СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СОСТОЯНИЯ, ЗАВИСЯЩЕГО ОТ ЭСТРОГЕНОВ ЯИЧНИКОВ

Способ лечения состояния, зависящего от эстрогенов яичников, такого, как эндометриоз, лейомиомы матки, предменструальный синдром или дисфункциональное маточное кровотечение, предусматривающий введение аналога релизинггормона гонадотропина (ГнРГ) и введение антипрогестина, которые обеспечивают терапевтический способ для долгосрочного лечения без быстрого снижения плотности кости, наблюдающегося при применении только аналогов ГнРГ в отдельности.

эктопическое наличие желез и стромы эндометриального типа в местах, находя-щихся вне матки. Это эктопическое нали-чие эндометриальной ткани часто приво-дит к образованию кист, содержащих из-мененную кровь. Это состояние вызывает изнуряющие боли у миллионов женщин во всем мире и возникает, в частности, в связи с ежемесячной пролиферацией тка-ни эндометрия. Эндометриоз часто явля-ется пожизненным состоянием.
Эндометриоз можно лечить медика-ментозными средствами, однако ни одно из них не является достаточно эффектив-ным при долгосрочном лечении в течение шести месяцев и более. Возможно, ста-рейшей терапией, демонстрирующей ви-димый эффект, является введение проге-стина инъекцией, перорально или в соче-тании с оральными контрацептивами. Однако длительное введение прогести-нов, особенно андрогенных, связано с рядом нежелательных побочных эффектов и не получило официального разрешения в Соединенных Штатах.
Синтетический стероид на основе этистерона, а именно 17-d-прегна-2,4-диен-20-ино[2,3-d]-изоксазол-17-ол, из-вестный также, как даназол, и имеющийся в продаже под торговым наименованием Данокрин (Danocrine), проявил себя как эффективное лекарственное средство для лечения эндометриоза, создающее гипо-эстрогенную среду. К сожалению, это лекарственное средство имеет также множество андрогенных побочных эф-фектов. Помимо вазомоторных рас-стройств, вызванных ухудшением эстро-генного фона, оно вызывает прибавку веса, длительные судороги мышц, атро-фию молочных желез, горячие приливы, неустойчивое настроение, жирность ко-жи, депрессию, отеки, акне, утомляе-мость, гирсутизм, нарушения либидо, го-ловную боль, сыпь и понижение голоса.
Одним из наиболее эффективных способов лечения эндометриоза является введение агониста релизинг-гормона го-надотропина, который подавляет секре-цию гонадотропина гипофизом и, таким образом, индуцирует состояние обрати-мой псевдоменопаузы. Несмотря на то, что индивидуальные реакции варьируют, эндометриоз обычно быстро регрессирует всего лишь в течение трех месяцев от начала лечения. После прекращения лече-ния боли часто возвращаются и эндомет-риоз вновь появляется спустя несколько месяцев после возвращения нормальных менструальных циклов. Это лекарствен-ное средство может использоваться также для лечения фиброзных опухолей матки (лейомиоматозных). Главным недостат-ком этой терапии является ряд побочных эффектов, которые вызываются продол-жительным тяжелым гипоэстрогенизмом или состоянием псевдоменопаузы, кото-рые происходят вследствие тяжелой эст-рогенной недостаточности, а именно, го-рячих приливов, костных дефектов и ослабления сердечно-сосудистой защиты эстрогенами. В самом деле, целью гормо-нальной заместительной терапии является обеспечение организма эстрогеном и/или прогестином и, таким образом, предот-вращение потерь костной ткани. Несмот-ря на то, что индивидуальные реакции также варьируют, потери костной ткани обычно становятся измеримыми спустя приблизительно 3 месяца лечения и ста-новятся весьма значительными спустя 6 месяцев лечения у наиболее восприимчи-вых пациентов. Абсолютная неприемле-мость этого побочного эффекта с точки зрения степени риска становится очевид-ной благодаря тому обстоятельству, что коэффициент летальности составляет приблизительно 3,2 года после перене-сенных женщинами в постменопаузе пе-реломов бедренных костей вследствие остеопороза. Из-за этого побочного эф-фекта Комиссия по продовольствию и лекарственным веществам Соединенных Штатов запрещает любое применение аналогов релизинг-гормона гонадотропи-на после того, как он применялся в тече-ние шести месяцев. Другими словами, это лекарство не может повторно вводиться после перерыва, согласно требованиям этой Комиссии.
Лейомиомы и эндометриоз являются состояниями, зависящими от эстрогенов яичников. Отмечается, что эффективным при лечении эндометриоза и лейомиом матки лекарственным средством является антипрогестин (иногда его называют “ан-тагонистами прогестерона” или “антиге-стагенами”). Смотри, например, Chwalisz и др., Endocrinology, 129(1): 312, 1991; Kettel и др., Fertil. Steril., 56(3): 402, 1991; Murphy и др., J. Clin. Endocrinol. Metab., 76(2): 513, 1993. Смотри также Gravanir и др., J. Clin. Endocrinol. Metab., 60: 156, 1986 и Wolf и др., Fertil. Steril., 52: 1055, 1989.
Предменструальный синдром (ПМС) и дисфункциональное маточное кровоте-чение (ДМК) также являются состояния-ми, для которых общей является цикличе-ская гормональная потребность, которая проистекает из выработки эстрогенов яичниками.
Изучалось применение комбинации агониста релизинг-гормона гонадотропи-на (лейпролида) и прогестина (медокси-прогестерона ацетата) для лечения лейо-миомы матки. При сопутствующем лече-нии отмечают, что прогестин реверсирует эффективность агонист-индуцированного гипоэстрогенизма по уменьшению неми-оматозного объема, т.е. это лечение пре-пятствует благоприятным эффектам лече-ния агонистом. При использовании по схеме add-back, прогестин уменьшает го-рячие приливы и потерю кальция с мо-чой, однако наблюдается также умеренное увеличение общего объема матки, хотя и не до исходных величин. Смотри Case и др., J. Сlin. Endocrinol. Metab., 76: 1217, 1993.
В настоящее время установлено, что схема применения аналога релизинг-гормона гонадотропина в комбинации с антипрогестином действует таким обра-зом, что облегчает симптомы состояний, зависящих от эстрогенов яичников, таких, как эндометриоз, лейомиомы матки, ПМС и ДМК, а также смягчает эффекты потери костной ткани, которые происходят вследствие снижения эстрогенов, вы-званного введением аналога ГнРГ (рели-зинг-гормона гонадотропина). Соответ-ственно, целью настоящего изобретения является создание такой схемы. Эта и иные цели настоящего изобретения будут ясны специалисту из следующего по-дробного описания.
5 242 6

