(-)-4-АМИНО-5-ФТОР-1-(2-ГИДРОКСИМЕ-ТИЛ-1, 3-ОКСАТИОЛАН-5-ИЛ)-(1H)-ПИРИМИ-ДИН-2-ОН, СМЕСЬ ЕГО ЭНАНТИОМЕРОВ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ

Изобретение относится к нуклеозидным аналогам 1,3-оксатиолана и их использованию при лечении вирусных инфекций.
Более конкретно, изобретение относится к (-)-4-амино-5-фтор-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-ону и его фармацевтически приемлемым производным и содержащих их фармацевтическим составам.

Настоящее изобретение относится к нуклеозидным аналогам и их использованию в ме-дицине. Более конкретно, изобретение связано с нуклеозидными аналогами 1,3-оксатиолана, с включающими их фармацевтическими составами и с их использованием при лечении ви-русных инфекций.
Единственным соединением, которое в настоящее время одобрено для использования при лечении состояний, вызываемых ВИЧ, является 3’-деоксимидин (AZT, зидовудин, BW 509U). Однако, это соединение обладает значительной предрасположенностью к побочным эффектами, а потому не может использоваться или же после первых попыток использования дальнейшее его применение приходится прекращать для большого количества пациентов. Сохраняется настоятельная потребность в разработке соединений, которые были бы актив-ными по отношению к ВИЧ, но имели бы значительно лучший сопутствующий терапевти-ческий индекс.




Соединение по формуле (1)
(I)

является рацемической смесью двух энантиомеров по формулам (1-1) и (1-2):

