СПОСОБ ОБРАБОТКИ МАТЕРИАЛА ИЗ ДРОЖЖЕВЫХ КЛЕТОК

Изобретение касается обработки дрожжевых отходов. Согласно изобретению, дрожжевые отходы, имеющие содержание твердых веществ не более 20 вес.%, переваривают с использованием пище-вой щелочной соли, такой как гидрокарбонат натрия, целые клетки отделяются от экстрагирован-ных выжимок, чтобы получить вещество, богатое поврежденными клеточными оболочками, ко-торые затем обрабатываются щелочным экстрагирующим агентом и отбеливаются либо до, либо после отделения с последующим понижением рН указанного отбеленного вещества с помощью пищевой кислоты, такой как, например, разбавленная соляная кислота. Продукт содержит дрож-жевой бета-глюкан, в котором, по существу, отсутствуют дрожжевые клетки и который преиму-щественно содержит множество остатков дрожжевых клеток, включающих, в основном неразру-шенные оболочки дрожжевых клеток. Остатки дрожжевых клеток содержат значительно меньшее количество содержимого дрожжевых клеток по сравнению с целыми клетками дрожжевых отхо-дов. 5 ил.

Изобретение касается обработки дрожжевых отходов. Согласно изобретению, дрожжевые отходы, имеющие содержание твердых веществ не более 20 вес.%, переваривают с использованием пище-вой щелочной соли, такой как гидрокарбонат натрия, целые клетки отделяются от экстрагирован-ных выжимок, чтобы получить вещество, богатое поврежденными клеточными оболочками, ко-торые затем обрабатываются щелочным экстрагирующим агентом и отбеливаются либо до, либо после отделения с последующим понижением рН указанного отбеленного вещества с помощью пищевой кислоты, такой как, например, разбавленная соляная кислота. Продукт содержит дрож-жевой бета-глюкан, в котором, по существу, отсутствуют дрожжевые клетки и который преиму-щественно содержит множество остатков дрожжевых клеток, включающих, в основном неразру-шенные оболочки дрожжевых клеток. Остатки дрожжевых клеток содержат значительно меньшее количество содержимого дрожжевых клеток по сравнению с целыми клетками дрожжевых отхо-дов. 5 ил.
Дрожжевые бета-глюканы, конечно, хорошо известны, например, патент США 4810646 описывает способ производства дрожжевых бета-глюканов, согласно которому выделяют расту-щую дрожжевую закваску Saccharomyces cerevisiae из ее питательной среды, подвергают интакт-ные целые дрожжевые клетки щелочному настаиванию для того, чтобы растворить протеиновую часть клетки, и подвергают нерастворенный глюкан действию ацетиловой кислоты, чтобы изме-нить бета (1-6) связи. Получающиеся полностью глюкановые частицы описаны в патенте США 4962094 как пригодные для использования в качестве диетических добавок, и указано, что они в значительной степени сохраняют in vivo трехмерную молекулярную структуру глюкана дрожже-вых клеток, из которого они образованы. Оболочки клетки эффективно разрушаются при этом способе; согласно изобретению, напротив, получаемые дрожжевые оболочки производят из дрожжевых отходов без разрушения структуры клеточной стенки.
Поэтому, согласно одному из аспектов изобретения, оно обеспечивает способ обработки дрожжеых отходов, имеющих содержание сухого вещества, не превышающее 20 вес. %, при этом способ предусматривает:
а) экстрагирование указанных отходов с помощью щелочной соли;
б) выделение целых клеток из экстрагированных отходов так, чтобы остался материал, бога-тый раскрытыми, но в других отношениях интактными оболочками клеток;
в) обработка последнего материала с помощью щелочного экстрагирующего агента;
г) отбеливание указанного материала отбеливающим агентом или пищевым окисляю-щим/востанавливающим агентом (например, аскорбиновой кислотой) либо до, либо после ука-занного сепарирующего этапа; и
д) понижение рН указанного отбеленного материала с помощью пищевой кислоты (напри-мер, лимонную кислоту, ортофосфорную кислоту, разбавленную соляную кислоту или разбав-ленную серную кислоту).
