HREIMS m/z 147.0517 (С5Н9NO4, +1.4mmu), IR max 3322-2400, 2797, 1711, 1654, 1413 cm-1; 1H NMR of major conformer 5.00 (NH; br s), 3.32 (3-H; m), 3.24 (3-H’; m), 2.71 (2-H; m), 1.44 (CMe3; s), 1.20 (2-Ме; d); 13С NMR of major/minor (2:1 ratio) con-formers 180.7/179.5 (1), 156.0/157.7 (BОС CО), 79.5/81.0 (CМе3), 42.7/44.0 (3), 39.9/40.2 (2), 28.3/28.3 (CMe3), 14.6/14.6 (2-Ме). Anal. Found: С, 53.04; Н, 8.62. Calcd for С9H17NO4: С, 53.18; Н, 8.43.
К раствору 2.66 г L-лейциновой кислоты (20 ммолей) и 1.74 г бикарбоната натрия (20 ммолей) в 30 мл воды при 0°С добавляли 30 мл раствора 6.44 г тетрабутиламмоний хлорида (20 ммолей) и 1.74 мл аллилбромида (20 ммолей) в СН2Сl2. После ин-тенсивного перемешивания смеси в течение 24 ча-сов, СН2Сl2 выпаривали. Добавляли около 50 мл воды и водный слой экстрагировали четыре раза Et2O. Эфирный раствор сушили над безводным сульфатом натрия и затем выпаривали. Остаток пропускали через короткую Si колонку с получени-ем 3.21 г аллил (2S)-2-гидрокси-4-метилпентаноата (АА) (выход 93%) в виде бесцветного масла,
[]D -8.4° (с 1.1, СHCl3); IR max 3464, 2957, 1732, 1203, 1140, 1087 cm-1; 1Н NMR 5.92 (allyl 2-Н; m), 5.34 (allyl 3-НZ; dd, 17.4/1.1), 5.28 (allyl 3-HE, dd, 10.5/1.1), 4.67 (allyl 1-H2, d, 5.7), 4.23 (2-H, br s), 2.64 (ОН; br s), 1.89 (4-H; m), 1.57 (3-H2; m), 0.96 (5-Н3; d, 6.5), 0.95 (4-Me; d, 6.7); 13С NMR 175.3 (1), 131.4 (allyl C-2), 118.6 (3), 68.9 (2), 65.7 (allyl C-1), 43.2 (3). 24.1 (4), 23.0 (5), 21.3 (4-Me).
К раствору 1.74 г Z (8.55 ммоля), 1.34 г АА (8.0 ммолей) и 64 мг DМАР в 12 мл сухого СН2Сl2 при 0°С добавляли по каплям 8 мл раствора DDC (2.47 г, 12 ммолей) в СН2Сl2. Прозрачный раствор пере-мешивали при 0°С в течение 30 минут и затем при 23°С в течение 3 часов. Белый осадок отфильтро-вали, растворитель выпаривали и остаток повтор-но растворяли в Et2O. Эфирный раствор промывали последовательно холодным 0.5 N раствором NaCl, раствором бикарбоната натрия и рассолом. Высу-шенный эфирный слой (Na2SO4) выпаривали и про-дукт очищали с помощью флеш хроматографии (силикагель) с получением 2.62 г (выход 92%) чи-стого аллил(2S, 2’R)-2-[3'(трет-бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4-метилпентаноата (АВ) в виде бесцветного масла,
[]D -51.3° (с 3.41, СНСl3), EIMS m/z (rel intensi-ty) 301 (5.2), 284 (4.0), 258 (1.5), 228 (43.5), 170 (41.8), 130 (74.5), 112 (100); HREIMS m/z 301.1532 (C14H23NO6, -0.7mmu, M-Me2C=CH2), 284.1496 (С14Н22NO5, +0.2mmu); IR max 3395, 2962, 1747, 1715, 1515, 1251, 1175, 1083 cm-1. 1H NMR unit С 5.17 (NH; br s), 3.42 (3-H; m), 3.22 (3-H’; m), 2.78 (2-H, m), 1.43 (СМе3; br s), 1.21 (2-Me; d, 7.1); unit D 5.90 (allyl 2-Н; m), 5.33 (allyl 3-НZ; d, 16.3), 5.27 (allyl 3-HE; d, 10.3), 5.09 (2-H; dd, 9.7/3.7), 4.63 (allyl 1-H2; m), 1.80 (3-H2; m), 1.64 (4-H, m), 0.96 (5-Н3; d, 6.5), 0.94 (4-Ме; d, 7.3). 13С NMR unit C 174.7 (1), 156.0 (BОС CО), 79.2 (CМе3), 43.1 (3), 40.3 (2), 28.3 (СMe3), 14.5 (2-Me), unit D 170.4 (1), 131.4 (allyl C-2), 119.0 (allyl C-3), 70.9 (2), 65.9 (allyl C-1), 39.6 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Me).
К 10 мл раствора 282 Mr (0.8 ммоля) АВ и 91 мг (0.08 ммоля) тетра-кис(трифенилфосфин)палладия в сухом ТГФ мед-ленно добавляли 688 мкл (8 ммолей) сухого мор-фолина. После перемешивания в течение 40 минут, растворитель упаривали и добавляли 100 мл CH2Cl2. Раствор последовательно промывали 2 N НCl (40 мл) и водой. Органический слой отфиль-тровывали и фильтрат экстрагировали дважды насыщенным раствором бикарбоната натрия. По-сле обратного промывания СН2Cl2, водный слой сначала подкисляли до рН 3 холодным раствором КНSO4 при 0°С и затем экстрагировали три раза эфиром. Высушенный эфирный экстракт выпари-вали с получением 250 мг (2S, 2’R)-2-[3’ (трет-бутоксикарбонил)амино-2’-метилпропаноил-окси]-4-метилпентановой кислоты (АС) (выход 100%) в виде воскоподобного твердого вещества,
[]D -47.9° (с 4.7, СНСl3); EIMS m/z (rel intensi-ty) 261 (12), 244 (18), 217 (28), 198 (17), 188 (100), 160 (61), HREIMS m/z 261.1221 (С11Н19NO6, -0.8mmu, M-Me2C=CH2), 244.1221 (С11H18NO5, -3.6mmu); IR max 3376, 2960, 1738, 1518, 1174, 786 cm-1. 1Н NMR (CDCl3+D2O) unit C 3.49 (H-3; dd, -13.8/3.5), 3.12 (3-H; dd, -13.8/8.7), 2.68 (2-H; m), 1.43 (СMe3; br s), 1.21 (2-Ме, d, 7.1); unit D 5.12 (2-H; dd, 9.6/3.5), 1.90-1.68 (3H/4-H; m), 0.97 (5-H; d. 6.1), 0.94 (4-Ме; d, 6.0). 13С NMR unit С 174.6 or 174.8 (1), 156.1 (BOC CО), 79.5 (CМе3), 43.0 (3), 40.4 (2), 28.3 (СMe3), 14.5 (2-Ме); unit D 174.6 or 174.8 (1). 70.5 (2), 39.5 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.4 (4-Ме).
Соединение AD
Спирт W (34.8 мг, 0.056 ммоля), соединение АС (26.8 мг, 0.085 ммоля) и DМАР (1.74 мг) раство-ряли в 283 мкл дихлорметана. К этой смеси добав-ляли 666 мкл раствора DDC (17.5 мг, 0.085 ммоля) в дихлорметане. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Растворитель упаривали с потоком азота, добавляли эфир и отфильтровывали белый осадок. Фильтрат последовательно промывали 0.5 N раствором НСl, насыщенным раствором бикар-боната натрия и рассолом. Концентрирование и хроматографирование (колонка с силикагелем, 25% ЕtOАс/гексан) давало 46 мг соединения АD (выход 90%);
[]D -11.8 (СНСl3, с 2.0), IR max 3369, 2961, 1737, 1511, 1252, 1174, 1066, 813, 756 cm-1. 1H NMR (500MHz) unit А 7.25 (10-H/14-H, dt, 8.5, 2.1), 6.84 (11-H/13-H, dt, 8.5, 2.1), 6.76 (3-Н, ddd, 15.5, 6.5, 6.4), 6.34 (8-Н, d, 15.6), 5.88 (2-Н, bd, 15.5), 5.86 (7-Н, dd 15.6, 8.7), 5.04 (5, m), 3.80 (ОMе, s), 2.56 (6-H, m), 2.52 (4-H, m), 1.10 (6-Me, d, 6.8); unit В 7.19 (5-H, d, 2.1), 7.05 (9-H, dd, 8.5, 2.1), 6.83 (8-H, d, 8.5), 6,55 (NH, bd, 7.3), 5.04 (2-H, m), 4.78/4.70 (СН2ССl3, ABq, -11.8), 3.85 (ОСН3, S), 3.19 (3-H, dd, 6.3, -13.8), 3.08 (3-H’, dd, 6.8, -13.8); unit С 5.14 (NH, bt, 6.3), 3.32 (3-Н, m), 3.20 (3-Н’ m). 2.73 (2-Н, m), 1.42 (СМе3, s). 1.18 (2-Ме, d, 7.0); unit D 4.93 (2-Н, dd, 10.0, 3.7), 1.67 (3-Н/4-Н, m), 1.55 (3-Н’, m), 0.86 (5-Н, d, 6.5), 0.83 (4-Ме-Н, d, 6.5). 13С NMR unit А 165.4 (1), 159.1 (12), 139.3 (3), 131.1 (9). 129.7 (7), 128.5 (8) 127.3 (10, 14), 125.4 (2), 114.0 (11, 13), 76.5 (5), 55.3 (ОMе), 41.1 (6), 33.4 (4), 16.7 (6-Ме); unit B 170.5 (1), 154.1 (7), 131.2 (5), 128.9 (4), 128.5 (9), 122.4 (6), 112.1 (8), 94.3 (ССl3), 74.6 (CН2ССl3), 56.1 (ОMе), 53.2 (2), 36.6 (3), unit С 175.2 (1), 156.0 (BОСCО), 79.3 (CMe3), 43.1 (3), 40.4 (2), 28.3 (СMe3), 14.4 (2-Ме), unit D 170.1 (1), 71.4 (2), 39.5 (3), 24.7 (4), 22.9 (5), 21.4 (4-Ме).
Криптофицин 81
Соединение АD (46 мг , 0.05 ммоля) смешивали с активированной Zn пылью (178 мг, избыток) в 1.3 мл НОАс. Смесь подвергали воздействию ультра-звука в течение 45 минут и затем перемешивали дополнительно 90 минут. Добавляли около 30 мл дихлорметана. Твердое вещество отфильтровывали и фильтрат выпаривали в вакууме. Остаток раство-ряли в 1.1 мл ТФУК и раствор перемешивали в течение одного часа. ТФУК выпаривали в вакууме и добавляли воду. Проведение лиофильной сушки давало свободную аминокислоту. Аминокислоту растворяли в 4.6 мл ДМФА. К этому раствору до-бавляли 26 мкл DIEA и FDPP (30 мг, 0.075 ммоля, в 2.2 мл ДМФА), соответственно. После перемешива-ния в течение 6 часов, растворитель упаривали и добавляли EtOAc. Раствор промывали 0.5 N рас-твором НСl и рассолом соответственно. Выпарива-ние растворителя с последующей хроматографиче-ской очисткой (силикагель, эфир) давало 20.5 мг Криптофицин 81 (выход 61%).