Мы неожиданно обнаружили, что (-)-энантиомер соединения (1) проявляет значительно большую активность, чем (+)-энантиомер, хотя оба энантиомера обладают неожиданно низ-кой цитотоксичностью. Таким образом, первой целью настоящего изобретения является (-) (или левовращающий) энантиомер соединения соединения по формуле (1) и его фармацев-тически приемлемые производные.
(-)-энантиомер имеет химическое название (-)-4-амино-5-фтор-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-он (далее называется соединение (А)). Этот энантиомер имеет абсолютную стереохимическую структуру, представленную формулой (1-1).
Соединение (А) преимущественно должно быть свободно от соответствующего (+)-энантиомера, т.е. должно содержать не более приблизительно 5% вес. (+)-энантиомера, более предпочтительно не более приблизительно 1% вес.
По “фармацевтически приемлемым производным” понимается фармацевтически прием-лемая соль, сложный эфир или соль этого эфира соединения (А) или другого соединения, которое при назначении пациенту способно выделять (прямо или косвенно) соединение (А), или метаболит, обладающий антивирусной активностью, или его радикал.
Для специалиста очевидно, что соединение (А) может быть модифицировано с целью получения его фармацевтически приемлемых производных, по функциональным группам как фрагмента основания, так и по оксиметильной группе оксатиоланового кольца. Моди-фикации по всем этим функциональным группам включаются в объем притязаний по насто-ящему изобретению. Однако, особый интерес представляют фармацевтически приемлемые производные, полученные модификацией 2-оксиметильной группы оксатиоланового коль-ца.
Предпочтительным эфирами соединения (А) являются производные, в которых атом во-дорода в 2-оксиметильной группе замещается ацильной группой , в которой некарбо-нильный фрагмент R эфира выбирают из атома водорода, алкильной группы с прямой или разветвленной цепью (например, метильной группы, этильной группы, n-пропильной груп-пы, трет-бутильной группы, n-бутильной группы), алкоксиалкильной группы (например, метоксиметильной группы), аралкильной группы (например, бензильной группы), арилок-сиалкильной группы (например, феноксиметильной группы), арильной группы (например, фенильной группы, произвольно замещенной атомом галогена (С1-С4) алкильной группой или (С1-С4) алкокси-группой); сульфонатом, таким как алкил- или аралкилсульфонильная группа (например, метансульфонильная группа); эфиров аминокислот (например, L-валерильной группы или L-изолейцильной группы) и моно-, ди- или трифосфатов.
Что касается указанных выше эфиров, то, если особо не оговаривается, любой алкиль-ный фрагмент в них преимущественно содержит от 1 до 16 атомов углерода, в частности от 1 до 4 атомов углерода. Любой арильный фрагмент в указанных соединениях преимуще-ственно является фенильной группой.
В частности, эфирами могут быть эфиры, образованные (С1-С16) алкильными группа-ми, незамещенные бензиловые эфиры или бензиловые эфиры, замещенные, по крайней ме-ре, одним атомом галогена (брома, хлора, фтора или йода), одной (С1-С16) алкильной груп-пой, (С1-С6) алкокси-группой, нитро-группой или трифторметильной группой.
Фармацевтически приемлемыми солями соединения (А) являются соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Приме-ры подходящих кислот включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную, азотную кислоту, хлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, фосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, n-толуолсульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафтен-2-сульфоновую кислоту и бензольсульфоновую кислоту. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, которые сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, мо-гут использоваться для получения промежуточных соединений при синтезе соединений по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот.
Солями, образованными соответствующими основаниями, являются соли щелочных ме-таллов (например, натрия), соли щелочно-земельных металлов (например, магния), соли ам-мония и четвертичные аммониевые соли NR4+ (где R является (С1-С4) алкильной группой).
Ссылки в данном описании на соединение (А) по изобретению относятся как к соб-ственно соединению (А), так и к его фармацевтически приемлемым производным.
Соединения по настоящему изобретению либо сами обладают антивирусной активно-стью, либо образуют такие соединения в процессе метаболизма. В частности, такие соедине-ния эффективны при ингибировании репликации ретровирусов, в том числе ретровирусов человека, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), который является причиной заболевания СПИДом.
Соединения по настоящему изобретению можно использовать также для лечения жи-вотных, в том числе человека, инфицированных вирусом гепатита В.
Следующей целью настоящего изобретения является использование соединения (А) или его фармацевтически приемлемого производного в качестве активного терапевтического средства, в частности, антивирусного средства, например, при лечении ретровирусных ин-фекций или инфекций, вызванных вирусом гепатита В.
Еще одной целью настоящего изобретения является способ лечения вирусной инфекции, в частности, инфекции, вызванной вирусом гепатита В или ретровирусами, такими как ВИЧ, у животных, в том числе у человека, который состоит в назначении эффективного ко-личества соединения (А) или его фармацевтически приемлемого производного.
Еще одной или альтернативной целью изобретения является использование соединения (А) или его фармацевтически приемлемого производного в производстве медицинских пре-паратов для лечения вирусных инфекций.
Соединения по настоящему изобретению могут использоваться также при лечении свя-занных со СПИДом состояний, таких как связанный со СПИДом комплекс прогрессирую-щего общего поражения лимфатических узлов, связанных со СПИДом нейрологических со-стояний (таких как слабоумие и трофический парапарез), положительных анти-ВИЧ-антитело и ВИЧ-положительных состояний, саркомы Капози, тромботической пурпуры и заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, например, pneumocystis carinii.
Соединения по настоящему изобретению полезны также для предотвращения развития заболевания в клиническую форму у пациентов, у которых обнаруживается положительная реакция на анти-ВИЧ-антитело и ВИЧ-антиген, и для профилактики после воздействия ВИЧ.
Соединение (А) или его фармацевтически приемлемые производные могут использо-ваться также для предотвращения вирусного загрязнения физиологических жидкостей, та-ких как кровь и семенная жидкость в условиях in vitro.
Соединения по настоящему изобретению могут использоваться также при лечении жи-вотных, в том числе человека, инфицированных вирусом гепатита В.
Для специалистов очевидно, что указанный способ лечения распространяется и на про-филактику заболевания, а также и на лечение уже выявленных инфекций или заболеваний с выраженными симптомами.
Следует подчеркнуть, что количество соединения по настоящему изобретению, которое необходимо для лечения, будет меняться в зависимости не только от конкретно выбранного соединения, но и от пути назначения, природы заболевания, возраста и общего состояния пациента и устанавливается по усмотрению лечащего врача или ветеринара. Однако, в об-щем случае приемлемая доза составляет приблизительно от 0,1 до приблизительно 750 мг/кг веса тела в день, предпочтительно от 0,5 до 60 мг/кг в день, и наиболее предпочтительно от 1 до 20 мг/кг в день.
Требуемая доза может представлять собой одну дозу или же разделена на несколько доз, которые назначаются через определенные промежутки времени, например, в виде двух, трех, четырех или более дозировок в день.
Соединение по настоящему изобретению удобно назначать в виде стандартной дозы, со-держащей, например, от 10 до 1500 мг, предпочтительно от 20 до 1000 мг, еще более пред-почтительно от 50 до 700 мг активного ингредиента на стандартную дозу.
В идеале, количество назначаемого активного ингредиента должно быть таким, чтобы максимальная его концентрация в плазме составляла приблизительно от 1 до приблизитель-но 75 мкМ, предпочтительно приблизительно от 2 до 50 мкМ, наиболее предпочтительно от 3 до приблизительно 30 мкМ. Это достигается, например, внутривенной инъекцией, в част-ности, солевого раствора с концентрацией от 0,1 до 5% активного ингредиента, или назна-чением орально шариков, содержащих приблизительно от 1 до приблизительно 100 мг ак-тивного ингредиента. Требуемый уровень содержания лекарства в крови можно поддержи-вать с помощью непрерывного вливания в количестве приблизительно от 0,01 до приблизи-тельно 5,0 мг/кг в час или попеременных вливаний, содержащих приблизительно от 0,4 до приблизительно 15 мг/кг активного ингредиента.
Несмотря на то, что в терапевтических целях соединение по настоящему изобретению может назначаться в виде чистого вещества, предпочтительнее вводить активные ингреди-енты в виде фармацевтических составов.