Типичные пищевые щелочные соли, используемые на этапе (а), включают гидрокарбонат натрия, кальция или калия, или карбонат натрия, кальция и калия; гидрокарбонат натрия является наиболее предпочтительным. Дрожжевые отходы обычно имеют содержание сухого вещества примерно от 2 до 12 вес. %, например, от 4 до 8 вес. % (обычно около 5 вес. %), и вязкость в пре-делах 5-15 сантипуаз (5%-ная водная суспензия). Отходы обычно экстрагируют на этапе (а) спо-соба согласно изобретению с применением щелочной соли, обычно при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Щелочная соль (которая, как указано выше, является предпочтительно гидрокарбонатом натрия) предпочтительно используют в количестве до 2,5 вес.% (предпочти-тельно около 1%) от общего объема дрожжевых отходов (жидких и твердых) и предпочтительно так, чтобы получающаяся экстрагированная смесь имела рН в пределах от 8 до 12, наиболее пред-почтительно от 8 до 9.
Отделение целых клеток из экстрагированных отходов для получения материала, богатого поврежденными клеточными оболочками, обычно осуществляют механическими способами, предпочтительно посредством центрифугирования. Центрифуга обычно работает со скоростью примерно 5000 оборотов в минуту при дифференциальном центрифугировании или примерно 2500 об/мин. при статическом центрифугировании. Было обнаружено, что использование гидро-карбоната на стадии (а) способствует этому отделению (возможно вследствие выделения газа, который служит для облегчения оболочек дрожжевых клеток).
После отделения материал подвергают обработке щелочным экстрагированием экстрагиру-ющим агентом, таким как гидроксид калия, гидроксид натрия или гидроксид кальция. Эта обра-ботка щелочным экстрагирующим агентом (которая аналогична процессу, известному как мерсе-ризация) обычно включает обработку в щелочном растворе, имеющем рН от 8 до 14, предпочти-тельно около 12-12,5. Обработка способствует удалению окрашенных продуктов реакции, раство-ренных нежелательных веществ, таких как протеин, вскрывает структуру клеточных оболочек и облегчает этап отбеливания. Затем смесь нагревают предпочтительно до температуры от 65 до 85 0С по меньшей мере в течение часа. Для того, чтобы конечный продукт имел бледно-кремовый цвет, предпочтительно использовать щелочь, включающую гидроксид калия или натрия; однако для того, чтобы конечный продукт имел белый цвет, предпочтительно использовать щелочь, включающую гидроксид кальция.
На стадии отбеливания предпочтительно используют перекись водорода или окислительно-восстановительный агент (такой, как аскорбиновая кислота), в случае, если продукт имеет пище-вое назначение; отбеливание предпочтительно осуществляют таким образом, чтобы отбеленный материал был бледно-кремового или белого цвета, благоприятного, если получаемый продукт предназначен для использования в качестве пищевого вещества, такого как функциональная мез-га. Стадию отбеливания предпочтительно осуществляют в реакторе, и количество материала, бо-гатого поврежденными клеточными оболочками, вводимого в реактор, предпочтительно контро-лируют таким образом, чтобы материал занимал не более, чем примерно половину объема реакто-ра. Это вызвано тем, что стадия отбеливания обычно включает вспенивание, которое вызывает значительное увеличение объема обрабатываемого материала. Предпочтительно, вспенивание контролируется использованием пеногасящей лопасти и может быть существенно уменьшено, благодаря добавлению противопенного агента. Если конечный продукт предназначен для исполь-зования в качестве пищевого сгустителя, отбеливаемый материал предпочтительно должен кон-тактировать с фосфатным/нитратным буферным веществом, имеющим рН примерно от 5 до 6 и обрабатываться дрожжелитическим ферментом, таким как Новозим 234 (который имеет боковую активность бета-глюканазы) в течение примерно 6 часов в диапазоне температур примерно от 55 до 750С. Условия реакции выбирают, как описано выше, таким образом, чтобы повысить актив-ность эндо-бета-глюканазы и существенно подавить активность экзо-бета-глюканазы Новозима 234. Чем выше степень обработки с применением эндо-бета-глюканазы, тем хуже липомиметиче-ские свойства и лучше гуммирующие свойства продукта. Затем обработанный ферментом мате-риал нагревают обычно до температуры примерно от 70 до 900С по меньшей мере в течение 30 минут, центрифугируют, ресуспендируют и предпочтительно подвергают дальнейшему центри-фугированию до высыхания.