[]D +34.9 (СHCl3, с 0.45); IR max 3409, 3270, 2958, 1746, 1725, 1672, 1511, 1251, 1175, 1066, 1025, 972, 816 cm-1. 1Н NMR (500 MHz) unit A 7.26 (10-H/14-H; dt, 8.6, 2.5), 6.84 (11-Н/13-Н, dt, 8.6, 2.5), 6.68 (3-Н, ddd, 15.4, 9.9, 5.6), 6.35 (8-Н, d, 15.9), 5.86 (7-Н, dd, 15.9, 8.8), 5.77 (2-Н, dd, 15.4, 0.9), 4.99 (5-H, ddd, 11.2, 6.0, 1.7), 3.80 (ОСН3, S), 2.53 (4-H/6-H, m), 2.37 (4-H’, ddd, 11.2, 9.9,-14.6), 1.12 (6-Me, d, 6.9), unit B 7.22 (5-H, d, 2.2), 7.08 (9-H, dd, 8.4, 2.4), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.64 (NH, d, 8.6), 4.81 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, S), 3.13 (3-Н; dd, 5.6. -14.5), 3.05 (3-H’, dd, 7.1, -14.5); unit С, 6.93 (NH, bdd, 5.8, 5.6), 3.50 (3-Н, ddd, 5.2, 3.9, -13.5), 3.28 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.7, - 13.5), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.84 (2-Н, dd, 10.1, 3.4), 1.67 (3-Н/ 4-Н; m), 1.38 (3-Н’, m), 0.78 (5-Н, d, 6.5), 0.75 (4-Ме-Н, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 159.2 (12), 141.4 (3), 131.1 (9), 129.6 (7), 128.4 (8), 127.3 (10, 14), 125.2 (2), 114.1 (11, 13), 77.5 (5), 55.3 (ОMе), 42.2 (6), 36.4 (4), 17.4 (6-Ме); unit B 171.0 (1), 154.0 (7), 131.2 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.1 (8), 56.2 (ОMе), 53.5 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.2 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме); unit D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 15 Синтез Криптофицина 82
Соединение АЕ
Соединение АЕ представляет производное трет-бутилдифенилсилилового эфира (TBDMS) Е.
Соединение AF
Гидролиз АЕ (150 мг) проводили с 87% выхо-дом с использованием процедуры, описанной выше для гидролиза Т и U.
1H NMR 7.69/7.64 (SiPh2, 2’-H, 6’-H/2’’-H, 6’’-H, d, 6.3), 7.41 (SiPh2, 4’-H/4’’-H, m), 7.39 (SiPh2, 3’-Н, 4-Me-H/ 3’’-H, 5’’-H, m), 6.86 (3-H; dt; 15.5, 7.5), 5.62 (2-H. d, 15.5), 5.30 (7-H/8-H, m).
Соединение AG
Получение AG (96 мг) из AF (76 мг, 0.18 ммоля) проводили с 70 % выходом с использованием про-цедуры, описанной выше для получения V из U. 1H NMR unit A 7.67 (SiPh2, 2’-Н, 6’-Н/2’’-Н, 6’’-H; m), 7.46-7.31 (SiPh2, 3’-Н, 4’-H, 4-Ме-Н/3’’-Н, 4’’-Н, 5’’-Н, m), 6.62 (3-Н, dt, 15.4, 7.6), 5.51/5.48 (2-Н, d, 15.4), 5.33 (7/8, m), 3.70 (5-Н, m), 2.22 (4-Н/6-Н, m), 1.61 (9, bd, 7.4), 1.06 (СМе3, S), 0.98 (6-Ме, d, 6.8); unit B 7.16 7.16 (5-Н, d, 1.7), 7.00 (9-H, dd, 8.5, 1.7), 6.83/6.82 (8-Н, d, 8.5), 5.68/5.66 (NH, d, 7.3), 5.03 (2-Н, m), 4.78/4.73 (СH2CCl3, ABq, -11.9), 3.87 (ОMе, S), 3.16 (3-H; m), 3.09 (3-H’, m). 13С NMR unit A 165.1 (1), 143.0/142.9 (3), 136.0 (SiPh2, 2’, 6’/2’’, 6’’), 134.3/133.7 (SiPh2, 1’/1’’), 132.5 (7), 129.6 (8), 129.6 (SiPh2, 4’/4’’), 127.5 (SiPh2, 3’, 4-Ме/3’’, 5’’), 125.7/125.4 (2), 76.3 (5), 41.6 (6), 36.9/36.8 (4), 27.0 (СMe3), 19.5 (CМе3), 18.1 (9), 16.4/16.3 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.4 (4/9), 122.5 (6), 112.1 (8), 94.2 (CCl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 52.9 (2) 36.4 (3).
Соединение АН
Получение АН (53.4 мг) из AG (84 мг, 0.11 ммоля) проводили с 92 % выходом с использовани-ем процедуры, описанной выше для получения W из V.
1H NMR unit A 6.83 (3-Н, dt, 15.4, 7.5), 5.80 (2-Н, d, 15.4), 5.51 (8-Н, m), 5.33 (7-Н, dd, 15.2, 8.3), 3.50 (5-Н, m), 2.42 (4-Н, m), 2.30 (4-Н’, m), 2.28 (6, m), 1.68 (9, d, 7.3), 0.99 (6-Ме, d, 6.7); unit В 7.20 (5-Н, d, 1.8), 7.03 (9-Н, dd, 8.4, 1.8), 6.80 (8-Н, d, 8.4), 6.10 (NH, bd, 7.0), 5.07 (2-Н, m), 4.80/4.70 (СH2CCl3, ABq, -11.5), 3.88 (ОСН3, S), 3.20 (3-Н, dd, 5.5, -14.3), 3.10 (3-Н’, dd, 7.2, -14.3). 13С NMR unit A 165.4 (1), 142.8 (3), 132.2 (7), 127.7 (8), 125.7 (2), 73.6 (5), 42.8 (6), 36.9 (4), 18.1 (9), 16.8 (6-Ме); unit B 170.2 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 128.5 (4/9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.2 (ССl3), 74.7 (CH2CCl3), 56.1 (ОMе), 53.1 (2), 36.5 (3).
Криптофицин 82
Соединение Аl (36.8 мг, выход 86 % ) получали из 27.4 мг (0.052 ммолей) соединения АН с исполь-зованием процедуры, описанной выше для АD.
Соединение Аl (68 мг, 0.083 ммоля) было под-вергнуто циклизации до Криптофицина 82 (28.5 мг) с использованием процедуры, описанной выше для циклизации АD до Криптофицина 81;
[]D +19.9 (СНСl3, с 2.0). 1H NMR (500 MHz) unit А 6.65 (3-H, ddd, 15.4, 9.5, 5.6), 5.76 (2-Н, d, 15.4), 5.48 (8-Н, dq, 15.3, 6.5), 5.27 (7-Н, ddd, 15.3, 8.4, 1.5), 4.89 (5- Н, ddd, 10.7, 5.6, 1.5), 2.38 (4-Н, m), 2.33 (4-H’/6-Н, m), 1.66 (9-Н, dd, 6.4, 1.5), 1.00 (6-Me, d, 6.9); unit B 7.22 (5-Н, d, 2.0), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.0), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.74 (NH, m), 4.81 (2-Н, ddd, 8.5, 7.3, 5.6), 3.87 (ОMе, S), 3.13 (3-Н, dd, 5.6, - 14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.3, -14.4), unit С, 6.93 (NH, bdd, 6.7, 4.7), 3.52 (3-Н, ddd, 4.7, 3.9, -13.5), 3.27 (3-Н’, ddd, 6.8, 6.7, -13.5), 2.72 (2-Н, dqd, 7.1, 6.8, 3.9), 1.20 (2-Me; d, 7.1), unit D 4.88 (2-Н, dd, 9.6, 3.4), 1.75 (3-Н/ 4-H; m), 1.47 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.2), 0.91 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.5 (1), 141.7 (3), 131.4 (7), 127.1 (8), 125.2 (2), 77.7 (5), 41.5 (6), 36.2 (4), 17.9 (9), 17.2 (6- Me); unit B 171.0 (1), 153.9 (7), 131.1 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.5 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.3 (3), 38.2 (2), 14.0 (2-Ме), unit D 170.9 (1), 71.5 (2). 39.6 (3), 24.6 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме).
Пример 16 Синтез Криптофицина 90 и Крип-тофицина 91
Общая процедура для эпоксидирования Крип-тофицинов стирольного типа.
К раствору криптофицина (около 10 мг/мл) в дихлорметане добавляли три эквивалента м-хлорбензойной кислоты в дихлорметане (около 10 мг/мл). Раствор перемешивали при комнатной тем-пературе до тех пор пока весь исходный материал не прореагирует. Раствор пропускали через корот-кую колонку с силикагелем с использованием СН2Сl2 и затем 1:4 СН2Сl2 :Et2O с получением смеси двух эпоксидов. Эпоксиды разделяли с помощью жидкостной гель проникающей хроматографии (С-18, 7:3 MeCN:H2O).
Используя эту процедуру, Криптофицин 82 (5 мг) был превращен в 2.2 мг Криптофицина 90 и 1.2 мг Криптофицина 91.
Спектральные данные для Криптофицина 90
1Н-ЯМР (500 МГц) -звено А 6.67 (3-Н, ddd, 15.4, 9.5, 5.8), 5.79 (2-Н, d,
15.4), 5.09 (5-Н, ddd, 10.4, 4.5, 2.6), 2.84 (8-Н, qd, 5.2, 2.2), 2.57 (7-Н, dd, 7.6,
2.2), 2.46 (4-Н, m), 1.82 (6-Н, m), 1.32 (9-Н, d, 5.2), 1.03 (6-Ме, d, 6.9), unit B 7.22 (5-Н, d, 2.2), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.74 (NH, d, 8.6), 4.81 (2- Н, ddd, 8.3, 7.4, 5.7), 3.87 (ОMе, S), 3.14 (3-H; dd, 5.4, -14.5), 3.03 (3-H’, dd, 7.3, - 14.5), unit С, 6.95 (NH, bdd, 6.7, 4.8), 3.52 (3-H, ddd, 4.8, 3.7, -13.4), 3.29 (3-H’, ddd, 6.7, 6.5, -13.4), 2.74 (2-H, dqd, 7.3, 6.5, 3.7), 1.24 (2-Me; d, 7.3), unit D 4.90 (2-Н, dd, 9.9, 3.7), 1.75 (3-H, m), 1.60 (4-Н, m), 1.49 (3-Н’, ddd, 8.7, 3.7, -13.7), 0.95 (5-Н, d, 6.5), 0.91 (4-Ме-Н, d, 6.7). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 141.1 (3), 125.3 (2), 76.3 (5), 60.0 (7), 56.8 (8), 40.2 (6), 36.5 (4), 17.5 (9), 13.3 (6-Me), unit В 171.0 (1), 154.0 (7), 131.1 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.2 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.7 (1), 71.4 (2), 39.6 (3), 24.7 (4), 23.0 (5), 21.5 (4-Ме)
Спектральные данные для Криптофицина 91
1Н-ЯМР (500 МГц) -звено А 6.68 (3-Н, ddd, 15.4. 9.8. 5.4), 5.78 (2-Н, d, 15.4), 5.09 (5-Н, ddd, 11.1, 3.7, 2.0), 2.75 (8-Н, rn), 2.62 (7-Н, dd, 9.5, 2.1), 2.48 (4-Н, m), 1.78 (6-Н, m), 1.32 (9-Н, d, 5.2), 0.99 (6-Ме, d, 7.1), unit В 7.23 (5-Н, d, 1.9), 7.09 (9-Н, dd, 8.4, 1.9), 6.85 (8-Н, d, 8.4), 5.68 (NH, d, 8.4), 4.82 (2-Н, m), 3.88 (ОMе, S), 3.15 (3-Н, dd, 5.4, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4); unit С, 6.95 (NH, bdd, 6.0, 4.6), 3.53 (3-Н, ddd, 5.0, 4.0, -13.4), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.7, -13.4), 2.75 (2-Н, m), 1.23 (2-Ме; d, 6.7); unit D 4.92 (2-H, dd, 9.8, 3.4), 1.77 (3-H, m), 1.58 (4-H; m), 0.96 (5-H, d, 7.3), 0.92 (4-Me-H, d, 6.7).