Таким образом, в настоящем изобретении далее заявляется фармацевтический состав, включающий соединение (А) или его фармацевтически приемлемое производное вместе с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых носителей, а также, по вы-бору, с другими терапевтическими и/или профилактическими средствами. Носители долж-ны быть “приемлемыми” в том смысле, что они должны совмещаться друг с другом в соста-ве композиции и не оказывать вредное воздействие на пациента, который использует этот состав.
Фармацевтические составы включают такие фармацевтические композиции, которые пригодны для орального, ректального, внутриносового, местного (в том числе буквального и подъязычного), вагинального или парентерального (в том числе внутримышечного, под-кожного и внутривенного) назначения или в форме, пригодной для ингаляции или вдувания порошкообразных лекарств. Составы, если это возможно, удобнее готовить в виде дискрет-ных доз, которые могут быть получены любыми способами, хорошо известными в фарма-ции. Все способы включают смешение активного вещества с жидким носителем или тща-тельно растертым твердым носителем или с обоими указанными носителями, а затем прида-ние продукту требуемой формы.
Фармацевтические составы, удобные для орального назначения, могут быть в виде стан-дартных доз, таких как капсулы, крахмальные капсулы или таблетки, каждая из которых содержит определенное количество активного ингредиента; в виде порошков или гранул; в виде раствора, суспензии или эмульсии. Активный ингредиент может также быть в виде шарика, лекарственной кашки или пасты.
Таблетки и капсулы для орального назначения могут содержать обычные наполнители, такие как связующие вещества, смазывающие средства, разрыхлители или смачивающие вещества. Таблетки могут быть покрыты способами хорошо известными из данной области техники. Жидкие препараты для орального назначения могут быть в форме, например, сус-пензий в воде или масле, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут представ-лять собой твердые продукты, которые необходимо перед употреблением смешать с водой или другим подходящим жидким носителем. Такие жидкие препараты могут включать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, эмульгаторы, неводные жидкие носи-тели (которые могут включать употребляемые в пищу масла) или консерванты.
Соединения по настоящему изобретению могут быть составлены для парентерального назначения (например, с помощью инъекции или непрерывного вливания) и могут быть представлены единичной дозой в виде ампул, заполненных шприцев, контейнеров для вли-вания небольшого количества лекарства или контейнерами, содержащими большое количе-ство доз, в которые добавляют консерванты. Составы могут иметь форму суспензий, раство-ров или эмульсий в маслах или водных носителях, и могут содержать вспомогательные со-единения, такие как суспендирующие средства, стабилизаторы и/или диспергаторы. Актив-ный ингредиент может также быть в порошкообразной форме, получаемой асептическим выделением, стерилизацией или лиофилизацией из раствора, и его необходимо перед упо-треблением смешать с подходящим носителем, в частности, со стерильной апирогенной во-дой.
Для местного нанесения на слой эпидерма соединение по настоящему изобретению мо-жет входить в состав мазей, кремов или лосьонов, а также в составе бляшек для нанесения на кожу. Мази и кремы могут, например, готовиться на основе воды или масла с добавлением подходящих загустителей и/или гелеобразующих средств. Лосьоны могут готовиться с ис-пользованием воды и масла, а также содержать в общем случае один или несколько эмульга-торов, стабилизаторов, диспергаторов, суспендирующих средств, загустителей или красите-лей.
Составы, пригодные для орального назначения, включают таблетки, состоящие из ак-тивного ингредиента в ароматизированной массе, обычно из сахарозы, камеди или смолы трагаканта; пастилки, состоящие из активных ингредиентов в инертном носителе, таком как желатин и глицерин или сахароза и камедь; жидкости для полоскания рта, состоящие из ак-тивных ингредиентов в подходящем жидком носителе.
Фармацевтические составы, удобные для ректального назначения, в которых носитель является твердым соединением, предпочтительно готовятся в виде суппозиторий, содержа-щий стандартную дозу. Подходящие носители включают шоколадное масло и другие веще-ства, обычно используемые для этих целей, а сами суппозитории удобно готовить смешени-ем активных ингредиентов с размягченным или расплавленным носителем с последующим охлаждением и отливкой в форму.
Составы для вагинального назначения могут быть представлены вагинальными суппо-зиториями, тампонами, кремами, гелями, пастами, пенками или аэрозолями, которые в до-полнение к активному ингредиенту содержат пригодные для этих целей известные носите-ли.
Для внутриносового назначения соединения по настоящему изобретению могут исполь-зоваться в виде жидких аэрозолей или распыляемых порошков или в форме капель.
Капли можно готовить с использованием воды и неводных жидкостей вместе с одним или несколькими диспергаторами, солюбилизаторами и суспендирующими агентами. Жид-кие аэрозоли преимущественно подаются из баллончиков под давлением.
Для ингаляции соединения по настоящему изобретению обычно поступают из аппарата для вдувания, распылителя или из аэрозольной упаковки или подаются с помощью других подходящих средств доставки аэрозолей. В аэрозольных упаковках могут использоваться соответствующие летучие соединения, такие как дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другие подходящие газы. В случае аэрозольной упаковки, стандартную дозу устанавливают с помощью клапана, который отмеряет опреде-ленное количество лекарства.
При назначении путем ингаляции или вдувания соединения по настоящему изобрете-нию могут готовиться также в форме сухой порошкообразной композиции, например, смеси порошков соединения и нужной основы, такой как лактоза или крахмал. Стандартные дозы порошкообразных составов могут быть изготовлены, например, в виде капсул или картри-джей или же, например, желатиновых или пластиковых упаковок, из которых порошок можно вводить с помощью ингалятора или аппарата для вдувания.
В случае необходимости описанные выше составы могут быть приспособлены для пор-ционного выделения активного ингредиента в течение длительного периода времени.
Фармацевтические составы по настоящему изобретению могут содержать также другие активные ингредиенты, такие как антимикробные средства и консерванты.
Соединения по настоящему изобретению можно также использовать с другими терапев-тическими средствами, например, с другими антиинфекционными средствами. В частности, соединения по настоящему изобретении можно применять совместно с известными антиви-русными средствами.
Таким образом, еще одной целью настоящего изобретения является сложный состав, включающий соединение (А) или его физиологически приемлемое производное вместе с другим терапевтическим средством, в частности, антивирусным средством.
Указанные сложные составы могут быть приготовлены для удобства в виде фармацев-тических композиций, таким образом, еще одной целью изобретения являются фармацевти-ческие композиции, состоящие из указанного выше сложного состава и фармацевтически приемлемого носителя.
Подходящими терапевтическими средствами для использования в таких сложных соста-вах являются ациклические нуклеозиды, такие как ацикловир или ганцикловир, интерферо-ны, такие как алфа-, бета- или гамма- интерферон, ингибиторы почечных выделений, такие как пробенецид, ингибиторы транспорта нуклеозидов, такие как дипиридамол, 2’,3’-дидеоксинуклеозиды, такие как AZT, 2’,3’-дидеокситидин, 2’,3’-дидеоксиаденозин, 2’,3’-дидеоксиинозин, 2’,3’-дидеокситимидин, 2’,3’-дидеокси-2’,3’-дидегидротимидин и 2’,3’-дидеокси-2’,3’-дидегидроцитидин, иммуномодуляторы, такие как интерлейкин-2 (IL-2) и гранулоцитарно-макрофагальный стимулирующий фактор (GM-CSF), эритропометин, ам-плиген, тимомодулин, тимопентин, фоскарнет, рибавирин и ингибиторы связывания ВИЧ с CD4 рецепторами, в частности, растворимый CD4, фрагменты CD4, гибридные молекулы CD4, ингибиторы гликозилирования, такие как 2-деокси-D-глюкоза, кастаноспермин и 1-деоксинойиримицин.
Индивидуальные компоненты таких сложных составов могут назначаться как последо-вательно, так и одновременно в виде отдельных или совместных фармацевтических компо-зиций.
В том случае, когда соединение (А) или его фармацевтически приемлемое производное используется совместно со вторым терапевтическим средством, которое активно по отноше-нию к тому же самому вирусу, доза каждого соединения может быть такой же или же отли-чаться от дозы в случае использования каждого средства отдельно. Нужная доза устанавли-вается специалистом.
Соединение (А) и его фармацевтически приемлемое производное можно получить лю-бым способом, который известен для синтеза соединений, обладающих аналогичной струк-турой, как это, например, описано в Европейской патентной публикации 0382526 А2.
Для специалиста очевидно, что в ряде описанных далее методов необходимая стерехи-мическая структура соединения (А) может быть получена либо при использовании оптиче-ски активного исходного соединения, либо путем расщепления рацемической смеси на од-ном из этапов синтеза. Во всех случаях оптически чистый целевой продукт может быть по-лучен расщеплением конечного продукта каждой реакции.
В одном из таких способов 1,3-оксатиолан по формуле (VIII)
VIII

