Изобретение относится к медицине, а точнее к клинической гематологии и паразитологии, и может быть использовано как новые биомаркеры его мутагенное действие в развитии и течении лейкемии, для ранней диагностики поражений костного мозга гельминтами и своевременное противогельминтное лечение лейкемии на фоне базисной терапии. Способ удобен, прост и дешевый для выявления гельминтной инвазии на ранних стадиях, задолго до того, как происходит процесс мутации в костном мозге, заменяя небезопасные методы исследования. Биомаркеры ранней диагностики имеют большие возможности для обследования лиц, страдающих лейкемией.
Проведенный иммуноферментный анализ у пациентов с лейкемией позволил нам установить, что гельминты как новый биомаркер в развитии лейкемии, встречаются не только в желудочно-кишечном тракте, но также обнаруживаются в сыворотке крови, костном мозге и ликворе.
На современном этапе иммуноферментный анализ крови позволяет с высокой точностью определить тип и численность гельминтов в организме и является результативным и верным анализом, где обнаруживают антитела к присутствующим паразитам. Анализ кала на яйца гельминтов не всегда дает достоверный ответ.
С другой стороны, на современном этапе не вызывает сомнения, что наличием лишь общеизвестных факторов риска нельзя объяснять весь спектр лейкогенеза. Последние научные исследования показали главенствующую роль в развитии лейкемии некоторых факторов риска развития (ионизирующее облучение, наследственность, химиопрепараты), однако значимость большинство из них к настоящему времени полностью не доказана.
Цель изобретения установить влияния костномозговых гельминтов на тяжесть течения лейкемии как фактор высокого риска развития заболевания.
Способ осуществляется следующим образом: пациентам помимо общеклинических анализов проводят исследования миелограммы с морфологическим и цитохимическим исследованием костного мозга: маркерные реакции на миелопероксидазу, содержание фосфолипидов - в реакции с Суданом черным. Далее проводят компьютерную томографию высокого разрешения или МРТ затем иммунологические анализы. Для проведения исследования на гельминтов у пациентов с лейкемией одновременно проводили забор сыворотки крови и костного мозга и после тестировали иммуноферментным анализом (ИФА).
Исследование проводилось на кафедре внутренних болезней №3 ГОУ «ТГМУ имени Абуали ибни Сино», в гематологическом отделение, базирующимся в ГУ НМЦ РТ за период 2019 год. Диагноз острый и хронический лейкоз ставился согласно утверждённой ВОЗ МКБ (Х пересмотра).
Объектом исследования явились 73 пациентов с различными формами лейкемии (РФЛ), в возрасте от 23 до 67 лет, среди них мужчин было 47, женщин 26. Из 73 пациентов с РФЛ у 25 (34,2%) пациентов оказалась острая лейкемия (ОЛ) и у 48 (66,0%) хроническая форма лейкемии (ХЛ). Среди острых лейкемий острой лимфоидной лейкемией (ОЛЛ) оказались 15(60,0%) и острой миелоидной (ОМЛ) 10 (40,0%) пациентов, тогда как среди хронических лейкемий множественная миелома (ММ) занимала главенствующую роль - у 23(48,0%), хронической лимфоидной лейкемией (ХЛЛ) – у 15 (31,1%) и хронической миелоидной лейкемией (ХМЛ) составили лишь 10(21,0%) пациентов. В свою очередь пациенты с острой и хронической формой лейкемии были распределены на 2 подгруппы: в IА подгруппу входили пациенты с ОЛ, ассоциированной с глистной инвазией (АГИ) (n=15) и IIА группа пациентов лейкемией, без ассоциации с глистной инвазией (БАГИ) (n=10) и в IБ подгруппу входили пациенты с ХЛ, АГИ (n=25) и IIБ группу пациенты с ХЛ лейкемией, БАГИ (n=23). Контрольную группу составили 30 относительно здоровых добровольцев.
Как видно на фиг. 1 среди пациентов с хронической лейкемией ММ, АГИ лидировала в более половины случаев (56,5%) по отношению других форм, что диктует дальнейшего глубокого изучения этой проблемы.
Методы исследования. Всем пациентам помимо общеклинических анализов проводили исследования миелограммы с морфологическим и цитохимическим исследованием костного мозга: маркерные реакции на миелопероксидазу (методом Кваглино в модификации Р.П. Нарциссова), содержание фосфолипидов - в реакции с Суданом черным (по Shechan и Storey). Из рентгенологических методов исследования проводили компьютерную томографию высокого разрешения или МРТ; иммунологические анализы.
