Изобретение относится к области химии и органической химии в частности синтеза новых биологически активных химических соединений, проявляющих антибактериальность по отношению к полевым культурам: (стафилококка, нокардии, пастареллы, коринбактерии выделенных от животных заболевшим респираторным заболеванием).
В течение последнего десятилетия значительно расширились исследования в области химии и биологической активности производных глицерина, являющиеся аналогами пурина и проявляющие различные виды биологической активности: антибактериальную, противораковую, противоишемическую, противоязвенную, пестицидную и др.
Изучение фармакологических эффектов синтезированных соединений в зависимости от их состава, строения и природы замещающих групп имеет важ
ное значение в теоретическом плане. Решение таких задач позволит осуществлять целенаправленный синтез соединений с усиленным необходимым лечебным и ослабленным побочными действиями.
Одной из ведущих проблем современной медицины и ветеринарии является разработка эффективных антибактериальных средств, поиск которых ведется среди синтезированных и биологически активных природных веществ.
Известно стероидное соединение, проявляющее антимикробными свойства 3-хлор-бензо|b|тиофен -2-карбокси гидразид 3α,7α-дигидрокси-12-кето холановой кислоты [1-2], является близкой по структуре к новым соединениям, проявляющим бактерицидное действие к полевым штаммом стафилококка, нокардии, коринбактерии и пастареллы имеет формулу:
Недостаток заключается в том, что указанное соединение проявляет менее антимикробную активность по отношению к полевым штаммом стафилококка, нокардии, коринбактерии и пастареллы.
Прототипом изобретения является 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол, обладающий, как бактерио-статической, так и бактерицидной активностям. Данное соединение получили таким образом.
Реакцией хлорангидрида бензойной кислоты 4 с N-бензил-1-1(1,3-диоксолан-4-ил)метиламина и N-бензил-1-1(2,2-дихлорциклопропил)-метиламина в среде ДМФА при t = 60°С синтезированы амиды с выходом близким к количественному. Следует отметить, что вторичные амины были получены по ранее известной методике с использованием ТЭБАХ, ДМСО и гидроксида калия.
Антимикробную активность соединения 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол были изучены методом серийных разведений препаратов в мясопептонном бульоне (МПБ) в отношении эпизоотических и музейных штаммов St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae.
Из основного раствора (1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол: 5 мг препарата на 100 мл стерильной дистиллированной воды) готовили последовательные двукратные разведения в МПБ в объеме 2 мл. В приготовленные разведения вносили суспензию тест - культуры в изотоническом растворе натрия хлорида в количестве 2´102 м.к. на 1 мл среды.
Посевы инкубировали при 37оС в течение 24 – 48 ч. По истечении срока инкубации учитывали результат. Минимальной бактериостатической концентрацией
(МБсК) считали концентрацию, которая вызывала задержку роста культуры, минимальной бактерицид
ной (МБцК) (определили при пересеве на МПА) – гибель микроорганизмов (отсутствие роста). Параллельно ставили контроли на МПБ и МПА [3-4].
Недостаток изобретения заключается в том, что указанное соединение проявляет менее антимикробную активность по отношению к полевым штаммам: стафилококка, нокардии, коринбактерии и пастареллы.
Целью изобретения является получение такого соединения ряда производных холановой кислоты, которое по сравнению с известными соединениями этого ряда, обладало бы более антибактериальным характером, будучи в то же время легко синтезируемым и дешевым.
Поставленная цель достигается получением соединения 1-хлор-3-метоксиглицилопропан-2-ола 3α,7β -дигидроксихолановой кислоты
Данное соединение получают в результате нагревании смеси 3-метоксиглицилопропан-2-ола с 3α,7β -дигидроксихолановой кислоты и растворенного едкого калия в этиленгликоля.