Краткое описание рисунков
Рис. 1 - график средних суточных уровней эстрадиола;
Рис. 2 - график брюшинного эндомет-риоза при различных схемах лечения;
Рис. 3 - график плотности минераль-ных веществ в кости в результате различ-ных схем лечения.

Настоящее изобретение в общих чер-тах касается лечения состояний, завися-щих от эстрогенов яичников, таких, как эндометриоз, гладкомышечные опухоли (например, лейомиомы матки), ПМС и/или ДМК. Конкретнее, оно относится к способу лечения состояния, зависящего от эстрогенов яичников, путем введения аналога релизинг-гормона гонадотропина в течение периода времени по меньшей мере около 30 дней, достаточного для снижения уровня циркулирующего в сы-воротке эстрогена до приблизительно 20 пг/мл или менее и после этого путем вве-дения антипролиферативного в отноше-нии эндометрия и сохраняющего веще-ство кости количества антипрогестина.

Женщину, страдающую состоянием, зависящим от эстрогенов яичников, та-ким, как эндометриоз, лейомиома матки, ПМС и/или ДМК, лечат согласно настоя-щему изобретению аналогом релизинг-гормона гонадотропина и антипрогести-ном. Неожиданно оказалось, что облегча-ются не только симптомы эндометриоза, ПМС, ДМК или миомы, но также и поте-ри костной ткани, связанные с эстроген-ной недостаточностью, нейтрализуются и в некоторых случаях фактически реверси-руются. В результате, толерантность к схеме лечения и продолжительности ле-чения может быть увеличена и представ-лена полезность введения антипрогестина свыше шести месяцев. Несмотря на то, что базальный уровень циркулирующего эстрогена выше во время введения анти-прогестина, чем во время терапии агони-стом ГнРГ, не было отмечено очевидного улучшения болезненного состояния, в то время как плотность кости сохранялась или повышалась. Не возводя это в ранг теории, полагают, что существуют раз-личные пороги эффекта эстрогенов, так, чтобы после первого снижения уровня эстрогенов возникает окно более высокой концентрации, при которой сниженный уровень циркулирующего эстрогена ока-зывает благоприятный терапевтический эффект и болезненное состояние улучша-ется, но эта же концентрация не индуци-рует быстрой потери костного вещества, в результате чего масса кости сохраняется на прежнем уровне или повышается.
Релизинг-гормон гонадотропина представляет собой малый полипептид, который вырабатывается гипоталамусом и иногда называется гонадотропным ре-лизинг-гормоном, релизинг-гормоном лютеинизирующего гормона, ГнРГ или ЛГРГ. Любой аналог, будь это антагонист или агонист, этого полипептида, может использоваться в настоящем изобретении.
Примеры антагониста релизинг-гормона гонадотропина могут быть найдены в патентах США 4 409 208, 4 547 370, 4 565 804, 4 569 927 и 4 619 914, 5 198 533 и WO 89/01 944, описания которых включены в настоящий документ в каче-стве ссылок. Примеры таких антагони-стов включают Антид (Antide, декапеп-тид, представленный формулой D-Ac-D-2-Nal1-DpClPhe2-D-3-Pal3-Ser4-NiLys5-D-NicLys6-Leu7-ILys8-Pro9-D-Ala10), [Ac-D4ClDPhe1, D4ClDPhe2, DTrр3, DArg6, DАlа10] ГнРГ, [Ас-4ClDPhe2, D3Pal3, Arg5, D2Nal6, DАlа10] ГнРГ, [Ас-D2-Nal1, 4ClDPhe2, DTrp3, DArg6, DAla10] ГнРГ, [Ас-D2Nal1, 4FDPhe2, DTrp3, DArg6] ГнРГ, [Ас-D2Nal1, 4ClDPhe2, DTrp3, DhArg(Et2)6, DAla10] ГнРГ и [Ас-Nal1, DME4ClPhe2, DPal3, Ser4 Tyr5, DArg6, Leu7, ILys8, Pro9, DAla10] ГнРГ.
Примеры агонистов релизинг-гормона гонадотропина включают лейпролид, нафарелин, бузерелин, [DА1а6, desGly-NH210] ГнРГ, [DLys6] ГнРГ, [DА1а6] ГнРГ, [2-Ме-А1а6] ГнРГ, [D--аминобутироил6, des-GlyNH210] ГнРГ, трипорелин, лютрелин, гозерелин, гистрелин и т.п.
Аналоги релизинг-гормона гонадо-тропина, применяемые в настоящем изоб-ретении, можно вводить в форме фарма-цевтически приемлемых нетоксичных солей или комплексных соединений. Со-ли включают соли присоединения кислот, такие, как например, гидрохлорид, гид-робромид, сульфат, фосфат, нитрат, окса-лат, фумарат, глюконат, таннат, малеат, ацетат, бензоат, сукцинат, альгинат, ма-лат, аскорбат, тартрат и т.п. Комплексные соединения могут образовываться с ме-таллами, такими как, например, цинк, барий, кальций, магний, алюминий и т.п.
