ПРОИЗВОДНЫЕ 2-АМИНО-7-(CHR2R3) - 3H,5H-ПИРРОЛО[3,2-D]-ПИРИМИДИН-4-ОНА, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ СЕЛЕКТИВНОГО ИНГИБИРОВАНИЯ ПРО-ЛИФЕРАЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО И НЕ ОКАЗЫВАЮЩИЙ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА B-ЛИМФОЦИТЫ

Предложены производные 2-амино-7-(СНR2R3) - 3Н,5Н-пирроло[3,2-d]-пиримидин-4-она формулы



где R1 - Н, NH2; R2, - насыщенный пятичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетеро-атомов S или О, или шестичленный N-содержащий гетероцикл, которые могут быть заме-щены; R3 - H, СН2СN, CH2CO2H, CH2CONH2, CO2CH3, CO2H или CH2CH2OH, или R2, и R3 вместе с СH образуют циклогексил- или циклогексенильную группу, которые являются ин-гибиторами пуриннуклеозидфосфорилазы. Предложены также способы их получения и спо-соб селективного ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов млекопитающего и не ока-зывающий воздействия на В-лимфоциты. 4 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.

Известно, что пуриннуклеозидфосфорилаза (PNP) катализирует фосфоролиз пурин-нуклеозидов в обратимой реакции. У индивидуумов, лишенных PNP, проявляется ослаб-ленное развитие Т-лимфоцитов, приводящее к пониженному межклеточному иммунитету, и нормальное развитие базофильного инсулоцита, приводящее к нормальному гуморальному иммунитету. Соответственное специфические ингибиторы PNP, которые селективно инги-бируют развитие Т-лимфоцитов без нарушения гуморального иммунитета, могут быть по-тенциально эффективны против болезней, в которых активиро¬ванные Т-лимфоциты явля-ются патогенными.
В журнале Science, v.214 (1981) описаны 8-аминогуанозины, обладающие селективным действием на Т - клетки, без воздействия на В-клетки.
Новые производные пирролопиримидинонов, в основе которых лежит бициклическая гетероциклическая система, неожиданно проявили свойство селективно ослаблять функции Т-лимфоцитов млекопитающего без ослабления влияния на гуморальный иммунитет, и бла-годаря этим найденным и исследован¬ным свойствам могут найти применение для лечения тяжелых заболеваний, таких как аутоиммунных нарушений, отторжение трансплантирован-ных органов, а также в терапии онкологических заболеваний.
Согласно изобретению предлагаются производные 2-амино-7-(СНR3)-ЗН,5Н-пирроло- [3,2-d] пиримидина-4-она формулы I:



где R1 означает H или NH2;
R2 означает насыщенный пятичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероато-ма серу или кислород, или шестичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома N, и которые могут быть необязательно замещены (С1-С4)алкокси, трифторметилом или га-логеном; (С6-С10)циклоалкил, незамещенный или галоидзамещенный фенил, R3 означает Н (СH2)n CN, (CH2)nCOOH, CO2CH3, (CH)n, CHNH2, (CH2)nCO2CH3, (CH2)n OH, n=1-4, R2 и R3 вместе с СH - группой, к которой они присоединены, образуют цикле - гексил или цикло-гексенильную группу. Предпочтительны соединения, в которых R2 и R3 вместе с СH - груп-пой, к которой они присоединены, образуют циклогексил или циклогексенил.
Предпочтительны соединения, где R1 - NH2 группа, и соединения, где R2 и R3 вместе с прилегающей СН-группой образуют циклогексильное или циклогексенильное кольцо, либо R2 - фенил, соединения, где R3 -CH2CN, СН2СООН, CH2CONH2, либо соединения, где R2 - возможно замещенные С1-С4-алкокси, галогеном, трифторметилом, 3-пиперидинил, 2-тетрагидрофуранил, 2-тетрагидротиенил, 3-, 4-пиридинил, циклопентил, циклогексил, цик-логептил, 2-адамантил, либо фенил, 3-хлорфенил, 2,3,5-трихлорфенил.
Среди предпочтительных соединений можно назвать 2-амино-7(СН2R]-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (I'), где R - 2- или 3-тетрагидротиенил, 2-, 3- или 4-пиперидинил, 2- или 3-тетрагидрофуранил, 2-, 3- или 4- тетрагидрофуранил. В частности, можно назвать соединения, предлагаемые согласно изобретению, выбранные из группы: 2-амино-7-(2-пиперидинилметил) -3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-oн (IВ), 2-амино-7-(3-пиперидинилметил)-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (I'С), 2-амино-7-(4-пиперидинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (I'D), 2-амино-7-(2-тетрагидрофуранилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-oн (I'Е), 2-амино-7-(3-тетрагидрофуранилметил)-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (I'F), 2-амино-7-(2-тетрагидротиенилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d)пиримидин-4-он (I'G), 2-амино-7-(3-тетрагидротиенилметил)-3H,5H- пирроло [3,2-d]пиримидин-4-он (I'Н).
В указанных соединениях гетероциклический радикал R в положении 7 может быть замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы: галоген, (С1-С4)алкокси, трифторметил.
В качестве галогена предпочтительным является хлор или фтор. В качестве алкокси предпочтительными являются низший алкокси, метокси, этокси, пропокси и бутокси.
Среди соединений, охватываемых изобретением, можно назвать 2-амино-7-(CH2R)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-оны (II), в которой R-пиридинил, в частности, соеди-нения II, выбранные из группы, 2-амино-7-(3- пиридинилметил)-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IIA), 2-амино-7-(2-пиридинилметил)-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IIB), или 2-амино-7-(4-пиридинилметил)-3Н,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IIC), в которых пиридинил может иметь один или два заместителя, выбранных из груп¬пы, содер-жащей галоген, (С1-С4) алкокси или трифторметил. В качестве галогена предпочтительны хлор или фтор. В качестве алкокси предпочтительны метокси, этокси, пропокси и бутокси.
Другой группой предпочтительных соединений являются (III) 2-амино-7-(R)-3H,5Н-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - 1-, 2- или 3- циклогексенил или циклогек-сил. Среди них можно назвать соединения III, выбранные из группы: 2-амино-7-(1-циклогексенил) 3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-он (IIIА), 2-амино-7-(2-циклогексенил)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-oн (IIIВ), 2-амино-7-(3-циклогексенил)-3H,5H-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-oн (IIIС) или 2-амино-7-(циклогексил)-3H,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IIID).
Согласно изобретению предлагаются также 2-амино-7-(СН2R)-3H,5H- пирроло [3,2-d] пиримидин-4-oны (IV), в которых R - однокольцевые циклопарафины, как, например, цик-лопентил, циклогексил и циклогептил; многокольцевые циклопарафины, как, например, 1- и 2-адамантил, 1- норборнанил, 2-экзо-норборнанил, 2-эндо-норборнанил, 1- и 2-бицикло [2,2,2] октанил, 1-, 2-, 3-, 6- и 8-бицикло[3,2,1]октанил, и 1-, 2- и 3-бицикло [3,3,1] нонанил, и циклоолефины, как, например, 1- и 2-норборненил. Примерами этой группы веществ (VI) являются 2-амино-7-(2-адамантилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-oн (IVA), 2-амино-7-(1-адамантилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVB), 2-амино-7-(циклопентилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVC), 2-амино-7-(циклогексилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVD), 2- амино-7-(циклогептилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IVE), 2-амино-7-(1-норборнанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IVF), 2-амино-7-(2-экзо-норборнанилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-oн (IVG), 2-амино-7-(2-эндо-норборнанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IVH), 2-амино-7-(1-норборненилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IVI), 2-амино-7-(2-норборненилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-oн (IVJ), 2-амино-7-(1-бицикло[2,2,2]октанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVK), 2-амино-7-(1-бицикло[3,2,1] октанилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-он (IVL) и 2-амино-7-(1-бицикло [3,3,1] нонанилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-он (IVM), и 2-амино-7-(1-норадамантилметил)-3H,5H- пирроло [3,2-d]пиримидин-4-он (IVN).
Среди соединений, полученных согласно изобретению, можно назвать группу произ-водных 2-амино-7-(СНR2,R3)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидина-4-она формулы (1), где R1, R2 имеют значения указанные выше, а R3 является группой, выбранной из Н, CH2CN, СН2СО2Н, CH2CONH2, CO2CH3, CH2CH2OH, CH2CO2CH3.
Другим объектом изобретения является способ селективного ингибирования пролифе-рации Т-лимфоцитов млекопитающего и не оказываю¬щий воздействия на В-лимфоциты, заключающийся в том, что млекопитающему вводят вышеуказанные соединения формулы (I) в эффективном количестве, при этом указанное соединение ингибирует пуриннуклео-зидфосфорилазу и тем самым образование Т-лимфоцитов.
Возможно также введение млекопитающим эффективного количества соединения формулы (I), не оказывающего ослабляющего действия на гуморальный иммунитет и оказы-вающего селективное ослабляющее действие на Т-лимфоциты, с фармацевтически перено-симым разбавителем.
Особенностью предлагаемого способа селективного ослабления функции Т-лимфоцитов млекопитающего без ослабления влияния на гуморальный иммунитет, является то, что введение млекопитающему вещества формулы (I), ингибирует пуриннуклеозидфос-форилазу и тем самым образование Т-лимфоцитов.
Для энтерального, такого как пер оральное или ректальное, трансдермальное или па-рентеральное, введения млекопитающим, включая человека, которые пригодны для ингиби-рования активности пуриннуклеозидфосфорилазы и для лечения болезней, восприимчивых к ней, возможно введение эффективного количества фармакологически активного вещества настоящего изобретения, одного или в комбинации с одним или более фармацевтически переносимыми носителями.
Предпочтительной используемой формой композиций являются таблетки и желатино-вые капсулы, включающие активный ингредиент вместе с а) разба¬вителями, например, лак-тозой, глюкозой, сахарозой, маннитом, сорбитом, целлюлозой и/или глицином; б) смазыва-ющими веществами, например, двуоксидом кремния, тальком, стеариновой кислотой, ее магниевой или кальциевой солью и/или полиэтиленгликолем, для таблеток также с в) свя-зующими веществами, например, магнийалюмосиликатом, крахмальной пастой, желатином, трагакантом, метилцеллюлозой, натрий карбоксиметилцеллюлозой и/или поливинилпирро-лидоном, при желании, г) дезинтегрантами, например, крахмалами, агар-агаром, альгиновой кислотой или ее натриевой солью, или шипучими смесями; и/или д) абсорбентами, красите-лями, корригентами и подслащивателями. Вспрыскиваемые композиции являются предпо-чтительно водными изотоническими растворами или суспензиями, и суппозитории пре-имущественно приготавливают из жировых эмульсий или суспензий. Указанные компози-ции могут быть стерилизованными и/или содержать адъюванты, как, например, предохра-няющие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, растворенные про-моторы, соли для регулирования осмотического давления и/или буферные растворы. Кроме того, они могут также содержать другие терапевтически ценные вещества. Указанные ком-позиции приготавливают в соответствии со стандартными способами перемешивания, гра-нулирования или покрытия, соответственно, и они содержат обычно около 0,1-75%, предпо-чтительно около 1-50%, активного ингредиента.
Для трансдермального применения используют эффективное количество вещества изобретения с носителем. Полезные носители включают абсорбируемые фармакологически приемлемые растворители для того, чтобы помочь проходить через кожу в организм. Суще-ственным является то, что трансдермальные аппараты могут иметь форму бандажа, включа-ющего под¬держивающую деталь, резервуар, содержащий предпочтительное вещество с но-сителями, перегородку для доставки вещества к коже организма с контролируемой и пред-варительно определенной скоростью в течение продолжительного периода временим и средства для прикрепления аппарата к коже.
Предлагаемый способ селективного ингибирования активности пуриннуклеозидфос-форилазы может быть использован при лечении болезней и сред, восприимчивых к ним, например, при аутоиммунных нарушениях, отторжениях при трансплантации, псориаза.
Способ также пригоден для ингибирования фосфоролиза и метаболического расщеп-ления противовирусных или противоопухолевых пуриннуклеозидов у млекопитающих пу-тем введения соединения формулы (I) самостоятельно или с одним или более фармацевтиче-ски переносимыми носителями. В частности, это относится к способу ингибирования фос-форолиза и метаболического расщепления известных пуриннуклеозидов, например, 2'-дезоксигуанозина, 2',3'-дидезоксиинозина, 2,'3'-дидезоксигуанозина или 2',3'-дидезоксиаденозина.
Таким образом, изобретение относится также к способу ингибирования фосфоролиза или метаболического расщепления противовирус¬ного или противоопухолевого эффекта 2'- или 3'-монодезоксипуриннуклеозидов или 2',3'-дидезоксипуриннуклеозидов у млекопитаю-щих, который включает введение млекопитающим при необходимости, или отдельно, или в комбинации с указанным нуклеозидом эффективного количества вещества настоящего изобретения, ингибирующего пуриннуклеозидфосфорилазу, предпочтительно в комбинации с одним или более фармацевтически переносимыми носителями. Более конкретно, это отно-сится к способу активации или усиления влияния 2',3'-дидезоксипуриннуклеозидов, извест-ных в технике, например, 2',3'- дидезоксиинозина, 2', 3'-дидезоксигуанозина или 2',3'-дидезоксиаденозина для лечения ретровирусных инфекций, например, ВИЧ-ретровирусных инфекций (приобретенный иммунодефицитный синдром, AIDS). 2',3'-Дидезоксипуриннук- леозиды известны в качестве ингибиторов ВИЧ-ретровирусной инфекции и метаболически расщепляются посредством PNP, например, как описано в Biochemical Pharmacology, 22, 3797 (1987). Они вводятся в фармацевтически переносимой дозе, которая эффективна в ин-гибировании ВИЧ-ретровирусных инфекций. Предпочтительно используется самая низкая возможная эффективная доза.
Фармацевтически переносимая эффективная дозировка активного вещества настояще-го изобретения, которую вводят, зависит от вида теплокровных животных (млекопитаю-щих), веса тела, возраста, индивидуального состояния и от формы введения.
Фармацевтическая композиция может быть пероральной, парентеральной, суппозито-рием или другой формой, которая доставляет вещество в ток крови млекопитающего, кото-рое необходимо вылечить. Пероральная форма имеет от около 1 до около 150 мг активного вещества для взрослого человека (50-70 кг), которое смешивается вместе с фармацевтически переносимыми разбавителями, например, лактозой. В обычной капсуле 25 мг вещества сме-шивают вместе с 192 мг лактозы, 80 мг модифицированного крахмала и 3 мг стеарата маг-ния. Возможно также использование форм, пригодных для вспрыскивания.
Использование соединений настоящего изобретения также возможно с другими тера-певтическими средствами. Ежедневная дозировка для человека весом 50-70 кг - 1-50 мг/кг ингибирует метаболическое разрушение опреде¬ленных противораковых средств, например, бета-2'-дезокси-6-тиогуаназина и противовирусных средств, например, 2',3'-дидезоксиинозина, анти-AIDS средства. Эти типы медикаментов, как известно, неустойчи-вы и разрушаются, теряя свою эффективность. Вещества настоящего изобретения способны уменьшить такую неустойчивость, что увеличивает эффективность других химиотерапевти-ческих средств.
Объектом изобретения являются также способы получения производных 2-амино-7-(CHR2,R3)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-онов общей формулы



где R1 означает Н, NH2, R2 и R3 означают незамещенный или галоидзамещенный фенил или циклогексил, R2 означает CH2CN.
Один способ предназначен для получения соединений указанной формулы, где R1 означает NH2, а другой для соединений указанной формулы, где R1 означает Н.
Способ получения производных 2-aмино-7-(CHR2R3)-3Н,5Н-пирроло-[3,2-d]-пиримидин-4-она (способ А) формулы (I')