где аномерная группа L является уходящей группой, взаимодействует с соответствующим основанием. Подходящими группами L являются группы OR, в которых R обозначает ал-кильную группу, в частности, (С1-С6) алкильную группу, такую как метильная группа, либо же R обозначает (С1-С6) ацильную группу, в частности, ацетильную группу, или атом гало-гена, например, йода, брома или хлора.
Соединение по формуле (VIII) легко взаимодействует с 5-фторцитозином или соответ-ствующим предшественником этого пиримидинового основания (предварительно силили-рованного силилирующим агентом, таким как гексаметилдисилазан) в подходящем раство-рителе, таком как хлористый метилен, в присутствии кислоты Льюиса, такой как тетрахло-рид титана, триметилсилилтрифлат, йодтриметилсилан или соединение олова (Y), напри-мер, SnCl4.
1,3-оксатиоланы по формуле (VIII) можно, например, синтезировать по реакции альде-гида по формуле (VII) с меркаптоацеталем по формуле (VI) в подходящем органическом растворителе, таком как толуол, в присутствии кислотного катализатора, например, кислоты Льюиса, такой как хлорид цинка.

HSCH2 CH(OC2H5)2 (VI)

C6H5CO2CH2CHO (VII)

Меркаптоацетали по формуле (VI) можно получить известными способами, например, G.Hesse and I.Jorder, Chem. Ber., Bd. 85, pp.924-932 (1952).
Альдегиды по формуле (VII) можно получить известными способами, например, E.G.Halloquist and H.Hibbert, Can.J.Research, V. 8, pp.129-136 (1933). Сырой альдегид (VII) удобно очищать, превращая его в кристаллический аддукт с бисульфитом с последующим выделением свободного альдегида.
Во втором способе соединение (А) получают интерконверсией в присутствии основания соединения по формуле (IX)

где В обозначает группу, которая превращается под действием основания в 5-фторцитозин. Такая интерконверсия может быть осуществлена либо простыми химическими превращени-ями (в частности, преобразованием урацилового основания в цитозин), или ферментатив-ными превращениями с использованием деоксирибозилтрансферазы. Указанные методы и условия интерконверсии хорошо известны в химии нуклеозидов.
В третьем способе по формуле (XI)
XI

