ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые способны сохранять, увеличивать или восстанавливать чувствительность клеток к терапевтическим или профилактическим средствам. Это изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения. Соединения и фармацевтические композиции по данному изобретению особенно полезны для лечения клеток с множественной лекарственной устойчивостью, для предупреждения развития множественной лекарственной устойчивости и при лечении раковых опухолей, отличающихся множественной лекарственной устойчивостью.

Настоящее изобретение относится к новым со-единениям, которые способны сохранять, увеличи-вать или восстанавливать чувствительность клеток к терапевтическим или профилактическим сред-ствам. Данное изобретение относится также к фар-мацевтическим композициям, содержащим эти со-единения. Соединения и фармацевтические компо-зиции по данному изобретению специально пред-назначены для воздействия на клетки с множе-ственной лекарственной устойчивостью, для предотвращения развития множественной лекар-ственной устойчивости и для лечения злокаче-ственных опухолей с множественной лекарствен-ной устойчивостью.

Предпосылки изобретения
Главной проблемой, влияющей на эффектив-ность химиотерапевтического лечения, является эволюция клеток, которые под воздействием хи-миотерапевтического средства приобретают устойчивость к большому количеству не родствен-ных в структурном отношении лекарственных и терапевтических средств. Такая множественная лекарственная устойчивость часто возникает в случае избытка продуцирования Р-гликопротеина мембраны 170 кДа (gp-170). Белок gp-170 присут-ствует в плазматических мембранах некоторых здоровых тканей, помимо линий раковых клеток, и гомологичен бактериальным транспортным бел-кам, (Hait et al., Cancer Communications, Vol. 1(1), 35 (1989); West, TIBS, Vol. 15, 42 (1990)). Этот бе-лок действует как экспортирующий насос, вызывая лекарственную устойчивость в результате активно-го вытеснения токсичных химических веществ. Хотя механизм действия этого насоса неизвестен, существует мнение, что белок gp-170 вытесняет вещества, обладающие определенными химиче-скими и физическими характеристиками, такими как гидрофобность, наличие карбонильных групп или присутствие глутатионового конъюгата (см. West).
Другой белок с множественной лекарственной устойчивостью, MRP (белок, связанный с лекар-ственной устойчивостью), был недавно обнаружен в клетках Н69АR, линии клеток с множествен- ной лекарственной устойчивостью, у которой отсут-ствует детектируемый Р-гликопротеин [S.P.C.Cole et al., Science, 258, pp. 1650-54 (1992)]. Лекарственно-устойчивый белок был обнаружен также в других линиях клеток с множественной лекарственной устойчивостью, не имеющих Р-гликопротеина, таких как клетки рака груди HL60/ADR и MCF-7 [(E.Schneider et а1., Cancer Res., 54, pp. 152-58 (1994); и N.Krishnamachary et al., Cancer Res., 53, pp. 3658-61 (1993)].
Ген лекарственно-устойчивого белка кодирует мембранный белок 190 кДа, который является еще одним членом суперсемейства АТФ-связывающих кассет. Лекарственно-устойчивый белок подобно Р-гликопротеину действует как насос, удаляющий натуральные лекарственные средства из клетки. Возможной физиологической функцией лекар-ственно-устойчивого белка может быть АТФ-зависимый перенос глутатионовых S-конъюгатов [G-Jedlitschky et al., Cancer Res., 54, pp. 4833-36 (1994); I. Leier et al., J. Biol. Chem., 269, pp. 27807-10 (1994); и Muller et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91, pp. 13033-37 (1994)].
Роль лекарственно-устойчивого белка в обла-сти клинической лекарственной устойчивости еще предстоит установить, но вполне вероятно, что лекарственно-устойчивый белок может быть еще одним белком, определяющим широкую устойчи-вость к противораковым лекарственным средствам.
Разные химические средства использовали для подавления множественной лекарственной устой-чивости и восстановления чувствительности к ле-карственным средствам. Хотя некоторые лекар-ственные средства улучшают чувствительность клеток с множественной лекарственной устойчиво-стью в отношении химиотерапевтических средств, их введение часто сопровождается нежелательны-ми побочными эффектами (см. Hait и др.). Напри-мер, хотя циклоспорин А (“CsA”), широко применя-емый иммуносупрессор, может повышать чувстви-тельность определенных раковых клеток в отноше-нии химиотерапевтических средств (Slater et al., Br. J. Cancer, Vol. 54, 235 (1986)), концентрации, необ-ходимые для достижения такого эффекта, вызыва-ют значительную иммуносупрессию у больных, иммунные системы которых уже ослаблены химио-терапией (см. Hait и др.). Кроме того, использова-ние CsA часто сопровождается вредными побоч-ными эффектами, включающими нефротоксич-ность, гепатотоксичность и расстройства цен-тральной нервной системы. Аналогичным образом, блокаторы кальциевого переноса и ингибиторы кальмодулина сенсибилизируют клетки с множе-ственной лекарственной устойчивостью, но каж-дый из них вызывает нежелательные физиологиче-ские эффекты (см. Hait et al.; Twentyman et al., Br. J. Cancer, Vol. 56, 55 (1987)).
Последние исследования привели к созданию лекарственных средств, которые потенциально обладают гораздо большим клиническим значени-ем в отношении сенсибилизации клеток с множе-ственной лекарственной устойчивостью. Эти сред-ства включают аналоги CsA, которые не оказыва-ют иммуносупрессивного действия, такие как 11-метиллейцинциклоспорин (11-met-leu CsA) (см. Hait et al.; Twentyman et al.), или средства, которые мо-гут быть эффективными при низких дозах, такие как иммуносупрессор FK-506 (Epand and Epand, Anti-Cancer Drug Design 6, 189 (1991)). Публикация РСТ WO 94/07858 относится к новому классу средств, модифицирующих множественную лекарственную устойчивость, которые по своей структуре не-сколько схожи с иммуносупрессорами FK-506 и рапамицином. Несмотря на эти разработки, по-прежнему существует необходимoсть в более эф-фективных средствах, которые можно использовать для ресенсибилизации клеток с множественной лекарственной устойчивостью в отношении тера-певтических или профилактических средств или предотвращения развития множественной лекар-ственной устойчивости.
Краткое изложение существа изобретения
Настоящим изобретением предусматриваются новые соединения, которые неожиданно обладают более высокой способностью, по сравнению с ра-нее описанными модификаторами множественной лекарственной устойчивости (МDR), сохранять, увеличивать или восстанавливать чувствитель-ность к лекарственным средствам в лекарственно-устойчивых клетках, композиции, содержащие эти соединения, и способы их применения. Соединения по настоящему изобретению можно использовать отдельно или в сочетании с другими терапевтиче-скими или профилактическими средствами с целью сохранения, увеличения или восстановления тера-певтического или профилактического действия лекарственных средств в клетках, особенно в клет-ках с множественной лекарственной устойчиво-стью, или с целью предотвращения образования клеток с множественной лекарственной устойчиво-стью. В соответствии с одним вариантом осу-ществления данного изобретения эти новые соеди-нения, композиции и способы успешно использу-ются для усиления схемы химиотерапевтического лечения или профилактики рака и других болезней.
Настоящим изобретением предусматриваются также способы получения соединений по данному изобретению и промежуточных продуктов, полез-ных при осуществлении этих способов.
Подробное описание изобретения
Данное изобретение относится к новому клас-су соединений, выраженных формулой (I):
(I)