Аспект рeлизинг-гормона гонадотро-пина в настоящем изобретении такой же, как ранее известное применение таких аналогов для лечения эндометриоза и/или лейомиомы матки. Таким образом, можно применять не только любой известный аналог ГнРГ, но также и их дозировки и способ введения также могут применяться в практике настоящего изобретения. Та-ким образом, способ введения может быть любым обычным способом, при котором этот аналог активен, например, перораль-ным, внутривенным, подкожным, внут-римышечным, сублингвальным, чрескож-ным, ректальным, интраназальным или интравагинальным, Подобно этому, ле-карственная форма может представлять таблетку, драже, капсулу, пилюлю, назальный аэрозоль, аэрозоль, гранулу, имплантат (или иное депо) и т.д.
7 242 8
Количество аналога релизинг-гормона гонадотропина, которое вводят, должно быть достаточным для снижения уровня циркулирующих эстрогенов до приблизительно 20 пг/мл или ниже к концу периода времени около 1 - 6 меся-цев и является тем же, что практикуется в настоящее время. В общих чертах, коли-чество может варьировать приблизитель-но от 0.05 до 50 мг, предпочтительно приблизительно от 0.5 до 10.0 мг еже-дневно. Определение эффективной дозы является обычной процедурой в области фармакологии, принимающей во внима-ние различные физические параметры, такие, как вес, возраст и т.п., и наилуч-шим образом определяется лечащим вра-чом. Введение может быть периодиче-ским, например, раз в месяц, или продол-жительным, например, ежедневным. Еже-дневное введение предпочтительнее, по-скольку пациенты с большей вероятно-стью будут придерживаться схемы приема и не будут забывать или упускать из виду схему периодического введения. Приме-нение введения депонированных форм, таких, как коммерчески доступный под торговым знаком Lupron Depot лейпроли-да ацетат, также может быть удобным.
Антипрогестином для комбинирова-ния с агонистом или антагонистом ГнРГ может быть антагонист рецепторов про-гестерона или фармацевтически подхо-дящий агент, который противодействует нормальной биологической активности прогестерона.
Предпочтительным антипрогестином является антагонист рецепторов проге-стерона, как стероидный, так и нестеро-идный, который демонстрирует опреде-ленную способность уменьшать секрецию эстрогенов, но, более важно, блокирует эстрогенную стимуляцию тропных тка-ней, таких, как эндометриоз, как эктопи-ческий, так и маточный, или ткань лейо-миомы. Например, RU486 является осо-бенно подходящим в практике настояще-го изобретения.
Примерами антипрогестинов, кото-рые могут применяться в этом изобрете-нии, являются RU486 (“мифепристон”, Roussel Uclaf, Париж; патент США 4 386 085); и “онапристон” (Schering Ag, Бер-лин; патент США 4 780 461) и стероиды, описанные в следующих патентах и па-тентных заявках: патент США 4 609 651, осо бенно соединение лилопристон (11-(4-диметиламинофенил)-17-гидрокси-17-(3-гидрокси-проп-1 -( Z) -ензил-4,9-(10) эстрадиен-3-он); патентная заявка США серийный № 06/ 827 050, особенно соединения 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1-пропинил)-4,9-эстрадиен-3-он и l1-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(3-гидрокси-1(2)-пропенил)-4,9-эстрадиен-3-он; патентная заявка США серийный № 07/283 632; опубликованная Европейская патентная заявка ЕР-А 04 042 831; опубликованная РСТ заявка WO 91/14 704; и другие анти-прогестины, например, патент США 4 891 368.
Антипрогестин можно вводить лю-бым известным способом, который прак-тикуется в фармакологии. Например, подходящий антипрогестин можно поме-щать в формы для перорального, подкож-ного, внутримышечного, трансбуккально-го введения, в кожный пластырь для чрескожного всасывания, а также в инертный матрикс, который имплантиру-ется в организм или в депонированные формы или интравагинально в матрикс, который медленно высвобождает анти-прогестин (такой, как имплантат, описан-ный в патентах США №№ 4 957 119 и 5 088 505 и т.п.) .
Фармацевтические композиции, со-держащие антипрогестин и подходящий носитель, могут находиться в твердых дозирующих формах, которые включают таблетки, капсулы, крахмальные капсулы, гранулы, пилюли, порошки или шарики; дозирующие формы для местного нанесе-ния включают растворы, порошки, жид-кие эмульсии, жидкие суспензии, по-лутвердые формы, мази, пасты, кремы, гели или желе и пены; парентеральные дозирующие формы включают растворы, суспензии, эмульсии или сухой порошок, включающие эффективное количество антипрогестина согласно настоящему изобретению. Известно, что активный ингредиент, антипрогестин, может со-держаться в таких композициях вместе с фармацевтически приемлемыми разбави-телями, наполнителями, дезинтегрирую-щими агентами, связывающими агентами, смазывающими агентами, поверхностно-активными агентами, гидрофобными но-сителями, водорастворимыми носителя-ми, эмульгаторами, буферами, увлажни-телями, смачивающими агентами, солю-билизирующими агентами, консерванта-ми и другими средствами, улучшающими свойства лекарственной формы. Средствa и способы введения хорошо известны и специалист может обратиться для сведе-ния к фармакологическим руководствам. Например, можно проконсультироваться в следующих источниках: “Modern Pharmaceutics”, Banker and Rhodes, Marcel Dekker, Inc. 1979; “Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics”, 6-e издание, MacMillan Publishing Co., Нью-Йорк, 1980.
