Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и штамм, выделенного от больного пастереллезом животного, имеющий высокую антигенную активность, которая используется для изготовления вакцины с целью специфической профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных.
В настоящее время в животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан для специфической профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных используется инактивированные моновакцины производства ФКП Ставропольской биофабрики Российской Федерации. Вакцины состоят из культур Пастерелла мултосида (Pasteurella multosida), инактивированных формалином и добавлением адъюванта-гидроокись алюминия.
Пастереллез - инфекционная болезнь многих видов млекопитающих и птиц, характеризующаяся при остром течении признаками септицемии, при подостром и хроническом - преимущественно поражением лёгких, и воспалительно-геморрагическими процессами в внутренних органах, на серозных и слизистых оболочках.
Возбудитель- Pastеurella multosida.
Классификация возбудителя:
Семейство: Pasteurellaceae.
Род: Pasteurella.
Вид: Pasteurella multosida.
Болеют многие виды сельскохозяйственных (крупный рогатый скот, овцы, козы) и диких животных, в т.ч. птицы (холера птиц).
Пастереллы широко распространены в природе и наносят значительный экономический ущерб животноводческим хозяйствам.
Известно 4 серотипов бактерий данного рода, некоторые из них обладают патогенностью для животных [1].
Также отмечены случаи заболевание пастереллезом людей [2].
Пастереллы - неподвижные, грамотрицательные, не образующие спор бактерии, располагающиеся изолированно, иногда парами и реже цепочками. При окрашивании мазков из крови и органов выявляется биполярность. Бактерии, выделенные от разных видов животных по морфологическим, культуральным свойствам сходны, но патогенность их наиболее высока для того вида животных, от которого они выделены.
Устойчивость возбудителя к воздействию внешних факторов и химических веществ невысокая. В навозе, земле и гниющих трупах пастереллы остаются жизнеспособными в течении 1-3 мес. При высушивании на открытом воздухе и солнце они погибают в течение 48 ч., под действием прямых солнечных лучей за 10-15 мин.
Все дезинфицирующие вещества в обычных концентрациях губительно действуют на бактерии в течение нескольких минут [2,3].
К факторам, способствующим эпизоотическому распространению пастереллеза среди мелкого рогатого скота, следует отнести массовые передвижения животных весной и осенью без должного учета степени благополучия фермерских, частных и крупных животноводческих хозяйств по пастереллезу, отсутствие надлежащей организации хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий в указанных хозяйствах [3].
В борьбе с указанными инфекционными болезнями важное значение имеет своевременная диагностика и специфическая профилактика-повышение иммунологической реактивности организма животных, особенно молодняка мелкого рогатого скота и проведение соответствующих санитарно-ветеринарных мероприятий.
Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие животные, который выделяют во внешнюю среду возбудителя при кашле, со слюной, фекалиями. Заражение животных происходит в основном через дыхательные пути или пищеварительный тракт, возможно и заражение через поврежденную кожу.
Болезнь у животных протекает в виде сверхострого, острого, подострого течения, а по локализации инфекционного процесса и клиническому проявлению - септическую, грудную, отечную и кишечную формы [3].
В последние годы в овцеводческих хозяйствах Республики Таджикистан в значительной степени возросло количество случаев возникновения инфекций, вызываемых пастереллезом. В отдельных хозяйствах Районов республиканского подчинения при изучении эпизоотологии инфекционных болезней молодняка сельскохозяйственных животных в 64 % случаях выделены пастереллы, сальмонеллы, кишечная палочка и др. [4-5].
Известен штамм Pasteurella multosida сероварианта В, исходные культуры которого обладали слабой вирулентностью: значение LD50 которого составляет 0,8х109 микробных клеток после пассажа на питательные среды с добавлением 10% сыворотки крови лошади, вирулентность их также не повышалась, увеличение вирулентности достигали путем пассажа через организм белых мышей и кроликов [6].
Недостатком данного штамма является возможность реверсии к первоначальным свойствам, то есть к ослаблению вирулентности, что при изготовлении вакцин из такого штамма может привести к снижению иммуногенной активности, а следовательно, и защитных свойств.
Задачи, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, обладающего высокой антигенной активностью для овец.
Поставленная задача достигается тем, что Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 для получения биологических препаратов - штамм выделен из легочной ткани больных пастереллезом овец Племенного хозяйство «Чорводор» Вахшского района Хатлонской области экс.№ 56 от 06.09. 2013г.