где R1, В и D независимо друг от друга обозначают:
Ar, (C1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С2- С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью, (С5-С7)-циклоалкилзамещенный (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С5-С7)-циклоалкилзамещенный (С3-С6)-алкенил или ал-кинил с прямой или разветвленной цепью, (C5-С7)-циклоалкенилзамещенный (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С5-С7)-циклоалкенилзамещенный (С3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью, Ar-замещенный (С1-С6)-алкил с прямой или разветв-ленной цепью, Аr-замещенный (С3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью;
где любая из СН2 групп указанных алкильных цепей может быть необязательно замещена гетеро-атомом, выбиваемым из группы, включающей О, S, SO, SO2 и NR, где R выбирают из группы, включа-ющей водород, (С1-С4)-алкил с прямой или раз-ветвленной цепью, (С3-С4)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью и (С1-С4) мости-ковый алкил, где мостиковая связь образована между азотом и атомом углерода указанной со-держащей гетероатом цепи с образованием кольца и где указанное кольцо необязательно связано с Аr группой;
В и D могут также быть водородом;
J выбирают из группы, включающей (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С3-С6)-алкенил с прямой или разветвленной цепью, Ar-замещенный (C1-С6)-алкил с прямой или разветв-ленной цепью и Ar-замещенный (С3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью;
K выбирают из группы, включающей (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, Ar-замещенный (С1-С6)-алкил с прямой или разветв-ленной цепью, Ar-замещенный (C2-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью и цик-логексилметил;
X выбирают из группы, включающей Аr, -OR2 и -NR3R4;
где R2 имеет те же значения, что и R1; R3 и R4 независимо друг от друга имеют те же значения, что В и D, или R3 и R4, вместе взятые, образуют 5-7-членное гетероциклическое алифатическое или ароматическое кольцо;
где Ar является карбоциклической ароматиче-ской группой, выбираемой из группы, включающей фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, инденил, азуленил, флуоренил и антраценил;
или Аr является гетероциклической аромати-ческой группой, выбираемой из группы, включаю-щей 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, пирролил, океса-золил, тиазолил, имидазолил, пираксолил, 2-пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотриазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,3,4-тиадиазолил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, 1,3,5-тритианил, индо-лизинил, индолил, изоиндолил, 3Н-индолил, индо-линил, бензо[b]фуранил, бензо[b]тиофенил, 1H-индазолил, бензимидазолил, бензтиазолил, пури-нил, 4H-хинолизинил, хинолинил, 1, 2, 3, 4-тетрагидрохинолинил, изохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, циннолинил, фталази-нил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,8-нафтиридинил, птеридинил, карбазолил, акриди-нил, феназинил, фенотиназинил н феноксазинил;
где Ar может иметь один или несколько заме-стителей, которые независимо друг от друга выби-рают из группы, включающей водород, галоген, гидроксил, нитро, -SO3H, трифторметил, трифтор-метокси, (С1-С6)-алкил с прямой или разветвлен-ной цепью, (С2-С6)-алкенил с прямой или разветв-ленной цепью, O[(С1-С6)-алкил с прямой или раз-ветвленной цепью], O-[(С3-C4)-алкенил с прямой или разветвленной цепью], О-бензил, O-фенил, 1,2-метилендиокси, -NR5R6, карбоксил, N-(C1-С5-алкил с прямой или разветвленной цепью или С3-С5-алкенил с прямой или разветвленной цепью) -карбоксамиды, N,N-ди-(С1-C5-алкил с прямой или разветвленной цепью или С3-C5-алкенил с прямой или разветвленной цепью)-карбоксамиды, морфо-линил, пиперидинил, О-М, СH2-(СH2)q-M, O-(СH2)q-M, (СH2)q-О-М и CH=CH-M;
где R5 и R6 независимо друг от друга выбира-ют из группы, включающей-водород, (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (C3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью и бензил; M выбирают из группы, включаю-щей 4-метоксифенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, пиразил, хинолил, 3,5-диметилизоксазоил, 2-метилтиазоил, тиазоил, 2-тиенил, 3 - тиенил и пиримидил; и q означает 0-2; и
m означает 0 или 1.
Предпочтительно, чтобы, по крайней мере, один из В или D независимо от другого был выра-жен формулой (CH2) (Z) - (CH2)s-Ar, где:
r означает 1-4;
s означает 0-l;
Аr имеет значения, указанные выше для со-единений формулы (I) ; и
каждый Z независимо от других выбирают из группы, включающей СН2, О, S, SO и SO2 и NR, где R выбирают из группы, включающей водород, (С1-С4)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С3-С4)-алкенил или алкинил с прямой или разветвлен-ной цепью и (С1-С4) мостиковый алкил, где мости-ковая связь образована между атомом азота и Аr группой.
Предпочтительными Аr группами по данному изобретению являются фенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, имидазолил, индолил, изоин-долил, хинолинил, изохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил и 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил, где указанный Аr может иметь один или несколько заместителей, которые независимо друг от друга выбирают из группы, включающей водород, гидроксил, нитро, трифтор-метил, (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, O-[(С1-С6)-алкил с прямой или разветвлен-ной цепью], галоген, SO3H и NR3R4, где R3 и R4 неза-висимо друг от друга выбирают из группы, вклю-чающей (С1-C6)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С3-С6)-алкенил с прямой или разветвлен-ной цепью, водород и бензил; или где R3 и R4, вме-сте взятые, могут образовывать 5-6-членное гете-роциклическое кольцо.
Примеры некоторых предпочтительных со-единений формулы (I) имеют формулу (II) или (III):

(II) (III)
где J и K независимо друг от друга обознача-ют (C1-C6) -алкил с прямой или разветвленной цепью или Аr-замещенный (C1-Сб)-алкил с прямой или разветвленной цепью; каждый Ас независимо от других является одной из предпочтительных арильных групп по данному изобретению, указан-ных выше; и каждый w означает 1 или 2.
В таблице 1 приведены некоторые примеры предпочтительных соединений формулы (I), где X является 3,4,5-триметоксифенильной группой и m означает 0 (формула (I')), где В, D, J, K и R1 имеют указанные значения для каждого соединения.
Таблица 1
(I)
Соед. B* D* J K R1
6 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 PhCH2 4-F-PhCh2-
7 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 PhCH2 PhCh2-
8 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 PhCH2 4-CI-PhCh2-
9 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 4-CI-PhCH2 PhCh2-
10 H- PH(CH2)3 CH3 PhCH2 4-Pyr-CH2
12 3-Pyr-(CH2)3- 3-Pyr-(CH2)3- CH3 PhCH2 PhCh2-
14 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 PhCH2 CH3
15 2-Pyr-(CH2)3- 3-Pyr-(CH2)3- CH3 PhCH2 CH3
16 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 (CH3)2CHCH2- PhCh2-
17 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 (CH3)2CHCH2- 4-F-PhCh2-
18 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 (CH3)2CHCH2- 4-CI-PhCh2-
19 4-Pyr-(CH2)2- 4-Pyr-(CH2)2- CH3 4-CI-PhCH2 4-F-PhCh2-
21 H- 3-Im-(CH2)2 CH3 PhCH2 PhCh2-
23 Ph(CH2)2- Ph(CH2)2- CH3 PhCH2 1H-Im-CH2

где Pyr - пиридильный радикал, Ph - фенильная группа и Im - имидазолильная группа.
Другое воплощение данного изобретения от-носится к соединениям формулы (XXXI):
(XXXI)
где m, В, D, J и K имеют значения, указанные выше для соединений формулы (I);
R7 имеет те же значения, что и R1, указанные выше для соединений формулы (I);
W является О или S;
Y является О или N, где,
когда Y означает О, тогда R8 является одиноч-ной парой (термин “одиночная пара” относится к одиночной паре электронов, такой как одиночная пара электронов, присутствующая в двухвалент-ном кислороде) и R9 выбирают из группы, включающей Ar, (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной цепью и (С3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью;