В некоторых случаях введение анало-га релизинг-гормона гонадотропина и антипрогестина может совпадать. В этом случае эти два компонента могут вво-диться совместно, с использованием од-ной и той же или разных дозированных форм или средств, например, одной таб-летки. Применение компонентов, компо-зиций и способов этого изобретения для медицинского и/или фармацевтического использования, которое описано в этом тексте, может осуществляться с помощью любого клинического, медицинского или фармацевтического способа или методи-ки, которые известны в настоящее время или будут известны в будущем.
Аналог релизинг-гормона гонадотро-пина вводят в течение периода времени по меньшей мере 30 дней, что достаточно для снижения уровня циркулирующего эстрогена в крови до приблизительно 20 пикограммов на мл или менее и, предпо-чтительно, для снижения уровня цирку-лирующего эстрогена по меньшей мере до приблизительно 10 пикограммов на мл или менее, имитируя, таким образом, уровни эстрогена в постменопаузе. В настоящее время введение аналога пре-кращают после приблизительно 6 меся-цев, хотя его возможно продлить, если сохраняющее кость количество антипро-гестина начинают вводить вовремя. Предпочтительной продолжительностью введения агониста ГнРГ в настоящее вре-мя является период времени приблизи-тельно три месяца.
9 242 10
Введение антипрогестина начинается, когда уровень циркулирующих эстроге-нов падает до 20 пг/мл или менее, и, предпочтительно, до приблизительно 10 пг/мл или менее. Период введения анти-прогестина может накладываться на пе-риод введения аналога релизинг-гормона гонадотропина или может начинаться по прекращении введения аналога ГнРГ или же может быть окно между интервалами введения, пока уровень циркулирующего эстрогена сохраняется не выше приблизи-тельно 20 пг/мл. Количество антипроге-стина таково, что оно ингибирует эстро-генную пролиферацию эндометрия, т.е. эффективное антипролиферативное коли-чество, но также и является эффективным сохраняющим костную ткань количе-ством. В этой связи, сохранение костной ткани означает, что масса кости (плот-ность) сохраняется или увеличивается. В случае антипрогестина RU486 это коли-чество обычно составляет приблизитель-но от 0.05 до 10.0 пг/кг и предпочтитель-но приблизительно от 0.5 до 5.0 пг/кг ежедневно. В случае других антипроге-стинов могут подходить другие милли-граммовые количества. Схемы, при кото-рых дозировка антипрогестина (и аналога ГнРГ) периодически изменяется, также находятся в пределах объема настоящего изобретения. Также, в то время как вво-дится эффективное антипролиферативное количество антипрогестина, может наблюдаться малое количество периоди-ческого кровотечения или отдельные кап-ли крови ежемесячно или ежегодно. Иными словами, состояние аменореи (от-сутствия менструальноподобных крово-течений), которое устанавливается при использовании настоящего изобретения, является существенным, но не обязатель-но тотальным, полным. Количество анти-прогестина, как и в случае аналога рели-зинг-гормона гонадотропина, которое должно вводиться, определяют с помо-щью стандартных способов, таких, как, например, определение кривых доза-ответ на приматах, у которых врожденный мен-струальный цикл яичников такой же, как у женщин, и экстраполяция этих данных на человека; экстраполяция результатов подходящих систем in vitro или определе-ние эффективности в клинических испы-таниях. При определении подходящих дозировок лечащий врач примет во вни-мание вес, возраст и прочие физические и медицинские параметры.
С целью дальнейшего иллюстрирова-ния настоящего изобретения далее приво-дятся специфические примеры. Следует, однако, понимать, что эти примеры слу-жат только целям иллюстрирования и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

