СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАДИИ ЗАВЕРШЕННОСТИ ФАГОЦИТОЗА СЕГМЕНТОЯДЕРНЫХ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, иммунологии и микробиологии.
Суть данного способа заключается в том, что фагоцитарную активность гранулоцитов определяют по общеизвестному способу, завершенность фагоцитоза определяют по стадии созидательного «покоя», включающая осветление цитоплазмы, образование перемычек между сегментами, обновление структур цитоплазмы, появление зернистости и четкости контур (мембраны).

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, иммунологии и микробиологии.
Согласно классическим постулатам И. И. Мечникова процесс фагоцитоза состоит из 4 стадий:
I - приближение лейкоцитов к фагоцитарному объекту;
II - контакт и прилипание микробов к поверхности лейкоцита;
III - умерщвление и их переваривание;
IY - растворение микробных частиц с помощью ферментативных процессов (лизис).
Изучение завершенности фагоцитоза является одним из главных, но наименее изученных звеньев в реакции фагоцитоза.
Общеизвестно, что нейтрофилы в норме после завершения фагоцитарного процесса в сосудистой системе проходят стадию эндотелиального транс-порта в ткани, где реализуют свой основной анти микробный потенциал. Однако судьба неитрофила и его морфофункциональное состояние после полного переваривания захваченных микробов в литературе нигде не упоминается.
Если учитывать, что защитная функция фаго-цитирующих лейкоцитов в сосудистой системе является промежуточным этапом (от образования и выхода из красного костного мозга до выхода в ткани для основного фагоцитоза и гибели), то вероятно, должен существовать какой-то внутриклеточный механизм, направленный на восстановление морфофункциональных особенностей гранулоцитов, утраченных в процессе переваривания.
Прототипом является общеизвестный способ определения стадии завершенности фагоцитоза по морфологическим изменениям фагоцитированных объектов (разрушенные частицы микробных клеток с нечеткими контурами бледно-розовой окраски) и фагоцитирующих клеток (бледная и вакуолизированная цитоплазма с бесформенными очертаниями и полисегментированными ядрами округлой формы)[1,3],
Недостатком способа является то, что подобные проявления в клетке могут происходить и в IY стадии фагоцитарного процесса (лизиса) и морфо-логические изменения фагоцитарных клеток не дают четкое представление о завершенности фагоцитоза нейтрофилов, т.к. в них еще просматриваются непереваренные микробы.
Целью изобретения является изучение цито-морфологических изменений сегментоядерных нейтрофилов после полного переваривания микробов и разработка способа, позволяющего определение стадии завершенности фагоцитоза.
Заявляемый способ изображен на прилагаемых рисунках (фиг. 1 - 4).
Определение фагоцитарной активности гранулоцитов проводили по общеизвестному способу [2].
В центрифужные пробирки приливали: 0,05 мл гепарина (20 ед), ОД мл исследуемой крови и 0,05 мл объекта фагоцитоза. После перемешивания смесь инкубировали в термостате в течение 30 мин, затем центрифугировали 3-5 мин и из осадка готовили мазки крови. Готовые мазки фиксировали в этаноле и окрашивали по Гимза-Романовскому. Подсчет проводили под иммерсией при увеличении 15x90. Рассчитывали фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ) из 100 сосчитанных нейтрофилов по всем четырем стадиям фагоцитарного процесса.
Завершенность фагоцитоза определяли по стадии созидательного «покоя», включающая осветление цитоплазмы, образование перемычек между сегментами, обновление структур цито-плазмы, появление зернистости и четкости контур (мембраны).
Предлагаемый способ определения функциональной активности сегментоядерных нейтрофилов и стадии завершенности фагоцитоза обладает высокой информативностью: дает четкое представление о завершенности фагоцитарного процесса - начало созидательного «покоя» свидетельствует о восстановительных процессах, происходящих в клеточных структурах после окончания фагоцитарной реакции; дифференцирует IV стадию (лизиса) и завершенности фагоцитоза; раскрывает морфофункциональные преобразование фагоцита перед выходом из сосудистого русла в ткани. По активности восстановительного периода можно судить о функциональных резервах лейкоцитов и состоянии антимикробной защиты организма.

1. Дуглас С.Д., Куй Д.Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике. - М, Медицина. 1983.
2. Васильева Н.В.и соавт. Метод .рекомендации по иммунологии, иммунопатологии и аллерголо-гии. - Чита,1975. - с.35-36.
3. Лецкий В.Б. Цитохимические исследования лейкоцитов. - Л., Медицина. 1973.