и
когда Y означает N, тогда R8 и R9 независимо друг от друга выбирают из группы, включающей Ar, (С1-С6)-алкил с прямой или разветвленной це-пью и (С3-С6)-алкенил или алкинил с прямой или разветвленной цепью; или R8 и R9, вместе взятые, образуют гетероциклическое 5-6-членное кольцо, выбираемое из группы, включающей пирролидин, имидазолидин, пиразолидин, пиперидин и пипера-зин;
где Ar имеет значение, указанное выше для со-единений формулы (I).
Предпочтительно, чтобы W в соединениях формулы (XXXI) был кислородом. Кроме того, предпочтение отдается соединениям формулы (XXXI), где, по крайней мере, один из В или D неза-висимо от другого выражен формулой -(CH2)r-(Z)-(CH2)s- Ar, где:
r означает 1-4;
s означает 0-1; и
каждый Z независимо от других выбирают из группы, включающей СH2, О, S, SO, SO2 и NR, где R выбирают из группы, включающей водород, (С1-С4)-алкил с прямой или разветвленной цепью, (С3-С4)-алкенил или алкинил с прямой или разветвлен-ной цепью и (C1-С4)-алкил с мостиковой связью, где мостик образован между атомом азота и Ar группой.
Как указывалось выше, соединения по данно-му изобретению включают все оптические и ра-цемические изомеры.
Как указывалось выше, все соединения по данному изобретению включают свои фармацевти-чески приемлемые производные. “Фармацевтиче-ски приемлемое производное” означает любую фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или соль такого эфира соединения по данному изобретению или любое другое соединение, кото-рое при введении нуждающемуся субъекту способ-но предоставить ему (прямо или косвенно) соеди-нение по данному изобретению, его метаболит или остаток, отличающийся способностью сохранять, увеличивать или восстанавливать чувствитель-ность клеток с множественной лекарственной устойчивостью к терапевтическим или профилак-тическим средствам или предотвращать развитие множественной лекарственной устойчивости.
Соединения по данному изобретению, выра-женные формулами (I) и (I’), можно получить с помощью любого известного метода. Эти соедине-ния предпочтительно синтезируют химическим путем из готовых исходных веществ, таких как альфа-аминокислоты. Предпочтение отдается так-же модулярным и конвергентным методам синтеза. В соответствии с конвергентным методом, напри-мер, крупные части конечного продукта соединяют на последних стадиях синтеза вместо последова-тельного добавления небольших частей к растущей молекулярной цепи.
Схема 1 иллюстрирует типичный пример кон-вергентного процесса синтеза соединений формулы

(I) (где m означает 0 или 1). Этот процесс включает связывание защищенной аминокислоты формулы (IV), где Р является защитной группой, с амином формулы (V), в результате чего образуется аминоамид формулы (VI). Защищенные альфа-аминокислоты хорошо известны в этой области и многие из них коммерчески доступны. Например, обычные защитные группы и известные способы защиты аминокислот описываются в книге T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 2nd Ed., John Wiley and Sons, New York (1991). Для защиты атома азота в соединениях формулы (IV) предпочтение отдается алкоксикар-бонильным группам, причем более предпочтитель-ными являются трет-бутоксикарбонил (Bос), бензи-локсикарбонил (Cbz), аллилоксикарбонил (Alloc) и триметилсилилэтоксикарбонил (Теос).
После связывания у соединений формулы (VI) удаляют защитные группы в приемлемых условиях удаления защитных групп (см. Greenе, выше), после чего свободную аминогруппу формулы (VII) аци-лируют, используя заранее полученный ацилхло-рид формулы (VIII’) или любую другую активиро-ванную форму соединения формулы (VIII). Галоген хлорсодержащей группы в соединении (VIII’) мо-жет быть заменен другими отщепляемыми группа-ми или активирующими группами, известными в этой области, такими как другие галогены, имида-золильные или пентафторфеноксигруппы.
Амины формулы (V), где m означает 0 (форму-ла (V’)) можно также получить в соответствии с известными способами, например, так, как показа-но на схемах 2, 3 и 4. В результате взаимодействия металлорганического реагента формулы (XV) с карбоновой кислотой формулы (XVI) или эквива-лентным веществом (например, амидом Вейнреба) получают кетоны формулы (XVII).
Схема 1






Схема 2




Схема 3



Схема 4

Такие кетоны можно легко превратить в ами-ны формулы (V’) с помощью любого процесса, хорошо известного в этой области, например, пу-тем восстановительного аминирования (схема 2).
Альтернативно (схема 3) в результате взаимо-действия, катализируемого металлическим катали-затором, 1,6-гептадиин-4-ол можно связать с аро-матическими галогенидами формулы (XVIII), в результате чего получают спирт формулы (XIX). Дальнейшая гидрогенизация дает спирт формулы (ХХ). Окисление в кетон формулы (XVII’) и после-дующее аминирование позволяют получить необ-ходимый амин формулы (V'').
В соответствии с другим воплощением спосо-бов по данному изобретению (схема 4) восстанав-ливают кетодиен формулы (ХХII), получаемый из альдегида формулы (ХХI), с получением кетона формулы (XVII"). В результате выполнения стан-дартной реакции аминирования получают амин формулы (V''’).
Таким образом, данным изобретением преду-сматривается также способ получения соединений формулы (I), включающий стадии:
(а) связывания аминокислоты формулы (IV) с амином формулы (V) с получением амида формулы (VI);
(b) удаление защитных групп из амида форму-лы (VI) с получением аминоамида формулы (VII); и
(с) ацилирование аминоамида формулы (VII) соединением формулы (VIII).
Специалистам в этой области должно быть понятно, что в соответствии со способами, проил-люстрированными на схемах синтеза 1-4, можно легко получить много разных соединений формулы (I). Те же способы можно использовать для синтеза многих других конечных продуктов путем варьи-рования исходных веществ.
Оптически активные соединения формулы (I) можно также полнить, используя оптически актив-ные исходные вещества, в результате чего устраня-ется необходимость разделения энантиомеров или отделения диастереомеров на последней стадии синтеза.
Схема 5 иллюстрирует типичный пример спо-соба получения предпочтительного подкласса соединений формулы (XXXI), где W является кис-лородом. Как показано на схеме 5, мочевины и карбаматы формулы (ХХХI’) получают аналогич-но способам получения соединений формулы (I), изображенным на схеме 1. Так, защищенную ами-нокислоту формулы (IV) можно связать со вторич-ным амином формулы (Viv). Удаление защитных групп с последующим ацилированием хлорангид-ридом формулы (ХХХ) дает желаемое соединение формулы (ХХХI’).
Схема 5

Специалистам в этой области должно быть также понятно, что вышеуказанные схемы синтеза не включают полный перечень всех способов, с помощью которых можно синтезировать соедине-ния или промежуточные продукты по данному изобретению.
Специалистам в этой области должны быть очевидны другие способы или модификации выше-указанных общих схем.
Соединения по данному изобретению можно модифицировать путем присоединения соответ-ствующих функциональных групп с целью усиле-ния специфических биологических свойств. Такие модификации известны в этой области и включают те, которые увеличивают био проницаемость в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), увеличивают доступность лекарственно-го средства при пероральном введении, повышают растворимость, что делает возможным паренте-ральное введение, изменяют метаболизм и скорость экскреции.
Соединения по данному изобретению отли-чаются способностью увеличивать, восстанавли-вать или сохранять чувствительность клеток с множественной лекарственной устойчивостью в отношении цитотоксичных соединений, например, таких, которые применяют в химиотерапии. На основании этой способности соединения по данно-му изобретению преимущественно используют в виде химиосенсибилизирующих средств с целью увеличения эффективности химиотерапии у лиц, имеющих лекарственно-устойчивые злокачествен-ные опухоли, метастазы или подобные болезни. Кроме того, соединения по данному изобретению способны сохранять чувствительность к терапев-тическим или профилактическим средствам в нере-зистентных клетках. Поэтому соединения по дан-ному изобретению полезны для лечения или преду-преждения множественной лекарственной устойчи-вости у нуждающихся субъектов. В частности, эти соединения полезны для лечения или предупре-ждения множественной лекарственной устойчиво-сти, опосредованной Р-гликопротеином и лекар-ственно-устойчивым белком.
Используемый в тексте данной заявки термин “нуждающийся субъект” относится к млекопитаю-щим, включая человека. Термин “клетка” относится к клеткам млекопитающих, включая клетки челове-ка.
Термины “сенсибилизирующее средство”, “сенсибилизатор”, “химиосенсибилизирующее средство”, “химиосенсибилизатор” и “модифика-тор множественной лекарственной устойчивости” означают соединение, обладающее способностью увеличивать или восстанавливать чувствитель-ность клетки с множественной лекарственной устойчивостью либо сохранять чувствительность нерезистентной клетки к одному или нескольким терапевтическим или профилактическим сред-ствам. Термин “сенсибилизация множественной лекарственной устойчивости”, “сенсибилизация” и “ресенсибилизация” относятся к действию такого соединения в отношении сохранения, увеличения или восстановления чувствительности к лекар-ственным средствам.