где R1 - NH2, R2 - фенил, незамещенный или замещенный галоидом, или циклогексил, R3 - CH2CN, заключается в том, что осуществляют следующие последовательные стадии:
а) реакцию соответствующего R2-замещенного альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3 (R2) -замещенного пентандинитрила;
б) реакцию полученного 3(R2)-пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии основания, с получением 3(R2)-2-фор- милпентандинитрила;
в) который взаимодействует с гидрохлоридом метилового эфира глицина в присут-ствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R2)-2,4- дициано)-2-бутенил] глицина;
г) полученный при этом N-[(3(R2)-2,4-дициано)-2-бутенил] глицин взаимодействует с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5- диазабицикло (4,3,0)-нон-5-еном или 1,8-диазабицикло [5,4,0] ундек-7-еном с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1-этил-1Н-пирроло-1,2- дикарбоксилата;
д) получаемый метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1-этил-1Н-пирроло-1,2-дикарбоксилат обрабатывают основанием с получением метил-3-амино-4- (2-циано-1(R2) -этил)-1Н-пирроло-2-карбоксилата;
е) последний подвергают взаимодействию с бензоилизотиоцианатом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-Циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н- пиррол-3-ил] тиомочевины;
ж) полученную N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил] тиомочевину алкилируют галоидным алкилом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]-S-метилтиомочевины;
з) затем N-бензоил-N'-[4-(2-цианo-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н- пиррол-3-ил]-S-метилтиомочевины обрабатывают метанольным или этанольным раствором аммиака с по-лучением смеси 3(R2)-3-[2-амино-4-оксо-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил] пропаннит-рила и 3(R2)-3-[2-метилмеркапто-4-оксо-3Н,5Н-пирроло [3,2-d] пиримидин-7-ил] про-паннитрила.
Предпочтительно этот способ использовать для соединений I', где R2 - фенил.
Способ получения производных 7(CHR2R3)-3Н,5Н-пирроло-[3,2-d] пиримидин-4-она формулы I" (способ В)

где R1 - Н,
R2 - фенил, незамещенный или замещенный галоидом, или циклогексил;
R3 - CH2CN, заключается в том, что осуществляют следующие последовательные ста-дии:
а) реакцию соответствующего циклического альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3(R2)-замещенного пентандинитрила;
б) реакцию полученного 3(R2)-пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии основания с получением 3(R2)-формилпентандинитрила;
в) последний подвергают взаимодействию с гидрохлоридом метилового эфира глици-на в присутствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R2)-2,4-дициано) -2-бутенил] глицина;
г) полученный метил-N-[(3(R2)-2,4-дициано)-2-бутенил] глицин подвергают взаимо-действию с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5-диазабицикло [4,3,0] нон-5-ена или 1,8-диазабицикло [5,4,0] ундек-7-ена с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1- этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата;
д) метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилат обраба-тывают основанием с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1Н-пирроло-2-карбоксилата;
е) затем метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1Н-пирроло-2-карбоксилат подвергают взаимодействию с диметилацеталем диметилформамида с получением метил-4-(2-циано-1(R2)-этил)-3-[N-(диметиламино- метилен)амино] -1Н -пирроло-2-карбоксилата; и
ж) метил-4-(2-циано-l(R2)-этил-3-[N-(диметиламинометилен)амино]-1Н-пирроло-2-карбоксилат обрабатывают метанольным раствором аммиака с получением 3(R2)-3-[4-оксо-3Н,5Н-пирроло-[3,2-d] пиримидин-7-ил]-пропаннитрила. Более подробно способ для полу-чения соединений формулы


где R1 - аминогруппа (способ А) проводится следующим образом:
Первая стадия способа включает реагирование соответствующего R2 замещенного циклического альдегида с циануксусной кислотой при молярном отношении около 1:1 до 1:5 в присутствии ацетата аммония при температуре около температуры кипения с обрат-ным холодильником в течение около 10 часов до 8 дней с получением 3R2-замещенного пентандинитрила в качестве промежуточного соединения. Во второй стадии 3(R2) замещен-ный пентандинитрил реагирует с алкиловым эфиром муравьиной кислоты, например, эти-ловым эфиром муравьиной кислоты, в присутствии сильного основания, например, металл-содержащего основания, гидрида натрия или алкоксида натрия, в частности, метоксида натрия, при молярном отношении около 1-2:3-6:1-3 и при температуре около 20-65С в тече-ние около 10 часов до 8 дней, с получением 3(R2)-2-формилпентандинитрила. Следующая стадия включает взаимодействие 3(R2)-2-формилпентандинитрила с гидрохлоридом метило-вого эфира глицина и в присутствии ацетата натрия или аммония при молярном отношении около 1-2:1,5-4:1,5-4 и при температуре около 20-60С в течение около 10-48 часов с получе-нием метил-N-[(3(R2)-2,4-дициано)-2-бутенил] глицина в качестве промежуточного соеди-нения. В последующей стадии метил-N-[(3(R2-2,4-дициано)-2-бутенил] глицин реагирует с алкиловым эфиром хлормуравьиной кислоты, например, этиловым эфиром хлормуравьиной кислоты, в присутствии 1,5-диазабицикло-[4,3,0]-нон-5-еном (DBN) или 1,8-диазабицикло-[5,4,0]ундек-7-еном (DBU) при молярном соотношении около 1-2:1,5-5:1,5-4 и при темпера-туре около 0-50°С в течение около 10 часов до 10 дней с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата в качестве промежуточного соеди-нения. Следующая стадия включает взаимодействие метил-3-амино-4-(2-циана-1(R2)-этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата с основанием, например, карбонатом натрия, при мо-лярном соотношении около 2:1 до 1:5 и при температуре около комнатной в течение около 10-48 часов с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата в качестве промежуточного соединения. В следующей стадии метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат реагирует с бензоилизотиоцианатом при молярном соотно-шении около 2:1 до 1:2 и при температуре около комнатной в течение около от 30 минут до 3 часов с получением N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]тиомочевины в качестве промежуточного соединения.
Следующую стадию взаимодействия N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]тиомочевины с галоидным алкилом, например, йодистым метилом, проводят при молярном отношении около 1:1 до 1:6 и при температуре около 0-30С в течение от приблизительно 10 минут до 10 часов с получением N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R2)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]-5-метилтиомочевины в качестве промежуточного соединения. В следующей стадии N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R2)-этил-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]-5-метилтиомочевину (около 1-2 моль) обрабатывают ме-танольным или этанольным раствором аммиака при молярном соотношении около 1:1 до 1:20 и при температуре около 20-130°С в течение около 16-60 часов с получением смеси 2-аминосоединения изобретения 3(R2)-3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d) пиримидин-7-ил) пропаннитрила и 3(R2)-3-(2-метилмеркапто-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил) пропаннитрила, которое может быть использовано в качестве промежуточного соедине-ния для получения другого вещества настоящего изобретения.
В другом способе получения соединений, где R1-водород (способ В) метил-3-амино-4-(2-циано-1(R2)-этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат, полученный выше в способе А, обрабаты-вают диметилацеталем диметилформамида при молярном соотношении около 1:1 до 1:4 и при температуре около 25-100С в течение около 1-10 дней с получением метил-4-(2-циано-1(R2)этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино]-1Н-пирроло-2-кар6оксилата в качестве про-межуточного соединения. Следующая стадия включает обработку метил 4-(2-циана-1(R2)этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино]-1Н-пирроло-2-карбоксилата метанольным или этанольным раствором аммиака при молярном соотношении около 1:1 до 1:20 и при температуре около 20-130°С в течение около 10-68 часов с получением соединения настоя-щего изобретения 3(R2)-3-(4-оксо-3H,5H-пирроло [3,2-d) пиримидин-7-ил)-пропаннитрила.
Итак, для получения соединений формулы (I) используют 3-замещенные пропионит-рилы в качестве исходных веществ. Такие исходные вещества могут быть получены с по-мощью целого ряда способов, которые хорошо известны в литературе. Соединение формулы (I) получается затем из указанного исходного вещества с использованием ряда известных реакций, описанных M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem., 44, 3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett., 21, 1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett., 22, 25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem., 48, 780 (1983).
Для получения группы соединений формулы (II), где R - пиридинил, используют 3-(пиридинил)пропионитрил в качестве исходного вещества. Соответствующий 3-(пиридинил)пропионитрил может быть получен путем превращения соответствующего 3-(пиридинил)пропионилхлорида в соответствующий амид реакцией амминолиза, например, обработкой аммония, который затем дегидратируется в желаемый нитрил при дистилляции с дегидратирующим агентом, например, РОСl3 или SOCl2. Либо исходное вещество получа-ют конденсацией 3-альдегида с цианоуксусной кислотой, с последующим декарбоксилиро-ванием с получением соответствующего замещенного акрилонитрила, который гидрируют для получения соответствующего 3-(пиридинил) пропионитрила или каталитически, или при растворении металлического магния в метаноле при 0°С, как, например, описано в Profitt, J. et al., J. Org. Chem. 40., 127 (1975). Далее вещества (a) получают из указанного ве-щества по методике, описанной M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem., 44, 3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett., 21, 1013 (1980) M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett., 22, 25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem., 48, 780 (1983).
Возможно использование в качестве исходного вещества циклогексенилацетонитрила для получения соединений группы (III) в результате взаимодействия этого исходного веще-ства с использованием методики, описанной M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem., 44, 3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett., 21, 1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett. 22, 25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem., 48, 780 (1983). Каталитическое гидрирование одного из (III, IIIB) или (IIIC) дает ве-щество (IIID).
Способ получения группы соединений (IV) изобретения использует соответствующие 3-замещенные пропионитрилы в качестве исходных веществ. Такие исходные вещества мо-гут быть получены посредством ряда способов, которые хорошо известны в литературе. Ве-щество (IV) затем получают из этого исходного вещества посредством использования мето-дик, описанных M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem., 44, 3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett., 21, 1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett., 22, 25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem., 48, 780 (1983).
Как очевидно для специалистов в данной области техники, варианты вышеупомяну-тых способов являются полезными при получении ряда веществ настоящего изобретения без отклонения от существа изобретения. Для реакций, включающих некоторые промежуточные соединения, требующие защиты атомов азота или кислорода в промежуточных соединениях, используют известные способы.
Чтобы более полно описать изобретение ниже приводятся следующие примеры, не ограничивающие область его применения. В примерах все части и проценты даны в масс.%, за исключением особо оговоренных случаев. Пропорции смесей растворителей, использо-ванных в качестве хроматографических растворителей для элюирования, даны по объему.
Испытания (как это следует из материалов заявки) проводились на млекопитающих. В частности, в примерах, приведенных в описании, опыты проводились на крысах линии Lewis, которым делалось внутрибрюшинное введение полученных по настоящему изобрете-нию веществ в виде инъекционных растворов с указанием дозировок, частоты инъекций и сравнительных опытов с контрольными группами животных. Результаты оговорены там же (примеры 22, 22, 53, 65, 70, 81, 89 и др.), а также в приведенной таблице 1.
Пример 1. Способ получения 3-(3-пиридинил) пропионитрила. В трех горлую колбу, снабженную магнитной мешалкой, термометром, капельной воронкой и обратным холо-дильником, вводят аргон через холодильник. Свежеизмельченный гидроксид калия (6,6 г, 0,1 моля) и безводный ацетонитрил (150 мл) загружают в колбу и нагревают до кипения с обратным холодильником, добавляют 3-пиридинкарбоксальдегида (10,7 г, 0,1 моля) в без-водном ацетонитриле (50 мл) добавляют по каплям в течение периода около 5 минут и ки-пячение с обратным холодильником продолжают в течение следующих приблизительно 3 минут. Полученную горячую реакционную смесь выливают в смесь лед/вода (100 г) и полу-ченный раствор экстрагируют с СH2Cl2 (3 х 100 мл), высушивают с Na2SO2 и выпаривают, получая сырой 3-(3-пиридинил) акрилонитрил, который очищают посредством колоночной хроматографии над силикагелем, используя СНС1з в качестве растворителя для элюирова-ния; выход 3,3 г (25,6%).
В атмосфере аргона, перемешиваемый раствор акрилонитрила (2,662 г, 0,02 моль) в 99%-ном этаноле (100 мл) обрабатывают каплей 4%-нoго водного гидроксида натрия, затем боргидридом натрия (0,378 г, 0,01 моль). Дополнительно боргидрид натрия (0,378 г) добав-ляют еще дважды с 4-часовыми интервалами. Смесь перемешивают при комнатной темпера-туре в течение ночи, разбавляют водой, экстрагируют с EtOAc и высушивают Na2SO4. Рас-творитель удаляют при пониженном давлении и полученный сырой продукт хроматографи-руют через колонку с силикагелем, используя хлороформ: метанол (40:1) в качестве раство-рителя для элюирования, получая 2,2 г (84,6%) продукта в виде бесцветного масла.
3-(3-Пиридинил) пропионитрил, полученный в примере 1, используют далее для син-теза соединений настоящего изобретения.
Пример 2. В атмосфере сухого N2 смесь 3-(3-пиридинил)пропионитрила (0,661 г, 5,0 ммоль), гидрида натрия (0,240 г, 10,0 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (1,11 г, 15,0 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) перемешивают в течение 48 часов с за-щитой от воздуха и влаги. Летучее вещество выпаривают и раствор твердого остатка в 15 мл холодной воды доводят при 0С до рН 6 с помощью холодной 6N НСI. Полученную масля-нистую смесь экстрагируют СНСI3 и экстракт промывают водой, высушивают, используя Na2SO4, и выпаривают, получая темное масло, которое является смесью 2-формил-3-(3-пиридинил)пропионитрила и нитрила исходного вещества. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.
Пример 3. Гидрохлорид метилового эфира глицина (0,942 г, 7,5 ммоль) и безводный ацетат натрия (0,615 г, 7,5 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного производного (0,89 г) в МеОН/Н2О (4:1, 50 мл). Спустя 24 часа МеОН выпаривают в вакууме, и смесь воды и масла экстрагируют с СHCI3. Слой СНСI3 высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое направляют в колонну с силикагелем. Элюирование с СHCl3 дает два основных слоя: (1) 3-(3-пиридинил)пропионитрил (использованный в качестве исходно-го вещества в предыдущей стадии) и (2) желаемый енамин.
Пример 4. В атмосфере азота этиловый эфир хлоруксусной кислоты (0,521 г, 4,8 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 3 (0,513 г, 3,2 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4,3,0]нон-5-ена (DEN, 1,37 г, 11,1 ммоль) в сухом СH2Cl2 (15 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0°С в течение одного часа раствор оставляют при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции с по-мощью ТСХ добавляют дополнительное количество ClCO2Et (0,1 мл) и DBN (1,0 г) для за-вершения реакции, и раствор выдерживают в течение 24 часов. Летучее вещество выпари-вают в вакууме и вязкий остаток очищают в короткой колонке с силикагелем (главная цель которой - удаление менее подвижного DBN), получая N-защищенный пиррол, который ис-пользуют для следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 5. К раствору N-защищенного пиррола примера 4 (0,635 г, 2,0 ммоль) в МеОН (50 мл) добавляют твердый Na2CO3 (0,212 г, 2,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 часов с выделением полученного деблокированно-го пиррола. Смесь упаривают досуха и остаток тщательно растирают в порошок с Н2О (25 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с СНСlз (3 х 100 мл). Экстракт высушивают (Na2SO4) и выпаривают до получения вязкой смолы, которая кристаллизуется при высушивании в вакууме для использования в качестве промежуточного вещества без дальнейшей очистки. Более высокая очистка может быть проведена или колоночной хрома-тографией при использовании силикагель/СНСl3, или перекристаллизацией из смеси толу-ол/циклогексан (1:3).
Пример 6. Бензоилизотиоцианат (0,232 г, 1,42 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 5 (0,290 г, 1,18 ммоль) в сухом СH2CI2 (100 мл). После 1 часа при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток перемешивают в смеси Еt2О/циклогексан (1:1, 20 мл). Полученную суспензию желтого твердого вещества отфильтровывают под давлением азота и тиоуреидное соединение высушивают в вакууме над Р2О5.
Пример 7. Иодистый метил (0,228 г, 1,61 ммоль) добавляют к раствору тиоуреида при-мера 6 (0,383 г, 0,94 ммоль) и DBN (0,140 г, 1,12 ммоль) в сухом СH2Cl2 (10 мл) при 0С. Рас-твор перемешивают при 0С в течение 15 минут, при температуре окружающей среды в те-чение 1 часа и затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в СНСl3 хроматографируют в колонне с силикагелем со смесью СНСl3/метанол в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиозамещенного промежуточного соединения.
Пример 8.



