СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭХИНОАЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА

Изобретение относится к области медицины и ка-сается способа получения эхиноаллергена для диагнотики эхинококкоза человека.
Целью изобретения является упрощение способа приготовления полностью очищенного от бластных веществ видоспецифичного аллергена для диагностики эхинококкоза человека. Указанная цель достигается тем, что эхинококковые цисты вида Е. haminis полученные при оперировании людей, больных эхинококкозом в эхинококковой жидкости подвергаются механическому измельчению на размельчителей тканей и фильтруют через ватно-марлевый тампон. Полученный фильтрат ставят в холодильник на 10-12 часов для осаждения крупных частиц белка, для полного осаждения добавляют 4-кратный объем 96° спирта-ректификата, полученный осадок растворяют в воде, промывают эфиром для удаления бластных веществ. Затем белок, полностью очищенный от бластных веществ осаждают 4-кратным объемом спирта-ректификата. Осадок после высушивания при температуре 37-39°С, размельчают в электро-мельнице или фарфоровой ступке. Готовый аллерген расфасовывают в ампулах по 0,01 г, запаивают и автоклавируют при 0,5 атмосферах в течение 20 минут при температуре 110°С. Аллерген используют в виде 0,1%-го раствора в физиологическом растворе или дистиллированной воде

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения эхиноаллергена для диагнотики эхинококкоза человека.
Прототипом заявляемого изобретения является способ получения эхиноаллергена из сколексов, собранных их эхинококковых цист (1). Согласно этому способу сколексы собирают из эхинококко-вых цист, полученных от больных эхинококкозом животных. После промывания 96-ным спиртом ректификатом, высущивания на воздухе, сколексы подвергают ферментативному расщеплению 0,1% раствором пепсина медицинского при рН-5,0 в течение 42 часов при температуре 30-39С. Затем гидролизат центрифугируют при 2 тыс. оборотов в течение 3 минут, фильтруют через ватно-марлевый тампон, непереваренный осадок выбрасывают. Из профильтрованного гидролизата аллерген оса-ждают путем добавления 4 объемов 96-го этило-вого спирта. Затем рН доводят до 7-7,7 добавлени-ем 20%-го раствора двууглекислой соды с целью лучшего осаждения аллергена. Выпавший осадок (аллерген) собирают центрифугированием при 4 тыс. оборотов в течение 5 мин. Надосадочный спирт сливают, осадок (аллерген) промывают ди-стиллированной водой и снова перессаждают 96-ным спиртом-ректификатом при температуре 4С. Аллерген после второго осаждения отделяют цен-трифугированием при 6 тыс. оборотов в течение 5 минут. Полученный аллерген сушат при темпера-туре 37-38С в течение 16-10 часов, растирают в электромельнице или ступке в мелко-дисперсный порошок. Готовый аллерген расфасовывают в ам-пулах по 0,1-0,2 г, запаивают, автоклавируют при 0,5 атмосферах в течение 20 минут при температу-ре 110С [1].
Недостатками данного способа являются сложность процесса приготовления аллергена и использование ферментативного гидролиза, для которого необходим дорогостоящий пепсин. А также в состав аллергена полученного только из сколексов не входят все белки обладающие аллер-генной активностью и данный аллерген приготов-ленный из сколексов цист, полученных от больных овец является мало специфичным для человека.
Целью изобретения является упрощение спо-соба приготовления полностью очищенного от бластных веществ видоспецифичного аллергена для диагностики эхинококкоза человека. Указанная цель достигается тем, что эхинококковые цисты вида Е. haminis полученные при оперировании людей, больных эхинококкозом в эхинококковой жидкости подвергаются механическому измельче-нию на размельчителей тканей и фильтруют через ватно-марлевый тампон. Полученный фильтрат ставят в холодильник на 10-12 часов для осажде-ния крупных частиц белка, для полного осаждения добавляют 4-кратный объем 96 спирта-ректификата, полученный осадок растворяют в воде, промывают эфиром для удаления бластных веществ. Затем белок, полностью очищенный от бластных веществ осаждают 4-кратным объемом спирта-ректификата. Осадок после высушивания при температуре 37-39С, размельчают в электро-мельнице или фарфоровой ступке. Готовый аллер-ген расфасовывают в ампулах по 0,01 г, запаивают и автоклавируют при 0,5 атмосферах в течение 20 минут при температуре 110С. Аллерген использу-ют в виде 0,1%-го раствора в физиологическом растворе или дистиллированной воде.

Применение предлогаемого
способа позволяет:
1. Снизить себестоимость аллергена за счет исключения использования дорогостоящего пепси-на при расщеплении тканей.
2. Полностью очистить аллерген от бластных веществ.
3. Получить видоспецифичный аллерген для диагностики эхинококкоза человека.
4. При использовании полностью очищенного аллергена от бластных веществ аллергических реакций на организм не отмечается.

Пример
Эхинококковые цисты вида E. hominis, полу-чают от оперированных людей с эхинококковой болезнью. Крупные цисты, изолированные от тка-ней человека, вскрывают над кюветой. Через разрез пузыря внутреннюю (герминативную) оболочку вместе со сколексами и эхинококковой жидкостью помещают в специальный стакан и подвергают механическому расщеплению на размельчителей тканей в течение 5 мин. Полученную суспензию фильтруют через ватно-марлевый тампон. Остатки неизмельченной ткани выбрасывают. Фильтрат ставят на 10-12 часов в холодильник для осажде-ния крупных частиц белка, затем фильтруют через ватно-марлевый тампон. К фильтрату добавляют 4-кратный объем 96-го спирта ректификата и остав-ляют в холодильнике при температуре 4С на 24 часа. Осадок (аллерген) отделяют центрифугиро-ванием при 6 тыс. оборотов в течение 5 мин. Надо-садочный спирт сливают. Осадок растворяют в воде и промывают эфиром для удаления бластных веществ. К водному слою добавляют 4-кратный объем 96-го спирта ректификата и ставят в холо-дильник при температуре 4С на 24 часа. Осадок (аллерген) отделяют центрифугированием при 6 тыс. оборотов в течение 10 минут. Надосадочный спирт сливают, осадок (аллерген) помещают в чашки Петри и сушат в термостате при 37-38С в течение 16-18 часов. Сухой аллерген измельчают в электромельнице или фарфоровой ступке в мелко-дисперсный порошок. Готовый аллерген фасуют в стеклянные ампулы по 0,01 г, запаивают, автокла-вируют при 0,5 атмосферах в течение 20 мин. при температуре 110С. Эхиноаллерген применяют в виде 0,1%-го раствора в физиологическом растворе или дистиллированной воде. Готовый аллерген проверяют на стерильность, безвредность и актив-ность.

Муминов А.М. Инструкция по изготовлению эхиноаллергена для диагностики эхинококкоза овец, коз и крупного рогатого скота. - г.Душанбе, 1999г.