Соединения по настоящему изобретению можно использовать в форме фармацевтически-приемлемых солей, получаемых из неорганических или органических кислот и оснований. Такими кислыми солями являются следующие соли: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсуль-фонат, бисульфат, бутират, нитрат, камфорат, кам-фосульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюко-гептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метан-сульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, ок-салат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сук-цинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Основные соли включают соли аммония, соли ще-лочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли, образуемые с органиче-скими основаниями, такие как соли дициклогекси-ламина, N-метил-D-глюкамин, и соли аминокислот, такие как аргинин, лизин и подобные. Кроме того, основные азотсодержащие группы можно кватер-низировать с помощью таких веществ, как низшие алкилгалогениды, такие как метил, этил, пропил и бутилхлорид, бромиды и иодиды; диалкилсульфа-ты, такие как диметил, диэтил, дибутил и диамил-сульфаты, галогениды с длинной цепью, такие как децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бро-миды и иодиды, аралкилкалогениды, такие как бензил и фенетилбромиды, и другие. В результате этого получают водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально, парентерально, путем ингаляции, местного применения, ректально, назально, трансбуккально, вагинально или в виде имплантированных дозированных лекарственных форм, содержащих известные нетоксичные фарма-цевтически приемлемые носители, адъюванты и связующие. Термин “парентеральный” включает подкожные, внутривенные, внутримышечные, ин-траартикулярные, внутрисуставные, внутригру-динные, подоболочечные, внутрипеченочные, внутриопухолевые и внутричерепные инъекции или вливания.
Фармацевтические композиции по данному изобретению включают любые соединения по это-му изобретению или их фармацевтически приемле-мые соли вместе с фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или связующим. Фарма-цевтически приемлемые носители, адъюванты и связующие, которые можно использовать в фарма-цевтических композициях по данному изобрете-нию, включают, но не ограничиваются ими, иони-ты, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат ка-лия, частичные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, вода, соли или элек-тролиты, такие как протаминсульфат, динатрий-фосфат, дикалийфосфат, хлорид натрия, соли цин-ка, коллоидный кремнезем, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлю-лозы, полиэтиленгликоль, натрий карбоксиметил-целлюлоза, полиакрилаты, парафины, блоксопо-лимеры полиэтилена и полиоксипропилена, поли-этиленгликоль и ланолин.
В соответствии с данным изобретением фар-мацевтические композиции могут быть в форме стерильного инъекционного препарата, например, стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Эту суспензию можно получить с по-мощью известных методов, используя приемлемые диспергаторы, смачивающие и суспендирующие агенты. Стерильный инъекционный препарат мо-жет также быть стерильным инъекционным раство-ром или суспензией в нетоксичном пригодном для парентерального введения разбавителе или рас-творителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых связующих и рас-творителей можно назвать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Помимо этого, в качестве растворителя или суспендирую-щей среды обычно используют стерильные нелету-чие масла. С этой целью можно применять любое мягкое нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производ-ные, пригодны для получения инъекционных пре-паратов, так же как и натуральные фармацевтиче-ски приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в полиоксиэтили-рованном виде. Эти масляные растворы или сус-пензии могут также содержать спиртовой разбави-тель или диспергатор с длинной цепью, такой как Ph. Helv. или аналогичный спирт.
Фармацевтические композиции по данному изобретению можно вводить перорально в любой пригодной для перорального введения дозирован-ной форме, включающей, но не ограничивающейся ею, капсулы, таблетки, водные суспензии или рас-творы. В случае таблеток, предназначенных для перорального введения обычно применяемыми носителями являются лактоза и кукурузный крах-мал. Обычно также добавляют такие связывающие вещества, как стеарат магния. Для перорального введения в виде капсул полезны такие разбавители, как лактоза и сухой кукурузный крахмал. Когда для перорального введения требуются водные сус-пензии, активный ингредиент соединяют с эмульги-рующими и суспендирующими агентами. При же-лании могут быть добавлены определенные под-сластители, ароматизаторы или красители.
Альтернативно, фармацевтические компози-ции по данному изобретению можно использовать в виде суппозиториев для ректального введения. Их можно получить путем смешивания лекарственного средства с приемлемым нераздражающим напол-нителем, который является твердым при комнатной температуре и жидким при ректальной температу-ре, поэтому он плавится в прямой кишке, высво-бождая лекарственное средство. Такие вещества включают кокосовое масло, пчелиный воск и поли-этиленгликоли.
Фармацевтические композиции по данному изобретению можно также использовать для мест-ного применения, особенно, когда целью лечения являются легко доступные участки или органы, включая болезни глаз, кожи или нижнего отдела кишечника, Приемлемые составы для местного применения можно легко приготовить для каждого из этих участков или органов.
Местное применение для нижнего отдела ки-шечника может осуществляться с помощью соста-вов ректальных суппозиториев (см. выше) или в виде приемлемого состава для клизмы. Кроме того, можно использовать пластыри местного чрезкож-ного действия.

Для местного применения фармацевтические композиции можно использовать в виде приемле-мой мази, содержащей активный компонент, сус-пендированный или растворенный в одном или нескольких носителях. Носители для местного применения соединений по данному изобретению, включают, но не ограничиваются ими, минераль-ное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропи-ленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгируемый парафин и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции можно получить в виде приемлемого лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или рас-творенные в одном или нескольких фармацевтиче-ски приемлемых носителях. Приемлемые носители включают, но не ограничиваются ими, минераль-ное масло, моностеарат сорбита, полисорбат 60, цетиловые сложные эфиры воска, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.
Для офтальмологического применения фарма-цевтические композиции могут быть получены в виде очень тонких суспензий в изотоническом рН-отрегулированном стерильном физиологическом растворе или, предпочтительно, в виде растворов в изотоническом рН-отрегулированном стерильном физиологическом растворе с консервантом, таким как хлорид бензилалкония, или без него. Альтерна-тивно, для офтальмологического применения фар-мацевтические композиции могут быть получены в виде мази на основе вазелина.
Фармацевтические композиции по данному изобретению можно также вводить в виде назаль-ного аэрозоля или путем ингаляции. Такие компо-зиции получают в соответствии с методами, хоро-шо известными в фармации, и они могут представ-лять собой растворы в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других приемлемых консервантов, промоторов абсорбции, усиливающих биологическую доступность, фто-руглеродов и/или других солюбилизаторов или диспергаторов.
Количество активного ингредиента, которое можно соединить с носителями с целью получения однократной дозы, будет изменяться в зависимости от нуждающегося субъекта и определенного режи-ма введения. Однако следует понять, что специ-фичная доза и схема лечения для любого нуждаю-щегося субъекта будет зависеть от ряда факторов, включающих активность используемого соедине-ния, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и питание нуждающегося субъекта, время вве-дения и скорость выведения соединения, опреде-ленные сочетания лекарственных препаратов, назначение лечащего врача и серьезность заболе-вания, подлежащего лечению. Количество активно-го ингредиента может также зависеть от терапев-тического или профилактического средства, если оно применяется, вместе с которым вводится дан-ный ингредиент. Термин “фармацевтически эффек-тивное количество” относится к количеству, оказы-вающему эффективное действие по предотвраще-нию множественной лекарственной устойчивости или по сохранению, увеличению или восстановле-нию чувствительности к лекарственному средству у клеток с множественной лекарственной устойчи-востью.
Полезные дозы составляют от около 0,01 до около 100 мг/кг массы тела в день, предпочтитель-но от около 0,5 до около 50 мг/кг массы тела в день соединения активного ингредиента. Типичный пре-парат должен содержать от около 5% до 95% ак-тивного соединения (в весовом отношении). Такие препараты, предпочтительно, содержат от около 20% до около 80% активного соединения.
Если соединения по данному изобретению вводят в процессе комбинированной терапии вме-сте с другими средствами, их можно вводить нуж-дающемуся субъекту последовательно или одно-временно. Альтернативно, фармацевтические или профилактические композиции по данному изобре-тению могут содержать соединение по этому изоб-ретению и другое терапевтическое или профилак-тическое средство.
Например, эти соединения можно вводить от-дельно или в сочетании с одним или несколькими терапевтическими средствами, такими как химио-терапевтические средства (например, актиномицин D, доксорубицин, винкристин, винбластин, этопо-зид, амсакрин, митоксантрон, тенипазид, таксол и колхицин) и/или химиосенсибилизирующее сред-ство (например, циклоспорин А и его аналоги, фе-нотиазины и тиоксантеры), с целью увеличения чувствительности клеток с множественной лекар-ственной устойчивостью у нуждающегося субъекта к лекарственному средству или средствам.
Более полному пониманию данного изобрете-ния способствуют приводимые ниже примеры. Эти примеры служат только для иллюстрации и никоим образом не ограничивают объем изобретения.