При желании отбеливаемый материал может быть подвергнут обработке пищевой кислотой (обычно соляной или ортофосфорной), центрифугирован и обработан лецитином (при условии, что конечный продукт не предполагается использовать в качестве загустителя). До сушки матери-ал может быть центрифугирован. Обработка отбеливаемого материала лецитином полезна ввиду того, что лецитин помогает скрыть остаточный привкус или запах, свойственный дрожжевым отходам.
Снижение рН при помощи пищевой кислоты может быть осуществлено промывкой цен-трифугируемого материала или может быть осуществлено впоследствии. Обычно рН понижают от 5 до 6 или на одной стадии, или первоначально понижают примерно от 6 до 7,5 (например, до 7,0), а на более поздней стадии - примерно от 5 до 6.
Кроме того. Настоящее изобретение обеспечивает продукт, включающий дрожжевой бета-глюкан, и в котором, по существу, отсутствуют
целые дрожжевые клетки, а преимущественно имеются в большом количестве оболочки дрожже-вых клеток, по существу, представляющих собой неразрушенные стенки дрожжевых клеток, при этом указанные оболочки дрожжевых клеток имеют значительно меньшее количество содержи-мого дрожжевых клеток, чем в целых клетках указанных дрожжевых отходов.
Обычно, единичные оболочки дрожжевых клеток имеют максимальный размер от 5 до 20 микрон, и при этом имеют, по существу, те же форму и величину, что и исходные клетки. Полу-чающийся продукт, кроме того, отличается своей стабильностью по сравнению с исходными дрожжевыми отходами (которые быстро разлагаются). Такая повышенная стабильность является преимуществом в случае, если вещество предназначено для пищевых продуктов. Поэтому насто-ящее изобретение, кроме того, включает устойчивый при хранении пищевой продукт, который представляет собой бледно-кремовый или белый дрожжевой бета-глюкан, который по существу не содержит целых дрожжевых клеток; продукт, который представляет собой физиологически функциональную мезгу, может быть вязким, полутвердым или может быть высушенным ( обычно посредством сублимационной или распылительной сушки) до порошкообразного состояния. Пищевым продуктом является, в предпочтительном варианте изобретения, липомиметик, и в та-ком виде он может быть использован как заменитель жира в отдельности или вместе с другими пищевыми ингредиентами. В некоторых вариантах настоящего изобретения пищевой продукт может быть далее обработан для получения вещества типа смолы или загустителя, которое обыч-но имеет вязкость порядка по меньшей мере 300 сантипуаз (5%-ная водная суспензия).
В некоторых вариантах продукт особенно подходит для использования в качестве биологи-чески приемлемого носителя. В частности, оболочки дрожжевых клеток могут использоваться как носитель, позволяющий введение лекарственных веществ (таких как фармацевтические или фар-макологические препараты или подкормки) больному животному.
Продукт, получаемый методом согласно настоящему изобретению, может быть использован с другими целями, отличными от пищевых, и в этом случае он может быть далее очищен посред-ством, например, экстракции растворителем, использующим ацетон или т. п. Продукт может быть также подвергнут дальнейшему отбеливанию с использованием гидроксида или отбеливающего агента, такого как гидрохлорид, с помощью которого можно получить белый продукт. Получае-мый продукт может быть использован в составах для ухода за кожей, как косметических, так и фармакологических. Настоящее изобретение также включает далее композицию для местного применения, которая включает дрожжевой бета-глюкан, по существу, не имеющий целых дрож-жевых клеток, возможно вместе с одним или более приемлемыми в данном случае ингредиентами (такими как витамины, духи, аминокислоты, медикаменты и т.п.).
Далее будет описан предпочтительный вариант выполнения настоящего изобретения со ссылками на сопровождающие чертежи, на которых:
фиг.1- технологическая схема начальных стадий традиционного способа производства дрожжевого экстракта, на которых получают дрожжевые отходы (исходный материал в способе согласно изобретению);
фиг.2 - еще одна технологическая схема, показывающая пример осуществления способа по изобретению;
фиг.3 - микроснимок продукта, согласно настоящему изобретению, сделанный с помощью конфокального микроскопа;
фиг.4 - сравнительный микроснимок бета-глюкана, сделанный с помощью конфокального микроскопа;
фиг.5 - микроснимок, изображающий продукт согласно изобретению, а также целые части-цы бета-глюкана, сделанный с помощью конфокального микроскопа.