Раствор метилтиосоединения примера 7 (0,358 г, 0,85 ммоль) в 100 мл МеОН, который был насыщен NH3 при 0°С, нагревают при 90-95°С в течение 24 часов в футерованной стек-лянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпа-ривают в вакууме, получая смесь желаемого 2-аминопроизводного, бензамида, и побочного продукта, представляющего собой 2-метилтиопроизводное. Смесь растворяют в метаноле и раствор выпаривают с силикагелем (около 5 г). Смесь затем осторожно наносят на верхнюю часть хроматографической колонки с силикагелем, которую затем элюируют смесью СНСl3/МеОН (9:1), получая побочное метилтиосоединение и желаемый 2-амино-7-(3-пиридинилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-он, как промежуточное соединение. Дальнейшую очистку проводят перекристаллизацией из кипящего изопропилацетата в ап-парате Сокслета.
Анализ: вычислено для С12Н11N5О: С, 59,74; Н, 4,60; N, 29,03; найдено: С, 59,58, Н, 4,86, N, 28,89.
MS (FAB): 242 (M + H)+; UV: 0,1 N HCl 233 (18,2), 269 (17,4), pH 7 233 (18,2), 269 (17,4); pH 7 233 (22,4); 269 (12,3); 0,1 N NaOH 227 (22,2), 263 (10,5), 290 (sh). IC50(PNP) = 25 nM.



Раствор пиридинилметильного промежуточного соединения в 0,1N HCl гидрируют на платиновом катализаторе при давлении Н2 60 фунтов/дюйм2 (4,2186 кг/см2). Катализатор генерируют посредством кратковременного гидрирования PtO2 в 0,1N НСl. Когда реакция заканчивается катализатор удаляют фильтрованием под давлением N2 и фильтрат выпари-вают. Остаток в минимальном количестве этанола разбавляют медленно большим количе-ством EtO2 и получают гидрохлоридную соль в виде белого гигроскопичного твердого ве-щества (IC). Т.пл. (в °С) при 200° размягчается.
MS (FAB) m/e 248 (M + H)+ UV 0,1 N HCl 234 (15,7), 273 (13,8) pH 7 буффер 232 (19,l), 271 (9,3), 0,1 N NaOH 229 (19,0), 266 (7,1), 288 (sh); 1Н-ЯМР (DNSO-d6)  1,19, 1,61, 1,77 (m, 4H, H-4's and 5's пиперидина), 1,96 (m, IH, H-3 пиперидина), 2,53 (d, 2H, -CH2-), 2,69 (m, 2H, H-2's пиперидина), 3,14 (d, 2H, H-6's пиперидина), 7,25 (d, J=2.8, IH, H-6), 7,76 (s, 2H, NH2), 8,81, 9,18 (yш., 1 каждый, NH+ обменивается с D2O), 12,24 (s, IH, S-NH). Анализ: вычислено для С12H17N6O  2,8 HCI  0,2 С2Н6О  Н2О: С, 39,55, Н, 6,16, N, 18,60, Сl, 26,36. Найдено: С, 39,75; Н, 6,24; N, 18,65, Сl, 26,08. IC50 = 1 мкМ.
Пример 9. Вещество (IC) примера 8 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в кото-ром изучают PNP активность (IC50) для вещества, которую определяют радиохимически по-средством измерения образования [14С]-гипоксантина из [14С]-инозина (Biomedicina, 33, 39 (1980)), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима.
Примеры 10-14. Следующие вещества настоящего изобретениям представляющие со-бой 2-амино-7-(СН2R)-3H5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R группа означает следующее:
пример 10: R - 2-метил-3-пиперидинил;
пример 11: R - 2-хлор-3-пиперидинил;
пример 12: R - 2-трифторметил-3-пиперидинил;
пример 13: R - 2-метокси-3-пиперидинил;
пример 14: R - 2-фтор-3-пиперидинил
получают, следуя способам, приведенным в примерах 1-8, используя соответствующие 3- (замещенные 3-пиридинил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.
Пример 15. 3-(2-Пиридинил)пропионитрил получают в этом примере, используя спо-соб (V.Boekelheide, еt а1., J. Am. Chem. Soc., 75, 3243 (1953)). Раствор цианида калия (83,74 г) в воде (160 мл) добавляют к раствору свежеперегнанного 2-винилпиридина (67,59 г) в ан-гидриде уксусной кислоты (131,30 г) со скоростью, отрегулированной для поддержания осторожного кипения с обратным холодильником. Когда добавление заканчивают, полу-ченную темнокрасную смесь нагревают в течение примерно 17 часов при 105C в масляной бане с энергичным перемешиванием. Охлажденную реакционную смесь доводят до рН 8 насыщенным раствором Na2CO3. Смесь экстрагируют СНСl3 (4 х 150 мл), промывают водой, высушивают Na2SO2 и выпаривают до темного вязкого масла. Масло фракционированно перегоняют в вакууме через Vigreaux колонну. После малого предгона, содержащего 2-винилпиридин (0,35 г), желаемый 3-(2-пиридинил)пропионитрил собирают в виде прозрач-ного, флуоресцирующего желто-зеленого вязкого масла: выход 59,8 г; 70,4%; точка кипения 86°С при 1,0 ммHg.
Примеры 16-20. Получают следующие вещества изобретениям 2-амино-7-(CH2R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых группа R имеет следующие значения:
пример 16: R - 2-пиперидинил;
пример 17: R - 4-пиперидинил;
пример 18: R - 3-трифторметил-4-пиперидинил;
пример 19: R - 3-метокси-2-пиперидинил;
пример 20: R - 3-фтор-4-пиперидинил,
следуя способам, приведенным в примерах 1-8 и 15, используя соответствующие 3-(2- или 4-пиридинил)пропионитрилы в качестве исходных веществ.
Пример 21. Получают фармацевтическую композицию для интраперитональной инъ-екции для испытания вещества (IC). Для этого интраперитональный инъек¬ционный раствор, содержащий вещество примера 8, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.
Пример 22. Вводят интраперитонально в Lewis Rats композицию примера 21, содер-жащую вещество (IC) с дозой 30 мг вещества (IC) с инъекцией дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют холодной 0,5 НClO4 и нейтрализуют твердым NH4HCO3. После удаления перхлоратных со-лей экстракт подвергают HPLC (ЖХВД) - жидкостная хроматография высокого давления) на колонне с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плаз-менного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IC).
Примеры 23-33 . Вещества, полученные в примерах 10-20, использованы для при-готовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 21. Полученные вспрыскиваемые растворы испытывают в соответствии со способом примера 22. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из живот-ных, получающих вещества настоящего изобретения.
Пример 34. В этом примере получают 3-(2-фуранил)пропионитрил. В трехгорлую кол-бу, снабженную конденсатором и осушительной трубкой, добавляют магниевые стружки (20 г) к раствору 3-(2-фуранил)акрилонитрила (67,2 г) в сухом метаноле (2 л). Дополнительное количество магния добавляют по частям в зависимости от скорости реакции до тех пор, пока не будет добавлено все количество (145 г). Спустя около 5 часов растворитель выпаривают до тех пор, пока содержимое не образует твердую пасту, которую доводят до рН около 6,5 с помощью 6N НСl при охлаждении. Смесь экстрагируют с помощью нескольких порций СНСl3, сушат с помощью Na2SO4 и концентрируют до темного масла. Перегонка в вакууме через короткую Vigreaux колонку дает пропионитрил в виде бесцветного масла; выход 49,5 г (72%); точка кипения 46,0-46,5С при 0,5 ммHg.
3-(2-фуранил)пропионитрил из примера 34 далее используют в синтезах изобретения.
Пример 35. В атмосфере сухого N2 пропионитрил (48,7 г), гидрид натрия (10,28 г), эти-ловый эфир муравьиной кислоты (32,74 г) и безводный тетрагидрофуран (200 мл) переме-шивают при комнатной температуре с защитой от влаги в течение 18 часов. Летучее веще-ство затем выпаривают, полученное желтое твердое вещество растворяют в примерно 20 мл холодной воды с охлаждением на ледяной бане, и раствор доводят до рН 6,0 с помощью хо-лодной 6N НСl. Полученный тяжелый маслянистый осадок экстрагируют в СНС13 и экс-тракт промывают водой, высушивают с помощью Na2SO4 и выпаривают, получая жидкое масло, которое содержит сырое формильное производное; выход 53,06 г.
Пример 36. Гидрохлорид метилового эфира глицина (67,05 г) и безводный ацетат натрия (43,79 г) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (53,05 г) в МеОН/Н2О (4:1, 1500 мл). Через 24 часа МеОН выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью СНС13. Слой СНС13 высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло (59,1 г).
Пример 37. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (43,68 г) до-бавляют по каплям к раствору янтарного масла примера 36 (59,1 г) и DEN (133 г) в сухом СH2Cl2 (400 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0С в течение 1 часа раствор оставляют стоять при комнатной температуре в течение ночи. После проверки течения реакции с помощью ТСХ вводят дополнительное количество ClCO2Et и DEN для завершения реакции, и раствор оставляют стоять в течение 24 часов. Летучее веще-ство выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на колонне с силикагелем (главная цель которой - удаление менее мобильного DEN), получая N - защищенный пиррол, соот-ветствующий пиррол без этоксикарбонильной защитной группы на пиррольном азоте и ис-ходный пропионитрил.
Пример 38. К раствору N-защищенного пиррола примера 37 (11,66 г) в МеОН (200 мл) 15 добавляют твердый Na2CO3 (4,23 г) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха и остаток тщательно растирают в порошок с Н2О (200 мл) для растворения неорганических веществ, и экстрагируют с помощью СНСl3 (3 х 200 мл). Экс-тракт сушат (Na2SO4) и 20 выпаривают, получая вязкую смолу, которая кристаллизуется при высушивании в вакууме, для использования в качестве промежуточного соединения без дальнейшей очистки, Более глубокая очистка может быть проведена колоночной хромато-графией с использованием силикагель/СНСl3, или перекристаллизацией из смеси толу-ол/циклогексан (1:3).
Пример 39. Бензоилизотиоцианат (4,58 г) добавляют по каплям к раствору дебло-кированного пиррола примера 38 (5,15 г) в сухом СH2Cl (75 мл). Через 1 час при комнатной температуре раствор выпаривают, и смолистый остаток растворяют в Et2O (100 мл) с почти немедленным выделением кристаллического твердого вещества, которое собирают филь-трованием. Фильтрат Et2О нагревают до кипения и разбавляют с помощью равного объема горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное количе-ство тиоуреидопроизводного.
Пример 40. Иодистый метил (8,70 г) добавляют к раствору тиоуреидопроизводного примера 39 (10,68 г) и DEN (4,15 г) в сухом СH2Cl2 (250 мл) при 0°С. Раствор перемешивают при 0°С в течение 15 минут, при температуре окружающей среды в течение 1 часа и затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в СНСl3 хроматографируют в колонне с силикаге-лем с использованием СНСlз в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилгиопромежуточного соединения.
Пример 41.


Раствор метилтиосоединения из примера 40 (0,80 г, 2,0 ммоль) в 25 мл МеОН, который был насыщен NH3 при 0°С, нагревают при 90-95°С в течение 24 часов в футерованной стек-лянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпа-ривают в вакууме, получая смесь 2-аминосоединения, бензамида и побочного продукта, ко-торый является 2-метилтиопроизводным. Смесь перемешивают энергично в течение не-скольких минут с 30 мл смеси 2:1 Еt2O/циклогексан, и нерастворимое белое твердое веще-ство отфильтровывают и промывают Еt2O). Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводного. Раствор нерастворимого в смеси Еt2О/циклогексан твердого ве-щества (0,425 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносится равномерно на верх колонны с силикагелем, которая затем элю-ируется с помощью смеси СНСl3/МеОН/НОАс (95:5:1), давая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое фуранильное промежуточное соединение. Промежуточное соединение перекристаллизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и сушат в вакууме над Р2О5 при 110°С в течение 7 часов.
Раствор промежуточного соединения (116 г, 0,5 ммоль) в метаноле (50 мл) гидрируют с помощью 30% палладия на древесном угле (40 мг) при давлении Н2 62 фунта/дюйм (4,3592 кг/см2) в течение около 36 часов. Катализатор удаляют фильтрованием под давлением N2 и фильтрат выпаривают, и затем повторно выпаривают с толуолом. Твердый остаток перекри-сталлизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. 2-Тетрагидрофуранильное соединение (IЕ) получают в виде белого кристаллического твердо-го вещества, которое высушивают в вакууме над Р2О5 при 110°C в течение примерно 6 ча-сов, выход 73 мг (61,8%), т.пл. 284-286°С (разл.).
MS (FAB) m/e 235 (M+Н)+, UV 0,1 N HCl 235 (17,1), 273 (14,7), pH 7 буффер 232 (20,0), 271 (10,5), 0,1 N NaOH 228 (20,2), 264 (7,0), 286 (6,2); 1H-ЯMP (DMSO-d6)  1,50, 1,78 (m, 4H, H-3's и 4's тетрагидрофуранила), 2,52, 2,69 (2d, 2Н, -CH2R), 3,57, 3,76 (2m, IH каждый, H-5's тетрагидрофуранила), 5,82 (s, 2H, NH2), 6,97 (d, J=2,8, IH, H-6), 10,34 (s, IH, 3-NH), 11,18 (s, IH, 5-NH). Анализ: вычислено для C11H14N4O2: С, 56,40; Н, 6,02; N, 23,92; найдено: С, 56,33; Н, 6,49; N, 23,95.
Пример 42. Продукт примера 41 испытывают на ферментативную ингибирующую ак-тивность в соответствии со способом примера 9, и наблюдают PNP активность (IC50=ll мкМ) для вещества.
Пример 43. Приготавливают фармацевтическую композицию для интраперитональной инъекции для испытания вещества (IЕ). Для этого интраперитональный инъектируемый раствор, содержащий вещество примера 41, растворяют в водном носителе, который содер-жит 10% DMSO.
Пример 44. Используя способ примера 16, вводят интраперитонально в Lewis Rats композицию примера 43, содержащую вещество (IЕ) с дозой 30 мг вещества (IE) и результа-ты анализируют по сравнению с контрольными. Наблюдают значительное увеличение плаз-менного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IЕ).
Примеры 45-49. Получают следующие вещества изобретения, 2-амино-7-(CH2R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых группа R означает:
пример 45: R - 3-тетрагидрофуранил;
пример 46: R - 3-хлор-2-тетрагидрофуранил;
пример 47: R - 3-трифторметил-2-тетрагидрофуранил;
пример 48: R - 3-метокси-3-тетрагидрофуранил;
пример 49: R - 3-фтор-2-тетрагидрофуранил.
Bещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 34-41, используя соот-ветствующие 3-(фуранил)-акрилонитрилы в качестве исходных веществ.
Пример 50.