Примеры
Общие методы
Спектры протонного ядерного магнитного ре-зонанса (1Н ЯМР) регистрировали при 500 МГц на спектрометре Bruker АМХ 500. Химические сдвиги выражены в частях на миллион () относительно Me4Si ( 0,0). Аналитическую жидкостную хрома-тографию высокого разрешения выполняли с по-мощью жидкостного хроматографа Waters 600Е или Hewlett Packard 1050.
Пример 1
1,5-Ди(пиридин-4-ил)-пент-1,4-диен-3-он (со-единение 1)
К раствору 1,3-ацентондикарбоновой кислоты (21,0 г, 0,144 ммоль) в абсолютном этаноле (200 мл) по каплям добавляют 4-пиридинкарбоксальдегид (30,8 г, 0,288 ммоль). В процессе добавления происходит выделение газа. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов реакционную смесь обрабаты-вают концентрированной хлористоводородной кислотой (100 мл) и нагревают до 80С; на протя-жении этого времени медленно образуется желтый осадок. Перемешивая суспензию, добавляют еще 500 мл этанола. После отстаивания суспензии в течение 1 часа при температуре 80С осадок соби-рают фильтрованием, промывают этанолом и су-шат в вакууме с получением необходимого продук-та в виде желтого твердого вещества. Полученный дигидрохлорид перекристаллизовывают из мети-ленхлорида, получая чистое соединение 1.
Пример 2
1,5-Ди (пиридин-4-ил) -пентан-3-он_(соедине-ние 2)
К суспензии соединения 1 (21,3 г, 67,4 ммоль) в 1,4-диоксане (40 мл) добавляют триэтиламин (48,1 мл, 0,346 моль), муравьиную кислоту (6,54 мл, 0,145 моль) и 10% палладия на углероде (0,7 г) и полученную смесь нагревают до температуры ки-пения с обратным холодильником. После переме-шивания при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 часа реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получен-ный остаток хроматографируют на силикагеле (элюирование смесью 5% метанола и метиленхло-рида) с получением требуемого продукта.
Пример 3
(4-Фторбензил) - (3-(пиридин-4-ил)-1-(2-(пиридин-4-ил) этил) -пропил) амин (соединение 3)
В колбу, оснащенную ловушкой Дина-Старка, вводят соединение 2 (12,46 г, 51,91 ммоль), 4-фторбензиламин (5,93 мл, 51,91 ммоль) и бензол (50 мл) и полученную смесь нагревают до температу-ры кипения с обратным холодильником. После отделения 930 мкл воды реакционную смесь охла-ждают и концентрируют. Остаток растворяют в этаноле (50 мл) и добавляют к суспензии борогид-рида натрия (2,96 г, 77,8 ммоль) в этаноле (50 мл), смесь нагревают до 80С и перемешивают в тече-ние 1 часа. Реакционную смесь охлаждают и кон-центрируют. Остаток растворяют в воде и подкис-ляют до рН 3,0 путем добавления 6 н раствора хлористоводородной кислоты. Водную фазу про-мывают этилацетатом (2 раза). Водную фазу под-щелачивают гидроксидом натрия до рН 10 и экс-трагируют продукт метиленхлоридом (2 раза). Органические фракции собирают, промывают насыщенным раствором соли, сушат над безвод-ным сульфатом магния, фильтруют и концентри-руют в вакууме. Хроматография остатка на сили-кагеле (элюирование смесью 5% метанола и мети-ленхлорида) дает соединение 3.
Пример 4
(S) -N- (4-Фторбензил) -2- (N-метил-N-трет-бутилкарбамоил) - амино-3-фенил-N-(3- (пиридин-4-ил) -1- (2- (пиридин-4-ил) этил) - пропил) пропи-онaмид ( соединение 4)
К раствору соединения 3 (550 мг, 1,66 ммоль) и (L)-BOС-N-метил-фенилаланина (700 мг, 2,5 ммоль) в метиленхлориде (4,0 мл), содержащему диизопропилэтиламин (300 мкл, 1,72 ммоль) до-бавляют гидрохлорид (3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (480 мг, 2,5 ммоль) и перемеши-вают реакционную смесь в течение 48 часов. Реак-ционную смесь разбавляют этилацетатом и водой. Слои разделяют и водную фазу повторно экстраги-руют этилацетатом. Органические фракции соби-рают, промывают насыщенным раствором бикар-боната натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Хромато-графия остатка на силикагеле (элюирование сме-сью 5% метанола и метиленхлорида) дает соеди-нение (4).
Пример 5
(S) -N- (4-Фторбензил) -2-метиламино-3-фенил-N- (3- (пиридин-4-ил) -1- (2- (пиридин-4-ил) этил) пропил) пропионамид (соединение 5)
Соединение 4 растворяют в метиленхлориде (10 мл) и обрабатывают трифторуксусной кисло-той (4,0 мл). После перемешивання при комнатной температуре в течение 1,5 часа реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток нейтрализуют насыщенным раствором карбоната калия и экстра-гируют этилацетатом (2 раза).
Экстракты соединяют, промывают водой, су-шат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакуумe с получением соедине-ния 5.
Пример 6
(S)-N-(4-Фторбензил) -2-( метил - (2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) -ацетил) амино) -3-фенил-N- (3-(пиридин-4-ил)-1- (2- пиридин-4 -ил)-этил) пропил) пропионамид (соединение 6)
К раствору соединения 5 (500 мг, 0,98 ммоль) и 3,4,5- триметоксибензоилмуравьиной кислоты (294 мг, 1,22 ммоль) в метиленхлориде (4,0 мл), содержащему N,N-диметилформамид (0,4 мл), до-бавляют гидрохлорид (3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (235 мг, 1,22 ммоль), и переме-шивают реакционную смесь в течение 24 часов. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и водой. Слои разделяют и водную фазу повторно экстрагируют этилацетатом. Органические фрак-ции соединяют, промывают насыщенным раство-ром бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (элюи-рование смесью 5% метанола и метиленхлорида) с получением требуемого продукта.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCI3)  8,48-8,44 (м), 8,38 (двойной дублет), 7,36-7,33 (м), 7,28-7,18 (м), 7,13-7,02 (м), 6,97-6,87 (м), 6,58 (д), 6,00 (двойной триплет), 5,81 (т), 4,97 (широкий синглет), 4,81 (д), 4,23-4,16 (м), 3,93 (с), 3,90 (с), 3,85 (с), 3,76 (с), 3,59 (двойной дублет) 3,28 (дд), 3,20 (с), 3,15 (с) , 3,04-2,96 (м), 3,02 (с), 3,01 (с), 2,94 (двойной дублет), 2,63 (двойной триплет), 2,53-2,37 (м), 1,92-1,78 (м), 1,72-1,62 (м), 1,52-1,42 (м).
Пример 7
(S)-N-Бензил-2-(метил-(2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил)-ацетил)амино)-3-фенил-N-(пиридин-4-ил)-1-(2-пиридин-4-ил-этил) пропил) -пропионамид (соединение 7)
Соединение 7 получают в соответствии с про-цедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина бензиламином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,48 (двойной дублет), 8,53 (двойной дублет), 8,43 (двойной дублет), 8,35 (двойной дуб-лет), 7,38 (д), 7,30-7,18 (м), 7,17-7,02 (м), 6,93 (с), 6,89 (д), 6,54 (д), 6,03 (двойной дублет), 5,86 (т), 5,08 (широкий дублет), 4,88 (д), 4,32-4,18 (м), 3,95 (с), 3,89 (с), 3,86 (с), 3,73 (с), 3,63 (двойной дублет), 3,23-3,19 (м), 3,09 (двойной дублет), 3,05 (с), 3,03 (с), 2,97 (двойной дублет), 2,63 (двойной триплет), 2,57-2,37 (м), 2,24 (двойной триплет), 2,06 (м), 1,95-1,76 (м), 1,74-1,63 (м), 1,54-1,44 (м).
Пример 8
( S)-N-(4-Хлорбензил)-2- (метил - (2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) -ацетил) амино)-3-фенил-N-(3-(пиридин-4-ил)-1- (2-(пиридин-4-ил)-этил) про-пил) пропионамид (соединение 8)
Соединение 8 получают в соответствии с про-цедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина 4-хлорбензиламином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,49 (двойной триплет), 8,45 (двой-ной дублет), 8,40 (двойной дублет), 7,69 (д), 7,31-7,14 (м), 7,12 (с), 7,08-7,03 (м), 6,98 (с), 6,94-6,91 (м), 6,85 (д), 6,02 (двойной дублет), 5,79 (т), 4,99 (широ-кий дублет), 4,83 (д), 4,22-4,16 (м), 3,96 (м), 3,91 (с), 3,88 (с), 3,87 (с), 3,81 (с), 3,78 (с), 3,61 (двойной дуб-лет), 3,33 (двойной дублет), 3,21 (с), 3,17 (с), 3,04 (с), 3,03 (с), 3,03-3,00 (м), 2,95 (двойной дублет), 2,65 (двойной триплет), 2,56-2,40 (м), 2,28 (двойной триплет), 1,90-1,80 (м), 1,75-1,66 (м), 1,52-1,43 (м).
Пример 9
(S)-N-Бензил-3- (4- хлорфенил) -2-(метил- (2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) ацетил) амино)-N-(3-(пиридин-4-ил)-1-(2-(пиридин-4-ил)-этил) про-пил) пропионамид (соединение 9)
Соединение 9 получают в соответствии с про-цедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина бензиламином и (L)-ВОС-N-метилфенилаланина (L)-ВОС-N-метил-4-хлорфенилаланином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,48 (двойной дублет), 8,45 (двойной триплет), 8,38 (двойной дублет), 7,32-6,87 (м), 6,58 (д), 5,94 (двойной дублет), 5,78 (т), 5,05 (широкий дублет), 4,83 (д), 4,26 (двойной дублет), 4,15 (м), 3,97 (с), 3,89 (с), 3,86 (с), 3,75 (с), 3,57 (двойной дуб-лет), 3,20 (с), 3,15 (с), 3,15-3,09 (м), 3,05-2,96 (м), 3,01 (с), 3,00 (с), 2,91 (двойной дублет), 2,65-2,38 (м), 2,26 (двойной триплет), 1,94-1,47 (м).
Пример 10
(S)-2-(Метил - (2-оксо-2-(3,4,5 -триметоксифенил) ацетил) - амино) -3-фенил-N- (4-фенилбутил) -N-[(пиридин-4-ил) метил] пропиона-мид (соединение 10)
Соединение 10 получают в соответствии с процедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина 4-фенилбутиламином и соедине-ния 2 4-пиридинкарбоксальдегидом.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, СDСl3)  8,46 (двойной дублет), 8,42 (двойной дублет), 7,30-7,23 (м), 7,18-7,11 (м), 7,11 (с), 7,10 (с), 6,90 (д), 6,77 (д), 5,88 (т), 5,60 (двойной дублет), 4,85 (д), 4,50 (д), 4,28 (д), 3,93 (с), 3,83 (с), 3,81 (с), 3,80 (с), 3,65-3,50 (м), 3,37 (м), 3,20-3,15 (м), 3,08-3,06 (м), 3,06 (с), 3,05 (с), 2,92 (двойной дублет), 2,60 (м), 2,54 (м), 1,60-1,48 (м), l,38-1,28 (м).
Пример 11
1,7-Ди (пиридин-4-ил)-гептан-4-он (соединение 11)
К раствору 1,7-ди-(пиридин-4-ил)-гептан-4-ола (4,1 г, 15,2 ммоль) в метиленхлориде (50 мл) при температуре ОС добавляют бромид калия (180 мг) и свободный 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилоксирадикал (71 мг). К полученной смеси по каплям добавляют раствор бикарбоната натрия (510 мг) в гипохлорите натрия (65 мл). По-сле окончания добавления реакционную смесь нагревают до комнатной температуры н перемеши-вают в течение 30 минут. Смесь разбавляют этила-цетатом и водой. Слои разделяют и водный слой повторно экстрагируют этилацетатом. Органиче-ские фракции соединяют, промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безвод-ным сульфатом магния, фильтруют и концентри-руют в вакууме. Хроматография остатка на сили-кагеле (элюирование смесью 5% метанола и мети-ленхлорида ) дает соединение 11.
Пример 12
(S)-N-Бензил-2-(метил-(2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил)-ацетил)амино-3-фенил-N-(3-(пиридин-4-ил)-1-(2-(пиридин-4-ил)-пропил)бутил)пропионамид (соединение 12)
Соединение 12 получают в соответствии с процедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина бензиламином и соединения 2 соединением 11.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,43-8,38 (м), 8,30 (м), 8,16 (м), 7,53-7,45 (м), 7,34 (м), 7,32 (м), 7,26-7,22 (м), 7,19-7,07 (м), 7,00-6,83 (м), 5,89 (двойной дублет), 5,72 (т), 4,90 (д), 4,72 (д), 4,10 (д), 4,00 (д), 3,93 (с), 3,91 (с), 3,85 (с), 3,74 (с), 3,52 (двойной дублет), 3,16-3,10 (м), 3,04 (с), 2,99 (двойной дублет), 2,93 (с), 2,84 (двой-ной дублет), 2,67-2,38 (м), 2,30 (м), 2,22 (м), 1,63-1,12 (м), 0,94 (м).
Пример 13
Метил- (3- (пиридин-4-ил) -1- (2- (пиридин-4-ил)-этил) пропил) - амин (соединение 13)
К суспензии гидрохлорида метиламина (1,7 г, 25,4 ммоль) и ацетата натрия (2,5 г, 30,48 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляют раствор соединения 2 (1,21 г, 5,08 ммоль) в метаноле (5 мл). Полученную смесь обрабатывают раствором цианборогидрида натрия (370 мг, 6,09 ммоль), в метаноле (5 мл) и нагревают до 80С. После выстаивания в течение 1 часа при 80С реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакуу-ме. Остаток растворяют в метиленхлориде и 2 н растворе гидроксида натрия. Слои разделяют, ор-ганическую фазу промывают насыщенным раство-ром соли, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме с получе-нием соединения 13.