можно перевести в соединение (А) превращением аномерной амино-группы в 5-фторцитозиновое основание методами, хорошо известными в химии нуклеозидов.
Многие из описанных здесь реакций в части синтеза нуклеозидов представлены в обзо-рах, например, Nucleoside Analogs-Chemistry, Biology and Medical Applikations, R.T.Walker et al., Eds., Plenum Press, N.Y. (1979), pp.165-192 и T.Ueda, Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, Vol.I, L.B.Townsend Ed., Plenum Press, N.Y. (1988) на стр.165-192, которые при-водятся здесь для справки.
Очевидно, что при осуществлении указанных выше реакций могут потребоваться ис-ходные вещества, имеющие защищенные функциональные группы, так что на промежуточ-ных или конечной стадиях для выделения целевого соединения может потребоваться прове-дение снятия указанной защиты. Защита и снятие защиты функциональных групп можно осуществить с использованием обычных способов. Так, например, амино-группы можно защитить с помощью группы, выбранной из аралкильной группы (в частности, бензильной группы), ацильной группы, арильной группы (в частности, 2,4-динитрофенильной группы) или силильной группы; соответствующее удаление защитной группы проводят в нужный момент гидролизом или гидрогенолизом в стандартных условиях. Окси-группы можно за-щитить любыми группами, которые используются для этой цели, как это описано, напри-мер, в Protective Groups in Organic Chemistry, J.F.W.McOmie, Ed., Plenum Press, N.Y. (1973) или T.W.Green, Protected Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, N.Y. (1989).
Примером подходящих групп для защиты окси-группы являются группы, выбранные из алкильной группы (например, метильной группы, третбутильной группы или метоксиме-тильной группы), аракильной группы (например, бензильной группы, дифенилметильной группы или трифенилметильной группы), гатероциклических групп, таких как тетрагипо-пиранильная группа, ацильной группы (например, ацетильной группы или бензоильной группы) и силильной группы, такой как триалкилсилильная группа (например, трет-бутилдиметилсилильная группа). Защита окси-группы может быть снята обычными спосо-бами. Так, например, алкильную группу, ацильную группу и гетероциклическую группу можно удалить сольволизом, например, гидролизом в кислой или щелочной среде. Арал-кильные группы, такие как трифенилметильная группа, можно также удалить сольволизом, например, гидролизом в кислой среде. Аралкильные группы, такие как бензильная группа, можно снять на нужной стадии синтеза, например, обработкой эфиратом трехфтористого бора и уксусным ангидридом. Силильные группы также удобно удалять, используя доноры ионов фтора, такие как тетра-n-бутиламмонийфторид.
В указанных выше способах соединение (А) обычно получают в виде смеси цис- и транс-изомеров, из которых соединением, представляющим интерес, является цис-изомер.
Эти изомеры можно разделить физическими методами, например, хроматографией на силикагеле или дробной перекристаллизацией непосредственно или в виде подходящего производного, в частности, в виде ацетатов (получаемых, например, с использованием ук-сусного ангидрида) с последующим (после разделения изомеров) обратным превращением в нужный продукт (в частности, деацетилированием метанольным раствором аммиака).
Фармацевтически приемлемые соли соединения по настоящему изобретению можно по-лучить способом, описанным в Патенте США 4383114, который приводится здесь для справки. Так, например, когда требуется получить из соединения (А) соль присоединения кислоты, то продукт по одному из представленных выше способов можно обычным спосо-бом превратить в соль обработкой выделенного свободного основания соответствующей кислотой в присутствии, если необходимо, подходящего растворителя, такого как сложный эфир (например, этилацетат) или спирт (например, метанол, этанол или изо-пропанол). Соли неорганических оснований могут быть получены взаимодействием целевого соединения с подходящим основанием, таким как спирт (в частности, метанол). Фармацевтически прием-лемые соли можно получать также из других солей, в том числе других фармацевтически приемлемых солей соединения (А), применяя обычные методы.
Соединение (А) можно превратить в фармацевтически приемлемые фосфаты или другие эфиры взаимодействием с фосфорилирующими агентами, такими как хлорокись фосфора, или подходящими этерифицирующими агентами, такими как ацилгалогенид или ангидрид. Эфир или соль соединения (А) можно, например, перевести в исходное соединение гидро-лизом.
Расщепление конечного продукта, промежуточного продукта или исходного вещества, можно провести любым известным способом: см., например, E.L.Elies, Stereochemistry of Carbon Compounds, McGraw Hill (1962) и S.H.Wilen, Tables of Resolving Agents.
Так, например, соединение (А) можно выделить с помощью хиральной жидкостной хроматографии высокого разрешения, используя подходящую стационарную фазу, напри-мер, ацетилированный бета-циклодекстрин или триацетат целлюлозы и соответствующий растворитель, например, спирт, такой как этанол, или водный раствор, например, ацетата триэтиламмония. Соединения можно расшепить также с помощью стимулируемой фермен-том энантиоселективной диссимиляции подходящим ферментом, таким как цитидиндеами-наза или селективным ферментативным разложением подходящего производного 5’-нуклеотидазы. В том случае, если расщепление проводят ферментативно, фермент может содержаться в растворе или, что более удобно, присутствовать в иммобилизованной форме. Иммобилизация ферментов может быть осуществлена известными способами, например, нанесением на смолу, такую как Eupergit S.
Изобретение далее поясняется следующими примерами, которые ни в коем случае не ограничивают настоящее изобретение. Все температуры приведены в градусах Цельсия.
Промежуточное соединение 1
(+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан

(i) 2-бензоилоксиметил-5-ацетокси-1,3-осатиолан
Бензоилоксиацетальдегид (216,33 г, 1,32 мол) растворяют в пиридине (373 мл, 4,61 мол) и к полученному раствору прибавляют 1,4-дитиан-2,5-диол (100,31 г, 9,66 мол). Гетероген-ную смесь перемешивают в атмосфере азота при температуре 65 С в течение 1 часа. К этому времени растворение завершается. К реакционной смеси прибавляют дихлорметан (650 мл) и смесь охлаждают до 0 С в бане со льдом. По каплям при 0-5 С в течении 1,5-2 часов при-бавляют хлористый ацетил (231 мл, 3,95 мол). Перемешивают при 0-5 С еще в течение 30 минут и осторожно выливают смесь в холодный (0С) насыщенный раствор бикарбоната натрия. Органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют дихлорметаном (3 х 200 мл). Органические вытяжки объединяют, моют насыщенным раствором бикарбоната натрия (3 х 200 мл) и соли (200 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остатки пиридина удаляют азеотропной перегонкой с бензолом. Получают 320,79 г сырого продукта, который очищают дистилляцией или фильтрованием через короткую колонку с силикагелем (элюент - гексан/этилацетат, 3/1).