П Р И М E Р 1
Для этого исследования выбрали в качестве агониста релизинг-гормона го-надотропина лейпролида ацетат, в каче-стве антипрогестина - RU486, которые вводили самкам обезьян Cynomolgus, ко-торые, как известно, являются весьма подходящими моделями для исследова-ния, касающегося человека.
Тридцать шесть взрослых самок обе-зьян Cynomolgus (Масаса facularis) с регу-лярными менструальными циклами по-мещали в отдельные клетки, с потребле-нием корма и воды вволю.
При использовании анестезии (кета-мин 20 мг/кг в/м, ксилазин, 1 мг/кг) на 3 день менструального цикла проводили диагностическую лапароскопию для ис-ключения спаечной болезни тазовой по-лости или наличия эндометриоза. Обезья-ны с выраженными спайками в тазовой полости из исследования исключались. На 8 - 14 дни менструального цикла брали кровь посредством венепункции (кетамин 10 мг/кг в/м) и исследовали сыворотку на эстрадиол-17 с помощью радиоиммуно-анализа. Лапаротомию выполняли (кета-мин 20 мг/кг, ксилазин 1 мг/кг) на 3 - 5 день после ясно определявшегося предо-вуляторного пика эстрадиола. Выполняли 2 см фундальную гистеротомию и при-близительно 100 мг эндометрия удаляли путем выскабливания и измельчали в сте-рильном физиологическом растворе. Раз-рез на матке ушивали 4-0 викриловым швом. Размельченную эндометриальную ткань инъецировали субперитонеально в пять участков, а именно, в левую и пра-вую пузырноматочные складки, левую и правую широкие связки и в слепой ме-шок.
В течение последующего менструаль-ного цикла выполняли лапаротомию на 3 - 5 день после выброса эстрадиола в сере-дине цикла. Отмечали наличие эктопиче-ской эндометриальной ткани и обширные спайки; перитонеальные имплантаты тщательно измеряли. Все поражения фо-тографировали и слепым способом отби-рали некоторое количество для дальней-шего гистологического определения ста-дии эндометриоза независимым исследо-вателем. Из типичных поражений брали биопсию и ткань фиксировали в 10% формалине для гистологического иссле-дования после окрашивания гематокси-лином и эозином.
Приматов разделяли поровну на че-тыре экспериментальные группы (N = 8). Группа 1 ежемесячно получала инъекции агониста релизинг-гормона гонадотропи-на в количестве 80 мкг/кг в/м на 21 день менструального цикла второго лапарото-мического цикла. С 28-дневными интер-валами было сделано 3 такие инъекции, после чего начали еженедельные инъек-ции антипрогестина RU486 (5 мг/кг в/м в масле, первоначально, затем 2 мг/кг в не-делю). Введение RU486 продолжали в течение 24 недель.
11 242 12
Группа 2 получала еженедельные инъекции только RU486 (5 мг/кг перво-начально, затем 2 мг/кг в неделю), начи-ная с 1 дня менструального цикла после подтверждения диагноза эндометриоза. Введение продолжали в течение 36 недель. Группа 3 получала только аналог ГнРГ в течение 36 недель. Группа 4 слу-жила контролем и получала носитель, 0.5 мл физиологического раствора в/м ежене-дельно в течение 36 недель.
После начала ежедневных инъекций выполняли лапаротомию для определения стадии процесса каждые 12 недель до конца лечения для оценки прогрессиро-вания или регрессирования заболевания.