Пример 17 Синтез Криптофицина 97
К раствору циклического депсипептида, Криптофицина 53 (9 мг, 0.013 ммоля), растворенно-го в диметилсульфоксиде (1 мл) добавляли азид цинка (40 мг) и концентрированную серную кисло-ту (4 мкл). Затем смеси позволяли перемешиваться при 75-85°С в течение 2 суток. После этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной тем-пературы, разбавляли Et2O (15 мл) и органический слой промывали рассолом (2 раза по 20 мл) и во-дой (20 мл). Затем эфирный экстракт сушили (MgSO4) и растворитель удаляли в вакууме с воз-вращением аморфного бесцветного твердого веще-ства, которое было преимущественно азидоспир-том, Криптофицином 86. Очистки продукта дости-гали за счет хроматографии с обращенной фазой (ODS, 10 мкл, 250 х 1- мм, 25% H2O/MeCN, 3 мл мин-1) с возращением чистого азидоспирта, Крип-тофицина 86, в виде аморфного бесцветного твер-дого вещества (7.4 мг, выход 77%).
Спектральные данные для Криптофицина 86
[]D - 22.0 (c=3.0, CHCl3); MS (EI) m/z 482/484 (highest observed ion, M+-229, 8/3), 625/627 (14/5), 259 (7), 195/197 (100/34), 184 (14), 155/157 (82/70), 91 (23), 77 (22); HRMS, obsd m/z 482.1791, C23H31N2O735Cl ( 2.9mmu); MS (FAB) m/z (magic bullet matrix) 712/714 (M+ +H, 79/36), 686/688 (31/12), 232 (74), 184 (100). 1H NMR (CDCl3) unit A 7.37-7.42 (10/11/12/13/14-Н, bm. W1/2=20), 6.77 (3-Н, ddd, 15.2, 10.6, 4.4), 5.77 (2-Н, dd, 15.2, 1.3), 5.45 (5-Н, ddd, 11.0, 4.2, 2.0), 4.55 (8-H, d, 5.7), 3.75 (7-H, dd, 7.3, 5.7), 2.55 (4-Hb, dddd, 14.5, 4.4, 2.0, 1.3), 2.43 (4-Ha, ddd, 14.5, 11.0, 10.6), 2.34 (7-OH, s), 1.80 (6-H, ddq, 7.3, 4.2, 7.0), 0.99 (6-Me, d, 7.0), unit В: 7.20 (5-H, d, 2.2), 7.06 (9-H, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.76 (NH, d, 7.7), 4.74 (2-H, ddd, 7.7, 7.5, 5.5), 3.87 (ОСH3, s), 3.10 (3-H, dd, 14.5, 5.5), 3.06 (3-Ha, dd, 14.5, 7.5), unit С: 7.22 (NH, dd, 8.4, 3.7), 3.40 (3-Hb, dd, 13.6, 8.4), 3.14 (3-Ha, dd, 13.6, 3.7), 1.23 (2-СН3, s), 1.16 (2-CH3, s), unit D: 4.85 (2-H, dd, 9.5, 5.1), 1.71 (3-Hb, ddd, 13.6, 9.5, 5.9), 1.59 (4-H, bm, W1/2=25), 1.50 (3-Ha, ddd, 13.6, 7.9, 5.1), 0.89 (4-СН3, d, 6.6), 0.85 (5-Н3, d, 6.6), 13С NMR (CDCl3) unit A: 165.3 (1), 143.0 (3), 135.1 (9), 129.1 (12), 128.9 (11/13), 128.6 (10/14), 124.3 (2), 75.1 (7), 74.6 (5), 67.8 (8), 39.3 (6), 34.7 (4), 11.9 (6-Me), unit B: 170.5 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.7 (4), 128.3 (9), 122.5 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.8 (1), 46.5 (3), 42.8 (2), 22.9 (2-Me), 22.7 (2-Me’), unit D: 170.2 (1), 71.4 (2), 39.4 (3), 24.7 (4), 22.6 (4-Me), 21.8 (5).
Криптофицин 97
К раствору циклического депсипептида, Криптофицина 86 (5.5 мг, 0.008 ммоля), растворен-ного в смеси Et2O/CH2Cl2 (3:1 мл, 0.5 мл), добавляли эфирный раствор (0.5 мл) трифенилфосфина (3 мг, 0.011 ммоля). Затем смеси позволяли перемеши-ваться при комнатной температуре в течение 3 суток. После этого времени растворитель удаляли в вакууме и остаток растворярли в СН2Сl2 и подвер-гали очистке с помощью жидкостной гель прони-кающей хроматографии (CN колонка, 10 мк, 250 х 10 мм, 80% EtOAc/CH2Cl2, 3 мл мин-1) с возращени-ем чистого Криптофицина 97, в виде аморфного бесцветного твердого вещества (4.2 мг, выход 82%).
UV (MeОН) max () 202 (24400), 218 (9400), 284 (2200) mm; MS (EI) m/z 667/669 (M+, 11/3), 639/641 (41/16), 442 (21), 226 (17), 195 (43), 196 (32), 197 (100), 198 (71), 199 (11), 182/184 (25/16), 155/157 (63/22), 146 (30), 91 (40), 77 (29); HRMS, obsd m/z 667.3061, C36H46N3O735Cl (-3.6mmu). 1H NMR (CDCl3) unit A 7.35 (11-H/13-H; m, W1/2=15 Hz), 7.28 (12-H, m), 7.16 (10-H/14-H; m, W1/2=15 Hz), 6.74 (3-H; ddd, 15.2/9.0/6.1), 5.69 (2-H, d, 15.2), 5.21 (5-H, ddd, 9.2/4.3/4.2), 2.79 (8-H, bs), 2.51 (4-Н2, m), 2.11 (7-Н, bd, 6.5), 1.48 (6-Н, m). 1.13 (6-Ме, d, 6.9); unit В: 7.18 (5-Н, d, 2.1), 7.04 (9-Н, d, 8.4, 2.1), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.53 (NH, m), 4.73 (2-H, ddd, 7.6, 5.6, 5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.09 (3-Hb, dd, 14.7, 5.4), 3.04 (3-Ha, dd, 14.7, 7.6), unit С: 7.20 (NH, m), 3.40 (3-Hb, dd, 13.5, 8.6), 3.11 (3-Ha, dd, 13.5, 3.3), 1.22 (2-Me, s), 1.15 (2-Me, s), unit D: 4.84 (2-H, dd, 10.1, 3.7), 1.71 (3-Hb, m), 1.67 (4-H, bm, W1/2=25), 1.35 (3-Ha, m), 0.86 (4-Me, d, 6.7), 0.84 (5-Н3, d, 6.5); 13С NMR (CDCl3) unit A: 165.0 (1), 142.1 (3), 139.2 (9), 128.8 (11/13), 127.5 (12), 125.4 (10/14), 124.6 (2), 76.6 (5), 42.5 (6), 42.1 (7), 40.5 (8), 36.6 (4), 14.8 (6-Me), unit В: 170.2 (1), 154.1 (7), 130.9 (5), 129.5 (4), 128.2 (9), 122.6 (6), 112.4 (8), 56.1 (7-ОMе), 54.3 (2), 35.3 (3), unit С: 177.9 (1), 46.5 (3), 42.7 (2), 22.8 (2-Me/2-Me’), unit D: 170.5 (1), 71.3 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (4-Me), 21.3 (5).
Пример 18 Синтез Криптофицинов 110-112 и 124
Криптофицин 108
К смеси Криптофицина 90 и Криптофицина 91 (27 мг, 0.045 ммоля) в 0.8 мл тетрагидрофурана добавляли 400 мкл водного раствора периодной кислоты (32 мг, 0.14 ммоля). Прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в тече-ние 5 часов. Добавляли воду и водный раствор экстрагировали дважды этилацетатом. Органиче-ский слой промывали водой, сушили и концентри-ровали. Остаток очищали с помощью хроматогра-фии с обращенной фазой на ODS колонке (1:1 MeCN/H2O) с получением выхода Криптофицина 108 90%.
1H-ЯМР (500 Мгц) -звено А 9.64 (7-Н, d, 1.9), 6.67 (3-Н, ddd, 15.3 10.0, 5.4), 5.81 (2-Н, dd, 15.3, 0.9), 5.32 (5-Н, ddd, 11.0, 6.6, 2.1), 2.65 (6-Н, qdd, 7.2, 6.9, 1.9), 2.53 (4-Н, m), 2.44 (4-Н’, m), 1.17 (6-Ме, d, 7.2); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.2), 7.08 (9-Н, dd, 8.4, 2.2), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.91 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, S), 3.16 (3-H; dd, 5.4, -14.6), 3.00 (3-H’, dd, 7.8, -14.6), unit С 7.05 (NH, bdd, 6.9, 5.0). 3.47 (3-H, ddd, 4.6, 4.2, -13.5), 3.32 (3-H’, ddd, 6.9, 6.6, - 13.5), 2.73 (2-H, m), 1.23 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.83 (2-H, dd, 9.5, 3.6), 1.75 (3-H, m), 1.70 (4-H; m), 1.40 (3-H’, ddd, 9.5, 3.9, -14.0), 0.93 (5-H, d, 6.6), 0.88 (4-Me-H, d, 6.6). 13С NMR (125 MHz) unit A 200.6 (7), 165.4 (1), 140.5 (3), 125.6 (2), 73.7 (5), 50.1 (6), 36.1 (4), 10.8 (6-Me); unit B 171.1 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128.3 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.8 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.0 (3), 38.1 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.4 (1), 71.3 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 22.9 (5), 21.4 (4-Ме).
Криптофицин 108 получали также селектив-ным озонолизом Криптофицина 82 с использовани-ем процедуры, описанной выше для озонолиза Е в F.