Предложенное соединение получают следующим образом: в круглодонную колбу, снабженную обратным холодильником, помещают 20г (0,047моль) 3-метоксиглицилопропан-2-ола с 7 г 3α,7β -дигидроксихолановой кислоты составил, прибавляют 11,2 г (0,2 моль) растворенного едкого калия в 55 мл этиленгликоля. Смесь кипятит в течение 2,5 часов с обратным холодильником. Затем, соединяют колбу с нисходящим холодильником и медленно отгоняют смесь гидразина и воды, пока температура реакционной смеси не поднимется до 1950С. Температуру поддерживают до прекращения выделения азота. После охлаждения реакционную смесь разбавляют равным объёмом воды и подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН=3. Затем, несколько раз экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и сушат сульфатом натрия. После удаления растворителя осадок многократно перекристал-лизовывают из этилового спирта.
Реакцию осуществляют при кипячении исходных веществ, при температуре 65-700с в течение 6-часов в среде абсолютного метанола.
Выход продукта реакции 1-хлор-3-метоксиглицилопропан-2-ола 3α,7β -дигидроксихолановой кислоты составил 83%, при температуре плавления 128-1290С.
1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол 3α,7β-дигидроксихолановой кислоты имеют широкий спектр противомикробного действия в отношении эпизоотических и музейных штаммов исследованных тест-культур. 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол
3α,7β-дигидроксихолановой кислоты, вызывает гибель исследованных культур в концентрациях 0,62 – 9,92 мкг/мл.В результате проведенных опытов установлено, что наибольшую чувствительность (МБсК – 0,31 – 1,24 мкг/мл) к 1-хлор-3-
метилтриптофалопропан-2-ол проявляют St. aureus, Str. pyogenes, P. multocida , Pr. vulgaris, S. enteritidis, Ps. aeruginosa, E. coli, S. pullorum, Kl. pneumoniae более устойчивы к 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол в отношении этих культур МБсК препарата составила 0,62 – 4,96 мкг/мл (см табл.).
Таблица
Противобактериальная активность 1-хлор-3-метокситриптофало пропан-2-ол 3α,7β-дигидроксихолановой кислоты, мкг/мл
|
Микроорганизм
|
МБсК
|
МБцК
|
|
St. aureus
|
0,31 – 1,24
|
0,62 – 2,48
|
|
Str. Pyogenes
|
0,31 – 1,24
|
0,62 – 2,48
|
|
E. coli
|
1,24 – 4,96
|
2,48 – 9,92
|
|
Pr. Vulgaris
|
0,62 – 2,48
|
1,24 – 4,96
|
|
S. enteritidis
|
0,62 – 2,48
|
1,24 – 4,96
|
|
S. pullorum
|
1,24 – 4,96
|
2,48 – 9,92
|
|
P. multocida
|
0,31 – 1,24
|
0,62 – 2,48
|
|
Ps. Aeruginosa
|
0,62 – 2,48
|
1,24 – 4,96
|
|
Kl. Pneumonia
|
1,24 – 4,96
|
2,48 – 9,92
|
Как видно соединения обладают выраженным бактерицидным действием по отношению к полевым штаммам стафилококка, нокардии, коринбактериям и пастереллам.
Антимикробную активность соединений 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол 3α,7β -дигидроксихолановой кислоты, определяли in vitro методом серийных разведений по отношению к полевым культурам стафилококка, нокардии, пастереллы, каринебактерий, выделенных от больных респираторным заболеванием животных.
Бактерицидность соединений 1-хлор-3-метилтрипто-фалопропан-2-ол 3α,7β -дигидрокси холановой кислоты изучали в сравнении с этонием. Проводили три параллельного опыта.
Минимальная подавляющая концентрация соединения 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол 3α,7β-дигидрокси холановой кислоты по отношению к стафилококку - 72-107 мкг/мл, нокардии - 120-200 мкг/мл, коринбактериям - 90-110 мкг/мл, пастереллам - 70-90 мкг/мл. Что касается соединения 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол, то по отношению к стафилококку - 80-120 мкг/мл, нокардии - 130-225 мкг/мл; коринбактериям - 115-135 мкг/мл; пастереллам - 90-115 мкг/мл.
Таким образом, была изучена острая токсичность, а также противомикробная активность некоторых гидразидпроизводных холановых кислот на примере 1-хлор-3-метилтриптофалопропан-2-ол и 3-хлорбензо|b|тиофен-2-карбокси гидразид-3α,7α,12α-трикетохолановой кислоты.