Как показано на фиг.1, пивные дрожжи А можно лишить горечи В и можно смешать с дру-гими дрожжами С, D прежде, чем они будут поданы на стадию лизиса для разрушшения клеточ-ных мембран. Стадия лизиса может быть в показанном на рисунке варианте автолизом Е (тща-тельной термической обработкой для того, чтобы убить клетки без инактивирования осмотиче-ского равновесия между содержимым клеток и их окружением путем использования растворен-ного вещества, такого как натрий хлорид, снаружи стенок клеток), или гидролизом С, (использу-ющим обычно кислоту, такую как соляная кислота). Лизированный продукт затем сепарируют обычно в центробежном сепараторе Н. Фракция J, содержащая тела клеток, которые являются дрожжевыми отжимками, и составляет исходный материал для способа согласно изобретению; оставшийся материал К проходит дальнейшую обработку до получения дрожжевого экстракта по обычной технологии. Дрожжевые отходы обычно имеют вязкость в пределах примерно от 5 до 15 спз (5%-ная водная суспензия).
Как показано на фиг.2, дрожжевые отходы J (обычно имеющие содержание твердого веще-ства примерно 5 вес. %), полученные в результате экстрагирующего процесса Х, обрабатывают гидрокарбонатом натрия (обычно в количестве примерно 1 вес. %, исходя из объема выжимок, так что смесь имеет рН от 8,0 до 9). Далее смесь перемешивают на стадии перемешивания L, обычно в течениие часа при комнатной температуре и сепарируют на стадии М, обычно включа-ющей щелочную обработку и экстрагирование (мерсеризацию) с использованием щелочного экс-трагирующего агента, такого как гидроксид калия. На стадии сепарирования образуются два по-тока: разорванные клеточные оболочки N и недеградированные клетки Р. Разорванные клеточные оболочки N затем обрабатывают отбеливающим агентом или пищевым окисляющим или восста-навливающим агентом на стадии отбеливания Q. Предпочтительно, отбеливающим агентом явля-ется перекись водорода или пищевой окислительно-восстановительный агент, такой как аскорби-новая кислота (хотя для некоторых (непищевых) целей отбеливающим агентом может быть гипо-хлорит или ему подобные вещества).
Отбеливающая стадия Q предпочтительно включает контролируемое вспенивание с исполь-зованием пеногасящей лопасти. Вспенивание может занимать остающиеся 60% реакционного объема, но может быть снижено с помощью противопенного агента. Отбеленный материал далее обрабатывают с помощью фосфатного/цитратного буфера, и рН смеси устанавливается приблизи-тельно на уровне 5,5. Отбеленные клеточные оболочки затем нагревают примерно до 650С и об-рабатывают дрожжелитическим ферментом (обычно Ново-234 бета-глюканазой) в течение при-мерно 6 часов. Затем обработанный ферментом материал помещают в реакционный сосуд и кос-венно нагревают с использованием водяной бани или водяной рубашки до температуры пример-но 800С по меньшей мере в течение 30 минут. Затем материал еще раз центрифугируется, ресус-пендируется и затем окончательно центрифугируется на стадии R. Получающаяся композиция является пищевым функциональным мезговым веществом S, которое можно использовать в том виде, как оно есть, или высушенным (обычно посредством распылительной или сублимационной сушки) для получения порошка. Полученное сухое вещество может быть восстановлено с помо-щью воды в материал, имеющий, по существу, те же свойства, которыми он обладал до высуши-вания.