Общая процедура для pеакции Виттига
Бутиллитий (0.4 мл, 2.5 М в гексане) добавля-ли к 10 мл раствора арилтрифенилфосфоний хло-рида (1 ммоль) в ТГФ при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут при -78°С и затем помещали на 1 час в баню со льдом. Три эквивалента указанной выше смеси добавляли к раствору Криптофицина 108 в ТГФ (около 30 мг/мл) при -78°С. Раствор перемешивали в течение 20 минут до удаления охлаждающей бани. Когда температура поднималась до 25°С, реакцию гаси-ли насыщенным водным раствором хлористого аммония. Смесь экстрагировали дважды этилаце-татом. Органический экстракт промывали водой, сушили и концентрировали. Остаток очищали на флеш колонке ODS колонке (65:35 MeCN/H2O) с получением смеси Е и Z изомеров ( содержание от 8% до 13% Z изомеров зависело от природы ариль-ной группы; анализ определяли с помощью ЯМР). Желаемый Е изомер кристаллизовали из эфира.
Криптофицин 110
Реакция Виттига приводила к 5.1 мг п-фторфенильного аналога (содержавшего около 8% Z изомера) из 7.3 мг Криптофицина 108 (было воз-вращено около 1 мг непрореагировавшего альдеги-да). После кристаллизации из эфира, получали 4.0 мг чистого Криптофицина 110;
[]D +42.4 (МеОН, с 2,1). 1H NMR unit А 7,29 (10-H/14-Н; dd, 8.6, 5,6), 6,99 (11-Н/13-H, dt, 8.6, 8.5), 6.68 (3-Н, ddd, 15.3, 9.7, 5.6), 6.38 (8-H, d, 15.8), 5.83 (7-H, dd, 15.8, 8,8), 5.78 (2-H, d, 15.3), 5.00 (5-H, ddd, 10.8, 7.3, 1.3), 2.53 (4-H/6-H, m), 2.36 (4-H’, m), 1,13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7,21 (5-H, d, 1,8), 7,07 (9-H, dd, 8.4, 1.8), 6,84 (8-H, d, 8.4), 5.68 (NH, d, 8,5), 4.82 (2-H, m), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.6, -14.4), 3.04 (3-H, dd, 7.2, -14.4); unit С, 6,95 (NH, bdd, 6,8, 5,9), 3.50 (3-H, td, 4.4, -13,5), 3.28 (3-H’, ddd, 6.8, 6.7, -13.5), 2.72 (2-H, m), 1.23 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, m), 1.65 (3-Н/4-Н; m), 1.35 (3-H’, ddd, 4.5, 3.8, - 10,9), 0.78 (5-H, d, 6.4), 0.74 (4-Me-H, d, 6.4). 13C NMR (75 MНz) unit A 165.4 (1), 162.3 (12, d, 1JC-F 245.8 Hz), 141.4 (3), 132.9 (9), 130.6 (7), 129.9 (8), 127.6 (10/14, d, 3JC-F 8.0 Hz), 125.2 (2), 115.5 (11/13, d, 2JC-F 21.5 Hz), 77.4 (5), 42.2 (6), 36,4 (4), 17.3 (6-Ме); unit В 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128,4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3); unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Мe); unit D 170.9 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.2 (4-Мe).
Криптофицин 111
Реакция Виттига приводила к 43 мг п-толильного аналога (содержавшего около 9% Z изомера) из 55 мг Криптофицина 108. После кри-сталлизации из эфира, получали 34 мг чистого Криптофицина 111;
[]D +44.3 (СHCl3, с 0.6); EIMS m/z (relative intensity %) 652 (2.9, М+), 497 (3.6), 412 (23.8), 242 (20), 145 (46), 105 (75); high-resolution EIMS 652.29094 (calcd for С36Н45СIN2О7, А-0,6mmu, М+). 13Н NMR unit A 7.21 (10-H/14-H; d, 8.0), 7.11 (11-H/13-H, d, 8,0), 6.68 (3-H, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 6.37 (8-H, d, 15,8), 5.95 (7-H, dd, 15.8, 8.6), 5.76 (2-H, d, 15.2), 4.99 (5-H, dd, 10.4, 6,2). 2,51 (4-Н/6-Н, m), 2,38 (4-H’, m), 2.32 (12-Me, s), 1.13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7.22 (5-H, d, 2.1), 7.08 (9-H, dd, 8.4, 2,1). 6.83 (8-H, d, 8.4), 5.80 (NH, d, 8.4), 4,81 (2-H, m), 3,86 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.6, -14.4), 3.03 (3-H’, dd, 7.3, -14.4); unit С 6.98 (NH, bdd, 6.0, 5.7), 3.49 (3-H, td, 4.6. -13.4), 3.29 (3-H’, ddd, 6.7, 6.6, -13.4), 2.70 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.81 (2-H,m), 1.65 (3-H/4-H; m), 1.37 (3-H’, m), 0,78 (5-H’, d, 5,8), 0.73 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (75 MHz) unit A 165.5 (1), 141.5 (3), 137.4 (12), 133.9 (9), 131.7 (7), 129.3 (10/14), 129.0 (8), 126.0 (11/13), 125.1 (2), 77.4 (5), 42.2 (6), 36.4 (4), 21.1 (12-Me), 17.3 (6-Me); unit B 171.0 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.9 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Me); unit D 170.9 (1), 71.6 (2), 39.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (5), 21.2 (4-Me).
Криптофицин 112
Реакция Виттига приводила к 35 мг 2-тиенильного аналога (содержавшего около 13% Z изомера) из 51 мг Криптофицина 108. После кри-сталлизации из эфира, получали 25 мг чистого Криптофицина 111;
1Н NMR (500 MHz) unit A 7.12 (12-H; d, 4.9), 6.94 (11-H, dd, 4.9, 3,4), 6.90 (10-H, d, 3.4), 6.68 (3-Н, ddd, 15,2, 9.5, 5,3), 6.54 (8-H, d, 15.7), 5.83 (7-H, dd, 15.7, 8.7), 5.78 (2-H, d, 15.2), 4.96 (5-H, dd, 9.5, 6.5), 2.51 (4-Н/6-Н, m), 2.35 (4-H’, m), 1.13 (6-СH3, d, 6.8); unit B 7.21 (5-H, d, 1.6), 7.07 (9-H, dd, 8.4, 1.6), 6.84 (8-H, d, 8.4), 5.74 (NH, d, 7.1), 4.82 (2-H, m), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.5, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.1, -14.4); unit С, 6.97 (NH, bt, 5.8), 3.50 (3-H, ddd, 4.4, 4.3, -13.4), 3.28 (3-H’, ddd, 6.8, 6.6, -13.4), 2.71 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, m), 1.67 (3-Н/4-Н; m), 1.39 (3-H’, m), 0.80 (5-H, d, 6.4), 0.77 (4-Me-H, d, 6.4).
Криптофицин 124
Реакция Виттига приводила к 131 мг п-хлорфенильного аналога (содержавшего около 10% Z изомера) из 153 мг Криптофицина 108. По-сле кристаллизации из эфира, получали 107 мг чистого Криптофицина 124;
[]D +29.2 (СHCl3, с 0.5); high- resolution EIMS m/z 672.23691 (calcd for С35Н42Сl2N2O7, 0.0mmu). 1Н NMR (500 MHz) unit А 7.26 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.68 (3-Н, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 6.36 (8-Н, d, 15.8), 5.98 (7-Н, dd, 15.8, 8.8), 5.77 (2-Н, d, 15.2), 5.00 (5-Н, bdd, 9.4, 6.3), 2.54 (4-Н/6-Н, m), 2.38 (4-Н’, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit B 7.22 (5-Н, d, 1.7), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 1.7), 6.84 (8-Н, d, 8.4), 5.73 (NH, bd, 7.8), 4.82 (2-Н, m), 3.86 (ОMе, s), 3.13 (3-Н, dd, 5.5, -14.4), 3.04 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4), unit С, 6.97 (NH, bt 5.8), 3.49 (3-Н, td, 4.2, -13.4), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.7, 6.6, -13.4), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2), unit D 4.81 (2-Н, m), 1.65 (3-H/4-H; m), 1.35 (3-Н’, m), 0.77 (5-Н, d, 7.1), 0.75 (4-Ме-Н, d, 7.1). 13С NMR (75 MHz) unit А 165.4 (1), 141.3 (3), 135.2 (12), 133.2 (9), 130.9 (7), 130.6 (8), 128.7 (11/13), 127.3 (10/14), 125.2 (2), 77.3 (5), 42.2 (6), 36.5 (4), 17.3 (6-Ме); unit B 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.8 (1). 71.5 (2), 39.6 (3), 24.5 (4), 22.8 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 19 Синтез Криптофицинов 115-120 и 126
Криптофицины 115 и 116
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стираль-ного типа, Криптофицин 110 (3.5 мг) был превра-щен в 2.0 мг Криптофицина 115 и 1 мг Криптофи-цина 116.
Спектральные данные для Криптофицина 115
[]D +29.1 (МеОН, с 0.8), EIMS m/z (relative intensity %) 672 (1.9, М+), 412 (5.8), 245 (17), 195 (52), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100), high-resolution EIMS 668.2853 (calcd for С35Н42СlFN2O8, +3.4mmu, M+). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.22 (10-H/14-H; ddt, 8.7, 5.2, 2.0), 7.01 (11-H/13-H, ddt, 8.7, 8.5, 2.0), 6.68 (3-H, ddd, 15.2, 9.7, 5.2), 5.74 (2-H, dd, 15.2, 0.8), 5.15 (5-H, ddd, 11.2, 5.0, 1.8), 3.67 (8-H, d, 2.0), 2.88 (7-H, dd, 7.4, 2.0), 2.54 (4-H, dtd, 5.2, 1.8, -14.4), 2.44 (4-H’, ddd, 11.2, 9.7, -14.4), 1.79 (6-H, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit В 7.21 (5-H, d, 2.0), 7.06 (9-H, dd, 8.3, 2.0), 6.83 (8-H, d, 8.3), 5.63 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-H, ddd, 8.4, 7.2, 5.4), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-H; dd, 5.4, -14.4), 3.03 (3-H’, dd, 7.2, -14.4), unit C 6.94 (NH, bdd, 6.7, 5.0), 3.48 (3-H, ddd, 5.0, 3.7, -13.4), 3.30 (3-H’, ddd, 6.8, 6.7, -13.4), 2.72 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.4) unit D 4.83 (2-H, dd, 9.9, 3.6), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.35 (3-H’, m), 0.87 (5-H, d, 6.5), 0.85 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 162.9 (12, d, 1JC-F 245.4 Hz), 141.0 (3), 132.5 (9), 127.3 (10/14, d, 3JC-F 8.3 Hz), 125.3 (2), 115.7 (11/13, d, 2JC-F 21.9 Hz), 76.1 (5), 63.0 (7), 58.3 (8), 40.5 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.7 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Ме), unit D 170.7 (1), 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Ме).
Криптофицины 117 и 118
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стироль-ного типа, Криптофицин 111 (6.2 мг) был превра-щен в 3.5 мг Криптофицина 117 и 1 мг Криптофи-цина 118.