Для проведения исследования на гельминтов у пациентов с лейкемией одновременно проводили забор сыворотки крови и костного мозга и после тестировали иммуноферментным анализом (ИФА).
Результаты исследования. Всего под наблюдением были 73 пациентов с РФЛ. После проспективного анализа клинико-лабораторных и инструментальных методов обследования нами установлено, что из 73 пациентов с острой и хронической лейкемией микст-инвазия антител к Toxocara canis и Ascaris lumbricoides обнаружены как в сыворотке крови, так и в костном мозге (36,0% и 28,0%; 39,5 и 20,8%) у одних и тех же пациентов, антитела только к Ascaris lumbricoides в сыворотке крови и костном мозге обнаружены почти в 2,5 раза меньше по отношению с микст-инвазией (16,0% и 12,0%; 18,7% и 10,4%). При острой лейкемии в копрограмме 3,3 раза больше были обнаружены яйца Ascaris lumbricoides по отношению особей Ascaris lumbricoides (40,0% и 12,0%), тогда как у больных с хронической лейкемией статистически различий между этими показателями не было (12,5% и 10,4%) (таб. 1).
Анализ влияния гельминтов на тяжесть течение лейкемии и, как фактор высокого риска развития, показал статистически значимые различия как в клиническом течении заболевания, так и лабораторных показателях, отличаясь от соответствующих показателей группы сравнения и в контрольной группе.
Как видно из таблицы 2, у пациентов с лейкемией, АГИ, гиперпластический, анемический, геморрагический, интоксикационный и иммунодефицитный синдромы были более выражены по отношению к пациентам с лейкемией без ассоциации с глистной инвазией.
Сравнительный анализ гематологических показателей у пациентов с лейкемией, АГИ, показал, что степень тяжести анемического синдрома, тромбоцитопении, лейкопении и лимфопении была выражена по отношению к пациентам без такового, тогда как лейкоцитоз и лимфоцитоз в основном встречались у пациентов с лейкемией без ассоциации с гельминтами. Выраженность бластемии у пациентов с лейкемией АГИ был более выраженным по отношению пациентов с ОЛ без таковых сочетаний (таб. 3).
Таким образом, согласно нашим исследованиям, гельминты являются возможными предикторами развития лейкемии. Нематоды (токсокар и аскарида) и психоневрологические расстройства, несомненно, влияют на тяжесть течения заболевания, что необходимо учитывать при выборе тактики лечения и определения прогноза.
Для раннего выявления, своевременной профилактики и терапии токсокароза инвазионных яиц токсокара у человека необходимо повысить уровень санитарно-просветительской работы среди населения и проводить регулярные санитарно-паразитологические исследования с использованием диагностической тест-системы на основе ИФА.
Среди пациентов с хронической лейкемией множественная миелома, АГИ лидировала в более половины случаев по отношению других форм, что диктует дальнейшего глубокого изучения этой проблемы.
Поиск новых прогностических биомаркеров, играющих роль в развитии лейкемии, может существенно повысить эффективность ранней диагностики. Противогельминтная и психокоррекционная терапия на фоне базисной терапии лейкемий может снизить риск развития как инфекционных, так и неинфекционных осложнений.
Пример. Больная И., 1953 г. рождения, жительница района Хатлонской области. Жалобы на прогрессирующую слабость, повышение температуры тела, головокружение, похудание, головные боли, зуд кожных покровов, тошнота, рвота, сердцебиение, боли в проекции желчного пузыря, поджелудочной области и в поясничной области, появление геморрагий и отёков на нижних конечностях.
Из анамнеза заболевания: болеет с марта 2019 года. Заболевание началось зуда кожных покровов, недомогания, снижения аппетита, тошноты. Обратилась семейному врачу, где после комплексного обследования и в кале были обнаружены яйца и особи аскариды и картина холецистита, панкреатита. Был выставлен диагноз: Хронический холецистит в стадии обострения и реактивный панкреатит. Хронический колит. Аскаридоз. Пациентка получила соответствующую терапию и дважды курс противогельминтной терапии. Через год общая слабость прогрессировала и в общем анализе крови выявлено анемия тяжелой степени, после она была направлена в гематологическое отделение ГУ НМЦ РТ шахраки «Шифобахш». После дообследования и стернальной пункции был выставлен диагноз: ОМЛ. Больная в сопровождении родственников обратилась в НИИ гематологии Российской Федерации, где был подтверждён диагноз: ОМЛ. И с этим диагнозом пациентка находилась на стационарном лечении.