(ii) цис- и транс-2-бензоилоксиметил-5-(N-ацетил-5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан.
5-фторцитозин (4,30 г, 33,3 ммол), гексаметилдисилазан (25мл) и сульфат аммония (120 мг) кипятят с обратным холодильником до полного растворения цитозина (3 часа), а затем кипятят еще в течение 2 часов. Гексаметилдисилазан отгоняют в вакууме и к остатку при-бавляют толуол (100 мл), чтобы упарить растворители. Полученный раствор бис(триметилсилил)фторцитозина в дихлорметане (40 мл) прибавляют в атмосфере аргона к раствору 2-бензилоксиметил-5-ацетокси-1,3-осатиолана (8,537 г, 30,3 ммол) в сухом дихлор-метане (100 мл), содержащем молекулярные сита (4А, 2 г), которые предварительно выдер-живают в атмосфере аргона и охлаждают до 0С в течение 20 минут.
К полученной смеси прибавляют при 0С [(трифторметансульфо-нил)окси]триметилсилан (6 мл, 31 ммол) и полученный раствор перемешивают при комнат-ной температуре в течение 2 часов. Отфильтровывают, фильтрат промывают дважды по 300 мл насыщенным раствором соли и один раз дистиллированной водой. Органический слой сушат над сульфатом магния, отфильтровывают и упаривают досуха. Получают сырое про-изводное 5-фтор-цитозина (10,1 г). Rf = 0,37 (EtOAc:MeOH, 9:1).
На следующей стадии полученный продукт без дальнейшей очистки ацетилируют. Сы-рой продукт растворяют в атмосфере аргона в дихлорметане (120 мл) в круглодонной колбе емкостью 500 мл. К полученному раствору прибавляют триэтиламин (12,7 мл, 91,1 мол) и диметиламинопиридин (111 мг, 0,9 ммол). Колбу под аргоном помещают на 1 час в баню со льдом. В охлажденную колбу впрыскивают уксусный ангидрид (4,3 мл, 45 ммол), перегнан-ный над ацетатом натрия. Оставляют смесь при перемешивании на ночь, а затем осторожно декантируют в колбу Эрленмейра, содержащую насыщенный раствор бикарбоната натрия. Продукт промывают дистиллированной водой, а затем насыщенным раствором соли. Пор-ции раствора в хлористом метилене сушат и упаривают досуха в глубоком вакууме, получая ацетилированную смесь альфа/бета изомеров в виде бесцветной пенки, вес которой после осушки составляет 9,6 г. Тонкослойной испарительной хроматографией из этого вещества, используя в качестве элюента этилацетат:метанол (9:1), получают 3,1 г (7,8 ммол, 46%) чи-стого транс- и 3,5 г (8,9 ммол, 30%) чистого цис-изомера целевого продукта.
транс-изомер: Rf = 0,65 (этилацетат:мета-нол, 9:1)
УФ спектр (МеОН)  max: 309 нм
Спектр ЯМР ( м.д. в CDCI3): 8,77 (1H, шир., С4-NH-Ac), 8,06 (2H, мульт., аром.), 7,70 (1Н, дубл., С6-Н, JCF = 6,3 Гц), 7,62 (1Н, мульт., аром.), 7,49 (2Н, мульт., аром.), 6,51 (1Н, дубл. дублетов, С6-Н), 5,91 (1Н, дубл. дублетов, С2-Н), 4,48 (2Н, дубл. дублетов, С2-СН2ОСОС6Н3), 3,66 (1Н, дубл. дублетов, С4-Н), 3,34 (дубл. дублетов, С4-Н), 2,56 (3Н, сингл., NH-COOH3).
цис-изомер: Rf = 0,58 (этилацетат:мета-нол, 9:1)
УФ спектр (МеОН)  max: 309 нм
Спектр ЯМР ( м.д. в CDCI3): 8,72 (1H, шир., С4-NH-Ac), 8,06 (2H, мульт., аром.), 7,87 (1Н, дубл. С6-Н, JCF = 6,3 Гц), 7,60 (1Н, мульт., аром.), 7,49 (2Н, мульт., аром.), 6,32 (1Н, дубл. дублетов, С0-Н), 5,47 (1Н, дубл. дублетов, С2-Н), 4,73 (2Н, дубл. дублетов, С2-СН2ОСОС6Н0), 3,62 (1Н, дубл. дублетов, С4-Н), 3,19 (дубл.дублетов, С4-Н), 2,55 (3Н, сингл., NH-COCH3).

(iii) (+)-цис-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан
1,2 г (3,05 ммол) цис-2-бензоилоксиметил-5- (N-ацетил-5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолана перемешивают в течение 2 часов при 0С в 30 мл метанольного раствора амми-ака и оставляют перемешиваться на ночь при комнатной температуре. Смесь упаривают при пониженном давлении и остаток растирают дважды (2 х 30 мл) с абсолютным эфиром. Твер-дый остаток перекристаллизовывают из абсолютного спирта и получают 655 мг (2,64 ммол, 87%) чистого цис-изомера целевого соединения:
т.пл.204-206 С; Rf = 0,21 (этилацетат:метанол, 9:1). Целевое соединение охарактеризовано методами Н и С-ЯМР спектроскопии и УФ спектроскопии.
УФ спектр (вода):  max = 280, 9 нм
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в ДМСО-d6): 8,22 (1Н, дубл., С6 -Н, JCF = 7,2 Гц), 7,84 (2Н, дубл., С4 -NH2), 6,16 (1H, трипл., С5-Н), 5,43 (1Н, трипл., С2-СН2-ОН), 5,19 (1Н, трипл., С2-Н), 3,77 (2Н, мульт., С2-СН2-ОН), 3,35 (1Н, дубл. дублетов, С4-Н).
Cпектр 13С-ЯМР (ДМСО-d6): 153,46 (C6), 158,14 (C2, 2JCF = 14,0 Гц), 134,63 (С4, JCF = 24,1 Гц), 126,32 (С3, JCF = 32,5 Гц), 86,82 (С0), 86,80 (С4), 86,77 (С2), 62,32 (СН2ОН).

Пример 1
(-)-4-амино-5-фтор-1-(2-оксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-он
(i) Монофосфат (+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолана
К перемешиваемой смеси Промежуточного соединения 1 (500 мг, 2,024 ммол) в сухом триметилфосфате (10 мл), охлажденной до 0С, прибавляют по каплям хлорокись фосфора (1,22 мл, 13,1 ммол). Реакционную смесь перемешивают при указанной температуре в тече-ние часа и реакцию прерывают, прибавляя ледяную воду. Доводят рН охлажденной смеси до 3 прибавлением 1N водного раствора едкого натра, переносят на колонку с активированным древесным углем (5 г, Darco) и элюируют сначала водой, а затем этанолом и водным раство-ром аммиака (соотношение 10:10:1). Фракции, которые содержат монофосфат, отделяют и упаривают, а затем переносят на колонку, наполненную 15 г DEAE Sephadex A25 (Форма НСО3). Проводят градиентное элюирование водой (300 мл), 0,1 М раствором бикарбоната аммония (300 мл) и 0,2 М раствором бикарбоната аммония (100 мл). Упаривание соответ-ствующих фракций после разбавления водой (30 мл) позволяет выделить монофосфат (+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолана в виде бесцветного вещества, Rf = 0,5 (n-PrOH:NH OH, 6:4), выходом 612 г (1,77 ммол, 87,9%).
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в D2O): 8,27 (1Н, дубл., С6 -Н, JCF = 6,47 Гц), 7,33 (1Н, дубл.дублетов С0-Н), 5,47 (1H, трипл., С2-Н), 4,84 (2Н, мульт., С2-СН2-ОН), 3,63 (1Н, дубл. дублетов, С4-Н), 3,30 (1Н, дубл. дублетов, С4-Н).
Чистота по данным жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР) составля-ет не менее 99%.