Спектральные данные для Криптофицина 117
[]D +25.5° (МеОН, с 1.8), EIMS m/z (relative intensity %) 668 (4.8, М+), 412 (6.2), 280 (11), 173 (9.4), 145 (15), 135 (34), 105 (100); lush-resolution EIMS m/z 668.28532 (calcd for С36H45CIN2O8 +1.1mmu, М+). 1Н NMR (500 Mhz) unit A 7.17/7.13 (10-H/11-H/13-H/14-H, А2B2 q, 8.0), 6.67 (3-Н, ddd, 15.4, 9.8, 5.6), 5.73 (2-Н, dd, 15.4, 0.9), 5.14 (5-Н, ddd, 11.2, 4.9, 2.0), 3.65 (8-Н, d, 2.0), 2.91 (7-Н, dd, 7.6, 2.0), 2.54 (4-Н, bdd, 5.6, -14.3), 2.44 (4-Н’, ddd, 10.7, 9.8, -14.3), 2.35 (12-Ме, s), 1.77 (6-Н, m), 1.14 (6-СН3, d, 6.9); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.2), 7.07 (9-Н, dd, 8.5, 2.2), 6.83 (8-Н, d, 8.5), 5.65 (NH, d, 8.5), 4.80 (2-Н, ddd, 8.3, 7.4, 5.6), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.6, -14.5), 3.02 (3-Н’, dd, 7.4, -14.5); unit С 6.93 (NH, bd, 6.8, 5.1), 3.48 (3-Н, ddd, 5.1, 3.8, -13.2), 3.29 (3-Н’, ddd, 6.9, 6.8, -13.2), 2.71 (2-Н, m), 1.22 (2-Me; d, 7.1); unit D 4.82 (2-H, dd, 9.8, 3.6), 1.70 (3-H/4-H, m), 1.33 (3-H’, m), 0.85 (5-H, d, 6.5), 0.84 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 141.0 (3), 138.4 (12), 133.7 (9), 129.4 (10/14), 125.6 (11/13), 125.3 (2), 76.2 (5), 62.9 (7), 59.0 (8), 40.7 (6), 36.7 (4), 21.1 (12-Me), 13.6 (6-Me); unit В 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.1 (3), unit С 175.5 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.7 (1). 71.3 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.8 (5), 21.2 (4-Ме).
Спектральные данные для Криптофицина 118
1Н-ЯМР спектр указанного криптофицина яв-лялся подобным спектру Криптофицина 38 за ис-ключением мультиплетов при 7.30-7.38 для фе-нильных протонов, заменяйшихся 4Н мультипле-том при 7.15 и 3Н синглетом при 2.35 для р-толильных протонов.
Криптофицины 119 и 120
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стирoль-ного типа, Криптофицин 112 (8 мг) был превращен в 1.2 мг Криптофицина 119 и 0.5 мг Криптофицина 120.
Спектральные данные для Криптофицина 119
1Н-ЯМР (500 МГц) unit А 7.28 (12-Н, d, 5.2), 7.11 (10-Н, d, 3.3), 7.00 (11-Н, dd, 5.2, 3.3), 6.68 (3-Н, ddd, 15.1, 9.9, 5.2), 5.76 (2-Н, dd, 15.1, 1.3), 5.15 (5-Н, ddd, 11.2, 5.5, 1.8), 3.94 (8-Н, d, 2.0), 3.10 (7-Н, dd, 7.5, 2.0), 2.56 (4-Н, bdd, 5.2, -14.3), 2.44 (4-Н’, ddd, 11.2, 9.9, -14.3), 1.76 (6-Н, m), 1.13 (6-СН3, d, 6.8); unit B 7.21 (5-Н, d, 2.3), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 2.3), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.63 (NH, d, 8.4), 4.80 (2-Н, ddd, 8.5, 7.4, 5.7), 3.87 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.7, -14.5), 3.03 (3-Н’, dd, 7.4, -14.5), unit С 6.95 (NH, bd, 6.5, 5.3), 3.48 (3-Н, ddd, 5.3, 3.6, -13.5), 3.31 (3-Н’, ddd, 6.8, 6.5, -13.5), 2.72 (2-Н, rn), 1.23 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.85 (2-Н, dd, 10.3, 3.5), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.33 (3-H’, m), 0.86 (5-H, d, 6.3), 0.85 (4-Me-H, d, 6.3).
Криптофицины 125 и 126
Используя общую процедуру, описанную вы-ше для эпоксидирования криптофицинов стирoль-ного типа, Криптофицин 124 (47 мг) был превращен в 26 мг Криптофицина 125 и 12 мг Криптофицина 126.
Спектральные данные для Криптоицина 125
[]D +35.6 (СНСl3, с=0.9); high-resolution EIMS m/z 688.2301 (calcd for C35H42Cl2N2O8, +1.7mmu). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.33 (11-H/13-H, dt, 8.5, 2.0), 7.18 (10-H//14-H, dt, 8.5, 2.0), 6.67 (3-H, ddd, 15.1, 9.9, 5.2), 5.73 (2-H, dd, 15.1, 0.9), 5.15 (5-H, ddd, 11.0, 4.7, 1.5), 3.66 (8-H, d, 1.9), 2.87 (7-H, dd, 7.4, 1.9), 2.53 (4-H, m), 2.42 (4-H’, ddd, 10.6, 10.5, -14.4), 1.78 (6-H, m), 1.12 (6-СН3, d, 7.0); unit В 7.20 (5-Н, d, 2.1), 7.06 (9-Н, dd, 8.3, 2.1), 6.83 (8-Н, d, 8.3), 5.72 (NH, d, 8.1), 4.79 (2-H, ddd, 8.3, 7.9, 5.4), 3.86 (ОMе, s), 3.12 (3-H; dd, 5.4, -14.5), 3.02 (3-H’, dd, 7.4, -14.5); unit С 6.97 (NH, bdd, 6.3, 5.5), 3.46 (3-H, ddd, 4.4, 4.1, -13.7), 3.22 (3-H’, ddd, 7.0, 6.3, -13.7), 2.70 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.82 (2-H, dd, 9.9, 3.4), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.33 (3-H’, m), 0.87 (5-H, d, 6.5), 0.84 (4-Me-H, d, 6.5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.3 (1), 141.0 (3), 135.3 (12), 134.4 (9), 128.9 (11/13), 126.9 (10/14), 125.3 (2), 76.0 (5), 63.1 (7), 58.2 (8), 40.4 (6). 36.7 (4), 13.4 (6-Me), unit B 170.9 (1), 154.0 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.3 (9), 122.4 (6), 112.3 (8), 56.1 (ОMе), 53.7 (2), 35.0 (3); unit С 175.6 (1), 41.0 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Me); unit D 170.7 (1), 71.2 (2), 39.4 (3), 24.5 (4), 22.9 (5), 21.3 (4-Me).
Спектральные данные для КриптоФицина 126
1Н-ЯМР (300 МГц) unit А 7.26 (11-Н/13-Н, d, 8.1), 7.17 (10-H//14-H, d, 8.1), 6.70 (3-Н, ddd, 15.1, 9.4, 5.3), 5.81 (2-Н, d, 15.1), 5.14 (5-Н, bdd, 10.0, 4.5), 3.57 (8-Н, bs), 2.85 (7-Н, bd, 7.6), 2.66 (4-Н, m), 2.59 (4-Н’, m), 1.77 (6-Н, m), 1.04 (6-СН3, d, 7.0), unit В 7.23 (5-Н, bs), 7.08 (9-Н, bd, 8.4), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.82 (NH, d, 6.8), 4.81 (2-Н, ddd, 7.2, 6.8, 5.4), 3.86 (ОMе, s), 3.14 (3-Н; dd, 5.4, -14.1), 3.03 (3-Н’, dd, 7.4, -14.1), unit С 7.03 (NH, bt, 5.7), 3.47 (3-H, ddd, 4.0, 3.7, -13.1), 3.34 (3-H’, ddd, 6.8, 6.4, -13.1), 2.72 (2-H, m), 1.24 (2-Me, d, 7.0), unit D 4.90 (2-H, dd, 10.0, 2.5), 1.74 (3-H/4-H; m), 1.45 (3-H’, m), 0.91 (5-H, d, 6.5), 0.86 (4-Me-H, d, 6,5). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.4 (1), 141.3 (3), 135.6 (12), 134.1 (9), 128.8 (11/13), 126.8 (10/14), 125.2 (2), 76.8 (5), 63.3 (7), 55.6 (8), 40.8 (6), 36.7 (4), 13.4 (6-Me); unit В 170.9 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.8 (4), 128.4 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.7 (2), 35.0 (3), unit С 175.7 (1), 41.0 (3), 38.2 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.8 (1), 71.4 (2), 39.3 (3), 24.6 (4), 23.1 (5), 21.3 (4-Ме).
Пример 20 Синтез Криптофицинов 121-123 и 127
Соединение AJ
К раствору моногидрата BОС-L-лейцина (1.245 г, 5 ммолей) в 30 мл безводного СН2Сl2 до-бавляли твердый EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3- этилкарбодиимид гидрохлорид) (0.53 г, 2.75 ммоля) в атмосфере N2 при перемешивании при 0°С. После перемешивания при 0°С в течение 1.5 часов, смесь концентрировали ниже 5°С и остаток раз-бавляли 35 мл холодного EtOAc, последовательно промывали двумя порциями (10 мл) каждого, охла-жденного на льду раствора, 5% водного раствора КНSO4, 5% водного NaHCO3, рассолом. Органиче-скую фазу отделяли, сушили (MgSO4) при 5°С и выпаривали ниже 5°С. Оставшееся масло разбав-ляли охлажденным на льду ТГФ (5 мл) и добавляли раствор соединения К (295 мг, 0.5 ммоля) в охла-жденный на льду безводный ТГФ (5 мл). Затем были добавлены несколько кристаллов DМАР к смеси, которую перемешивали и позволяли смеси достигнуть 25°С в течение ночи. Добавляли рас-твор 5% водного NaHCO3 (5 мл) и полученную двухфазную смесь интенсивно перемешивали при 25°С в течение 2 часов. Добавляли EtOAc (40 мл), водную фазу экстрагировали добавлением EtOAc (2 раза по 20 мл) и объединенные органические слои промывали водой и рассолом, сушили (NaSO4), фильтровали и выпаривали. Остаток от-фильтровывали через слой силикагеля с 25% EtOAc в гексане с получением соединения AJ в виде бес-цветного масла (385 мг, выход 96%):
[]D 13.6° (c= 0.63, СНCСl3); EIMS m/z (ге1. intensity) 805/803/801 (M+, 1%), 568/570/572/574 (9/10/6/2), 523/525/527 (5/6/1), 418/420/422/424 (15/15/6/2), 341/343/345/347 (58/70/35/9), 307/309/311(29/22/10), 224/227/228/229 (10/100/31/14), 208/210/211/2’12 (20/83/45/54), HREIMS m/z 800.2218 (С35H48 35Cl4N2O8, -5.3mmu); 1Н NMR (CDCl3) unit А 7.21-7.35 (Ph-H5; m), 6.77 (3-H; ddd, 6.7/6.7/15.3), 6.4 (8-H; d, 15.8), 6.05 (7-H; dd. 8.7/15.8), 5.9 (2-H; d, 15.3), 5.0 (5-H, m), 2.6 (6-H, m), 2.55 (4-H2; m), 1.17 (6-Me; d, 6.7), unit В 7.22 (5-H; s), 7.05 (9-H: d, 8.1), 6.84 (8-H, d, 8.1), 6,55 (NH; d, 7.8), 5.0 (2-H; ddd, 5.5/7.1/7.8), 4.68-4.8 (СН2ССl3; ABq, 11.9), 3.86 (OMe; s), 3.2 (3-H; dd, 5.5/14.0), 3.06 (3-H’: dd, 7.1/14.0), unit D 4.8 (NH; d), 4.2 (2-H; m), 1.65 (4-H; m), 1.55 (3-H; m), 1.4 (СMe3); s), 1.37 (3-H’; m), 0.85 (4-Me; d, 6.5), 0.8 (5-H, d, 6.5); 13С NMR unit A 165.4 (1), 139.3 (3), 137.0 (9), 131.5 (8), 130.5 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (12), 126.2 (10/12), 125.8 (2), 76.2 (5), 40.8 (6), 33.4 (4), 16.8 (6-Ме); unit B 170.0 (1), 154.2 (7), 131.0 (5), 129.0 (9), 122.5 (6), 112.2 (8), 94.4 (CСl3), 74.7 (CH2ССl3), 56.1 (ОMе), 53.3 (2), 36.5 (3), unit D 173.2 (1), 155.7 (BОС-CO), 80.0 (CMe3), 52.4 (2), 41.2 (3), 28.3 (СMe3), 24.8 (4), 22.8 (4-Ме), 21.6 (5).
