Изобретение относится к медицине, вернее к области клинико-биохимической лабораторной диагностики, и может быть использовано в качестве диагностического теста при эффективном лечении различных заболеваний.
Известен газохроматографический способ определения холестерина в сыворотке крови, который определяют холестерин в виде метилового эфира, а также использовали силилпроизводных холестерина.
Недостаток данного аналога в том что, теряется часть холестерина и уходит многое время, а также он невыгоден в клинических масштабах.
Известен также способ определения содержания холестерина в сыворотке крови, который используется в медицинской практике в диагностических целях.
Но при использовании данного метода расходуется значительное количество химических реактивов.
Наиболее близкий аналог является, способ определения холестерина в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии заключается в том, что в 0,25 мл сыворотки крови добавляют 1 мл рабочего стандарта – трикосан 0,125 мг/мл, 5 мл хлороформа, взбалтывают в течение 5 минут, фильтруют и выпаривают досуха. Затем добавляют 0,5 мл бидистилированной воды и 0,5 мл 4N раствора едкого натрия, гидролизируют в течение 15 минут, гидролизат нейтрализуют 10% раствором соляной кислоты и дважды экстрагируют хлороформом, экстракт промывают водой и сушат над сульфатом натрия, фильтруют, удаляют растворитель, остаток растворяют в 0,3 мл этилового спирта и хроматографируют. Недостаток прототипа в том, что используется дорогостоящий внутренний стандарт трикосан.
Задачей изобретения является разработка нового способа, который по сравнению с другими существующими методами было бы более точным и информативным в определение холестерина, будучи в тоже время не трудоемким и дешевым.
Сущность изобретения заключается в том, что для определения холестерина в пробирке с притертая пробке берут 1мл мочи, добавляют 1мл из раствора 0,25мг/мл метилового эфира 3α, 7α-дигидрокси-12-кето -5β-холановой кислоты, экстрагируют холестерин и связанные с ним эфиры с 10мл хлороформом.
Остаток подвергается гидролизу при помощи 0,6мл 4N раствора едкого натрия в присутствии 0,6мл бидистилированную воды до образования свободного холестерина. Гидролиз проводят в течение 10 минут. Гидролизат нейтрализуют 8% раствором соляной кислоты и дважды экстрагируют хлороформом. Хлороформный экстракт промывают водой, сушат над сульфатом натрия. Затем, экстракт фильтруют и после удаления растворителя, остаток растворяют в 0,2 мл этилового спирта и концентрации общего холестерина определяли газохроматографическим методом.
Этого способа можно использовать в диагностике мочекаменной болезни, а также калькулезного холецистита, сочетающего с уролитиазом.
Преимуществом способа является доступность сыря: хлороформ метилового эфира 3α, 7α-дигидрокси 12-кето-5β-холановой кислоты и едкого натрия.
Условия хроматографирования. Колонку длинной 1,5 м с внутренним диаметром 0,3 см заполняли фазой: хроматон N-AWзернения 0,160-0,200мм, содержащий 3% SE-30. Темпера хроматографической колонки 170-2400С при программировании температуры 50С/мин температура испарителя - 2800С, детектора 2750С, скорость газоносителя-40мл/мин, скорость водорода 30мл/мин, скорость движения ленты самописца -0,4см/мин, продолжительность анализа 30- минут.
Для идентификации были приготовлены искусственные смеси из хромато- графически чистых эталонов холестерина и внутреннего стандарта –метилового эфира 3α, 7α –дигидрокси- 12-кето-5β-холановой кислоты.
Все полученные хроматограммы оценивали методом внутренного стандартизациями.
Относительного поправочного коэффициента вычислили по следующей формуле
К – относительный поправочный коэффициент;
Ci –Концентрация холестерина;
Scт – площадь пика стандарта;
Сст – концентрация стандарта;
Si – площадь пика холестерина;
Процент холестерина в моче оценивали по следующей формуле:
М – масса стандарта;
а – количество анализируемой пробы;
Кст – постоянная величина = 1