При анестезии кетамином брали кровь через день в каждой группе в тече-ние 28 дней после начала лечения, вслед за подтверждением диагноза активного эндометриоза. Сыворотку замораживали для последующего анализа. После этого кровь брали еженедельно. Взятие крови продолжали до возобновления спонтан-ных менструаций или через два месяца после завершения инъекций, в зависимо-сти от того, что происходило в первую очередь. Сыворотку замораживали, надписывали и хранили для последующе-го радиоиммунного анализа. Эстрадиол и прогестерон определяли с помощью ра-диоиммунного анализа (ICN Biomedical, Лос-Анжелес, США).
Вагинальный эпителий брали во вре-мя каждого хирургического вмешатель-ства с помощью биопсийных щипцов Ке-воркяна с латеральной стенки верхних двух третей влагалища.
Обезьян обследовали ежедневно во время утреннего обхода. Отмечали изме-нения поведения. Осматривали кожу на наличие сыпи или воспалительных изме-нений в месте инъекции. Промежность осматривали на наличие менструации. Вес тела определяли ежемесячно и отме-чали изменения аппетита.
Одновременно с каждым взятием крови брали мочу на анализ. Первый об-разец брали во время первой лапарото-мии, второй образец - во время первой инъекции, а последующие образцы брали каждые четыре недели, начиная со време-ни взятия второго образца мочи. Для определения плотности минерального вещества кости в поясничном отделе по-звоночника использовали двойную рент-геновскую абсорбциометрию (DXA, Norland).
Животным проводили анестезию ке-тамином и удерживали, чтобы свести к минимуму связанные с движением арте-факты. DXA выполняли перед началом курса инъекций и с трехмесячными ин-тервалами после завершения исследова-ния.
Во время каждой лапаротомии вы-полняли малую повторную гистеротомию с целью взятия эндометрия для гистоло-гического исследования.
Было замечено, что как антипроге-стин, так и аналог ГнРГ по отдельности приводили к подавлению овуляции. Была только одна документально зафиксиро-ванная овуляция за 24 месяца (прогесте-рон > 3 нг/мл) в каждой из групп, полу-чавших лечение, против 18 очевидных овуляций за 24 месяца в контрольной 4 группе (только носитель). Средние тони-ческие уровни эстрадиола в сыворотке различались по группам, как показано на рис.1. Группа, получавшая аналог ГнРГ, была подавлена гораздо более однородно (24.2 ± 17 пг/мл) по сравнению с контро-лем, где уровни эстрогенов варьировали достаточно широко (40.6 ± 43 пг/мл), как и ожидалось. Интересно, что группа, по-лучавшая RU486, имела более высокий средний уровень эстрадиола в крови, чем каждая из остальных групп (57. 8 ± 34. 6, Kruskall-Wallis, р < 0.05).
Площадь эктопического эндометрия, наблюдавшаяся на перитонеальных по-верхностях, показана на рис.2. Площади поражения до начала лечения для всех групп были одинаковы (ANOVA, р>0.1). Площадь поражения после лечения значи-тельно отличалась от площади до начала лечения у групп 1, 2 и 3 и от площади после лечения в группе 4 и контроле (Wilcoхоn, р<0.05). Это наблюдение пока-зывает, что как аналог ГнРГ, так и анти-прогестин, имели отчетливое ограничи-вающее влияние на размеры эндометри-альных имплантатов. В группе 1, в кото-рой животным начинали терапию RU486 через три месяца после окончания курса терапии аналогом ГнРГ, средняя площадь перитонеальных поражений оставалась без изменений.

