СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВТОРНОГО ФАГОЦИТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ В КРОВИ ПОСЛЕ СТАДИИ ЗАВЕРШЕННОГО ФАГОЦИТОЗА

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, иммунологии и микробиологии.
По данному способу фагоцитарную актив-ность гранулоцитов определяют по общеизвест-ному способу. В каждую опытную пробирку после 30 мин, 1 ч и 2 ч инкубации приливают половину от прежнего количества 1 млрд взвеси кишечной палочки, выдерживают в термостате 15 мин. Ход реакции проводят как при контроле. Готовые мазки крови исследуют под микроскопом при увеличении 15х90, подсчитывают 100 нейтрофилов с учетом всех стадий фагоцитоза, завершенности фагоцитоза, стадий созидательного «покоя» и I, II, III, IV стадий повторного фагоцитоза. По результатам микроскопического исследования определяют процесс повторного фагоцитоза.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, иммунологии и микробиологии.
В настоящее время остается неизученным вопрос о функциональном состоянии нейтрофила после полного переваривания микробов в системе кровеносного русла. Сведения в литературных сообщениях об этом скудны и противоречивы.
Аналогов заявляемого способа не выявлено.
В результате многочисленных экспериментальных и клинических исследований мы пришли к заключению, что сегментоядерные нейтрофилы, после завершения переваривания захваченных микробов проходят стадию «созидательного покоя», в которой происходит ряд цитоморфологических изменений по восстановлению структурной целостности. Этот процесс по нашему мнению включает несколько этапов [1]. После восстановления морфофункциональных свойств нейтрофил способен пополнить пристеночный пул лейкоцитов с целью миграции в ткани, либо при нарушении антигенного баланса в крови вновь включиться в реакцию повторного фагоцитоза, проходя все стадии фагоцитарной реакции (передвижения, адгезии, поглощения и переваривания).
Цель изобретения - изучение судьбы нейтрофилов после стимуляции их в процессе фагоцитоза дополнительным введением бактериальных клеток in vitro и разработка способа определения повтор-ного фагоцитоза нейтрофилов в крови после стадии завершенного фагоцитоза.
Способ осуществляли следующим образом.
Определение фагоцитарной активности гранулоцитов проводили по общеизвестному способу [2]: в две центрифужные пробирки (контроль и опыт) приливали по 0,1 мл гепарина (20 ЕД), 0,2 мл исследуемой крови и 0,1 мл 1 млрд. взвеси од-носуточной культуры непатогенного штамма кишечной палочки. После осторожного перемешивания пробирки ставили в термостат на 30 мин, 1 ч и 2 ч. По истечении времени фагоцитарную реакцию в контрольных пробах прерывали охлаждением под струей холодной воды. Затем центрифугировали 3-5 мин при 1500 об/мин, из полученного осадка готовили мазки, фиксировали и окрашивали по Гимзе-Романовскому.
В каждую опытную пробирку после 30 мин, 1 ч и 2 ч инкубации приливали половину от прежнего количества (0,05 мл) 1 млрд взвеси кишечной палочки и снова ставили в термостат на 15 мин. В дальнейшем ход реакции проводили в той же последовательности, что и в контроле. Готовые мазки крови исследовали под микроскопом при увеличении 15х90. Подсчитывали 100 нейтрофилов с учетом всех стадий фагоцитоза: аттракции, поглощения, переваривания, завершенности фагоцитоза и этапов структурного обновления (1, 2 и 3 этапы), а также I, II, III, IV стадий повторного фагоцитоза. По результатам микроскопического исследования определили, что процесс повторного фагоцитоза после стадии созидательного «покоя» происходит при стимуляции нейтрофилов дополнительным введением фагоцитарного объекта, после увеличения времени фагоцитарного процесса (1 и 2 ч).
Данный способ выявления феномена повтор-ного фагоцитоза нейтрофилов путем стимуляции дополнительным введением фагоцитарного объекта, подтверждает о существовании повторной (возможно неоднократной) реакции фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в кровеносной системе после завершения переваривания микробов и восстановления морфофункциональных свойств фагоцитов.

1. Каримова Р.Ш., Адамчук Л.В., // Функциональное состояние сегментоядерных нейтрофилов человека после завершающей стадии фагоцитоза в норме и при патологии. Мат.1-го съезда физиологов Ср. Азии и Казахстана.-Душанбе,1991.- С.101-102.
2.Васильева Н.В.и соавт. Метод. рекомендации по иммунологии, иммунопатологии и аллергологии. – Чита,1975. – с.35-36.