Диагноз выставлен на основании гемограммы миелограммы - 89,0% бласты 90,0%.
Общее состояние тяжёлое. Сознание ясное. В пространстве и во времени ориентировано. Положение горизонтальное. Видимые слизистые оболочки и кожные покровы бледные, геморрагии на коже нижних конечностей. Дыхание через нос свободное. Границы легких в пределах нормы. Аускультативно на фоне ослабления везикулярного дыхания в нижних долях обеих легких выслушиваются мелкопузырчатые влажные хрипы. ЧД 23 в минуту. Область сердца в пределах нормы. Аускультативно тоны сердца приглушены, ритмичные. АД 130/90 мм.рт.ст. Пульс 88 ударов в минуту. Язык – бледно - розовый, сухой, обложен белым налётом. Живот мягкий болезненный в проекции жёлчного пузыря и панкреаса. Печень у края реберной дуги. Селезёнка выступает на 3,0 см из-под края левой реберной дуги. Симптом поколачивания отрицателен с двух сторон.
В общем анализе крови эритроциты - 1, 63; гемоглобин - 55,0; цветной показатель – 0,9; тромбоциты -25,0 тыс.; лейкоциты 25000, палочкоядерные – 8; сегментоядерные – 30; эозинофилы – 7; лимфоциты – 44; моноциты – 3;
В биохимическом анализе крови от 20.11.2017: общий белок 73,0 г/л; общий билирубин 10,1 мкмоль/л; прямой билирубин -3,2 мкмоль/л; непрямой билирубин – 20 мкмоль/л; ALAT – 18,1; мочевина 8,7.
Коагулограмма– ККВ -33 сек, ПТИ -83%, ПГкГ – 18, фибриноген – 2,5 г/л, ретракция кровяного сгустка – 0,15; кальций – 3,3 ммоль/л.
В общем анализе мочи: белок – 0,033‰, плотность – 1015, лейкоциты – 4-5 в поле зрения, эритроциты – 10-15.
Проведено лечение: курс ПХТ, сопроводительная терапия, водно-солевая нагрузка до 2,0 литра в сутки; дезинтоксикационная терапия; аскарбиновая кислота 5%-4,0 в/в; аллопуринол 200; симптоматическая терапия.
После проведённой терапии общее состояние больной несколько улучшилось. Общий белок – 65 г/л; эритроциты - 2,87; гемоглобин 90,0; лейкоциты – 15,0; тромбоциты– 95,0 тыс;
Больная поздно, через 7 месяца вновь в тяжёлом состоянии обратилась к гематологу анемическим, интоксикационным, геморрагическими синдромами.
Жалобы при поступлении: прогрессирующая слабость, недомогание, кровоподтеки на коже живота, спины и рук, зуд кожных покровов. отёки на лице и нижних конечностях, боли в пояснично-крестцовом, шейном и грудном отделе позвоночника и в рёбрах.
В ОАК – эритроциты – 1,56, гемоглобин 53,0 г/л; тромбоциты 27,0; лейкоциты – 179,0 тыс.; эозинофилы – 2; п/я – 18; c/ я -27; лимфоциты – 30; моноциты – 1. СОЭ – 75 мм/ч.
От 17.04.18 – общий белок 3,.0 г/л; мочевина - 14,2 млмоль/л; креатинин – 488,0 мкмоль/л; общий билирубин – 13,5; AlAT – 0,24; AsAT – 0,16; глюкоза – 6,0; фосфор – 2,5; кальций – 3,5 ммоль/л.
Был заподозрен ассоциирования лейкоза с гельминтной инвазией, учитывая то, что в анамнезе был аскаридоз. Былы иследованы кал на яйца глист, анализ крови, костного мозга и ликвор на ПЦР и ИФА исследования и были обнаружены антитела токсакора и аскариды в костном мозге. Примечание: P1-2 - статистически значимые различия между острой и хронической лейкемией, ассоциированными с глистной инвазией; P1-3 - статистически значимые различия между острой лейкемией, ассоциированной глистной инвазией, и без таковой; P2-4 - статистически значимые различия между хроническими лейкемиями, ассоциированными глистной инвазией, и без таковой