Результаты определения плотности кости с помощью двойной рентгеновской абсорбциометрии:

группа перед
лечением
(сред-нее±СО) после 3
месяцев после 6
месяцев
ана-лог/анти-проге-стин 0.481±0.046 0.481±0.056 0.049±0,046
антипро-гестин 0,501±0.029 0.541±0,033* отсут-ств.
кон-троль 0.441±0.028 0.446±0,047 отсут-ств.
*парный t-критерий, р = 0.08 по сравне-нию с плотностью перед лечением

После трех месяцев только ГнРГ или носителя в качестве контроля плотность кости не изменилась. Это ожидалось, по-скольку статистически потеря костной ткани в популяции не становится очевид-ной до 3 - 6 месяцев. У трех животных в группе 1 наблюдалась убыль костной тка-ни после 3 месяцев лечения аналогом ГнРГ, в то время как у остальных она оставалась неизменной или повышалась. Примером животного с быстрой потерей костной ткани является обезьяна 2190; относящиеся к этому случаю данные по-казаны на рис.3. Очевидна значительная степень потери костной ткани после трех месяцев лечения аналогом ГнРГ. Лечение антипрогестином препятствовало этой потере, и наблюдалось повышение плот-ности кости на пределе значимости (пар-ный t-критерий, р = 0.08) после 3 месяцев лечения антипрогестином.
13 242 14
Ежедневная оценка самочувствия об-наружила незначительные изменения по-ведения животных, воспалительные из-менения кожи и изменения пищевых привычек. При определении веса тела с интервалами в месяц ни в одной из групп не наблюдалось значимых изменений.
Гистологическая оценка эндометри-ального и вагинального эпителия при окраске гематоксилином и эозином пред-ставлено в табл.2.