В атмосфере азота раствор тетрагидрофуранильного производного (IЕ) (500 мг), полу-ченного в примере 41, и кристалл фенола в 2N НВr (20 мл) перемешивают в течение 18 ча-сов при 40°С. Растворитель выпаривают в вакууме при низкой температуре и остаток про-мывают с помощью нескольких мл Еt2О, декантацией удаляя любой трибромфенол. Т.пл. 311-313C.
MS (FAB) m/e 251 (M+Н)+, UV 0,1 N HCl 234 (17,4), 274 (15,2), pH 7 буффер 232 (20,9), 272 (10,6), 0,1 N NaOH 228 (21,3), 265 (7,3), 287 (6,5); ИK (KBr) 3211, 3203, 3127, 3108, 2936, 1661, 1609, 1567, 1524, 1369 см-1 1H-ЯМР (DMSO-d6)  1,62, 1,87, 2,01 (комплекс m, 4Н, H-3's и 4's тетрагидротиенила), 2,72 (m, 4Н, -СН2-перекрывающий Н-5's тетрагидротиенила), 3,64 (р, 1Н, 6-2 тетрагидротиенила), 5,82 (s, 2Н, NH2), 6,97 (d, J=3,0, 1H, Н-6), 10,34 (s, 1, 3-NH) 11,17 (s, l, 5-NH);
Анализ: вычислено для C11H14N4OS: С, 52,78, Н, 5,64; N, 22,38, найдено: С, 52,56; Н, 5,64; N, 22,50.
Из фильтрата получают 2-амино-1,5-дигидро-7-(1,2-дитиан-3-илметил)-4Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он; т.пл. 311-313С.
MS (FAB) m/e 283 (M+Н)+, IR (KBr) 3139, 3135, 3131, 2926, 1673, 1658, 1609, 1569, 1523, 1370 см-1; 1Н-ЯМР (DMSO-d6)  1,53, 1,67, 2,04 (комплекс m, 4Н, H-4's и 5’s дитиенила), 2,67 (m, 2Н, -CH2R); 2,75 (m, 2H, H-6's дитиенила), 3,17 (m, IH, H'3 дитиенила), 5,84 (s, 2H, NH2), 7,00 (d, J=3,0, IH, H-6), 10,34 (s, IH, 3-NH), 11,24 (s, IH, 5-NH).
Анализ: вычислено для C11H14N4OS2: С, 46,80; Н, 5,00; N, 19,85; найдено: С, 46,78; Н, 4,97; N, 19,81.
Суспензию остатка в воде доводят до рН 7 IN NaOH, получая бромоспирт в виде сво-бодного основания. Твердое вещество собирают, промывают холодной водой и высушивают при комнатной температуре.
Раствор бромоспирта в безводном диметилацетамиде охлаждают в ледяной бане и об-рабатывают эквимолярной порцией РВг3, Раствор перемешивают при комнатной темпера-туре в течение 1 часа, затем диметилацетамид выпаривают в вакууме при низкой температу-ре, используя воздушный насос и ловушку с сухим льдом. Суспензию остатка в смеси лед/вода доводят до рН 7, используя IN NaOH, и получают сырой продукт реакции, содер-жащий 1,4-дибромсоединение. После фильтрования, промывания холодной водой и высу-шивания при комнатной температуре полученный продукт кипятят с обратным холодиль-ником с сульфидом натрия в смеси 50% этанол/вода, либо нагревают с Na2S в растворе N,N-диметилацетамида; растворитель удаляют под вакуумом, остаток промывают водой для уда-ления NaBr и рН доводят до примерно 7 для осаждения 2-тетрагидротиенильного вещества (IG).
Пример 51. Вещество примера 50 испытывают на ферментативную ингибирующую активность, как в примере 9, и наблюдают PNP активность (IC50 = 11 nМ) для вещества наблюдают. IC50 = 18 nM для дитиан-3-ильного соединения.
Пример 52. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитональной инъек-ции для испытания вещества (IG). Интраперитонеальный инъекцируемый раствор, содер-жащий вещество примера 50, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.
Пример 53. Используя способ примера 16, вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию примера 52, содержащую вещество (IG) с дозой 30 мг вещества (IG) и результаты анализируют по сравнению с контрольными. Наблюдают значительное увеличе-ние плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IG).
Примеры 54-58. Получают следующие вещества изобретения, 2-амино-7-(СН2R)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-oны, в которых R означаете:
пример 54: R - 3-тетрагидротиенил;
пример 55: R - 3-хлор-2-тетрагидротиенил;
пример 56: R - 3-трифторметил-2-тетрагидротиенил;
пример 57: R - 3-метокси-2-тетрагидротиенил;
пример 58: R - 3-фтор-2-тетрагидротиенил.
Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 34-41 и 50, используя соответствующие 3-(фуранил)-акрилонитрилы в качестве исходных.
Пример 59. Используя способ примера 1,3-(2-пирролил)-пропионитрил получают, ис-пользуя пиррол-2-карбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное вещество 2-амино-7-(2-пирролилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 2-пирролидинильное вещество (а) получают восстановлением промежуточного вещества.
Пример 60. Используя способ примера 1, 3-(3-пирролил)пропионитрил получают, ис-пользуя пиррол-3-карбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное соединение 2-амино-7-(3-пирролилметил)-3Н,5Н-пирроло-[3,2-d]-пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 3-пирролидинильное вещество (IJ) получают восстановлением промежуточного вещества.
Пример 61. Используя способ примера 1, 3-(2-пиранил)пропионитрил получают, ис-пользуя 2-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, про-межуточное вещество 2-амино-7-(2-пиранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 2-тетрагидропиранильное вещество (IL) получают восстановлением промежуточного вещества.
Пример 62. Используя способ примера 1, 3-(3-пиранил)-пропионитрил получают, ис-пользуя 3-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, про-межуточное вещество 2-амино-7-(3-пиранилметил)-3H,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 3-тетрагидропиранильное вещество (IМ) получают восстановлением промежуточного соединения.
Пример 63. Используя способ примера 1, 3-(4-пиранил)-пропионитрил получают, ис-пользуя 4-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, про-межуточное вещество 2-амино-7-(4-пиранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 4-тетрагидропиранильное вещество (IN) получают восстановлением промежуточного соединения.
Пример 64. Раствор метилтиопроизводного примера 7 (0,358 г, 0,85 ммоль) в 100 мл МеОН, который был насыщен NH3 при 0°С, нагревают при 90-95C в течение 24 часов в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охла-жденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь желаемого 2-аминопромежуточного вещества, бензамида, и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным. Смесь растворяют в метаноле и раствор выпаривают с силикагелем (около 5 г). Затем смесь осторожно наносят на верх хроматографической колонны с силикагелем, которую затем элюируют с помощью смеси СНСI3/МеОН (9:1), получая метилтиопобочный продукт и же-лаемый 2-амино-7-(3-пиридинилметил)-3H,5H-пирроло-[3,2-d]-пиримидин-4-он, вещество (IIА). Дальнейшую очистку проводят перекристаллизацией из кипящего изопропилацетата в аппарате Сокслета.
Пример 65. Вещество (IIА) примера 64 испытывают на ферментативную ингибирую-щую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором наблюдают PNP активность (IC50) для веществам определяемую радиохимически посредством измерения образования [14С]-гипоксантина из [14С]-инозина (Biomedicina, 33, 39, 1980), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима.
Примеры 66-67. Получают следующие вещества изобретения, 2-амино-7-(СН2R)-3H,5H-пирроло-[3,2-d]-пиримидин-4-oны, в которых R означает:
пример 66: R - 2-пиридинил;
пример 67: R - 3-хлор-2-пиридинил.
Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 1-7 и 64, используя со-ответствующие 3-(пиридинил)-пропионитрилы в качестве исходных.
Пример 68. 2-амино-4-оксо-3Н,5Н-7-[(4-пиридил)метил]пирроло-[3,2-d]-пиримидин гидрохлорид гидрат (2:4:1)



Метил 3-([N-бензоил-S-метилизотиокарбамоил)амино]-4-[(4-пиридил)метил]-1Н-пиррол-2-карбоксилат (BCX-180, 9,5 г, 23, 25 ммоль) добавляют в 300-мл, выложенный стеклянной футеровкой, стеклянный сосуд высокого давления, к 90 мл метилата аммония (полученного путем пропускания аммиака в безводный метанол при температуре 0-5С до насыщения) и реакционный сосуд закупоривают. Этот сосуд нагревают до температуры 85-90С в течение 12 часов и затем охлаждают до комнатной температуры. Летучие вещества выпаривают с помощью вращающегося испарителя и к полученному остатку добавляют 150 мл IN HCl и 100 мл хлороформа. Полученную смесь энергично перемешивают и выделяют экстракт НСl. Экстракт НСl нейтрализуют, используя водный раствор карбоната натрия. Выпавшее в осадок твердое вещество выделяют путем фильтрации, высушивают на воздухе и экстрагируют 2 л этанола в аппарате Сокслета в течение 48 часов. Этанол выпаривают и образовавшийся светло-коричневый твердый остаток (3,1 г) размешивают с 20 мл деионизи-рованной (DI) воды. Концентрированную (37%) соляную кислоту добавляют по каплям до тех пор, пока все твердое вещество не растворяется (2,1 мл, 25,7 ммоль). Прозрачный рас-твор обрабатывают активированным углем (700 мг) при температуре 50С в течение 5 минут и фильтруют через короткую колонку, заполненную цеолитом. Полученный фильтрат кон-центрируют на вращающемся испарителе при температуре 50- 55°С, с получением белого твердого вещества, высушивают на воздухе, а затем в вакууме при температуре перегонки толуола. Масса полученного белого твердого вещества составляет 3,6 г (48%), т.пл. 340-342°С. Анализ: вычислено для C12H11N5O2HCl·0,5H2O: С, 44,59; Н, 4,67; N, 21,67. Найдено: С, 44,59; Н, 4,57; N, 21,47.
Пример 69. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитональной инъек-ции для испытания вещества (IIA). Для этого интраперитональный инъекцируемый раство-ра содержащий вещество примера 64, растворяют в водном носителей который содержит 10% DMSO.
Пример 70. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию примера 69, содержащее вещество (IIA), в дозе 30 мг вещества (IIA) инъекцией дважды в день. Исполь-зуют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное вре-мя после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют с помощью холодной 0,5N НClO4 и нейтрализуют с помощью твердого NH4HCO3. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонне с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдали значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IIА).
Примеры 71-73. Вещества, полученные как в примерах 66-68, использованы для полу-чения фармкомпозиций в соответствии со способом примера 69, и полученные инъекцируе-мые растворы испытаны в соответствии со способом примера 70. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещество изобретения.
Пример 74. 1-Циклогексенилацетонитрил используют в синтезах для получения со-единений изобретения. В атмосфере сухого N2 раствор 1-циклогексенилацетонитрила (9,2 г, 75,92 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (THF, 10 мл) добавляют к перемешиваемой сме-си гидрида натрия (3,18 г, 132,86 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (30,14 г, 406,93 ммоль) в 50 мл THF, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение около 18 часов. Летучее вещество выпаривают в вакууме при комнатной темпера-туре. Воду (30 мл) добавляют к остатку при 0С, и раствор доводят до рН 6 добавлением по каплям 6N НСl. Полученный осадок в виде тяжелого масла экстрагируют СНСl3. Экстракт промывают водой и высушивают с помощью Na2SO, и полученный органический слой вы-паривают, получая сырое формильное производное в виде красно-коричневого масла (9,6 г).
Пример 75. Гидрохлорид метилового эфира глицина (16,68 г, 132,85 ммоль) и безвод-ный ацетат натрия (10,89 г, 132,85 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного произ-водного (9,6 г) примера 74 без дальнейшей очистки в смеси МеОН/Н2O) (4:1, 150 мл). Спустя 24 часа МеОН выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью СНСl3. Слой СНСl3 высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование с помощью СНСl3 дает желаемый енамин: выход 4,5 г.
Пример 76. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (3,04 г, 28,06 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 75 (4,12 г, 18,70 15 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4,3,0]нон-5-ена (DEN, 6,96 г, 56,11 ммоль) в сухом СH2Cl2 (100 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После перемешивания при 0°С в течение 1 часа раствору дают постоять при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции с помо-щью ТСХ вводят дополнительное количество ClCO2Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для заверше-ния реакции, и раствор оставляют на 24 часа. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вяз-кий остаток очищают на короткой колонке с силикагелем (главная цель которой есть удале-ние менее мобильного DBN), получая N - защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 77. К раствору N-защищенного пиррола примера 76 (3,0 г, 10,26 ммоль) в Ме-ОН (100 мл) добавляют твердый Na2CO3 (2,71 г, 25,65 ммоль) и реакционную смесь переме-шивают при комнатной температуре в течение 48 часов с отделением полученного деблоки-рованного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ, и экстрагируют с помощью CHCl3 (3 х 50 мл). Экстракт сушат (Na2SO4) и выпаривают до получения вязкой смолы, которую очищают на колонне с силикагелем, используя СНСlз в качестве элюента; выход 2,04 г; т.пл. 125С.
Пример 78. Бензоилизотиоцианат (0,76 г, 4,65 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 77 (0,91 г, 4,13 ммоль) в сухом СH2Cl2 (30 мл). Спустя 1 час при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растирают в по-рошок с метанолом, получая тиоуреидопроизводное; выход 0,70 г, т.пл. 170°С.
Пример 79. Иодистый метил (0,678 г, 4,78 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидо-производного примера 78 (0,630 г, 1,64 ммоль) и DBN (0,230 г, 1,85 ммоль) в сухом СH2Cl2 (50 мл) при 0С. Раствор перемешивают при 0С в течение 15 минут, при температуре окру-жающей среды в течение 1 часа, а затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в СНСl3 хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью СНСl3 в качестве элюента, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного соединения, выход 0,7 г.
Пример 80.



Раствор метилтиосоединения примера 79 (0,70 г, 1,76 ммоль) в 50 мл МеОН, который был насыщен NH3 при 0С, нагревают при 90-95С в течение 24 часов в футерованной стек-лянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпа-ривают в вакууме, получая смесь вещества (IIIА), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IIIA). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 50 мл Et2O, и нерастворимое белое твердое вещество отфильтровывают и промывают с помощью Еt2O). Фильтрат содер-жал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводного. Раствор нерастворимого в Et2O твердого вещества (0,342 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Из-мельченный в порошок остаток наносят равномерным слоем на верхнюю часть колонны с силикагелем, который затем элюируют с помощью смеси CHCl3MeOH/HOAc (95:5:1), полу-чая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IIIА). Соединение (IIIА) перекристаллизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в ап-парате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три массы и высушивают в вакууме над Р2О5 при 110C в течение 7 часов, выход 44%, т.пл. 280С (разл.).
Анализ для С12Н14О40,6Н2O: вычислено: С, 59,78; Н, 6,35; N, 23,23; найдено: С, 59,98; Н, 6,46; N, 23,15.
Пример 81. Вещество примера 80 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в кото-ром определяют PNP активность для вещества радиохимическим измерением образования [14С]-гипоксантинаиз [14С]-инозина (Biomedicina, 33, 39, 1980), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима. При 1 mM фосфата IC50 равно 1,9 мкМ, и при 50 mM фосфата IС50 равно 19 мкМ.
Пример 82. Следуя способам, приведенным в примерах 74-80, вещества (IIIB) и (IIIC) получают, используя 2- и 3-циклогексенилацетонитрил, соответственно, в 25 качестве ис-ходных веществ. Вещества испытывают, как в примере 81, и наблюдают значительную фер-ментативно - ингибирующую активность.
Примеры 83-87. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(R)-3H,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R группа следующая:
пример 83: R - 3-метил-2-циклогексенил;
пример 84: R - 2-хлор-3-циклогексенил;
пример 85: R - 3-трифторметил-1-циклогексенил;
пример 86: R - 3-метокси-1-циклогексенил;
пример 87: R - 2-фтор-3-циклогексенил.
Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 74-81, используя соот-ветствующие циклогексенилацетонитрилы в качестве исходных.
Пример 88. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального введе-ния для испытания вещества (IIIА). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содер-жащий вещество (IIIА), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.
Пример 89. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержа-щую вещество (IIIА) примера 88, в дозе 30 мг вещества (IIIА) с инъекцией, дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определен-ное время после введения животных усыпляют, и получают образцы плазмы. Плазму экс-трагируют с помощью холодной 0,5N НClO4 и нейтрализуют с помощью твердого NH4HCO3. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонке с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плазменного ино-зина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IIIА).
Примеры 90-94. Вещества, полученные, как в примерах 83-87, использованы для при-готовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 88, и полученные инъекцируемые растворы испытывают в соответствии со способом примера 89. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у живот-ных, получающих вещества изобретения.
Пример 95.