(ii) (+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцито-зин-1-ил)-1,3-оксатиолан
К раствору монофосфата (+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолана (100 мг, 0,29 ммол) в 3 мл буферного раствора на основе глицина [глицин (52,6 мг) и хлорид магния (19 мг) в воде (10 мл)] быстро прибавляют 5-нуклеотидазу (“Sigma”, 3,5 мг с актив-ностью 29 ед/мг). Полученную смесь выдерживают в термостате при перемешивании при 37С. За ходом реакции следят с помощью ЖХВР (хиральная колонка, содержащая глико-протеин альфа-кислоты, элюент - 0,2 М раствор фосфата натрия с рН 7, скорость подачи 0,15 мл/мин) через различные промежутки времени. Через 2,5 часа наблюдается присутствие лишь (+)-энантиомера. Прибавляют еще некоторое количество (2 мг) фермента и смесь вы-держивают в термостате еще в течение 3 часов. Анализ по данным ЖХВР ясно указывает на селективный и полный гидролиз (+)-энантиомера. Полученную смесь переносят на колонку, наполненную DEAE Sephadex А25 (форма НСО). Проводят градиентное элюирование водой (155 мл), а затем 0,1 М и 0,2 М раствором бикарбоната аммония (по 100 мл каждого). Соот-ветствующие фракции, содержащие первый элюированный нуклеозид, объединяют и упа-ривают. Оставшееся твердое вещество очищают на короткой колонке с силикагелем, ис-пользуя в качестве элюента смесь этилацетата и метанола (4,5:0,5), а затем разделяют с по-мощью ЖХВР (в тех же условиях, что и приведенные ранее). Получают чистый (+)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан (23 мг, 0,093 ммол, 32%) в виде белого твердого вещества.
[]=1D+123 (C, 1,00, MeOH); т.пл.185С
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в ДМСО): 8,26 (1Н, дубл., С6-Н, JHF = 5,22 Гц), 7,87 (1Н, сингл., NH2, D2O, обмен), 7,63 (1Н, сингл., NH2, D2O, обмен) 6,20 (1Н, дубл.дублетов, С0-Н), 5,48 (1Н, трипл., С2-Н), 5,24 (1Н, трипл., СН2-ОН, D2O, обмен), 3,84 (2Н, мульт., С2-СН2ОН), 3,50 (1Н, дубл.дублетов, С4-Н), 3,37 (1Н, дубл.дублетов, С4-Н).

(iii) (-)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцито-зин-1-ил)-1,3-оксатиолан
Соответствующие фракции после колонки с сефадексом, содержащие второй элюиро-ванный нуклеозид, получение которого описано на стадии (ii), объединяют и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 2 мл воды и обрабатывают алкалинфосфата-зой (“Sigma”, 1 мл с активностью 60 ед/мг) с последующим термостатированием в течение 1,5 часов при температуре 37С. Растворитель упаривают и остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетат-метанол (4:1) с последующей ЖХВР (в тех же условиях, что и указанные ранее). Таким образом получают чистый (-)-цис-2-оксиметил-5-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан (20 мг, 0,081 ммол, 28%) с т.пл. 190С (с разл.): Rf = 0,21 (EtAc:MeOH, 4:1).
УФ спектр (вода):  max = 279,1 мм
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в ДМСО-D6): 8,25 (1Н, дубл., С6-Н, JHF =7,26 Гц), 7,88 (1Н, шир., С4-NH2, D2O, обмен), 7,85 (1Н, шир., С4-NH2; D2O, обмен), 5,24 (1Н, трипл., С2-Н), 3,83 (2Н, мульт., С2СН2-ОН), 3,19 (1Н, дубл.дублетов, С4-Н), 3,15 (1Н, дубл.дублетов, С4-Н).
Промежуточное соединение 2 и Пример 2 поясняют альтернативный способ получения соединения (А).
Промежуточное соединение 2
(1 R, 2S,%R)-ментил-5R-(5-фторцито-зин-1-ил)-1,3-оксатиолан-2S-карбоксилат
К суспензии 5-фторцитозина (155 мг, 1,2 ммол) в хлористом метилене (1 мл) при ком-натной температуре в атмосфере аргона прибавляют последовательно 2,4,6-коллидин (0,317 мл, 2,4 ммол) и трет-бутилметилсилилтрифторметансульфонат (0,551 мл, 2,4 ммол). Полу-ченную смесь перемешивают в течение 15 минут до получения прозрачного раствора. При-бавляют раствор (1R, 2B, SR)-ментил-5R-ацетокси-1,3-оксатиолан-2S-карбоксилата (330 мг, 1 ммол) в хлористом метилене (0,5 мл), а затем йодтриметилсилан (0,156 мл, 1,1 ммол). Перемешивание продолжают в течение 3 часов. Разбавляют смесь хлористым метиленом (20 мл) и промывают последовательно водным раствором бисульфита натрия, водой, насыщен-ным раствором соли и упаривают. Остаток переносят в смесь эфиргексан (1:1, 10 мл) и насыщенный раствор бикарбоната натрия (2 мл) и перемешивают при комнатной темпера-туре в течение 15 минут. Водный слой отделяют, а органический слой подвергают центри-фугированию и получают твердое вещество белого цвета, которое промывают гексаном (3 х 5 мл) и сушат в вакууме. Полученный таким способом (1R, 2S, 5R)-ментил-5R-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан-2S-карбоксилат (350 мг, 88% содержит около 6% (1R, 2S, 5R)-ментил-5S-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан-2S-карбоксилата (ЯМР). Полу-ченное вещество перекристаллизовывают из смеси метанол-хлористый метилен и получают кристаллический продукт.
[]26D + 22 (С, 0,19, МеОН); т.пл. 216-218С
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в CDCI3): 0,78 (3Н, дубл., J = 7 Гц), 0,91 (6Н, трипл., J = 7,3 Гц), 1,00 (2Н, мульт.), 1,39-2,04 (7Н, мульт.), 3,12 (1Н, дубл.дублетов, J = 6,6 Гц, 6,1 Гц), 3,52 (1Н, дубл.дублетов, J = 4,7 Гц, 6,1 Гц), 4,79 (1Н, дубл.дублетов, J = 4,6 Гц, 4,3 Гц), 5,46 (1Н, сингл.), 5,75 (1Н, шир. сингл., обмен), 6,42 (1Н, трипл., J = 5,0 Гц), 8,10 (1Н, шир. сингл., обмен), 8,48 (1Н, дубл., J = 6,6 Гц).