Пример 14
(S)-N-Метил-2-(метил-(2-оксо-2- (3,4,5-триметоксифенил)-ацетил)амино-3-фенил-N-(3-(пиридин-4-ил)-1-(2-пиридин-4-ил)-этил) пропил) пропионамид (соединение 14)
Соединение 14 получают в соответствии с процедурами по примерам 4-6 путем замены со-единения 3 соединением 13.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,50-8,46 (м), 8,37 (д), 7,32-7,26 (м), 7,21-7,16 (м), 7,10-7,06 (м),6,97 (двойной дублет), 6,93 (д), 5,93 (д), 5,54 (т), 4,72 (широкий синглет), 4,17 (м), 3,94 (с), 3,92 (с), 3,84 (с), 3,82 (с), 3,51 (двойной дублет), 3,38 (двойной дублет), 3,29 (с), 3,11 (двойной дублет), 3,06 (с), 3,00 (с), 2,97 (двой-ной дублет), 2,86 (с), 2,82 (с), 2,49 (м), 2,37-2,23 (м), 2,17-1,98 (м), 1,85-1,55 (м).
Пример 15
(S)-N-Метил-2-(метил- (2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) -ацетил) амино) -3-фенил-N- (3-(пиридин-4-ил)-1-(2-пиридин-4-ил) -пропил) бутил) пропионамид (соединение 15)
Соединение 15 получают в соответствии с процедурами по примерам 13 и 14 путем замены соединения 2 соединением 11.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, СDCl3)  8,44-8,38 (м), 8,37-8,30 (м), 7,50-7,43 (м), 7,38-7,08 (м), 7,04 (с), 7,03-6,98 (м), 6,90-6,86 (м), 5,83 (двойной дублет), 5,74 (т), 4,75 (т), 4,65 (м), 3,94-3,93 (м), 3,92 (с), 3,90 (с), 3,84 (с), 3,83 (с), 3,44 (двойной дублет), 3,32 (двойной дублет), 3,20 (с), 3,01 (двойной дублет), 2,95 (с), 2,91 (с), 2,87 (двой-ной дублет), 2,59 (с), 2,58-2,37 (м), 1,68-1,00 (м).
Пример 16
Бензил- (3-(пиридин-4-ил)-1-(2- (пиридин-4-ил) этил) пропил) -амид (S) -4-метил-2- (метил- (2-оксо-2- (3,4,5-триметоксифенил)-ацетил) амино) пента-новой кислоты (соединение 16)
Соединение 16 получают в соответствии с процедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина бензиламином и (L) -ВОС-N-метилфенилаланина (S) -BОС-N-метиллейцином.
Пример 17
4-Фторбензил-(3-пиридн-4-ил-1-(2-пиридин-4-ил-этил)пропил) амид (S)-4-метил-2-(метил- (2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) ацетил) амино) пентано-вой кислоты (соединение 17)
Соединение 17 получают в соответствии с процедурами по примерам 4-6 путем замены (L)-Вос-N-метилфенилаламина (S)-Вос-N-метиллейцином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,48 (м), 8,45 (д), 7,32 (м), 7,18 (с), 7,12 (с), 7,09-6,92 (м), 6,84 (д), 5,72 (двойной дуб-лет), 5,48 (двойной дублет), 4,99 (широкий дублет), 4,68 (д), 4,42 (д), 4,36 (д), 4,29 (м), 3,94 (с), 3,91 (с), 3,87 (с), 3,83 (с), 2,96 (с), 2,92 (с), 2,69 (двойной три-плет), 2,62-2,55 (м), 2,52- 2,44 (м), 2,12-1,73 (м), 1,63-1,57 (м), 1,48-1,39 (м), 1,23 (м), 1,03 (т), 0,90 (д), 0,69 (д).
Пример 18
4-Хлорбензил-(3-пиридин-4-ил-1- (2-пиридин-4-ил-этил) -пропил) амид (S)-4-метил -2- (метил -(2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) ацетил) амино) пентановой кислоты (соединение 18)
Соединение 18 получают в соответствии с процедурами по примерам 3-6 путем замены 4-фторбензиламина 4-хлорбензиламином и (L)-Вос-N-метилфенилаланина (S)-Вос-N-метиллейцином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, СDСl3)  8,50 (м), 8,47 (д), 7,38 (д), 7,30-7,26 (м), 7,19 (с), 7,13 (с), 7,10 (д), 7,04 (д), 6,98 (д), 6,84 (д), 5,73 (двойной дублет), 5,47 (двойной дублет), 5,03 (широкий дублет), 4,69 (д), 4,42 (д), 4,36 (д), 4,31 (м), 3,95 (с), 3,93 (с), 3,88 (с), 3,84 (с), 2,97 (с), 2,94 (с), 2,70 (двойной триплет), 2,63-2,43 (м), 2,12-1,56 (м), 1,48-1,40 (м), 1,25 (м), 1,04 (т), 0,91 (д), 0,70 (д).
Пример 19
(S) -N-(4-фторбензил)-3- (4-хлорфенил)-2-(метил-(2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) ацетил) амино)-N- (3-пиридин-4-ил-1-(2-пиридин-4-ил-этил) пропил) пропионамид (соединение 19)
Соединение 19 получают в соответствии с процедурами по примерам 4-6 путем замены (L)-Вос-N-метилфенилаланина (L)- Boс-N-метил-4-хлорфенилаланином.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,49-8,41 (м), 7,34 (с), 7,28-7,20 (м), 7,10-6,90 (м), 6,64 (д), 5,92 (двойной дублет), 5,74 (т), 4,95 (широкий дублет), 4,74 (д), 4,24-4,13 (м), 3,94 (с), 3,90 (с), 3,86 (с), 3,77 (с), 3,54 (двойной дуб-лет), 3,23-3,17 (м), 2,99 (с), 2,98 (с), 2,90 (д), 2,63 (двойной триплет), 2,59-2,37 (м), 2,28 (двойной три-плет), 1,94-1,70 (м), 1,57-1,47 (м).
Пример 20
(4-Хлорбензил) -(3-имидазол-1-ил-пропил) амин (соединение 20)
К раствору 1-(3-аминопропил)имидазола (2,1 г, 16,8 ммоль) диизопропил этиламина (3,5 мл, 20,0 ммоль) и 4-N,N-диметиламинопиридина (200 мг, 1,7 ммоль) в метиленхлориде (15 мл) при температуре 0С по каплям добавляют 4-хлорбензоилхлорид (2,1 мл, 16,8 ммоль). Затем реакционную смесь оставляют для нагревания до комнатной темпера-туры. Через 5 часов реакционную смесь разбавля-ют метиленхлоридом, промывают 1 н раствором гидроксида натрия, насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом магния, фильтру-ют и концентрируют в вакууме с получением бело-го твердого вещества. Это вещество промывают диэтиловым эфиром с получением N-(3-имидазол-1-ил-пропил)- 4-хлорбензамида. К суспензии выше-указанного амида (1,58 г, 6,0 ммоль) в тетрагидро-фуране (30 мл) медленно добавляют алюмогидрид лития (456 мг, 12,0 ммоль), после чего реакция ста-новится экзотермической. Смесь нагревают до тем-пературы 80С, перемешивают в течение 1 часа, охлаждают до 0С и гасят путем добавления воды (0,5 мл), 15% гидроксида. натрия (0,5 мл) и еще 1,5 мл воды. Реакционную смесь разбавляют этилаце-татом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме с получе-нием соединения 20.
Пример 21
(S)-N-(4-хлорбензил)-N-(3-имидазол-1-ил-пропил)-2-(метил-(2-oксо-2-(3,4,5-триметоксифенил) ацетил) амино) -3-фенил - про-пионамид (соединение 21)
Соединение 21 получают в соответствии с процедурами по примерам 4-6 путем замены со-единения 3 соединением 20.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, CDCl3)  8,48 (м), 7,44 (широкий синглет), 7,37 (широкий синглет), 7,30-7,16 (м), 7,10-7,02 (м), 6,95 (д), 6,83 (м), 5,78 (т), 5,72 (т), 4,77 (д), 4,57 (д), 4,26 (двойной дублет), 3,94 (с), 3,93 (с), 3,88-3,77 (м), 3,80 (с), 3,48 (двойной триплет), 3,42-3,33 (м), 3,19-3,14 (м), 3,13 (с), 3,12 (с), 3,13- 2,97 (м), 2,89 (т), 2,80 (м), 2,74 (т), 2,65 (м), 2,08-1,98 (м), 1,90 (м), 1,80-1,60 (м).
Пример 22
N-(1Н-Имидазол-2-ил-метил) -N-(1-фенетил-3-фенилпропил) - амин (соединение 22)
К раствору 1,5-дифенилпентан-3-она (5,26 г, 22,1 ммоль), ацетата аммония (8,52 г, 110,5 ммоль) и ацетата натрия (9,06 г, 110,5 ммоль) в метаноле (80 мл) добавляют раствор цианборогидрида натрия (1,67 г, 26,52 ммоль) в метаноле (20 мл) и реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником. После пере-мешивания при температуре кипения с обратным холодильником в течение 30 минут реакционную смесь охлаждают и концентрируют до сухого со-стояния. Остаток распределяют между мети-ленхлоридом и 2 н раствором гидроксида натрия. Органическую фазу отделяют, промывают насы-щенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Хроматография остатка на силикагеле (элюирование смесью 2-5% метанола и мети-ленхлорида) дает N-(1-фенетил-3-фенилпропил) амин. К раствору вышеуказанного амина (2,1 г, 8,82 ммоль) в этаноле (50 мл) добавляют 2-имидизолкарбоксальдегид (813 мг, 8,47 ммоль) и реакционную смесь нагревают до 50С. После пе-ремешивания в течение 2 часов полученный одно-родный раствор обрабатывают борогидридом натрия (400 мг, 10,58 ммоль) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют до сухого состояния и остаток распределяют меж-ду метиленхлоридом и 2 н раствором гидроксида натрия. Органическую фазу отделяют, промывают насыщенным раствором соли, сушат над безвод-ным сульфатом магния, фильтруют и концентри-руют в вакууме. Хроматография остатка на сили-кагеле (элюирование смесью 5% метанола и мети-ленхлорида) дает соединение 22.
Пример 23
(S)-N-(1H-Имидазол-2-ил-метил)-2-(метил-(2-оксо-2-(3,4,5-триметоксифенил)ацетил)амино)-N-(1-фенетил-3-фенилпропил)-3-фенилпропионамид (соединение 23)
Соединение 23 получают в соответствии с процедурами по примерам 4-6 путем замены со-единения 3 соединением 22.
Спектр 1Н ЯМР в виде смеси ротомеров (500 МГц, СDСl3)  7,40-7,00 (м), 6,95-6,87 (м), 5,95 (т), 5,69 (т), 4,66 (д), 4,46 (д), 4,12 (м), 3,94 (с), 3,92 (с), 3,82 (м), 3,81 (c), 3,80 (с), 3,47 (с), 3,43 (двойной дублет), 3,34 (двойной дублет), 3,22 (с), 3,15 (с), 3,03 (двойной дублет), 3,00 (с), 2,60 (двойной три-плет), 2,45-2,22 (м), 1,80-1,78 (м).
Пример 24
Исследование сенсибилизации клеток с мно-жественной лекарственной устойчивостью
Для определения способности соединений по данному изобретению увеличивать антипролифе-ративную активность лекарственного средства можно использовать линии клеток, которые, как известно, устойчивы к определенному лекарствен-ному средству. Эти линии клеток включают, но не ограничиваются ими, L1210, P388D, СНО и МCF7. Альтернативно, устойчивые линии клеток можно вырастить в лабораторных условиях. Линию кле-ток подвергают воздействию лекарственного сред-ства, в отношении которого она обладает устойчи-востью, или испытуемого соединения. После этого измеряют жезнеспособность клеток и сравнивают полученный результат с жизнеспособностью кле-ток, подвергнутых воздействию этого лекарствен-ного средства в присутствии испытуемого соедине-ния.
Анализы выполняли с использованием лейкоз-ных клеток мышей L1210, трансформированных с помощью ретровируса pHaMDR1/A, содержащего кДНК с множественной лекарственной устойчиво-стью МDR1, описанных Пастаном и др., Proc. Natl. Acad. Sci., Vol. 85, 4486-4490 (1988). Резистентная линия, маркированная L1210VMDRC.06, была предоставлена д-ром М.М.Готтесманом из Нацио-нального института рака. Эти лекарственно-устойчивые трансфектанты были отобраны в ре-зультате культивирования клеток в 0,06 мг/мл кол-хицина.
Анализы множественной лекарственной устойчивости выполняли путем культивирования клеток (2 х 103, 1 х 104 или 5 х 104 клеток/лунку) на 96-луночных титрационных микропланшетах и обработки их доксорубицином с разными концен-трациями (50 нмоль - 10 мкмоль) в присутствии или отсутствии модификаторов множественной клеточ-ной устойчивости (ингибиторов множественной клеточной устойчивости) по данному изобретению (1, 2,5 или 10 мкмоль), как это описывается в статье Форда и др., Cancer Res., Vol. 50, 1748-1756 (1990). После культивирования в течение 3 дней произво-дили количественное определение жизнеспособно-сти клеток, используя красители МТТ (Mossman) и ХТТ для оценки митохондриальной функции. Все анализы повторяли 4 или 8 раз; см. также Mossman Т., J. Immunol. Methods, Vol. 65, 55-63 (1993).
Результаты определяли путем сравнения IC50 для доксорубицина с IC50 для доксорубицина и ингибитора множественной лекарственной устой-чивости. Высчитывали величину отношения мно-жественной лекарственной устойчивости (IC50 док-сорубицин/ IC50 доксорубицин + ингибитор) и це-лые числа использовали для сравнения эффектив-ности соединений.
Во всех анализах соединения по данному изобретению тестировали в отношении характер-ной антипролиферативной или цитотоксической активности. Результаты представлены в приводи-мой ниже таблице 2. Как видно из таблицы 2, со-единения обычно вызывали цитотоксичность < 10% при концентрациях 10 мкмоль или выше. В таблице 2 “NT” означает, что данное соединение не испы-тывали при соответствующей концентрации.
Таблица 2
Оценка соединений в отношении обращения множественной лекарственной устойчивости (MDR)