Вещество (HID) получают, используя 2-амино-7-(1-циклогексенил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он в качестве промежуточного соединения. Раствор промежу-точного соединения (0,2 г, 0,86 ммоль) в этаноле (50 мл) гидрируют с помощью 10% Pd-C (50 мг) при давлении 45 фунтов/дюйм2 в течение 16 часов и фильтруют горячий через цео-лит. Фильтрат выпаривают досуха, и остаток кристаллизуют из горячего этанола, получая вещество (IIID); выход 157 мг (78%); т.пл. – более 300°С (разл.).
Анализ для C12H16N4O0EtOH: вычислено: С, 61,80; Н, 7,10; N, 23,51; найдено: С, 61,95; Н, 7,43; N, 23,56.
Пример 96. Вещество (IIID), полученное в примере 95, испытывают на ферментатив-но-ингибирующую активность, как в примере 81. При 1 mM фосфата IC50 равно 1,3 мкМ, и при 50 mM фосфата IC50 равно 145 мкМ.
Пример 97. 3-(2-Адамантил)-пропионитрил получают в этом примере, используя мето-дику способа M.Ohno et а1., J. Org. Chem, 53, 1285 (1988). Раствор 2-бромадамантана (20 г, 92,96 ммоль), Bu2SnH (32,46 г, 111,5 моль), акрилонитрила (9,86 г, 185,92 ммоль) и AIBN (740 мг) в толуоле (280 мл) перемешивают при температуре кипения с обратным холодиль-ником в течение 3 часов. Реакционную смесь промывают аммиачной водой (0,4 М, 500 мл), органический слой промывают водой и высушивают над MgSO4 и выпаривают. Остаток перегоняют при температуре между 110-118°С и около 0,2 ммHg; фракции соединяют, полу-чая сырой образец загрязненного 3-(2-адамантил)-пропионитрила с комплексами олова, ко-торый очищают на колонне с силикагелем с помощью гексанов; за которыми следуют гек-сан/этилацетат 97:3 и гексан/этилацетат 95:5; выход 9,4 г (53,4%) т.пл. полутвердый.
Пример 98. 3-(2-Адамантил)-пропионитрил примера 97 используют далее для синтеза соединений изобретения. В атмосфере сухого N2, смесь 3-(2-адамантил)-пропионитрила (7,0 г, 36,99 ммоль), гидрида натрия (1,7 г, 73,95 ммоль) и безводного тетрагидрофурана (75 мл) нагревают при 52С в водяной бане в течение 15 минут, и раствор этилового эфира муравь-иной кислоты (13,69 г, 184,89 ммоль) в THF (100 мл) добавляют в течение 45 минут. Через 2 часа при 50-55°С вторую порцию NaH (0,8 г) и HCO2Et (7,5 мл) добавляют, и реакционную смесь перемешивают в течение примерно 2 дней. Третью порцию HCO2Et (7,5 мл) и NaH (0,8 г) добавляют и оставляют при комнатной температуре в течение около 24 часов (непро-реагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован в первой стадии очистки). Крутую пасту перемешивают в течение ночи и дают охладиться до ком-натной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении и оставшу-юся бледножелтую корку растворяют в минимальном объеме холодной воды (приблизи-тельно 150 мл) при 0°С. Раствор доводят до рН 6,0 добавлением 6N НСl и экстрагируют с помощью СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт промывают водой, высушивают над Na2SO4 и выпа-ривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.
Пример 99. Гидрохлорид метилового эфира глицина (6,96 г, 55,46 ммоль) и 25 безвод-ный ацетат натрия (4,55 г, 55,46 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного произ-водного (8,0 г) в МеОН/Н2О (4:1, 500 мл). Спустя 24 часа МеОН выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют СНСl3. Слой CHCl3 высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают в колонку с силикагелем. Элюирование с помощью СНСl3 дает два 30 основных слоя: (1) 3-(2-адамантил)-пропионитрил (использованный в ка-честве исходного вещества в предыдущей стадии), и (2) желаемый енамин; выход 6 г.
Пример 100. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (2,82 г, 26,0 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 99 (5,0 г, 17,34 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4,3,0]нон-5-ена (“DBN”, 6,46 г, 52,0 ммоль) в сухом СH2Cl2 (50 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После перемешивания при 0°С в течение 1 часа раствору дают стоять при комнатной температуре в течение ночи. После контролирования хода реакции по ТСХ, вводят дополнительное количество ClCO2Et (1,81 мл) и DBN (3,23 г) для завершения реакции, и раствор оставляют стоять в течение 24 часов. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонне с силикагелем (главная цель которой - удаление менее мобильной DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 101. К раствору сырого N-защищенного пиррола примера 100 (6,0 г, 16,59 15 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляют твердый Na2CO3 (4,39 г, 41,49 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 часов с отделением получен-ного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха и остаток растирают в порошок тщательно с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт сушат (Na2SO4) и выпаривают, получая вязкую смолу, которую кри-сталлизуют с помощью эфира; выход 4 г, т.пл. 162-163°С.
Пример 102. Бензоилизотиоцианат (1,22 г, 7,47 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 101 (1,91 г, 6,62 ммоль) в сухом СH2Cl (50 мл). Спустя 1 час при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растворяют в Еt2O (100 мл) с почти немедленным выделением кристаллического твердого вещества, кото-рое отфильтровывают. Маточник Et2O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное количе-ство тиоуреидопроизводного; выход 2,81 г (95%), т.пл. 193-194C.
Пример 103. Иодистый метил (2,46 г, 17,39 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидо-производного примера 102 (2,7 г, 5,98 ммоль) и DBN (0,82 г, 6,57 ммоль) в сухом СH2Cl2 (50 мл) при 0С. Раствор перемешивают при 0С в течение 15 минут, при температуре окружа-ющей среды в течение 1 часа и затем выпаривают в вакууме, получая сырой образец метил-тиосоединения как промежуточного вещества; выход 2,78 г (сырой).
Пример 104.


Раствор метилтиосоединения примера 103 (2,78 г, 5,18 ммоль) в 150 мл МеОН, кото-рый был насыщен NH3 при 0C, нагревают при 90-C в течение 24 часов в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы вы-паривают в вакууме, получая смесь вещества (IVA), бензамида и побочного продукта, кото-рый является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVA). Смесь энер-гично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Еt2O и нераство-римое белое твердое вещество отфильтровывают с помощью Еt2O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводное. Раствор нерастворимого в Et2O твердо-го вещества (1,38 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 25 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносится равномерно на верхнюю часть колонки с силикагелем, кото-рую затем элюируют с помощью СНСI3/МеОН/НОАс (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVA). (IVA) продукт перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три массы и высушивают в вакууме над Р2О5 при 110C в течение 7 часов; выход 51,5%; т.пл. – более 350°С (разл.).
Анализ для C17H22N4O0,21 МеОН0,22 Н2О: вычислено: С, 66,88; Н, 7,59; N, 18,12; найдено: С 66,86; Н, 7,59; N, 18,12.
Пример 105. Вещество примера 104 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Для этого проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором определяют PNP активность (IC50) для вещества радиохимическим измере-нием образования [14С]-гипоксантинаиз [14С] - инозина (Biomedicine, 33, 39, 1980), используя селезенку теленка - в качестве источника энзима. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,090 мкМ, и при 50 mM фосфата IC50 равно 2,5 мкМ.
Примеры 106-110. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH2R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - замещенная 2-адамантильная группа:
пример 106: R - 2-(1-метил)-адамантил;
пример 107: R - 2-(1-хлор)-адамантил;
пример 108: R - 2-(1-трифторметил)-адамантил;
пример 109: R - 2-(1-метокси)-адамантил;
пример 110: R - 2-(1-фтор)-адамантил.
Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 98-104, используя со-ответствующие 3-(2-адамантил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.
Примеры 111-116. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH2R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - следующая 1-адамантильная группа:
пример 111: R - 1-(2-метил)-адамантил;
пример 112: R - 1-(2-хлоро)-адамантил;
пример 113: R - 1-(2-трифторметил)-адамантил;
пример 114: R - 1-(2-метокси)-адамантил;
пример 115: R - 1-(2-фтор)-адамантил;
пример 116: R - 1-адамантил.
Вещества получают, следуя способами приведенным в примерах 98-104, используя со-ответствующие 3-(1-адамантил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.
Пример 117. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального инъ-екцирования для испытания вещества (IVA). Интраперитональный инъекцируемый рас-твор, содержащий вещество (IVA), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.
Пример 118. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержа-щую вещество (IVA) примера 117 в дозе 30 мг вещества (IVA) инъекцией дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определен-ное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстра-гируют с помощью холодной 0,5N НClO4 и нейтрализуют твердым NH4HCO3. После удале-ния перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонке с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взя-той у животных, получающих вещество (IVA).
Примеры 119-129. Вещества, полученные как в примерах 106-116, использованы для приготовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 117, и полученные инъекцируемые растворы испытывают в соответствии со способом при-мера 118. Наблюдают увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, полу-чающих вещества настоящего изобретения.
Пример 130. В этом примере получают 3-циклопентилпропионитрил. 3-Циклопентилпропионитрил хлорид (57,7 г, 0,36 моль) добавляют по каплям к большому из-бытку концентрированного гидроксида аммония (400 мл), охлажденного в бане лед/соль. Тяжелую суспензию белого твердого вещества перемешивают в течение ночи, собирают фильтрованием, промывают холодной водой и перекристаллизовывают из примерно 2 лит-ров кипящей воды. Блестящие белые пластинки амида сушат в вакууме над Р2О5, выход 31,6 г (62,3%), т.пл. 122С.
С защитой от атмосферной влаги раствор амида (23,5 г, 0,166 моль) в РОСl3 (150 мл) нагревают при 12С в течение 1 часа. Масляную баню охлаждают до около 70С и избыток РОСl3 отгоняют в вакууме, и охлажденный остаток наливают на лед (около 300 г). Смесь нейтрализуют путем осторожного добавления твердого Na2CO3 и экстрагируют с помощью нескольких порций Еt2О. Высушенный над Na2SO4 экстракт выпаривают, получая прозрач-ное бледножелтое масло, которое перегоняют в вакууме, получая желаемый нитрил; выход 16,86 г (82%), т.кип. 88,0-88,5С/8,7 мм. MS (EI): m/z 122 (М-Н)+; ИК (cap, пленка), 2245 см-1 (CN); 1Н ЯМР,  1,67 (q, 2, - CH2CH2CN), 2,36 (t, 2, -CH2CN), комплексные мультиплеты, центрированные около 1,11, 1,63, 1,86 (циклопентильные протоны).
Пример 131. 3-Циклопентилпропионитрил предыдущего примера далее обрабатывают в синтезах изобретения. В атмосфере сухого N2 смесь 3-циклопентилпропионитрила (14,8 г, 0,12 моль), гидрида натрия (5,8 г, 0,24 моль) и безводного тетрагидрофурана (300 мл) нагре-вают при 52С на водяной бане в течение 15 минут, и раствор этилового эфира муравьиной кислоты (13,3 г, 0,18 моль) в ТГФ (100 мл) добавляют в течение 45 минут. Через 2 часа при 50-55°С добавляют вторую порцию NaH (1,9 г) и HCO2Et (5,0 мл), за которой в течение 30 минут следует третья порция HCO2Et (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован при первой стадии очистки). Крутую пасту перемеши-вают в течение ночи и дают возможность охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении и оставшуюся бледножелтую корку рас-творяют в минимальном объеме холодной воды (около 150 мл) при 0С. Раствор доводят до рН 6,0 добавлением 6N НСl и экстрагируют СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт промывают водой, сушат над Na2SO4 и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт (15,6 г) используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.
Пример 132. Гидрохлорид метилового эфира глицина (19,31 г, 0,154 моль) и безводный ацетат натрия (12,61 г, 0,154 моля) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (15,6 г) в МеОН/Н2О (4:1, 500 мл). Через 24 часа МеОН выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью СНСl3. Слой СНСlз высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование с помощью СНСl3 дает два основных слоя: 3-циклопентилпропионитрил (8,22 г, 66,7 ммоль или 55,6% нитрила, использованного в качестве исходного вещества в преды-дущей стадии); желаемый енамин (3,45 г, 29,1% от теоретического выхода, с поправкой на количество нитрила, присутствующего в исходном веществе; MS (FAB): 223 (M+H)+.
Пример 133. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (2,53 г, 23,3 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина предыдущего примера (3,45 г, 15,5 ммоль) и DBN (5,78 г, 46,6 ммоль) в сухом СH2Cl2 (50 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0°С в течение 1 часа раствор выдерживают при комнатной тем-пературе в течение ночи. После проверки хода реакции по ТСХ, вводят дополнительное ко-личество ClCO2Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для завершения реакции и раствор выдерживают в течение 24 часов. Летучее вещество испаряют в вакууме, вязкий остаток очищают на корот-кой колонке с силикагелем (главная цель которой - удаление менее мобильного DBN), полу-чая N-защищенный пиррол (4,50 г, 98%), который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 134. К раствору N - защищенного пиррола предыдущего примера (4,50 г, 15,3 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляют твердый Na2CO3 (1,62 г, 15,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 часов с отделением получен-ного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха и остаток тщательно растирают в порошок с Н2О (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт сушат (Na2SO4) и выпаривают, получая вязкую смолу, которую кристал-лизуют при высушивании в вакууме; выход 2,97 г (87,4%) вещества, пригодного для исполь-зования в качестве промежуточного соединения без дальнейшей очистки. Более глубокая очистка может быть осуществлена колоночной хроматографией, с применением силикаге-ля/СНСl3 или перекристаллизацией из смеси толуол/циклогексан (1:3).
Пример 135. Бензоилизотиоцианат (2,62 г, 16,03 ммоль) добавляют по каплям к раство-ру деблокированного пиррола примера 134 (2,97 г, 13,36 ммоль) в сухом СH2Cl2 (100 мл). Через 1 час при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток раство-ряют в Еt2O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого веще-ства, выход 1,75 г. Фильтрат Еt2O нагревают до кипения и разбавляют с помощью равного объема горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительные 1,58 г тиоуреидопроизводного; общий выход 3,33 г (64,6%). Небольшое количество тиоуре-идосоединения перекристаллизовывают из горячей смеси Еt2O/циклогексан (15 мл каждого); т.пл. 123-12С. MS (FAB): 386 (M+Н)+.
Анализ для C20H23N3O3S0,45С6Н12: вычислено: С, 64,40; Н, 6,76; N, 9,93; найдено: С, 64,51; Н, 7,10; N, 9,93.
Пример 136. Иодистый метил (2,60 г, 18,32 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидо соединения примера 135 (3,21 г, 8,33 ммоль) и DBN (1,24 г, 9,99 ммоль) в сухом СH2CI2 (80 мл) при 0°С. Раствор перемешивают при 0С в течение 15 минут, при температуре окружа-ющей среды в течение 1 часа, а затем испаряют в вакууме. Раствор остатка в СНСl3 хромато-графируют на колонне с силикагелем с помощью СНСl3 в качестве растворителя для элюи-рования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного продукта; выход 2,46 г (74%).
Пример 137.