Пример 2
2S-оксиметил-5R-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан
К суспензии литийалюмогидрида (10 мг, 0,54 ммол) в ТГФ (1 мл) медленно прибавляют в атмосфере аргона при комнатной температуре раствор (1R, 2S, 5R)-ментил-5R-(5-фторцитозин-1-ил)-1,3-оксатиолан-2S-карбоксилата (54 мг, 0,135 ммол) в ТГФ (2 мл). Пере-мешивают реакционную смесь в течение 30 минут и прерывают реакцию, прибавляя избы-ток метанола (2 мл), а затем прибавляют силикагель (3 г). Образовавшуюся массу очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат-гексан-м етанол, 1:1:1) и получают смолоподобное твердое вещество, которое высушивают азеотропной перегонкой с толуолом и выделяют 20,7 мг (63%) твердого белого вещества.
[]26D + 114 (C, 0,12, MeOH)
Спектр 1Н-ЯМР ( м.д. в ДМСО-D6): 3,14 (1Н, дубл.дублетов, J = 4,3 Гц, 11,9 Гц), 3,42 (1Н, дубл.дублетов, J = 5,3 Гц, 11,9 Гц), 3,76 (2Н, мульт.), 5,18 (1Н, мульт.), 5,42 (1Н, трипл., J = 4,8 Гц), 6,14 (1Н, мульт.), 7,59 (1Н, нир. мульт., обмен), 7,83 (1Н, шир.мульт., обмен), 8,29 (1Н, дубл., J = 7,66 Гц).

Пример 3
Биологическая активность

(i) Антивирусное активность
Антивирусную активность соединения по Примеру 1 определяют по отношению к ВИЧ-1 в следующих клеточных линиях.
Клетки С8166, Т-лимфобластоидная клеточная линия человека, инфицированные ВИЧ-1, штамм RF.
Клетки МТ-4, клеточная линия Т-клеток лейкемии, инфицированные ВИЧ-1, штамм RF.
Антивирусную активность в клетках С8166 определяют по ингибированию образования соклетий (Tochikura et al., Virology, Vol. 164, 542-546), а в клетках Мт-4 по ингибированию превращения формазана [Baba et al., Biochem. Biophys. Res.Commun., Vol. 65, pp.128-134 (1987); Mossman, J. Immun.Meth., Vol. 65, pp.55-57 (1983)]. Антивирусную активность опре-деляют также путем анализа количества антигенов ВИЧ р24, синтезируемых в присутствии и в отсутствии энантиомеров.
Полученные результаты представлены в Таблицах 1 и 2.

Таблица 1
50% антивирусной активности (мкг/мл)

Анализ Форма-зан Ингибирова-ние образо-вания сокле-тий
Клетки МТ-4 С8166
Вирус ВИЧ-1 RF ВИЧ-1 RF
(+)-энантиомер > 1 0,04
(-)-энантиомер 0,14 0,0018
Промежуточное соединение 1 0,065 0,013
АZT 0,0038

Таблица 2
50% ингибирования синтеза ВИЧ р24 (мкг/мл)

Клетки С8166
Вирус (ВИЧ-1) RF
(+)-энантиомер 0,1
(-)-энантиомер 0,0022
Промежуточное соединение 1 0,011
АZT 0,017

(ii) Цитоксичность
Цитоксичность соединения по Примеру 1 и рацемической смеси (Промежуточное со-единения 1) определяют в двух клеточных линиях CD4: Н9, и СЕМ.
Исследуемые соединения последовательно разбавляют от исходной концентрации 100 мкг/мл до 0,3 мкг/мл (окончательная концентрация) в 96 ячеек для микротитрования. В каж-дую ячейку помещают по 3,6 х 104 клеток, в том числе в контрольные ячейки, которые не содержат лекарство. Термостатируют в течение 5 дней при температуре 37 С и подсчиты-вают количество жизнеспособных клеток путем отделения суспензии клеток и подсчета ко-личества клеток, за исключением трипаносом, в гемоцитометре.
Полученные результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
50% цитоксичности (мкг/мл)

Соединение Клетки СЕМ Клетки Н9
(+)-энантиомер 217 334
(-)-энантиомер 148 296
Промежуточное соединение 1 173 232

ЕР 0382526 А, 1990.
S.L.Doong “Inhibition of the replications of hepatitis B virus in vitro by 2’,3’-dideoxy - 3’- thi-acidine and related analogs” p.27, 1990, Colambus, Ohio, US.
Ф.П.Тринус “Фармако-терапевтический справочник”, Киев “Здоровья”, 1989, с.262.