Таблица 2


груп-па
э н д о м е т р и и ваги-нальный
эпителий
менструаль-ная
фаза тол-щина и кера-тин
толь-ко
ана-лог неактивная ранняя про-лифератив-ная тон-кий тонкий
ана-лог/
анти-про-ге-стин фаза интер-вала,
статическая уме-ренно
тон-кий умеренно
толстый
кон-троль циклическая уме-ренно тол-стый,
вариа-
бель-ный цикличе-ский

Эндометрий под действием аналога ГнРГ был равномерно тонким и слабо пролиферативным. Эндометрий под дей-ствием антипрогестина был тоньше, чем у контрольных обезьян, но постоянно пре-бывал в фазе интервала, как на 17 день типичного нормального менструального цикла. У контрольных приматов был циклический эндометрий, толще во все биопсийные дни, чем в любой из осталь-ных групп. Толщина вагинального эпите-лия, кератинового слоя и до основания выростов сетчатого слоя была больше в группе антипрогестина, чем в группах аналога ГнРГ. В группе контроля данные различались, но кератиновый слой был толще, чем после лечения аналогом ГнРГ.
Эктопические эндометриозные пора-жения, такие, как эндометрий in situ, пре-терпевали постепенную регрессию в те-чение трех месяцев терапии, причем из-менения эндометрия наступали гораздо быстрее при лечении аналогом релизинг-гормона гонадотропина, чем при лечении только антипрогестином. Вышеприве-денные результаты показывают, что ан-типрогестин был способен поддерживать сократившуюся поверхность перитоне-ального эндометриоза после прекращения лечения аналогом. Эндометриоз у кон-трольных животных спонтанно не улуч-шался и, на самом деле, эндометриозные поражения прогрессивно ухудшались в течение трех месяцев.
У трех приматов, участвовавших в эксперименте, происходила быстрая по-теря минерального вещества кости после наступления медикаментозно индуциро-ванного гипоэстрогенизма посредством лечения аналогом ГнРГ. Было показано, что плотность кости возвращалась к ис-ходной после трех месяцев введения ан-типрогестина. В целом, у приматов, ле-ченных антипрогестином, наступало по-вышение на пределе статистической зна-чимости плотности кости по сравнению с исходной. Вагинальная атрофия, пробле-ма при лечении аналогами релизинг-гормона гонадотропина, не отмечалась. Толщина вагинального эпителия и кера-тинового слоя была больше в группе ан-типрогестина, состояние, которое обычно обеспечивает более легкое осуществление полового акта, уменьшает недержание мочи и снижает дизурию. В добавление к этим преимуществам в отношении кости и вагинального эпителия, эндометрий остается умеренно тонким по сравнению с контрольными нелеченными обезьянами с сохранным циклом, и это относят на счет антипролиферативного действия ан-типрогестина.
Схема, описанная в примере 1, была повторена с различными комбинациями агентов.

Примеры 2 - 1 0 сведены в таблице 3

Таблица 3

при-мер аналог антипрогестин
1 2 3
2 нафаре-лин онапристон
3 бузере-лин лилопристон
4 антид 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-17-(1-пропинил)-4,9-эстрадиен-3-он
5 гозере-лин 11-(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-l7-(3-гидрокси-1(2)-пропенил)-4,9-эстрадиен-3-он
6 гистре-лин мифепристон
7 лютре-лин онапристон
8 тристо-релин лилопристон
9 Nal-Gly мифепристон
10 азалин В мифепристон

В настоящем изобретении могут быть сделаны различные изменения и модифи-кации без отступления от его идеи и объ-ема. Различные варианты осуществления настоящего изобретения, описанные и проиллюстрированные в настоящем до-кументе, предназначаются для того, чтобы служить образцом, а не ограничивать настоящее изобретение.

1. Патент США, 5063204 (Nordisk Gentofte A/S), 05.11.91, кл. A 61 K 38/08.
2. Патент США, 5043321 (Center for Innactive Tech-nology), 27.08.91, кл. A 61 K 38/00.
3. WO 88/05308 (Commonwelth Scien-tific and Industrial Res. Organization), 28.07.88, кл. A 61 K 39/385.