Соединение АК
Соединение AJ (115 мг, 0.134 ммоля) раство-ряли в ТФУК (3 мл) и оставляли при 25°С в течение 1 часа. Растворитель удаляли и остаток выпарива-ли повторно из СН2Сl2 с получением в результате аморфного твердого вещества. Это твердое веще-ство растворяли в безводном ТГФ (5 мл) и добавля-ли достаточное количество диэтилизопропиламина с доведением рН раствора до 8-9, когда аликвота раствора оставляла пятно на влажной рН бумаге. Раствор охлаждали до 0°С с перемешиванием и добавляли раствор соединения AL в ТГФ (3 мг). Для приготовления соединения AL, соединение Z (55 мг, 0.27 ммоля) растворяли в ТГФ (3 мл) и до-бавляли диэтилизопропиламин (0.046 мл, 0.27 ммоля). К этой смеси после охлаждения до -15°С добавляли по каплям пивалоилхлорид (0.033 мл, 0.27 ммоля) и раствор перемешивали при -15°С в течение 10 минут и при 0°С в течение 20 минут. Полученную суспензию переносили затем в рас-твор соединения AJ в ТГФ. Полученную смесь пе-ремешивали при -0°С и позволяли достигнуть тем-пературы 25°С в течение ночи. Через 12 часов нахождения при температуре 25°С добавляли 5% водный раствор NaHCO3 и полученную смесь ин-тенсивно перемешивали при 25°С в течение 1.5 часов. Добавляли EtОАс (40 мл) и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали дополнительно EtOAc (2 раза по 10 мл). Объединенные органиче-ские экстракты промывали 5% водным раствором NaHCO3 (20 мл), 5% водным раствором KHSO4 (20 мл) и рассолом, сушили (NaSO4) и выпаривали. Оставшееся масло хроматографировали на силика-геле, элюируя 35% EtOAc в гексане с получением соединения АК в виде бесцветной пены (98 мг, вы-ход 83%).:
[]D -8.3 (с 0.88, СHCl3); 1Н NMR (CDCl3) unit A 7.28-7.35 (Ph-Н4; m), 7.22 (H-12; m), 6.75 (H-3; ddd, 6.4/6.4/15.4), 6.4 (H-8; d, 15.9), 6.04 (H-7; dd, 8.6/15.9) 5.95 (H-2, d, 15.4), 5.0 (H-5; m), 2.6 (H-4; m), 1.1 (6-Me; d, 6.8); unit B 7.22 (Н-5, d, 1.5), 7.15 (NH; d, 7.6), 7.05 (H-9; dd, 1.5/8.2), 6.85 (H-8; d, 8.2), 5.0 (H-2; m), 4.8- 4.68 (CH3CCl3; ABq, 12), 3.86 (OMe; s), 3.2 (H-3, m), 3.1 (Н-3’, dd, 7.2/14.1), unit С 5.0 (NH; m), 3.2 (H2-3; m), 2.55 (H-2; m), 1.1 (2-Me; d, 7.1), unit D 6.12 (NH; m), 4.4 (H-2; m). 1.65 (H-4; m), 1.55 (Н-3; m), 1.4 (H-3’, m), 0.86 (4-Me; d, 6.8), 0.81 (5-H, d, 6.8); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.8 (1), 138.9 (3), 131.5 (8), 130.4 (7), 128.6 (11/13), 127.4 (12), 126.2 (10/14), 125.8 (2), 76.3 (5), 33.6 (4), 16.6 (6-Me); unit B 170.2 (1), 154.1 (7), 136.9 (4), 131.2 (5), 128.6 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 94.4 (CCl3), 74.5 (CН2ССl3), 56.1 (OMe), 53.4 (2), 36.6 (3); unit C 175.4 (1), 156.3 (BОС-CO), 79.5 (OCМе3), 43.6 (3), 41.3 (2), 15.1 (2-Me); unit D 172.6 (1), 51.3 (2), 40.5 (3), 24.5 (4), 22.7 (4-Me), 21.5 (5).
Криптофицин 121
Соединение АК (73 мг, 0.082 ммоля) растворя-ли в АсОН (3.5 мл), добавляли активированную Zn пыль и полученную суспензию подвергали ультра-звуковому воздействию в течение 45 минут. После перемешивания при 25°С дополнительно в течение 1.5 часов смесь разбавляли СН2Сl2 (5 мл) и филь-тровали через целитR. Твердое вещество промыва-ли дополнительно СН2Сl2 (10 мл) и полученный фильтрат упаривали. Остаток без дальнейшей очистки растворяли в ТФУК (3 мл), хранили при 25°С в течение 1 часа и растворитель удаляли в вакууме. Остаток повторно выпаривали из СН2Сl2 , затем из толуола до получения бесцветного твер-дого вещества. Это твердое вещество растворяли в ДМФА (3 мл), добавляли FDPP (43 мг, 0.108 ммоля) с последующим добавлением достаточного коли-чества диэтилизопропиламина с доведением рН раствора до рН8-9, когда аликвота оставляла пят-но на влажной рН бумаге. После перемешивания при 25°С в течение 16 часов, смесь разбавляли эфиром (40 мл) и промывали 5% водным раствором KHSO4 (2 раза по 1 мл), 5% водным раствором NaHCO3 (15 мл) и рассолом. После сушки (Na2SO4) и выпаривания остаток очищали с помощью гель проникающей жидкостной хроматографии с обра-щенной фазой на С-18 колонке с силикагелем (EconosilR С-18, 22 х 250 мм), элюируя смесью СН3СN/вода 65:35 при 6 мл/мин. Фракцию, элюи-руемую при tR 48 минут, собирали и выпаривали с получением аморфного твердого вещества (26 мг, выход 50%):
[]D +46.5 (с 0.81, СHCl3); EIMS m/z 637/639 (М+, 1%), 449/451 (2/1), 420 (5), 411/413 (7/5), 227/228 (9/7), 195 (10), 184 (15), 167/168/169 (40/86/29), 155/157 (100/26), 91 (85), 69 (86); HREIMS m/z 637,2864 (С35H44 35Cl N3 O6, + 5.5mmu); 1H NMR unit A 7,21-7.35 (Ph-H5; m), 6,75 (Н-3; ddd, 4,2/10.8/16), 6.4 (H-8; d, 16), 6,04 (H-7; dd, 8.8/16), 5.75 (H-2; d, 16), 5,1 ((H-5; m), 2.55 (H-4; m, H-6; m), 2.35 (H-4’, m); unit B 7,18 (H-5; d, 2), 7.05 (H-9; dd, 2.0/8.3), 6.85 (H-8: d, 8.3), 5.7 (NH; d, 7.2), 4.7 (H-2; ddd, 4.9/7.2/7.7), 3.86 (ОMе, s), 3,1 (H-3; dd, 4.9/14.4), 3.0 (H-3’; dd, 7.7/ 14.4); unit С 7.25 (NH, m), 3,5 (H-3; m), 3.4 (H-3’; m), 2.55 (H-2; m), 1,2 (2-Me; d, 7.2); unit D 5.8 (NH; d, 7.2), 4.4 (H-2; m), 1.55 (H-4; m), 1.38 (H2-3; dd, 7.2/7.7), 0.76 (4-Me; d, 6.6), 0.74 (H-5; d, 6.6); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.1 (1), 141.9 (3), 136.8 (9), 131.7 (8), 130.2 (7), 128.5 (11/13), 127.3 (14), 126.1 (10/12), 125.1 (2), 76.5 (5), 42.3 (6), 36.3 (4), 17.2 (6-Me); unit B 171.0 (1), 154.1 (7), 130.8(5), 129.6 (4), 128.4 (9), 122.5 (6), 112,4 (8), 56,2 (OMe), 54.4 (2), 35.4 (3), unit С 175.8 (1), 41.0 (3), 38.6 (2), 14.8 (2-Me); unit D 173.2 (1), 51.1 (2), 40,9 (3), 24.7 (4), 23,4 (4-Ме), 21,5 (5)
Криптофицины 122 и 123
К перемешиваемому раствору (0°С) Крипто-фицина 121 ( мг, 0.011 ммоля) в безводном СН2Сl2 (1.3 мл) добавляли 99% м-СРВА (17 vu, 0.1 ммоля) в виде одной порции. Затем добавляли безводный толуол (0.7 мл) и полученную смесь перемешивали при 25°С в течение 72 часов. Растворитель выпари-вали в вакууме и оставшееся твердое вещество очищали с помощью гель проникающей жидкост-ной хроматографии с обращенной фазой на С-18 колонке с силикагелем (EconosilR С-18, 22 х 250 мм), элюируя смесью СН3СN/вода 65:35 при 6 мл/мин. Криптофицин 122 (9 мг, выход 44%) элюировали при tR 37.5 минут и Криптофицин 123 (5 мг, выход 23%) элюировали при tR 40 минут.
Криптофицин 122
[]D +35.0 (с 1. CHCl3), EIMS m/z 653/655 (1.6/0.7, М+), 411/413 (20/5), 280/282 (39/19), 252/254 (13/8), 223/225/227 (19/10/23), 211/213 (18/6), 195/197 (51/13), 184/186 (49/11), 176/168/169 (20/16/21), 155/156/157 (95/59/42), 139/141/143 (60/40/24), 135/135 (30/11). 129/131 (40/29), 91 (100); HREIMS m/z 653.2906 (C35 Н44 35Сl N3 O7, -3.8mmu). 1Н NMR (d6-acetone) unit A 6.65 (Н-3, ddd, 38/11.0/15.0), 5.9 (H-2; dd, 1.9/15.0), 5.25 (Н-5; ddd, 1.9/4.9/11.5), 3.82 (Н-8; d, 2.0), 3.0 (H-7; dd, 2.0/7.7), 2.65 (H-4; dddd, 2.0/2.0/3.8/14.5), 2.4 (H-4’; ddd, 11.0/11.5/ 14.5), 1.85 (H-6, dqd, 4.9/7.4/7.7), 1.1 (6-Me; d, 6.9); unit В 7.45 (NH; d, 7.9), 7.22 (H-9; dd, 2.0/8.4), 7.0 (H-8; d, 8.4), 4.45 (H-2; ddd, 3.6/7.9/11.2), 3.84 (ОMе; s), 3.2 (H-3; dd, 3.6/14.5), 2.75 (H-3’; dd, 11.2/14.5); unit C 7.8 (NH; d, 8.8), 3.65 (H-3; ddd, 3.3/8.8/13.2), 3.1 (H-3’, ddd, 2.1/2.1/13.2), 2.55 (H-2; m), unit D 7.35 (NH; d, 8.1), 4.25 (H-2, ddd, 4.8/8.1/10.8), 1.65 (H-4; m), 1.45 (H-3; ddd. 5.1/10.8/13.7), 1.35 (H-3’; 4.8/9.0/13.7), 0.8 (4-Me/ H-5; d, 6.5); 13С NMR unit A 165.9 (1), 140.8 (3), 138.6 (9), 129.4 (11/13), 129.2 (12), 126.7 (2), 126.6 (10/14), 76.0 (5), 63.9 (7), 59.3 (8), 41.2 (6), 37.7 (4), 13.9 (6-Me); unit B 171.9 (1), 154.6 (7), 132.5 (4), 131.4 (5), 129.0 (9), 122.4 (6), 113.1 (8), 56.9 (2), 65.4 (OMe), 36.4 (3) unit C 177.2 (1), 41.3 (3), 38.9 (2), 15.7 (2-Me); unit D 174.2 (1), 51.7 (2), 40.6 (3), 25.3 (4), 23.1 (4-Me), 21.5 (5).