Раствор метилтиосоединения примера 136 (2,07 г, 5,18 ммоль) в 150 мл МеОН, кото-рый был насыщен NH3 при 0°С, нагревают при 90-95°С в течение 24 часов в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы вы-паривают в вакууме, получая смесь вещества (IVC), бензамида и побочного продукта, кото-рый является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVC). Смесь энер-гично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Еt2O и нераство-римое белое вещество отфильтровывают и промывают Еt2O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Еt2O твердого вещества (1,13 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонки с силикагелем, которую затем элю-ируют с помощью смеси CHCI3MeOH/HOAc (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт (252 мг, MS (FAB): 264 (M+Н)+) и желаемое 2-аминосоединение (IVC) (679 мг, 56,4%). (IVC) перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацета-те в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над Р2О5 при 110 в течение 7 часов; выход 540 мг (44,9%), т.пл. 324-326C (разл.); MS (FAB): 233 (M+H)+.
Анализ для С12H16N4О: вычислено: С, 62,05; Н, 6,94; N, 24,12; найдено: С, 62,04; Н, 7,11; N, 24,48.
Пример 138. Вещество примера 137 испытывают на ферментативно-ингибирующую активность в соответствии со способом примера 9. При 1 mM фосфата IС50 равно 0,029 мкМ, и при 50 mM фосфата IC50 равно 1,8 мкМ.
Примеры 139-142. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH2R)-3H,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - замещенный циклопентил:
пример 139: R - 3-метилциклопентил;
пример 140: R - 2-хлороциклопентил;
пример 141: R - 3-трифторметилциклопентил;
пример 142: R - 3-метоксициклопентил.
Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 130-137, используя со-ответствующие 3-(замещенные циклопентил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.
Пример 143. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального инъ-екцирования для испытания вещества (IVC). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество (IVC), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.
Пример 144. Используя способ примера 112, вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержащую вещество (IVC) примера 143 и результаты сравнивают с контрольными. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещество (IVC).
Пример 145. В этом примере получают 3-циклогексилпропионитрил. Раствор цикло-гексанпропионовой кислоты (50 г, 0,32 моль) и хлористого тиснила (152 г, 1,28 моль) в 100 мл бензола выдерживают в течение ночи и затем выпаривают до маслообразного остатка. Остаток добавляют порциями к 28%-ному водному 30 раствору аммиака (270 мл) при 25С и смесь перемешивают в течение примерно 2 часов. Полученный продукт собирают фильтро-ванием, промывают холодной водой и перекристаллизовывают из около 2 литров кипящей воды. Блестящие белые пластинки амида высушивают в вакууме над Р2O5; выход 45,5 г.
С защитой от атмосферной влаги раствор амида (45,5 г, 0,293 моль) в SOCI2 (200,3 г, 1,68 моль) кипятят с обратным холодильником в течение примерно 6 часов. Масляную баню охлаждают до около 70С и избыток SOCl2 отгоняют под вакуумом, и охлажденный остаток выливают на лед (около 300 г). Смесь нейтрализуют путем осторожного добавления твердо-го Na2CO3 и экстрагируют с помощью нескольких порций Еt2O. Высушенный (Na2SO4) экс-тракт выпаривают, получая прозрачное, бледножелтое масло, которое перегоняют в вакууме, получая желаемый нитрил, выход 42,0 г.
Пример 146. 3-Циклогексилпропионитрил примера 145 далее используют в синтезе для получения соединений настоящего изобретения. В атмосфере сухого N2 смесь 3-циклогексилпропионитрила (22,3 г, 0,16 моль), гидрида натрия (5,38 г, 0,224 моль) и безвод-ного тетрагидрофурана (120 мл) нагревают при 52°С на водяной бане в течение 15 минут, и добавляют раствор этилового эфира муравьиной кислоты (55,4 г, 0,75 моль) в THF (50 мл) в течение 45 минут. Через 2 часа при 50-55°С добавляют вторую порцию NaH (2,0 г) и HCO2Et (5,0 мл) (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенери-рован при первой стадии очистки), и реакционную смесь перемешивают в течение пример-но 3 дней при 55°С и затем дают охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении и оставшуюся бледножелтую корку растворяют в минимальном количестве холодной воды (около 75 мл) при 0С. Раствор доводят до рН 6,0 добавлением 6N НСl и экстрагируют СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт промывают водой, сушат над Na2SO4 и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт ис-пользуют в следующей реакции без дальнейшей очистки.
Пример 147. Гидрохлорид метилового эфира глицина (30,60 г, 0,24 моль) и безводный ацетат натрия (19,99 г, 0,24 моль) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (25,22 г) в смеси МеОН/Н2О (4:1, 500 мл). Спустя 24 часа МеОН ис-паряют в вакууме, смесь воды и масла экстрагируют СНСl3. Слой СНСl3 высушивают (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование СHCl3 дает два основных слоя: (1) 3-циклогексилпропионитрил (использо-ванный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии) и (2) желаемый енамин; вы-ход 16 г.
Пример 148. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (1,38 г, 12,7 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 147 (2,0 г, 8,46 ммоль) и DBN (2,1 г, 16,9 ммоль) в сухом СH2CI2 (50 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После пере-мешивания при 0С в течение 1 часа раствор выдерживают при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции по ТСХ вводят дополнительное количество ClCO2Et (0,5 мл) и DBN (1,5 мл) для завершения реакции, и раствору дают постоять в тече-ние 24 часов. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на корот-кой колонне с силикагелем (цель которой - удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 149. К раствору N-защищенного пиррола примера 148 (2,6 г, 8,43 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляют твердый Na2CO3 (2,23 г, 21,07 ммоль) и реакционную смесь пере-мешивают при комнатной температуре в течение 48 часов с отделением полученного дебло-кированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, и остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с помощью СНСl3 (3 х 25 100 мл). Экстракт сушат (Na2SO4) и испаряют, получая вязкую смолу, которую очи-щают на колонне с силикагелем, используя СНСl3 в качестве растворителя для элюирования; выход 1,67 г (84%), т.пл. 73-74C.
Пример 150. Бензоилизотиоцианат (0,74 г, 4,02 ммоль) добавляют по каплям к раствору 30 деблокированного пиррола примера 149 (0,95 г) в сухом СH2Cl2 (20 мл). Спустя 1 час при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растворяют в Et2O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого вещества. Маточник Et2O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медлен-ном охлаждении раствор дает дополнительно тиоуреидопроизводное; выход 1,41 г (88%), т.пл. 156-157С.
Пример 151. Иодистый метил (1,1 г, 7,6 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидопроиз-водного примера 150 (0,96 г, 2,61 ммоль) и 1,<5-диазабицикло[4,3,0]нон-5-ена (0,38 г, 3,0 ммоль) в сухом CH2Cl2 (20 мл) при 0С. Раствор перемешивают при 0°С в течение 15 минут, при температуре окружающей среды в течение 1 часа и затем выпаривают в вакууме. Рас-твор остатка в СНСl3 хроматографируют на колонке с силикагелем с СНСl3 в качестве рас-творителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как проме-жуточного вещества, выход 0,92 г.
Пример 152.


Раствор метилтиосоединения примера 151 (0,8 г, 1,93 ммоль) в мл МеОН, который был насыщен NH3 при 0С, нагревают при 90-95°С в течение 24 часов в футерованной стеклян-ными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпарива-ют в вакууме, получая смесь вещества (IVD), бензамида и побочного продукта, который яв-ляется 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVD). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Еt2О, и нерастворимое твердое белое вещество отфильтровывают и промывают с помощью Еt2O. Фильтрат содер-жал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Еt2О твердого вещества (0,390 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Из-мельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонки с силикаге-лем, которую затем элюируют смесью СНСI3/МеОН/НОАс (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVD). (IVD) перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над Р2О5 при 110C в течение 7 часов; выход 49%, т.пл. – более 300°С.
Анализ для C13H18N4O: вычислено: С, 63,39; Н, 7,36; N, 22,74; найдено: С, 63,50; Н, 7,74; N, 22,67.
Пример 153. Вещество примера 152 испытывают на ферментативную ингибирующую активность, как в примере 105. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,037 мкМ, и при 50 mM фос-фата IC50 равно 2,2 мкМ.
Пример 154. Вещество примера 152 испытывают для определения его эффективности по ингибированию токсичности 2-дезоксигуанозина (d-GuО) (D.A.Schewach еt а1., Cancer es., 46, 519 (1986) и J.С.Sirear et al., Agents and tions, 21, 253 (1987)). Для этого выращивают CCRF-CEM клетки в RPMI-1640 среде. К суспендированным культурам этих клеток добав-ляют d-GuO при стационарной концентрации (5,62 мкМ) и вещество при переменной кон-центрации, и определяют число клеток в Coulter счетчике через 24, 48 и 72 часа после этого. Из этих данных рассчитывают IC50, равную 2,0 мкМ, как концентрацию вещества, требуе-мую для снижения роста числа клеток между 0 и 72 часами на 50% от клеток контрольных культур.
Пример 155.


Получают 2-амино-7-(3-метилциклогексилметил)-3Н,5Н-пирроло [3,2-d]пиримидин-4-oн. Сначала, используя способы, приведенные в примерах 146-152 выше, но с 3-(3-метилбензил)-пропионитрилом в качестве исходного вещества, получают арильное произ-водное 2-амино-7-(3-метилбензил)-3Н,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он. Раствор арильно-го производного (0,2 г, 0,78 ммоль) в трифторуксусной кислоте (TFA) (20 мл) гидрируют с помощью PtO2 при давлении 60 фунтов/дюйм в течение 24 часов. Катализатор отфильтро-вывают через цеолитный слой и фильтрат выпаривают. Остаток растирают в порошок с по-мощью метанола и оставляют в холодильнике на ночь. Полученная кристаллическая три-фторацетатная соль осаждается из раствора и собирается фильтрованием. TFA-соль суспен-дируют в 8 мл воды, доводя до рН 8 конц. NH4OH и измельчают ультразвуком. Чистый про-дукт собирают, промывают водой и сушат; выход 165 мг (81%), т.пл. 282С.
Анализ для C14H20N4O: вычислено: С, 64,60; Н, 7,74; N, 21,52; найдено: С 64,24; Н, 7,96; N, 21,51%.
Пример 156.


Способа описанный в примере 155, повторяют для получения 2-амино-7- (3-трифторметилциклогексилметил)-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-она, используя 3-(3-трифторметилбензил)-пропионитрил в качестве исходного вещества; выход 69%, т.пл. 165С.
Анализ для С14Н17N4ОF30,6H2O: вычислено: С, 51,72; Н, 5,64; N, 17,23; найдено: С, 51,82; Н, 5,71; N, 16,81%.
Пример 157. Вещество, полученное в примере 155, испытывают на ферментативно - ингибирующую активность, как в примере 105. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,025 мкМ, и при 50 mM фосфата IС50 равно 0,820 мкМ.
Пример 158. Вещество, полученное в примере 156, испытывают на ферментативно - ингибирующую активность, как в примере 105. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,020 мкМ, и при 50 mM фосфата IC50 равно 0,740 мкМ.
Пример 159. В этом примере 3-циклогептилпропионитрил получают в соответствии со способом примера 97, используя раствор 2-бромциклогептана (25,57 г, 144,38 ммоль), Bu3SnH (50,42 г, 173,26 ммоль), акрилонитрила (15,32 г, 288,77 ммоль) и AIBN (1,13 г) в то-луоле (300 мл). Выход составляет 16 г. в виде масла.
Пример 160. 3-Циклогептилпропионитрил примера 159 далее используют в синтезе для получения соединений изобретения. В атмосфере сухого N2 смесь 3- циклогептилпропи-онитрила (8,5 г, 56,19 ммоль), гидрида натрия (2,6 г, 112,39 водяной бане в течение 15 ми-нут, и раствор этилового эфира муравьиной кислоты (20,81 г, 280,99 ммоль) в THF (100 мл) добавляют в течение 45 минут. Спустя 2 часа при 50-55°С добавляют вторую порцию NaH (1,35 г) и HCO2Et (10,4 г), за которой через 30 минут следует третья порция HCO2Et (непро-реагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован на первой стадии очистки). Густую пасту перемешивают в течение ночи и дают охладиться до комнат-ной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении и оставшуюся бледножелтую корку растворяют в минимальном объеме холодной воды (около 150 мл) при 0С. Раствор доводят до рН 6,0 добавлением 6N НСl и экстрагируют с помощью СНСl3 (3 х 100 мл). Экстракт промывают водой, высушивают над Na2SO4 и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без даль-нейшей очистки.
Пример 161. Гидрохлорид метилового эфира глицина (9,35 г, 74,47 ммоль) и безвод-ный ацетат натрия (6,10 г, 74,47 ммоль) добавляют к сырому формильному производному примера 160 (8,9 г, 49,65 ммоль) в смеси МеОН/Н2О (4:1, 250 мл). Спустя 24 часа МеОН вы-паривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью СНСl3. Слой СНСl3 су-шат (Na2SO4) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силика-гелем. Элюирование СНСl3 дает два основных слоя: (1) 3-циклогептилпропионитрил (ис-пользованный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии) и (2) желаемый ена-мин, который перекристаллизовывают из смеси CHCl3/Et2O; выход 6,18 г, т.пл. 57-58°С.
Пример 162. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (4,01 г, 37,03 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 161 (6,18 г, 24,69 ммоль) и DBN (9,19 г, 74,04 ммоль) в сухом СH2CI2 (100 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. По-сле перемешивания при 0С в течение 1 часа раствору дают постоять при комнатной темпе-ратуре в течение ночи. После проверки хода реакции по ТСХ добавляют дополнительное количество CICO2Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для завершения реакции, и раствору дают по-стоять в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонке с силикагелем (главная цель которой - удаленно менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальней-шей очистки.
Пример 163. К раствору N-защищенного пиррола примера 162 (7,8 г, 24,19 ммоль) в МеОН (100 мл) добавляют твердый Na2CO3 (6,41 г, 60,48 ммоль), реакционную смесь пере-мешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблоки-рованного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с помощью СНСlз (3 х 100 мл). Экстракт сушат (Na2SO4) и выпаривают до получения вязкой смолы, которую очищают колоночной хроматографией, используя силикагель/СНОз; выход 4 г, т.пл. 88-89°С.
Пример 164. Бензоилизотиоцианат (1,5 г, 8,96 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 163 (1,99 г, 7,95 ммоль) в сухом СН2Сl2 (50 мл). Спустя 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолообразный остаток растворяют в Еt2O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого вещества. Ма-точник Еt2O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное тиоуреидосоединение; выход 2,89 г (88%), т.пл. 158-159°С.
Пример 165. Йодистый метил (1,7 г, 11,96 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидосо-единения примера 164 (1,7 г, 4,1 ммоль) и DBN (0,56 г, 4,52 ммоль) в сухом СН2Сl2 (80 мл) при 0°С. Раствор перемешивают при 0°С в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч, затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в СНClз хроматографи-руют на колонне с силикагелем с СНСlз в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного вещества.
Пример 166.



Раствор метилтиосоединения примера 165 (1,72 г, 4,02 ммоль) в 50 мл МeОН, который был насыщен NНз при 0°С, нагревают при 90-95°С в течение 24 ч в футерованной cтеклян-ными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпарива-ют в вакууме, получая смесь вещества (IVE), бензамида и побочного продукта, который яв-ляется 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVE). Смесь энергично перемешивают с приблизительно 75 мл Еt2O, нерастворимое белое твердое вещество от-фильтровывают и промывают Еt2O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Еt2O твердого вещества (0,850 г) в МеОН выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонны с сидикагелем, которую затем элюируют с помощью смеси СНС1з/МеОН/НОАс (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVE). (IVE) продукт перекристаллизовывают при экстрак-ции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над Р2SO5 при 110°С в течение 7 ч; выход 54%, т.пл. - бо-лее 300°С (разл.).
Анализ для С14Н20N4O: вычислено: С 64,60; Н 7,74; N 21,52; найдено: С 64,78; Н 8,01; N 21,61.
Пример 167. Вещество примера 166 испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 105. При 1 mM фосфата IС50 равно 0,030 мкМ, при 50 mМ фосфата IС50 равно 0,840 мкМ.
Используя способ примера 97, из 1-бромнорборнана получают 3-(1-норборнанил)-пропионитрил, и из 2-бромнорбортона получают 3-(2-яорборнанил)-пропионитрил (смесь 2-экз и 2-эндо). Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещества (IVF), (IVG) и (IVH).
Пример 169. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло[3,2,1]октанил)-пропионитрил, 3-(2-бицикло[3,2,1]октанил)-пропионитрил, 3-(3-бицикло[3,2,1]октанил)-пропионитрил и 3-(8-бицикло[3,2,1 ]октанил)-пропионитрил получают соответственно из 1-бромбицикло [3,2,1]октана, 2-бромбицикло [3,2,1]октана, 3-бромбицикло[3,2,1]октана и 8-бромбицикло[3,2,1]октана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в веще-ство (IVI) и родственные 2-бицикло [3,2,1] октанил-; З-бицикло [3,2,1]октанил- и 8-бицикло[3,2,1]-октанилпроизводные.
Пример 170. Используя методику способа, описанного в D. Farcasiu, Synthesis, 615 (1972), 6-бицикло[3,2,1]октанкарооксальдегид получают реакцией) бицикло[3,2,1]октан-6-она с триметилсульфоксоний йодидом с образованием промежуточного эпоксида, который затем превращают в альдегид обработкой эфиратом трифторида бора. Следуя способу Neth-erlands Pat., 6, 610, 204, альдегид конденсируют с циануксусной кислотой при кипячении с обратным холодильником в растворе пиридин/толуол с каталитическим количеством ацета-та аммония в течение 48-72 ч, получая соответствующий акрилонитрил. Акрилонитрил за-тем гидрируют, используя палладий-на-угле как катализатор, в метаноле, как описано Profitt et al., в J. Org. Chem., 40, 127, (1975), для получения 3-(6-бицикло[3,2,1]октанил)-пропионитрила. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в 6-бицикло[3.2.1]октанильное производное, аналогичное веществу (IVL).
Пример 171. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло[3,3,1]нонанил)-пропионитрил и 3-(3-бицикло[3,3,1]нонанил)-пропионитрил соответственно получают из 1- бромбицик-ло[3,3,1]нонана и 3-бромбицикло[3,3,1]нонана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещество (IVM) и родственное 3- бицикло[3,3,1]нонанилпроизводное.
Пример 172. Следуя способу примера 171, бицикло[3,3,1]нонан-9-он реагирует с обра-зованием соответствующего альдегида, из которого получают соответствующий 3-замещенный пропионитрил, который затем превращают в 9-бицикло[3,3,1]нонанильное производное, аналогичное веществу (IVM).
Пример 173. Следуя способу примера 170, 2-бицикло[3,3,1]нонанкарбоксальдегид реа-гирует с образованием соответствующего 3-замещенного пропионитрила, который затем превращают в 2-бицикло[3,3,1]нонанильное производное, аналогичное веществу (IVM).
Пример 174. Используя способ примера 97, 3-(1-норадамантил)-пропионитрил получа-ют из 1-бромнорадамантана и 3-(2-норадамантил)-пропионитрил получают из 2-бромнорадамантана. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в конечное веще-ство (IVN).
Пример 175. Следуя способу примера 170, 3-норадамантанкарбоксальдегид реагирует с образованием соответствующего З-замещенного пропионитрила, который затем превращают в 3-норадамантильное производное, аналогичное веществу (IVN).
Пример 176. Следуя способу примера 170, норадамантон-7-он реагирует с образовани-ем соответствующего альдегида, из которого получают соответствующий 3-замещенный пропионитрил, который затем превращают в 7-норадамантнльное производное, аналогичное веществу (IVN).
Пример 177. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло [2,2,2]октанил)-пропионитрил получают из 1-бромбицикло[2,2,2]октана и 3-(2-бицикло [2,2,2]oктанил)-пропионитрил по-лучают из 2-бромбицикло [2,2,2]октана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превра-щают в вещество (IVK) и аналогичное 2-бицикло[2,2,2]октанильное производное.
Пример 178. Используя способ примера 97, 3-(1-норборненил)пропионитрил получают из 1-бромнорборнена. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в вещество (IVI).
Пример 179. Следуя способу примера 170, 5-норборнен-2-карбоксальдегид (смесь 2-эндо и 2-экзо) реагирует с образованием соответствующего 3-замещенного пропионитрила, который затем превращают в вещество (IVJ).
Пример 180.