Штамм Pasteurella multosida Mah.K. №02/2016 РМ TJ-02 в основном используется для производства биологических препаратов, в том числе ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и пастереллеза сельскохозяйственных животных и депонирован в Центре национальной коллекций патогенных микроорганизмов Института проблем биологической безопасности Таджикской академии сельскохозяйственных наук.
Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 для получения биологических препаратов растет на плотных питательных средах в аэробных условиях в виде мелких, прозрачных, с ровным краем круглой формы колоний, которые флуоресцируют в проходящем свете.
На жидких питательных средах - видны умеренное помутнение, на дне слизистый осадок, при встряхивании пробирки поднимается в виде «косички». В жидких мясных питательных средах интенсивный рост штамма Pasteurella multosida №02/2016 PMTJ-02 происходит в течение 24-36 часов, часто с образованием слизи. При посеве на среды Гисса с углеводами ферментировал глюкозу, сахарозу, лактозу, дульцит, глицерин, салицин, инулин, рамнозу раффинозу, редуцирует нитраты, не образует уреазу, не обладает гемолитической активностью, продуцирует индол, не разжижает желатин и не свёртывает молоко.
Таксономическая принадлежность.
Данный штамм отнесен к семейству Pastereullaceae, виду Pasteurella multosida.
Патогенность для животных.
Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 для получения биологических препаратов патогенен для мелкого рогато скота и лабораторных животных.
Культурально-морфологические признаки.
Для выделения и поддержания культур используют обычные среды: МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, обогащенные сывороткой кровы лошади. Оптимальная температура 37оС, рh-среды 7- 7,4. Имеет форму овоидов или коротких палочек. ри взаимодействии с раствором 1:1000 сивный хлопьевидный флокулятный бульон. На жидких средах образует слабое помутнение с незначительным серо – белым осадком. На плотных средах через 24 часов, при 37оС образуют выпуклые, влажные, серовато – белые колонии диаметром 1 – 3мм.
Биохимические свойства штамма.
В биохимическом отношении штамм Pasteurella multosida №02/2016 РМTJ-02 ферментируют мальтозу, глюкозу, маннозу, галактозу, ферментируют сорбит и ксилозу. Не продуцирует ß- гемолизин, не ферментируют инозит, рамнозу и салицин.
Антигенный состав шамма Pasteurella multosida №02/2016 РМ TJ-02.
Имеет в своем составе капсульный и соматический антигены.
Способы и условия хранения.
Хранят штамм в пробирке при температуре +2+40С в МПА под вазелиновом масле или сахароза - желатиновой среде в течение одного года. Жизнеспособность поддерживается путем пересева на питательные среды - МПБ, МПА 1- раз каждый 3-6 месяца при условии хранения +2+40 С.
Антигенные свойства.
Антигенность штамма Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 составляет 6,8 Iog2
Иммуногенность.
Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 составляет 96%.
Вирулентность.
Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 для получения биологических препаратов является вирулентным для лабораторных животных и молодняка сельскохозяйственных животных.
Чувствительность к антибиотикам.
Штамм чувствителен в более 60% случаев к антибиотикам: Нитокс-200, Амоксициллин, Доксициклин, Окситетрациклин, Тилозин-200, Осипрол, Левоэритроциклин.
Пример 1.
Штамм Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02 выделен при посеве из кусочков легких патологической ткани на мясо-пептоный бульон с добавлением лошадиной сыворотки 1мл на пробирку. В первые сутки выращивания отмечали легкое равномерное помутнение среды. Через 6-8 дней хранения при +2 -4 0С на дне пробирки образовывался характерный слизистый осадок с полным просветлением бульона.
Пример 2.
Антигенные свойства изучали в реакции непрямой гемагглютинации в разведении сыворотки до 1024. В качестве антигена использовали бактериальную культуру штамма Pasteurella multosida Mah. K. №02/2016 РМ TJ-02. Результаты реакции показали, что антигенная активность штамм а Pasteurella multosida №02/2016РМTJ-02 составляет 6,8 Iog2.
Таким образом, штамм Pasteurella multosida №02/2016 РМ TJ-02 обладает высокой антигенной активностью-6,8 Iog2, по сравнению с известными штаммами- антигенами (4,6Iog2), который может быть использован для диагностических и профилактических препаратов в качестве штамма- антигена.