Криптофицин 123
[]D +25.2° (с 0.58, СHCl3); 1H NMR (CDCl3) unit A 7.21-7.35 (Ph-H5, m), 6.75 (H-3, ddd, 4.1/10.9/14.1), 5.85 (H-2; dd, 1.4/15.2), 5.25 (H-5, m), 3.6 (H-8; d, 2.0), 2.9 (H-7, dd, 2.0/7.8), 2.7 (H-4; m), 2.55 (H-4’; m). 1.75 (H-6; m), 1.05 (6-Me; d, 7.1), unit В 7.18 (H-5; d, 2.0), 7.05 (H-9; dd, 2.0, 8.5), 6.85 (H-8; d, 8.5), 5.95 (NH; d, 7.7), 4.7 (H-2; ddd, 4.9/7.7/8.1), 3.86 (OMe; s), 3.15 (H-3; dd, 4.9/14.5), 3.05 (H-3’; dd, 8.1/14.5); unit С 7.25 (NH; m), 3.55 (H-3; ddd, 4.6/8.7/13.3), 3.15 (H-3’; ddd, 3.0/3.1/13.3), 2.55 (H-2; m), 1.2 (2-Me; d, 7.3); unit D 6.0 (NH; d, 8.2), 4.45 (H-2; m), 1.6 (H-4; m), 1.55 (H2-3; m), 0.88 (4-Me; d, 7.1), 0.87 (5-H; d, 7.1).
Криптофицин 127
Криптофицин 122 (5 мг, 0.0075 ммоля) раство-ряли в СНСl3 (2 мл) и охлаждали до -40°С в атмо-сфере N2. Добавляли по каплям триметилсилилхло-рид (0.02 мл, 0.157 ммоля) и полученную смесь перемешивали при -40°С в течение 1 часа. Раство-ритель выпаривали и остаток фильтровали через слой силикагеля с 15% EtOH в диэтиловом эфире с получением Криптофицина 127 (4 мг, выход 77%).
[]D +28.6 (с 1.16, СНСl3); EIMS m/z 653 (0.5; M+-HCl); 411 (2); 182/184 (22/26), 153/155 (68/40); 135 (31); 107/108/109 (55/22/31); 91/92 (100/30); 79/81 (45/35); НREIMS m/z 653.2841 (C35H4435CIN3O7, 2.6mmu); 1Н NMR (СНСl3) unit A 7.3-7.4 (Ph-H5; m), 6.75 (Н-3, ddd, 4.2/10.9/15.0), 5.8 (H-2; dd, 1.5/15.0), 5.2 (H-5; ddd, 1.9/9.9/9.9), 4.65 (H-8; d, 9.6), 4.0 (Н-7, brd, 9.6), 2.65 (H-4; m), 2.48 (H-6; m), 2.35 (H-4’; ddd, 10.9/11.2/14.5), 1.02 (6-Me; d, 7.0); unit B 7.18 (H-5; d, 2.2), 7.05 (H-9; dd, 2.2/8.6), 6.85 (H-8; d, 8.6), 6.05 (NH; d, 7.7). 4.65 (H-2; ddd, 4.7/7.7/8.6), 3.86 (OMe; s), 3.15 (H-3; dd, 4.7/14.6), 2.9 (H-3’; dd, 8.6/14.6); unit C 7.25 (NH; brdd, 4.1/5.7), 3.4 (H2-3; m), 2.55 (H-2; m), 1.15 (2-Me, d, 7.5); unit D 6.2 (NH; d, 8.2), 4.45 (H-2; m), 1.65 (H-4; m), 1.55 (H2-3; m), 0.93 (4-Me; d, 6.8), 0.92 (5-Me; d, 6.8); 13С NMR (CDCl3) unit A 165.4 (1), 142.4 (3), 138.8 (9), 128.8 (11/13), 128.2 (12), 128.0 (10/14), 124.0 (2), 75.6 (5), 73.9 (7), 62.1 (8), 38.6 (6), 36.4 (4), 8.5 (6-Me); unit B 171.1 (1), 154.0 (7), 130.8 (5), 129.8 (4), 128.2 (9), 122.4 (6), 112.4 (8), 56.1 (ОMе), 54.5 (2), 35.4 (3); unit C 175.8 (1), 41.1 (3), 38.8 (2), 14.8 (2-Me); unit D 173.2 (1), 51.1 (2), 40.9 (3), 25.0 (4), 22.8 (5), 21.8 (4-Me).
Пример 21 Синтез Криптофицинов 128 и 130-134
Криптофицины 128, 130 и 131
Неочищенную 2:1 смесь 5.7 мг Криптофици-нов 117 и 118 растворяли в СНСl3 (0.5 мл) и обра-батывали триметилсилилхлоридом (5 мкл) при -60°С в течение 3 часов.
Разделение с помощью гель проникающей жидкостной хроматографии с обращенной фазой, полученной смеси хлоргидринов давало Крипто-фицин 128, Криптофицин 130 и Криптофицин 131. Дальнейшая очистка с помощью гель проникаю-щей жидкостной хроматографии с нормальной фазой давала чистый Криптофицин 128 (2.1 мг).
Спектральные данные для Криптофицина 128
[]D +51.4 (CHCl3, с 0.4), IR max 3408, 3281, 2958, 1747, 1731, 1668, 1538, 1505, 1258, 1179, 1067, 910, 733 cm-1; EIMS m/z (relative intensity %) 668 (0.3, М+- HCl), 500 (1.2), 445 (4.2), 407 (6), 318 (12), 274 (17), 240 (33), 199 (29), 155 (31), 141 (23), 135 (15), 109 (100); high-resolution EIMS 668.2851 (calcd for С35H45CIN2O8, +1.3mmu, M+-HCl). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.27 (10-H/14-H, d, 8.0), 7.18 (11-H/13-H, d, 8.0), 6.69 (3-H, ddd, 15.2, 9.6, 5.4), 5.79 (2-H, dd, 15.2, 0.8), 5.10 (5-H, ddd, 11.0, 8.4, 1.7), 4.63 (8-H, d, 9.6), 3.99 (7-H, bd, 9.6), 2.67 (4-H, bdd, 5.4, - 14.2), 2.49 (6-H, dqd, 7.6, 7.6, 1.7), 2.36 (4-H’, td, 10.7, -14.2), 2.35 (12-Me, s), 1.04 (6-СН3, d, 7.1); unit B 7.23 (5-Н, d, 2.1), 7.09 (9-Н, dd, 8.5, 2.1), 6.84 (8-Н, d, 8.5), 5.83 (NH, d, 8.6), 4.80 (2-H, ddd, 8.2, 7.5, 5.7), 3.87 (ОMе, s), 3.16 (3-H, dd, 5.6, - 14.4), 3.00 (3-H’, dd, 7.5, -14.4); unit C 6.94 (NH, bt, 5.8), 3.53 (3-H, ddd, 5.4, 4.1, - 13.5), 3.24 (3-H’, ddd, 6.9, 6.6, -13.5), 2.74 (2-H, m), 1.22 (2-Me; d, 7.3); unit D 4.92 (2-H, dd, 9.9, 3.2), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.47 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.4), 0.92 (4-Me-H, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.6 (1), 141.6 (3), 139.2 (12), 135.3 (9), 129.7 (10/14), 127.9 (11/13), 125.2 (2), 76.4 (5), 74.0 (7), 62.0 (8), 38.4 (6), 36.3 (4), 21.1 (12-Me), 8.6 (6-Me); unit В 171.1 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.0 (4), 128.4 (9), 122.4 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3); unit С 175.3 (1), 41.3 (3), 38.3 (2), 14.0 (2-Ме); unit D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.7 (3), 24.7 (4), 23.1 (5), 21.5 (4-Me).
Cпектральные данные для Криптофицина 130
1H-ЯМР (300 Мгц) unit А 7.27 (10-H/14-H, d, 7.8), 7.16 (11-H/13-H, d, 7.8), 6.69 (3-Н, ddd, 15.1, 9.6, 5.2), 5.75 (2-Н, d, 15.1), 5.40 (5-Н, ddd, 10.6, 3.0, 1.8), 5.05 (8-Н, d, 5.9), 3.74 (7-Н, ddd, 10.5, 5.4, 5.2), 2.59 (4-Н, m), 2.55 (6-Н, m), 2.37 (4-Н’, m), 2.33 (12-Ме, s), 1.06 (6-СН3, d, 6.9); unit B 7.21 (5-Н, bs), 7.07 (9-Н, bd, 8.4), 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.77 (NH, d, 6.6), 4.80 (2-Н, m), 3.87 (ОMе, s), 3.12 (3-Н; dd, 5.6, -14.4), 3.02 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4), unit С 7.00 (NH, bt, 6.5), 3.47 (3-Н, ddd, 4.3, 4.0, -13.3), 3.24 (3-H’, ddd, 6.7, 6.6, -13.3), 2.72 (2-Н, m), 1.23 (2-Ме, d, 7.3); unit D 4.80 (2-Н, m), 1.70 (3-H/4-H; m), 1.42 (3-Н’, ddd, 7.9, 4.7, -13.0), 0.91 (5-Н, d, 6.4), 0.86 (4-Ме-Н, d, 6.4). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.5 (1), 142.1 (3), 138.8 (12), 135.2 (9), 129.5 (10/14), 127.5 (11/13), 124.8 (2), 77.8 (5), 74.2 (7), 67.2 (8), 39.4 (6), 34.6 (4), 21.1 (12-Ме), 12.3 (6-Ме), unit В 171.0 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 129.5 (4), 128.4 (9), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.6 (2), 35.0 (3)’ unit С 175.6 (1), 41.1 (3), 38.3 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.3 (1), 71.5 (2), 39.5 (3), 24.6 (4), 22.7 (5), 21.6 (4-Ме).