Приведенное выше промежуточное соединение получают в этом примере по методике способа Schiemenz G.P., Engelhard H. (Chem. Ber., 1962, 95, 195).
Смесь циануксусной кислоты (25,38 г, 298,38 ммоль), 2,3,5-трихлорбензальдегада (25,0 г, 119.З5 ммоль), ацетата аммония (500 мг), толуола (120 мл) и пиридина (65 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 16 ч в колбе, снабженной ловушкой Дина-Старка и холодильником. Растворители выпаривают в вакууме, остаток экстрагируют с помощью СНСlз, промывают его водой, высушивают (Na2SO4), выпаривают, получая сырой продукт, который очищают колоночной хроматографией с силикагелем, ис-пользуя смесь гексан-Е10Ас в качестве растворителя для элюировання. Выход 23,69 г (73%), т.пл. 90-91°С.
Пример 181.


В этом примере получают упомянутое промежуточное соединение. К перемешиваемой смеси NaH (1,56 г, 65,05 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (14,78 г, 199,51 ммоль) в ТHF (100 мл) добавляют замещенный пентандинитрил примера 180 (10,17 г, 37,17 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота, полученную реакционную смесь пе-ремешивают в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме при комнатной темпе-ратуре. Воду (50 мл) добавляют к остатку при 0-5°С и раствор доводят до рН 5-6 20%-ной концентрации НС1 (о/о). Тяжелое масло экстрагируют этилацетатом, промывают водой (1 х 100 мл) и высушивают (MgSO4). Слой этилацетата выпаривают, получая красно-коричневое масло (11,0 г), которое используют в следующей стадии без дальнейшей очистки.
Пример 182.


В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Гидрохлорид мети-лового эфира глицина (8,17 г, 65,06 ммоль) и ацетат натрия (5,33 г, 65,06 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного соединения примера 181 (11,0 г) в смеси МеОН (80 мл) и во-ды (20 мл), полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 22 ч. После испарения растворителя при комнатной температуре остаток экстрагируют этилаце-татом. Промытый (Н2O) и высушенный (MgSO4) органический слой выпаривают, получая масло. Испарительная колоночная хроматография (силикагель), использующая СНClз в ка-честве растворителя для элюирования, дает чистый желаемый енамин в виде смеси цис-транс изомеров, которые перекристаллизовывают из МеОН; выход 10,41 г (75%,), т.пл. .142-1430С.
Пример 183.



В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Раствор енамина примера 182 (10,0 г, 26,84 ммоль) в сухом СН2Сl2 (100 мл) охлаждают до0°С и обрабатывают 1,5-диазабицикло [4,3,0]нон-5-eном (10,53 г, 84,79 ммоль) в атмосфере азота, за которым сле-дует этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (6,90 г, 63,57 ммоль). Раствор перемешивают при 0°С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 48 ч. Летучие вещества испаряют в вакууме, получая вязкую темную смолу, которую очищают испарительной коло-ночной хроматографией над силикагелем, используя СНОз в качестве растворителя для элюирования. Все фракции, содержашие желаемый М-защищенный пиррол, объединяют и выпаривают, получая пенистое, легкое, бледно-желтое вещество, которое перемешивают в МеОН (100 мл), получая кристаллическое вещество, которое перекристаллизовывают из СНСlз-МеОН; выход 8,92 г (74,7%), т.пл. 160-161°С.
Пример 184.



В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Суспензию N-защищенного пиррола примера 183 (8,6 г, 19,34 ммоль) в МеОН (300 мл) обрабатывают Nа2СОз (5,12 г, 48,34 ммоль), реакционную смесь перемешивают при комнатной температу-ре в течение 17 ч с отделением деблокированного пиррола в течение первого часа. Твердый карбонат натрия удаляют фильтрованием и хорошо промывают МеОН. Фильтрат уменьша-ют до объема 25 мл, выдерживают в холодильнике в течение 1 ч, получая 5,23 г кристалли-ческого продукта. Дальнейшая концентрация маточного раствора дает дополнительные 0,14 г чистого продукта; общий выход 6,45 г (89,5%), т.пл. 178-181°С.
Пример 185.


В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. К суспензии пирро-да примера 184 (5,83 г, 15,64 ммоль) в дихлорметане (100 мл) добавляют бензоилизотиоциа-нат (2,88 г, 17,64 ммоль) при комнатной температуре под азотом. Реакционную смесь пере-мешивают в течение 30 мин с отделением желаемого тиоурсидососдинения. Добавляют до-полнительное количество бензоилизотиоцианата (0,5 мл) и снова перемешивают в течение 30 мин. Растворитель выпаривают досуха и легкий желтый остаток растирают в порошок с метанолом. Белое кристаллическое вещество выделяют фильтрованием и перекристаллизо-вывают из смеси хлороформ - эфир, получая требуемое тиоуреидопроизводное в виде анали-тически чистого образца; выход 7,71 г (92%.),т.пл. 210-211°С.
Пример 186.


В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Раствор тиоуреидо-производного примера 185 (6,75 г, 12,6 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена (1,76 г, 14,20 ммоль) в сухом СН2Сl2 (200 мл) охлаждают до 0°С и обрабатывают йодистым метилом (5,20 г, 36,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 10 мин и затем в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают при комнатной темпера-туре, остаток экстрагируют СНClз, промывают водой (2 х 50 мл), сушат (Na2SO4) и выпари-вают, получая стекловидную пену (6.95.г), которую используют в следующей стадии без очистки.
Пример 187.


В этом примере получают приведенные вещества А и В. Вещество А – вещество насто-ящего изобретения, вещество В - промежуточное соединение. Раствор метилтиопроизводно-го промежуточного вещества примера 186 (6,90 г, 12,54 ммоль) в МеОН (200 мл) насыщают при 0°С аммиаком и нагревают при 100°С а течение 20 ч а футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Реакционную смесь доводят до комнатной темпера-туры и растворитель выпаривают при комнатной температуре. Очистка сырой смеси испа-рительной колоночной хроматографией над силикагелем, используя СНОз в качестве рас-творителя для элюирования, даст 8В (1,1 г, 21%), т.пл. 290-291°С, затем СНСlз-МеОН (95:5) дает чистый 8А (2,76 г, 57,5°/о), т.пл. 284-285°С.
МS (ЕI) 381 (М+), 346 (381-Сl)+, 341 (381-СН2СN)+; ИК (КВг) 3323, 3180, 3162, 2255, 1685, 1630, 1604, 1558, 1525, 1414, 1393; 'Н-ЯМР (DМSO-d6)  3,27-3,50 (m, 2Н, СН2СN), 4,86 (t, 1Н, СН-СН2СN), 5,90 (s, 2Н, NH2), 7,15 (d, J=2 Hz, пиррольное кольцо СH), 7,57 (d, J=1,5 Hz, ароматич. СH), 7,79 (d, J=1,7 Нz, 1H, ароматич. СH), 10,50 (s, 1Н, NН-СО), 11,58 (s, 1Н, пиррольное кольцо NН).
Анализ: вычислено для С15Н10СlзN5O: С 47,08; Н 2,63; N 18,30; найдено: С 46,92; Н 2,94; N 17,05.
Пример 188. Вещество изобретения примера 187 испытывают на ферментативную ин-гибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (РNР), в котором определяют РNР активность (IС50) для вещества (8А) посредством радио-химического измерения образования [14С]-гипоксантина из [14С]-инозина (Biomedicine, 1980, 33, 39), используя селезенку теленка в качестве источника энзима. При 1 mМ фосфата IС50 составляет 0,64 мкМ, при 50 mМ фосфата IС50 составляет 10 мкМ.
Пример 189.


Cледуя способу, приведенному в примерах 180-187, 3-(3-хлорфенил)-3-(2-амино-4-оксо-3Н,5Н-пирроло{3,2-d]пиримидин-7-ил)пропаннитрил, получают, используя 3-(3-хлорфенил)-пентандинитрил в качестве исходного вещества; выход 54,5%, т.пл. 157-1580С.
NS(FAB), m/z 314(M+H)+, 273 (313-CH2CN)+; ИК (KBr) 3313, 3166, 3148, 2920, 2240, 1682, 1625, 1596, 1573, 1525; 1H-ЯМР (DMSO-d6)  3,24-3,48 (m, 2H, CH2CN), 4,41 (t, 1H, CH-CH2CN), 5,88 (s, 2H, NH2), 7,13 (d, J=3,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,20-7,50 (m, 4H, ароматич. СН), 10,44 (s, 1H, NHCO), 11,45 (d, 1H, пиррольное кольцоNH).
Анализ: вычислено для С15Н12СlN5O0,2МеОН: С 57,02; Н 4,03; N 21,87; найдено: С 57,03; Н 3,95; N 21,88.
Пример 190. Следуя способу, приведенному в примерах 180-187, могут быть получены следующие группы веществ (1-9) общей формулы:



3-Арил-3-(2-амино-4-оксо-3Н,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)пропаннитрил где Ar имеет одно из следующих значений: (1) фенил, 2,3-дихлорфенил, 3-метилфенил и 3-метоксифенил; (2) тиенил (2- и 3-); (3) фуранил (2- и 3-); (4) пиридинил (2- и 3- и 4-); (5) пир-ролил (2- и 3-); (6) тиазолил (2-, 4- и 5-); (7) 2-пиразинил; (8) пиридазинил (3- и 4-); (9) пира-золил.
Пример 191. Следуя способу, приведенному в примерах 180-187, могут быть получены следующие вещества 10-14 : 21, исходя из соответственно замещенного пентандинитрила. Вещества 15-20 и 22 получают из соответствующих ненасыщенных Аг аналогов в примере 190. В этом способе нитрильная группа в ненасыщенном аналоге превращается в амидную группу гидролизом, катализируемым кислотой или основанием, затем ненасыщенную Аг группу переводят в насыщенную R2 группу с помощью каталитического гидрирования, за которым следует вновь превращение амида в нитрил с помощью известных способов дегид-ратации.



3-(Замещенный)-3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]-пиримидин-7-ил)пропан нитрил
где R2 означает: (10) 1-адамантил; (11) 2-адамантил; (12) циклогексил; (13) циклогептил; (14) циклопентил; (15) тетрагидрофуранил; (16) тетрагидротиенил; (17) тетрагидропиранил; (18) пиразолидинил; (19) тиазолидинил:(20) пиперазинил; (21) морфолинил; (22) гексагидропи-ридазинил.
Пример 192.



В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3Н,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-фенилпропаннитрил. Раствор вещества А, полученного в примере 187 (2,0 г, 5,22 ммоль), в горячем этаноле (250 мл) и диметилформамиде (DMF) (150 мл) гидрируют над 30%-ным Рd/С катализатором (1,0 г) в присутствии триэтиламина (2,64 г, 5,0 эквивалентов) при атмосферном давлении. Спустя 5 ч реакция завершается и катализатор отфильтровывают под давлением N2. Твердое вещество, полученное после испарения филь-трата, растирают в порошок, разрушают ультразвуком с Н20 и высушивают; выход 1,28 г (88%), т.пл. 168-170°С.
МS (FAB), m/z280 (M+H)+, 239 (280-СН2СN)+; 'Н-ЯМР (DMSO-d6)  3,20-3,46 (m, 2Н, СНзСN), 4,37 (t, 1Н, СНСН2СN), 5,86 (s, 2Н, NН2), 7,05 (d, J=1,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо СH), 7,21 (t, 1Н, ароматич. СH), 7,30 (t, 2Н, ароматич. СH), 7,39 (d, J=7,5 Нz, 2Н, ароматич. СH), 10,41 (s, 1Н, NHCO), 11,40 (s, 1Н, пиррол NH).
Анализ: вычислено для С15Н13N5O: С 64,50; Н 4,69; N 25,07; найдено: С 64,68; Н 4,57; N 25,19.
Пример 193. Вещество, полученное в примере 192, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,023 мкМ, а при 50 mM фосфата IC50 равно 4,7 мкМ.
Пример 194.



В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3Н,5Н-пирроло [3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-фенилпропановую кислоту. Раствор вещества, полученного в примере 192 (0,200 г, 0,72 ммоль) в 6N НС1 (3,0 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 18 ч. Растворитель выпаривают в вакууме, остаток рас-тирают в порошок с Н2O (6 мл), доводят до рН 10 концентрации гидроксидом аммония. Не-растворимое вещество собирают фильтрованием, фильтрат повторно доводят до рН 6,8. Бе-лое вещество, которое осаждается, собирают, промывают водой и высушивают; выход 0,19 г (89%,), т.пл. 290°С (разл.).
МS (FAB), m/z 299 (М+Н)+; ИК (KВг) 3187, 3181, 1688, 1636, 1557, 1524, 1495, 1398, 1376; UV 0,1 N НС1 234 (17,15), 273 (15,05); рН 7 231 (20,05), 272 (10,72); 0,1 N NaOH 227 (22,3), 264 (7,29), 288 (6,66); 1H-ЯМР (DMSO-d6)  2,86-3,0 (dd, 1H, -CHH-), 3,02-3,14 (dd, 1H, -CHH-), 4,47 (t, 1H, СН-СН2СN), 5,85 (s, 2Н, NH2), 6,95 (d, J=3 Нz, 1Н, пиррольное кольцо СH), 7,14 (t, 1Н, ароматич. СН), 7,24 (t, 2Н, ароматич. СH), 7,33 (d, J=7,0 Нz, 2Н, ароматич. СH), 10,38 (плечо, 1Н, NHСО), 11,25 (плечо, 1Н, пиррольное кольцо NH), 11,1-12,1 (очень широкий, виден в интеграле, 1Н, СООН).
Анализ: вычислено для С15Н14N4O30,3Н2O: С 59,38; Н 4,85; N 18,45; найдено: С 59,42; Н 5,04; N 18,56.
Пример 195. Вещество, полученное в примере 194, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,012 мкМ, а при 50 mM фосфата IC50 равно 0,19 мкМ.
Пример 196.



В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-фенилпропанамид. Раствор вещества, полученного в примере 192 (0,200 г, 0,72 ммоль), в концентрированной Н2SO4 (0,5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, затем выливают на дробленый лед (5,0 г) и доводят до рН 6,8 посредством концентрации NH4OH. Осажденное твердое вещество собирают, промывают водой и высушивают; выход 0,180 г, т.пл, 199-201°С (разл.).
МS(FAB), m/z 298 (М+Н)+; ИК (КВг) 3324, 3259, 3185, 3178, 1670, 1626, 1561, 1524, 1411; 'H-ЯМР (DMSO-d6)  2,60 (dd, 1Н, -СНН-), 2,86 (dd, 1Н, -СHH-), 4,52 (t, 1Н, СН-СН2, 5,98 (плечо, 2Н, NH2, 6,67 (s, 2Н, СОNН2), 6,99 (D, j= 2,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо СH), 7,06-7,31 (m, 5Н, ароматич. CH), 10,60 (очень широкий, 1Н, NНСО), 11,37 (плечо, 1H, пир-рольное кольцо NН).
Анализ: вычиcлено для С15Н15N5O20,8Н20: С 57,80; Н 5,36; N 22,46; найдено: С 57,89; Н 5,18; N 22,36.
Пример 197. Вещество, полученное в примере 196, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC50 равно 0,20 мкМ, при 50 mM фосфата IC50 равно 6,6 мкМ.
Пример 198.