Соед. IC50 для
доксо-руби-цина + IC50 для
доксору-бицина + 0,5 мк моль соедине-ния IC50 для
доксору-бицина + 1,0 мк моль соедине-ния Отно-шение MDR 0,5 мк моль Отно-шение MDR 1,0 мк моль
6 350 65 <50 5,4 >7,0
7 425 95 <50 4,5 >8,5
8 600 55 150 4,0 10,9
9 275 <50 <50 >5,5 >5,5
10 400 170 65 2,4 6,1
12 460 125 <50 3,2 >9,2
14 775 610 350 1,3 2,2
15 375 375 175 1,0 2,1
16 350 65 <50 5,4 >7,0
21 350 275 85 1,3 4,1
23 600 125 <50 4,8 >12,0
CsA 500 NT <55 NT >9,1

Пример 25
Ингибирование множественной лекарственной устойчивости, опосредованной лекарственно-устойчивым белком
Чтобы показать, что соединения по данному изобретению, эффективно воздействуют на множе-ственную лекарственную устойчивость, опосредо-ванную лекарственно-устойчивым белком, помимо множественной лекарственной устойчивости, опо-средованной Р-гликопротеином, анализировали ингибирование на линии клеток, не экспрессирую-щих Р-гликопротеин.
Клетки HL60/ADR культивировали на 96-луночных титрационных микропланшетах (4 х 104 клеток/лунку). Затем клетки подвергали воздей-ствию доксорубицина с разными концентрациями (от 50 нмоль до 10 мкмоль) в присутствии или от-сутствии разных соединений по данному изобрете-нию при разных концентрациях (0,5 - 10 мкмоль). После культивирования клеток в течение 3 дней производили количественное определение их жиз-не- способности, используя метод на основе краси-теля ХТТ для оценки митохондриальной функции.
Результаты выражали в виде отношения IC50 для доксорубицина к IС50 для доксорубицина и ингиби-тора множественной лекарственной устойчивости. Значения IC50 выражены в нмолях. Во всех анали-зах характерная антипролиферативная или цито-токсическая активность ингибиторов множествен-ной лекарственной устойчивости определялась также для клеток HL60/ADR. Результаты этого анализа представлены в приведенной ниже табли-це 3.
Таблица 3
Обращение множественной лекарственной устойчивости (МDR), опосредованной лекарствен-но-устойчивым белком в клетках HL60/ADR