Спектральные данные для Криптофицина 131
1H-ЯМР (300 Мгц) unit A 7.18 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.64 (3-Н, ddd, 15.2, 9.8, 5.4), 5.70 (2-Н, d, 15.2), 5.06 (5-Н, bt, 9.1), 4.86 (8-Н, d. 9.7), 4.06 (7-Н, bd, 9.7), 2.54 (4-Н, bdd, 5.2, -14.2), 2.37 (12-Ме, s), 2.13 (4-Н’, т), 1.85 (6-Н, m), 0.97 (6-СН3, d, 6.6); unit В 7.21 (5-Н, d, 2.1), 7.07 (9-Н, dd, 8.4, 2.1). 6.83 (8-Н, d, 8.4), 5.66 (NH, d, 10.0), 4.79 (2-Н, bq, 7.7), 3.87 (ОMе, s), 3.14 (3-Н; dd, 5.6, - 14.4), 3.02 (3-Н’, dd, 7.2, -14.4); unit С 6.93 (NH, bt, 6.2), 3.51 (3-H, ddd, 5.0, 4.2, - 13.5), 3.27 (3-H’, ddd, 6.7, 6.4, -13.5), 2.73 (2-H, rn), 1.23 (2-Me; d, 7.3), unit D 4.86 (2-H, dd, 9.7, 3.4), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.46 (3-H’, m), 0.94 (5-H, d, 6.0), 0.93 (4-Me-H, d, 6.4).
Криптофицин 132, 133 и 134
Смесь Криптофицина 124 и изомера Z (134 мг, 0.199 ммолей) растворяли в дихлорметане (6 мл) и позволяли взаимодействовать с м-хлорпербензойной кислотой (103 мг, 0.598 ммолей) при комнатной температуре в течение 36 часов. Добавляли фосфатный буфер (10 мл, рН 8) для удаления хлорбензойной кислоты образующейся в процессе реакции. Через 30 минут водный слой заменяли диметилсульфоксидом (50 мкл) и свежим образцом фосфатного буфера (10 мл). Перемеши-вание продолжали в течение 30 минут. Органиче-ский слой отделяли растворитель упаривали и остаток очищали с помощью жидкостной гель про-никающей хроматографии с обращенной фазой (Econosil ODS силикагель, 22 х 250 мм, 35% смесь вода/СН3СN, при 6 мл/мин) с получением Крипто-фицина 134 (tR 52.5 мин, 9 мг, выход 6%), частично чистого Криптофицина 133 (tR 61 мин, 32 мг, выход 22%) и неочищенного Криптофицина 132 (tR 67.5 мин, 72 мг). Дальнейшая очистка с помощью жид-костной гель проникающей хроматографии с нор-мальной фазой (Econosil силикагель, 10 х 250 мм, 56% ЕtOАс/гексан, 3 мл/мин) давала чистый Крип-тофицин 132 (65 мг, выход 45%),
Спектральные данные для Криптофицина 132
[]D +60.1° (СНСl3, с=1.1); EIMS m/z (relative intensity %) 688 (1.6, М+- HCl), 412 (10), 261 (11), 195 (57), 184 (28), 165 (28), 155 (92), 135 (85), high-resolution EIMS m/z 688.23563 (сalcd for С35Н42Сl2N2О8, -3.8mmu, M+-HCl). 1H NMR (500 MHz) unit A 7.33 (10-H/11-H/13-H/14-H, s), 6.67 (3-H, ddd, 15.2, 9.9, 5.1), 5.79 (2-H, dd, 15.2, 1.1), 5.10 (5-H, ddd, 1.11, 8.1, 1.5), 4.63 (8-H, d, 9.5), 3.98 (7-H, bd, 9.3), 2.62 (4-H, bdd, 5.1, -14.2), 2.47 (6-H, dqd, 7.4, 7.4, 1.5), 2.40 (4-H’, td, 10.8, -14.2), 2.35 (12-Me, s), 1.02 (6-СН3, d, 7.0); unit B 7.21 (5-H, d, 2.1), 7.06 (9-H, dd, 8.4, 2.1), 6.82 (8-H, d, 8.4), 6.04 (NH, d, 8.5), 4.74 (2-H, td, 8.0, 5.4), 3.85 (ОMе, s), 3.13 (3-Н; dd, 5.3, -14.4), 2.95 (3-H’, dd, 7.8, -14.4); unit C 7.00 (NH, bt, 5.9). 3.48 (3-H, ddd, 5.0, 3.9, -13.4), 3.23 (3-H’, ddd, 6.6, 6.3, -13.4), 2.71 (2-H, m), 1.21 (2-Me; d, 7.2); unit D 4.91 (2-H, dd, 9.7, 3.4), 1.75 (3-H/4-H; m), 1.45 (3-H’, m), 0.92 (5-H, d, 6.6), 0.91 (4-Me-H, d, 6.6). 13С NMR (125 MHz) unit A 165.7 (1), 141.6 (3), 137.3 (12), 134.8 (9), 129.4 (11/13), 129.0 (10/14), 125.2 (2), 76.4 (5). 74.0 (7), 61.4 (8), 38.4 (6), 36.2 (4), 8.7 (6-Ме); unit В 171.1 (1), 153.9 (7), 131.0 (5), 130.1 (4), 128.4 (9), 122.3 (6), 112.2 (8), 56.1 (ОMе), 53.8 (2), 34.9 (3); unit С 175.3 (1), 41.0 (3), 38.1 (2), 14.1 (2-Ме); unit D 170.6 (1), 71.3 (2), 39.7 (3), 24.7 (4), 23.1 (5), 21.5 (4-Ме).
1Н-ЯМР спектр является подобным спектру Криптофицина 27, за исключением того, что два мультиплета при 7.31 (10/14) и 7.36-7.40 (11/12/13) для фенильных протонов заменялись на два дубле-та при 7.26 (10/14) и 7.36 (11/13) для п-хлорфенильных протонов.
Пример 22 Отношения структура-активность (SAR) и оценка in vivo
Цитотоксичности Криптофицинов 1, 3 и 8 и новых криптофицинов по отношению к человече-ским линиям КB и LoVo опухолевых клеток пока-зывают в Таблице 6. Криптофицин 51 и Криптофи-цин 3 проявляют сравнимые цитотоксичности (IC50 3.5-5.8 нМ). Криптофицин 52 (IC50 43-70 пкМ), од-нако, обладает слегка меньшей цитотоксичностью, чем Криптофицин 1 (IC50 9-29 пкМ), и Криптофицин 55 (IC50 33-47 пкМ), обладает слегка меньшей ци-тотоксичностью, чем Криптофицин 8 (IC50 9-19 пкМ). Цитотоксичность IC50 для Криптофицинов 117, 122, 125, 127, 128 и 132 является сравнимой с цитотоксичностью для Криптофицинов 1, 8, 52 и 55; однако, данные не позволяют в настоящий мо-мент провести более полные сравнения.
Криптофицин 52 является активным in vivo, но требует, грубо, применения три раза по полной дозе, по сравнению с Криптофицином 1. Актив-ность in vivo Криптофицина 52 против пяти твер-дых опухолей мышиного происхождения и трех человеческих твердых опухолей суммируется в Таблице 7. Аналогично Криптофицин 55 был акти-вен in vivo, но требовал также применения трех полных дозировок, по сравнению с Криптофицином 8. Активность in vivo Криптофицина 55 против шести твердых опухолей мышиного происхожде-ния и четырех человеческих твердых опухолей суммируется в Таблице 8. Данные in vivo оказыва-ется коррелируют с данными in vitro.
Криптофицины 117, 125, 128 и 132 являются активными in vivo против панкреатической адено-карциномы мышиного происхождения (Раnс 03). Криптофицины 117 и 128 оказывается являются более сильными, так что они требуют меньших общих доз, чем Криптофицины 1 и 8, соответствен-но, тогда как Криптофицины 125 и 132 являются менее сильными, так что они требуют более высо-ких общих доз, чем Криптофицины 1 и 8, соответ-ственно. Данные суммируются в Таблице 9.
Величины Т/С, которые составляют меньше чем 42%, считаются активными согласно NCl стан-дартам; считается что величины Т/С, которые со-ставляют меньше, чем 10%, имеют превосходную активность и потенциальную клиническую актив-ность согласно NCl стандартам. Суммарную вели-чину Log уничтожения определяют в виде Т-С/3.2 Td, где Т представляет среднее время в сутках для опухолей обработанной группы для достижения опухоли в 750 мг, С представляет среднее время в сутках для опухолей контрольной группы для до-стижения опухоли в 750 мг, и Td представляет вре-мя удвоения объема опухоли. T.H.Corbett et.al., Cytotocxic Anticancer Drugs: Model and Conceptd for Drug Discovery and Development, pp. 35-87; Kluwer: Norwell, 1992). Суммарные величины Log уничто-жения выше 2.8, 2.0-2.8, 1.3-1.9, 0.7-1.2 и ниже 0.7 с продолжительностью обработки лекарством 5-20 суток считают ++++, +++, ++, + и (неактивный), со-ответственно. Характеристика активности от +++ до ++++, которая является указанием на клиниче-скую активность, является необходимой для ча-стичного влияния или полной регрессии масс с 100-300 мг размером большинства трансплантирован-ных твердых опухолей мыши. Криптофицин 52 показывает величины Т/С, находящиеся в области от 0 до 14% для мышиных опухолей и от 4.1 до 16 для человеческих опухолей и суммарные величины Log уничтожения от 1.1 до 2 для мышиных опухо-лей и от 0 до 3.2 для человеческих опухолей. Крип-тофицин 1 показывает величины Т/С, находящиеся в области от 0 до 27% и величины Log уничтоже-ния в области меньше 1 до 2. Криптофицин 55 по-казывает величины Т/С, находящиеся в области от больше чем 0 до 4.4% и величины Log уничтожения в области от 2.1 до больше 4.6 (кривые) для всех, но одного из трех, Colon 26 эксперимента, который показывает суммарную величину Log уничтожения 1.2. Криптофицин 8 показывает величины Т/С, больше чем 0 и величины Log уничтожения больше 2.8 (некоторые кривые), как показано в Таблице 10. Оказывается, что Криптофицины 117 и 125 имеют величины Т/С и суммарные величины Log уничто-жения, которые сравнимы с этими величинами для других криптофицинов эпоксидного типа, а именно Криптофицинов 1 и 52, тогда как Криптофицины 128 и 132 имеют величины Т/С и суммарные вели-чины Log уничтожения, которые являются сравни-мыми с этими величинами для других криптофици-нов хлорфицинового типа, а именно Криптофици-нов 8 и 55.
Все публикации и патентные заявки, перечис-ленные в этом описании, но не индивидуально и конкретно введенные здесь ссылкой, вводятся здесь ссылкой, как если бы они были указаны как кон-кретно и индивидуально введенными ссылкой.
Хотя вышеприведенное изобретение было описано в некоторых деталях с помощью иллю-страции и примера с целью разъяснения и понима-ния, для специалиста в этой области будет очевид-но в свете описания этого изобретения, что некото-рые изменения и модификации могут быть проведе-ны в нем без отклонения от сути и объема заявляе-мого в формуле изобретения.
(56) Документы, цитированные в отчёте
ЕР 0358418 Аl, 05.09.1988
WO 91/10655 Al, 25.07.1991
SU 1726475 Al, 15.04.1992
WO 91/10655 Al, 25.07.1991
SU 1726475 Al, 15.04.1992
📎 Прикреплённые файлы
-
347.pdf⬇ Скачать