Согласно второму варианту выполнения настоящего изобретения, стадия сепарирования М включает центрифугирование в центробежном сепараторе (обычно при 2500 об/мин в течение 10 минут для статического центрифугирования или 5000 об/мин для дифференцированного центри-фугирования), при котором смесь промывают водой. Центрифугируемый материал разделяется в результате на два потока: клеточные оболочки N и недеградированные клетки Р. Клеточные обо-лочки N ресуспендируют в разбавленном растворе щелочного агента, например 0,5-5 вес./об.% гидроксида натрия или калия (для получения продукта кремового цвета), или гидроксида кальция (для получения белого продукта) и затем корректируют 40% гидроксидом натрия или калия так, чтобы рН клеточных оболочек N был в пределах от 12 до 12,5. Клеточные оболочки N затем кос-венно нагревают (как описано выше) по меньшей мере до 700С в течение примерно 1 часа, прежде чем будут поданы на стадию отбеливания Q, где материал перемешивают в течение примерно 1 часа и опять нагревают по меньшей мере до 700С и одновременно обрабатывают отбеливателем. Отбеливателем предпочтительно является перекись водорода или пищевой окислительно-восстановительный агент (хотя для некоторых непищевых целей отбеливателем может быть ги-похлорид или ему подобное вещество). Затем в отбеленное вещество добавляется концентриро-ванная соляная кислота так, чтобы получить практически нейтральный уровень рН, и далее веще-ство центрифугируется на стадии R. Стадия R далее включает ресуспендирование отбеленного материала в суспендированной среде, состоящей из воды и лецитина, дальнейшее центрифугиро-вание и дальнейшее понижение рН примерно до 5,0. Получающаяся композиция представляет собой пищевое функциональное мезговое вещество S, которое может быть использовано в том виде, как оно есть, или высушенным (обычно посредством распылительной или сублимационной сушки), в виде порошка. Полученное высушенное вещество может быть восстановлено при по-мощи воды в материал, имеющий, по существу, те же свойства, которыми он обладал до высуши-вания.
Недеградированные клетки переваривают с помощью дрожжелитического фермента (например, Ново-234 бета-глюканазы) на стадии Т (обычно эту обработку проводят при темпера-туре около 300С в течение 30 минут). Обработанный ферментом материал затем передают на ста-дию центрифугирования U, в результате чего плучают преимущественно жидкую фазу, которую подают на стадию экстрагирования Х, и преимущественно твердую фазу, которую смешивают с остатками дрожжевых отходов J.
На фиг.3 дрожжевой бета-глюкан, показанный на микроснимке, по существу не содержит целых дрожжевых клеток и преимущественно представляет собой множество оболочек дрожже-вых клеток. Оболочки дрожжевых клеток являются дрожжевыми клеточными стенками, которые остались по существу неразрушенными и содержат существенно меньшее количество клеточного вещества, чем первоначально присутствовало в целых клетках дрожжевых отходов.
Фиг.4, которая приведена только для сравнения, показывает частицы бета-глюкана, полу-ченные способом согласно патенту США 4810646. Частицы глюкана включают целые агрегиро-ванные частицы бета-глюкана. Очевидно, что показанные частицы глюкана отличаются от обо-лочек дрожжевых клеток, показанных на фиг.3.
На фиг.5 показаны оболочки дрожжевых клеток бета-глюкана согласно настоящему изобре-тению и (внизу микроснимка, в центре) агрегированные целые частицы бета-глюкана, получен-ные способом согласно патенту США 4810646. Как показано на фиг.5, оболочки дрожжевых кле-ток бета-глюкана значительно больше, чем отдельные агрегированные частицы бета-глюкана.
Далее настоящее изобретение будет проиллюстрировано следующими примерами
Пример 1
Пивные дрожжи подвергают автолизу для разрыва клеточных мембран. Лизированный ма-териал затем отделяют посредством центрифугирования, с получением дрожжевых отходов; эта фракция содержит тела клеток и имеет вязкость 10 спз (5%-ная водная суспензия).
Затем дрожжевые отходы обрабатывают гидрокарбонатом натрия для того, чтобы получить экстрагированную смесь, имеющую рН 8,5. Затем смесь перемешивают в течение примерно 1 часа при комнатной температуре и центрифугируют для дальнейшего разделения. Центрифугирован-ный материал разделяется в результате на два потока, а именно: на материал, богатый клеточны-ми оболочками, и на неразрушенные клетки. Материал, богатый клеточными оболочками ресус-пендируют в 2,5 %-ном гидроксиде натрия для того, чтобы довести рН материала до 12,5. Затем материал, богатый клеточными оболочками, косвенно нагревают в водяной бане примерно до 650С в течение 1 часа, и отбеливают перекисью водорода в течение примерно 1 часа при переме-шивании. Затем в отбеленный материал добавляют концентрированную соляную кислоту для того, чтобы получить рН 7,0; далее вещество центрифугируют и рН снижают до 5,0.