В этом примере получают вышеприведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-(3-хлорфенил)пропановую кислоту, метиловый эфир. Хлористый тиснил (0,2 г, 0,17 ммоль) добавляют к перемешиваемому метанолу (4,0 мл) при 00С. Вещество, полученное в примере 194 (0,2 г, 0,67 ммоль), добавляют, смесь перемеши-вают при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель удаляют на водном аспира-торе (30°С) и вакуумном насосе (лиофилизация), получая полутвердую массу, которую очи-щают на колонне с силикагелем, используя СНClз-МеОН в качестве растворителя для элюи-рования; выход 0,1 г, т.пл. 302-303°С (разл.)
МS (FAB), m/z 347 (М+Н); 273 (346-СН2CO2CH3)+, UV 0,1 N HCl 220 (sh), 232 (sh), 273 (15,1), pH 7 буффер 232 (18,1), 270 (7,4), 0,1 N NaOH 262 (6,5), 288 (5,9); 1H-ЯМР (DMSO-d6)  3,15 (dd, J, 2H, CH2CO2CH3), 3,48 (s, 3H, CH2CH3), 4,48 (t, 1H, -CHCH2-), 5,83 (s, 2 NH2), 7,06 ( d, J, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,19, 7,26, 7,39, (комплекс m, 4H, хлорфенил СН), 10,36 (s, 1H, 3-NH), 11,30 (d, J, 1H, 5NH).
Анализ: вычислено для С16Н15СlN4O30,3CН3OH: С 54,93; Н 4,58; N 15,72; найдено: С 54,99; Н 4,78; N 15,85.
Пример 199. Вещество, полученное в примере 198, испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Обнаружена значительная активность (IC50 = 55 nM).
Пример 200.



В этом примере получают 3-(2-амино-4-оксо-ЗН,5Н-пирроло [3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-циклогексанпропановую кислоту. Раствор вещества, полученного в примере 194 (83 мг, 0,28 ммоль) в трифторуксусной кислоте (ТFA) (15 мл) гидрируют с помощью РtO2 (83 мг) при давлении 60 фунтов/дюйм2 в течение 24 ч. Катализатор отфильтровывают через слой цеоли-та, фильтрат выпаривают при 25°С. Остаток суспендируют в воде (8 мл), доводят до рН 8,5 концентрированной NН4OН и фильтруют через Whatman фильтровальную бумагу для уда-ления примесей коричневого цвета. Бесцветный фильтрат доводят до рН 6,8, осажденное вещество фильтруют, промывают водой и высушивают; выход 65 мг (77%), т.пл. - более 300°С.
МS(FAB), m/z 305 (М+Н)+; ИК (КВг) 3330, 3194, 2926, 2852, 1683, 1639, 1557, 1522, 1401, 1377; 1Н-ЯМР (DMSO-d6): 0,85, 1,06, 1,60 (m, 11Н, циклогексил Н), 2,56 (m, 2Н, СН2СО2Н), 3,05 (m, 1Н, СН-СН2), 5,79 (s, 2Н, NН2), 6,89 (d, J = 2,5 Нz, 1Н, пиррольное коль-цо СH), 10,31 (плечо, 1Н, пиррол NН), 11,16 (s, 1Н, NHCO), 11,76 (плечо, 1Н, пиррол NH).
Анализ: вычислено для С15Н20N4O1,75Н2O: С 53,64; Н 7,05; N 16,68; найдено: С 54,03; Н 6,71; N 16,30.
Пример 201. Вещество, полученное в примере 200, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mМ фосфата IC50 равно 0,097 мкМ, а при 50 mМ фосфата IC50 равно 1,0 мкМ.
Пример 202. Получают вещество изобретения, в котором R2-СН2OРО(ОН)2. Нитриль-ную группу вещества примера 192 превращают в соответствующий амид посредством обра-ботки серной кислотой. Используя реакцию дегидратации по 'Гофману, амид превращают в соответствующий амин, который затем переводят в соответствующую
пиридиниевую соль, используя пиррилиевую соль. Превращение соли в соответствующую соль галоидоводородной кислоты достигают, используя бромид натрия, которую затем пре-вращают в эфир фосфиновой кислоты, используя триэтилфосфит. Гидролиз эфира с исполь-зованием триметилсилилбромида дает соответствующую фосфиновую кислоту.
Пример 203. В этом примере получают вещество изобретения посредством изменения числа углеродных атомов. Нитрильную группу вещества примера 192 переводят в соответ-ствующий альдегид, который затем превращают в соответствующий спирт. Используя трехбромистый фосфор, спирт превращают в соответствующий алкилбромид, который затем превращают в ацетонитрил, используя цианид калия.
Пример 204. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R2 = СН2ОР(О)(ОН)2. Спирт, полученный в качестве промежуточного соединения в предыдущем примере, превращают в соответствующий диэтилфосфонометиловый эфир, используя ди-этилхлорметилфосфонат. Удаление этильной группы эфира выполняют, используя триме-тилсилилбромид, с получением фосфиновой кислоты.
Пример 205. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R2 = СН2NНSO2NН2. Нитрильную группу вещества примера 192 восстанавливают до амина, ис-пользуя стандартное каталитическое гидрирование с помощью палладия в кислой среде (обычно 0,01N до 1N НС1), который затем превращают в сульфамид, используя сульфамоил-хлорид.
Пример 206. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R2 = СН2NHСН2СООН, путем реакции промежуточного метиламиносоедииения, полученного в предыдущем примере, с хлоруксусной кислотой.
Пример 207. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R2 = СН2NНРО(ОН)2, реакцией промежуточного производного метиламина, полученного в при-мере 206, с диэтилхлорметилфосфонатом и обработкой полученного продукта с триметил-силилбромидом.
Пример 208. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R3 = OSO2NH2, Реакцией промежуточного спирта, полученного в примере 203, с сульфамоилхло-ридом.
Пример 209. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R1 = Н, R2 = фенил, R3 = СН2СN. Используют методику способа, описанного в Mu III Lim., et al., J.Org. Chem., vol. 44, N 22, 3826 (1979). Вещество примера 184 и диметилацеталь диметилформа-мида взаимодействуют при комнатной температуре в течение 2 дней и затем выпаривают досуха в вакууме. Остаток кристаллизуется, давая чистое производное N-(диметиламино) метилена, которое цнклизуют в присутствии насыщенного метанольного раствора аммиака, получая желаемый конечный продукт.
Пример 210. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R1 = ОСНз, R2 = фенил, R3 = СН2СN. Используя вещество В примера 187, S-метильную группу окисляют до метилсульфона, который затем превращают в конечное метоксисоединение обработкой ме-токсидом натрия в метаноле.
Пример 211. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R2 = тетра-зол. Вещество примера 192 обрабатывают азидом лития в присутствии хлорида аммония в качестве катализатора в диметилформамиде (DMF) при 100°С, получая желаемый тетразол.
Пример 212. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R2 = триа-зол. Вещество примера 198 обрабатывают гидратом гидразина, получая соответствующий гидразид, который затем обрабатывают иминоэфиром, получая желаемый триазол.
Пример 213. Вещество, полученное в примере 189, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mМ фосфата IC50 равно 0,012 мкМ, а при 50 mМ фосфата IC50 равно 2,0 мкМ.
Пример 214. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R3 в приве-денной общей формуле - СNH(NН2). Вещество А из примера 187 взаимодействует с меток-сидом натрия в метаноле при комнатной температуре в течение примерно 2 дней, образуя промежуточное вещество метил-имидат. Промежуточное вещество затем реагирует с аммиа-ком в метаноле, образуя соответствующий имидин.
Пример 215. 2-амино-7-(3-хлорфенил-3-гидроксипропил)-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пири-мидин-4-он



Размешанную суспензию метилового сложного эфира примера 198 (6,00 г, 17,3 ммоль) и сухого (NН4)2SO4 (100 мг) в гексаметилдисилазане (400 мл) кипятят с обратным холодиль-ником в течение 8 ч, одновременно обеспечивая защиту от атмосферной влаги. Прозрачный раствор уменьшают в объеме до приблизительно половины его первоначального объема пу-тем дистиллирования при атмосферном давлении, а оставшиеся гексаметилдисалазаны вы-паривают в вакууме, получая триметилсилилпроизводное в виде вязкой смолы, которую затем высушивают над Р2O5. Сырой продукт затем используют в последующей реакции без дальнейшей очистки: МS (FAB), m/z 491 (М+Н)+.
Раствор LiAlH4 в тетрагидрофуране (26 мл 1М, 26 ммоль) добавляют по каплям в рас-твор триметилсилилировлнного сложного эфира (предположительно 17,3 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (200 мл). После размешивания в течение 1 ч избыток гидрида разрушают путем добавления ЕtOАс (100 мл) и все растворители выпаривают в вакууме. В размешан-ную суспензию остатка в холодной Н2O (200 мл) добавляют разведенную НСl до тех пор, пока рН не достигнет 1 и по истечении 15 мин рН доводят до 7 с помощью раствора NaOH. Твердое вещество собирают фильтрованием, промывают холодной Н2O, слегка высушивают в вакууме, затем порошкуют путем размешивания со смесью 1:1 (100 мл) циклогексана и Еt2O. Твердое вещество отфильтровывают и частично высушивают в воронке под потоком N2. Раствор твердого вещества в горячем МеОН выпаривают досуха с силикагелем (отвер-стия 230-400 меш, 50 г), смесь осторожно наносят на верх колонны с силикагелем, затем элюируют с помощью смеси СНС13/МеОН в соотношении 17:3 и 4:1, получая желаемый спирт (4,65 г, 84%). С помощью двух перекристаллизаций из Н2O/ЕtOН в соотношении 2:1 получают банде кристаллы, которые затем высушивают в вакууме над Р2O5 в течение 30 ч при 110°С; выход 3,36 г (61%).
МS(FAB), m/z319 (М+Н)+; 321 (Cl изотопный пик 319)+, 301 (318-ОН)+, 151 (В + 2Н)+; UV 0,1 NHCl 233 (17,9), 274 (15,7), рН 7 буффер 230 (22,3), 272 (10,6), 0,1 N NaОН 266 (7,3), 288.(6,7); 1Н-ЯМР (DMSO-d6)  2,07, 2,21 (2 секстета 1Н каждый, -СНСН2СН2OН), 3,29 (m, 1Н, -СН2OН), 4,17 (1, 1Н, -СНСН2СН2OН), 4,45 (t,. 1Н.-СН2OН), 5,79 (s, 2Н, NН2), 7,09 (d, J, 1Н, пиррольное кольцо СH), 7,18, 7,27, 7,34 (комплекс m, 4Н, хлорфенил СН), 10,36 (s, 1Н, 3-NН), 11,29 (d, J, 1Н, 5-NН).
Анализ: вычислено для С15Н15СlN4O2: С 56,52; Н 4,74; N 17,58; найдено: С 56,51; Н 4,84; N 17,49.
Пример 216. 2-амино-7-(1-циклогексил-3-гидроксипропил)-3Н,5Н-пирроло[3,2-d]-пиримидин-4-он



Раствор спирта из примера 215 (100 мг, 0,314 ммоль) в СF3СООН (20 мл) гидрогенизи-руют путем размешивания с платиновым катализатором (100 мг РtO2) в аппарате Парра при первоначальном давлении в 60 фунтов/дюйм. Катализатор удаляют путем фильтрации через тонкий слой цеолита под N2. Фильтрат выпаривают, остаток дважды растворяют в МеОН (5,0 мл), а раствор выпаривают. Мутному раствору остатка в Н2O/конц. NН4OН (20 мл, 1:1) дают постоять в течение 4 ч при комнатной температуре, прежде чем подвергнуть его филь-трованию и выпариванию досуха. Раствор остатка в Н2O (30 мл), содержащий 2 капли 1N NаОН нейтрализуют 1N НС1 и охлаждают до 5°С. Осалившееся белое твердое вещество со-бирают фильтрацией, промывают холодной водой и высушивают в вакууме над Р2O5 при температуре 1100С в течение 6 ч; выход 63 мг (67%), т.пл. 181-186°С.
МS(FAB), m/z 291 (М+Н)+; UV 0,1 N НС1 236 (16,2), 275 (14,9), рН 7 буффер 231 (18,8), 274 (12,1), 0,1 N NаОН 230 (19,6), 268 (7,8), 288 (плечо); 1Н-ЯМР (DMSO-d6)
15 0,85, 1,08, 1,59 (комплексные мультиплеты, 11H, циклогексил СH), 1,78 (m, 2Н, -CНСН2СН2OН), 2,62 (m, 1Н, СНСН2СН2OН), 3,14, 3,17, 3,24 (комплексные мультиплеты, 2Н, -СН2OН), 4,25 (уш. 1Н, -СН2OН), 5,82 (s, 2Н, -NН2, 6,86 (d, J, 1Н, Н-6), 10,35 (уш. 1Н, 3-NH), 11,17 (d, J, 1Н, 5-NН).
Анализ вычислено для С15Н22N4O20,5Н20: С 60,18: Н 7,74; N 18,71; найдено: С 60,09; Н 7,68; N 18,73.
Пример 217. 2-Амино-7-[2-карбокси-1-(3-хлорфенил)-этил]-3Н,5Н-пирроло[3,2-d]-пиримидин-4-он




2-Амино-7-[2-пиано-1-(3-хлорфенил) этил]-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (20 г, 63,75 ммоль) гидролкзуют до получения соответствующей кислоты с помощью способа, описанного в примере 194. Выход: 18 г (84,9%), т.пл. 295-296°С.
МS(FAB), m/z 333 (М+Н)+; ИК(КВг) 3182, 3170, 1686, 1639, 1596, 1572, 1525, 1477, 1402, 1377; UV 0,1 N НС1 235 (17,2), 273 (15,42); рН 7 233 (20.2), 272 (1058), 0,1 N NаОН 231 (20,9), 263 (7,2), 288 (6,67); 1Н-ЯМР (DMSO-d6)  2,96 (m, 2Н, СН2СN), 4,48 (t, 1Н, СН-СН2СN), 6,06 (уш. 2Н, NН2), 7,11 (d, J = 2,6 Нz, 1Н, пиррольное кольцо СН), 7,21 (d, J = 8 Нz, 1Н, ароматичен), 7,25-7,46 (m, 3Н, ароматич. СH), 10,3-11,0 (очень широкий, виден в инте-грале, 1Н, NH или СООН), 10,42 (уш. 1Н, пиррольное кольцо NH), 11,7-12,3 (очень широ-кий, виден в интеграле, 1Н, NН или СООН).
Анализ: вычислено для С15Н14N4O30,ЗН2O: С 59,38: Н 4,85; найдено: С 59,42; Н 5,04; N 18,56.
Пример 218. 7-[2-циано-1-(3-хлорфенил)-этил]-3Н.5Н-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-он



К раствору 3-(2-метилтио-4-оксо-ЗН,5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-(3-хлорфенил)пропаннитрила (1,0 г) в этаноле (100 м) добавляют 30% Pd/С и образовавшуюся суспензию кипятят с обратным холодильником в течение нескольких минут. Затем при по-стоянном помешивании добавляют гидрат гидразина (300 мл), реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней. Затем добавляют дополнительные порции гид-рата гидразина (300 мл) и Рd/С (0,5 г) и реакционную смесь кипятят с обратным холодиль-ником еще 4 дня. Катализатор удаляют фильтрацией, фильтрат уменьшают в объеме до 75 мл, фильтруют и выпаривают, получая желаемый продукт в виде белого твердого вещества; выход 0,82 г (94,7%); т.пл. 230°С.
МS(FAB), 299 (М+1)+; ИК (КВг) 3166, 3155, 3150, 3142, 3133, 3093, 2248, 1673, 1595, 1414; UV (0,1 N НС1), 237 (27,8); рН 7; 262(9,9), 233(31,1); 0,1N NаОН. 268(8,9); 1Н-ЯМР (DMSO-d6)  3,3-3,52 (m, СН2СN), 4,6 (t, 1Н, СНСН2-СN), 7,24-7,56 (m, ароматич. СH и Н-6), 7,84 (s, Н-2), 11,95 (s, NНСО), 12,11 (s, пиррол NH).
Анализ: вычислено для С15Н11СlN4O: С 60,31; Н 3,71; N 18,75; найдено: С 60,19; Н 3,92; N 18,41.
IC50 для РNР = 10 nМ.
В таблице приведены данные по ингибированию пролиферации Т-лимфоцитов . Вы-шеуказанные соединения не были способны ингибировать пролиферацию В-лимфоцитов в концентрации 100 мкМ, тем самым демонстрируя присущую им селективность по отноше-нию к Т-лимфоцитам.

Irenc S. Kuzmers et al. Science, 1981, v.214, p. 1137-1139