Соед. IC50 доксо-руби-цина IC50 док-соруб. + 0,5 мк-моль соед. IC50 док-соруб. + 1 мкмоль соед. IC50 доксо-руб. + 2,5 мк-моль соед. IC50 доксо-руб. + 5 мкмоль соед. IC50 доксо-руб. + 10 мк-моль соед. Отно-шение MDR 0,5 мк-моль Отно-шение MDR 1 мк-моль Отно-шение MDR 2,5 мк-моль Отно-шение MDR 5 мк-моль Отно-шение MDR 10 мк-моль
7 5 1,8 1,1 0,625 0,4 0,08 4,4 4,5 8 12,5 62,5
8 5 1,1 0,8 0,5 0,4 0,2 4,5 6,3 10 12,5 25
9 5 1 0,6 0,2 0,2 0,04 5 8,3 25 25 125


Хотя здесь описано лишь несколько осуществ-лений данного изобретения, очевидно, что основ-ные положения изобретения могут быть изменены, в результате чего будут получены другие вариан-ты, при осуществлении которых используются продук


ты, способы и методы данного изобретения. По-этому следует понимать, что объем данного изоб-ретения должен определяться прилагаемой форму-лой изобретения, а не типичными вариантами осу-ществления, приведенными в качестве примеров.

EP 0529395 AI, 03.03.1993
EP 0431520 AI, 12.06.1991
EP 0539976 AI, 05.05.1993
WO 9407858 AI, 14.04.1994
SU 262006 A, 13.01.1979
RU 2001907 CI, 30.10.1993