Полученный продукт (продукт А), по существу, не имеет целых дрожжевых клеток и пре-имущественно включает оболочки дрожжевых клеток, по существу, неразрушенные. Оболочки дрожжевых клеток, имеют меньшее количество содержимого дрожжевых клеток по сравнению с целыми клетками отходов и пригодны для использования в косметических составах (как показано на примере 3), в очищающих реагентах (как показано на примере 4), в пищевых композициях (как показано на примере 5), или могут использоваться как среда-носитель для пестицидов (как пока-зано на примере 6).
Пример 2
Следующий состав с целью местного применения пригоден для изготовления косметиче-ского крема:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %
Продукт А 10
Борная кислота 10
Глицерин 14
Отжатое миндальное
масло 5
Гликонин 5
Лавандовое масло 0,05
К указанной смеси может быть добавлена дистиллированная вода в необходимом количе-стве.
Пример 3
Следующий состав для местного применения пригоден в качестве фармацевтической ком-позиции:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %
Продукт А 10
Феноксиэтанол (эмульгирущая основа) 1
Ацетат гидрокорзона 0,1-2,5
Хлорокрезол ( в эмульгирующей основе) 0,1
При необходимости в эмульгирущую основу (в данном случае -феноксиэтанол), которая обычно содержит незначительные количества (1-2 долей на 1000000) метил-Н-гидробензоата, мо-жет быть добавлена дистиллированная вода.
Пример 4
Следующий состав для местного применения пригоден в качестве средства бытовой дезин-фекции:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %
Кислый гудрон с высокой температурой
кипения (интервал кипения 2200С-325°С) 40
Продукт А 5-8
50%-ное сульфонированное
касторовое масло 0-4
К уазанной смеси может быть добавлена дистиллированная вода в необходимом количестве.
Пример 5
Следующий состав пригоден для использования в качестве пищевого продукта; в этом слу-чае продукт (А) по изобретению присутствует как носитель привкуса:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %
Продукт А 98,45
Сырное масло 1
Соль 0,5
Лецитин 0,05
Лецитин включен в состав, чтобы способствовать заглушению остаточного привкуса или запаха, свойственного дрожжевым отходам.
К указанной смеси может быть добавлена питьевая вода в необходимом количестве.
Пример 6
Следующий состав пригоден для использования в качестве среды-носителя, обеспечиваю-щей медленное выделение пестицидов:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %

Продукт А 2-4
Лецитин 0,1
Пиретрин 0,
Пиперонил бутоксид 1,0
К указанной смеси может быть добавлена вода в необходимом количестве.
Составы, описанные в примерах 2-6, имеют вязкость в пределах от 30 до 50 спз (5%-ный водный раствор).
Пример 7
Следующий состав пригоден для использования в приготовлении обезжиренной приправы.:
Компоненты Процент концентрации
(вес./об.) %
Вода 76,4
Яичный желток 4,9
НРС* 4,9
Сахароза 3,2
Уксус
(12%-ная уксусная
кислота 3,1
Соль 1,5
Сухая горчица 0,1
Сорбат калия 0,1
Ксантановая смола 0,1
Продукт А 6,0

* НРС представляет собой модифицированный крахмал, полученный из кукурузы восковой спелости.
Все сухие ингредиенты смешивают в выпарном аппарате, добавляют воду и уксус, а затем смесь нагревают до 900С и выдерживают при такой температуре в течение 30 секунд.
Затем смесь охлаждают до 200С, а выпарной аппарат и содержимое заново взвешивают. По-терю веса при испарении компенсируют добавлением воды.
Яичный желток добавляют постепенно в крахмальную пасту во время перемешивания с по-мощью миксера с высоким усилием сдвига. Смешивание продолжают в течение 3 минут после того, как были добавлены последнее масло и яйцо.
Получается весьма приятная заправка, которая хорошо сохраняется в стерильных банках при температуре 40С.
Аналогичный состав создают с использованием 32,5%-ного масла и 49,9%-ной воды вместо воды и продукта А. Получают аналогичный продукт, показывающий, что обезжиренный состав, согласно настоящему изобретению, является вполне приемлемой заправкой.

GB, патент, 4810646, кл. С12Р 19/04,1989