Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, а именно биотехнологии вакцинных препаратов и может быть использовано против клостридиозов мелкого рогатого скота.
Клостридиоз– широко распространенное заболевание животных, вызываемое различными видами и типами клостридий. В большинстве случаев животные заражаются через корма, повреждения на коже и слизистых. Клостридии вызывают у животных (чаще у молодняка) инфекционную энтеротоксемию.
Возбудитель - Clostridium sordellii
Классификация возбудителя:
Семейство: - Clostridiaceae
Род: - Clostridia
Вид: - Clostridium sordellii
Клостридии – крупные палочковидные неподвижные бактерии. В организме животных образуют капсулы, во внешней среде – споры, которые сохраняются в почве до 4 лет, на сухих поверхностях – до 2 лет. Клостридиозы широко распространены в природе и наносят значительный экономический ущерб сельскому хозяйству. Известно более 180 видов бактерий данного рода, некоторые из них обладают патогенностью и токсичностью для животных.
К патогенным клостридиам относится также Clostridium sordellii, обуславливающая развитие газовой гангрены. О выделении Clostridium sordellii из организма больных животных в литературе встречаются лишь единичные сообщения [1,2,3,4].
Основную роль в патогенезе анаэробных инфекций играют экзотоксины, вырабатываемые бактериями в анаэробных условиях [ 5 ].
Клинические признаки заболеваний развиваются стремительно и как правило заканчиваются летальным исходом.
Описаны только единичные случаи выделения этого вида клостридий при анаэробных инфекциях овец.
В последние годы (2015 - 2017гг.) в овцеводческих хозяйствах Республики Таджикистан в значительной степени возросло количество случаев возникновения инфекций, вызываемых Clostridium sordellii. В отдельных хозяйствах республики от этой болезни пало и вынужденно убито от 8 до 12% поголовья [6] .
В настоящее время для профилактики клостридиозов мелкого рогатого скота (брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отёка овец и дизентерии ягнят) используется инактивированная вакцина производства Ставропольской биофабрики г. Ставрополь Российской Федерации. [7]
Вакцина состоит из культур токсигенных производственных штаммов Cl. perfringens типов В или С, Cl. perfringens типа D, Cl. oedematiens и Cl. septicum инактивированных формалином и адъюванта- гидроокси алюминия.
Известен эпизоотический штамм B. sordellii №03. Данный штамм на печеночном бульоне образует интенсивный рост с помутнением среды и газообразование. К микробу чувствительны подопытные животные всех видов: белые мыши, крысы, кролики, куры и др. [8].
Недостатком данного штамма является то, что при выращивании культур B. sordellii в жидких питательных средах сахарозам, токсин образуется через 48 часов значительно меньшей токсичностью. Токсины B. Sordellii в разведении 1:500 убывает морских свинок через 24 часа после подкожного введения в разведении 1:2000 – через 48 часов и в разведении 1:5000 через 5 дней. Белые мыши погибают от токсина B. sordellii в разведении 1:10000.
Накопление токсина в питательных средах происходит в течение 2 – 7 суток
Целью изобретения является получение штамма Clostridium sordellii №03 / 2016 / ЁCLSTJ – 03Ё обладающего защитным эффектом при использовании данного штамма для приготовлении вакцины против клостридиозов мелкого рогатого скота.
Поставленная цель достигается тем, что штамм Clostridium sordellii №03/2016/Ё CLSTJ-03Ё был выделен из овцеводческих хозяйств Раштского и Яванского районов и города Вахдата Республики Таджикистан при массовых заболеваниях овец с характерными признаками клостридиозов животных.
Выделенный штамм Clostridium sordellii №03/2016/Ё CLSTJ-03E используют для производства вакцины против брадзота овец. При включении в вакцины штамма Clostridium sordellii №03/2016/Ё CLSTJ-03Ё повышается защитный эффект вакцины. У привитых животных вырабатывает достаточно напряженный иммунитет к возбудителю брадзота овец.
Штамм Clostridium Sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё депонирован в Центре национальной коллекции патогенных микроорганизмов Института проблем биологической безопасности и биотехнологии.
Штамм Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё характеризуется следующими признаками:
Штамм Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё грамм положительная палочка с закругленными концами, хорошо подвижны, имеют жгутики, споры овальные, расположенные субтерминально. Часто отмечалось палочковидные цепочки, состоящих из 3 - 4 члеников. Бациллы капсул не образовывали, хорошо окрашивались по методу Граму.
Штамм Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё выращивают в среде Китта – Тароцци в течение 18 – 24 часов при температуре 37 – 380С. С целью лучшего токсинообразования при культивиро
вании добавляют 40% глюкозу из расчета 0,5% сухого вещества.
Токсигенность. Штамм Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё обладает выраженной токсигенностью по отношению к лабораторным животным. Токсин образуется через 24 – 48 часов при выращивании в мясо – пептоном печеночном бульоне с добавлением глюкозы.
Благоприятной средой для накопления токсина Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё является бульон изготовленной из мясо телят с кусочками печени и с добавлением 3% пептона.
Культурально – морфологические свойства штамма и генетические особенности.
Штамм Clostridium sordellii №03 / 2016 / Ё CLSTJ – 03Ё растет на простых питательных средах в анаэробных условиях. На поверхности питательных сред образует слабовыпуклые серовато-белые колонии с неровным краем. На кровяном агаре колонии бывают окруженной узкой зоной гемолиза. В жидких мясных питательных средах интенсивный рост Clostridium sordellii происходит в течение 24 часов, часто с образованием слизи. На среде Китта-Тароцци культура давала обильное помутнение. В жидком бульоне выделенные культуры давали интенсивный рост с образованием газа. Культуры должны иметь чистый рост на МППБ и типичную морфологию при отсутствии роста в МПБ и на МПА.
Физико-биохимические свойства штамма. Выделенный штамм Clostridium sordellii №03/2016/Ё CLSTJ-ОЗЁ ферментирует мальтозу, глюкозу и фруктозу, не разлагает лактозу и сахарозу. Разжижает желатин и свёрнутую сыворотку, вырабатывает сероводород и индол, образует уреазу. В процессе роста производят микроскопию культур. В мазках должны быть палочки типичные для Clostridium sordellii.
Способ хранения штамма: (t0, питательная среда)
Штамм хранят на среде Китта-Тароцци при температуре +4+60С.
Периодичность пересевов на питательных средах.
Один раз в 6 месяца при хранении на среде Китта-Тароцци и раз в три года при хранении в лиофилизированном виде.
Вирулентность.
Вирулентность выделенного штамм Clostridium sordellii №03/2016/Ё CLSTJ-ОЗЁ составляет от 0,5 до 1 см3 при внутримышечном введении морским свинкам.
Пример .
Безвредность опытной серии вакцины проверяли на базе Национального центра ветеринарной диагностики СГВН на 3 овцах. Вакцину первоначально вводили внутримышечно в дозе 2–3 мл. Ревакцинацию проводили через 15 дней после вакцинации. У вакцинированных животных отмечали кратковременное повышение температуры тела, других отклонений от физиологической нормы не наблюдалось. При применении вакцины в соответствии с инструкцией побочных явлений и осложнений не было выявлено
