СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОЛИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Изобретение касается макролидных веществ, в частности получения соединений общей ф-лы в которых R1 - СН3, С2Н5 или изо-С3Н7; R2 - низший алкил, причем группа NOR2 находится в Е-конфигурации и ОR3-гидроксил, которые обладают антигельментной и инсектицидной активностью. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут восстановлением соединения ф-лы I, где вместо группы OR3 находится кетогруппа, с помощью агента, способного к стереоселестивному восстановлению 5-кетогруппы - боргидрида щелочного металла или литийалкоксиалюминийгидрида, причем в первом случае процесс ведут в среде растворителя - алканола при (-30) -( +80)°С, а во втором используют простой эфир и температуру (-78)-0°С. Новые вещества малотоксичны и активны в отношении клеща паутинного, цикадки картофельной и листовертки почкоедки табачной, а также в отношении гельминтных паразитов. 2 табл.

Изобретение относится к способу получения новых макролидных соединений - антибиотиков, общей формулы I

где R1 - метил, этил или изопропил;
R2- низший алкил;
ОR3- представляет собой гидроксильную группу; и группа = NOR2 находится в Е-конфигурации.
Известно получение производных макролидных соединений, используемых в качестве антибиотиков, например антибиотик S 541 (фактор А), который может быть выделен из продуктов ферментации новых Streptomyces Sp. или получен химическим путем.
Однако этот антибиотик обладает недостаточно высокой антигельминтной и инсектицидной активно-стью.
Цель изобретения - получение новых макролидных соединений, обладающих более высокой антигель-минтной и инсектицидной активностью.
Эта цель достигается способом получения соединения формулы 1, заключающимся в восстановлении соединения формулы II

где R1 и R2 имеют указанные значения.
Реакция восстановления может быть осуществлена с помощью восстанавливающего агента, который способен к стереоселективному восстановлению 5-кетогруппы. К восстанавливающим агентам относятся такие боргидриды, как боргидриды щелочных металлов (например, боргидрид натрия) и литий-алкокси-алюминий гидриды, такие, как литий-трибутокси-алюминий гидрид.
Реакция, использующая боргидридный восстанавливающий, протекает в присутствии такого раствори-теля, как алканол, например изопропиловый или изобутиловый спирт, обычно при температуре в диапазоне от -30 до +800С, например при 00С. Реакция, включающая использование литий-алкоксиалюминийгидрида, протекает в присутствии такого растворителя, как, например, простой эфир, например тетрагидрофуран или диоксан, и может быть проведена при температурах в диапазоне от -78 до 00С.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами (температуры указаны в 0С, а EtOH означает этанол).
В приводимых примерах соединения названы производными известных факторов, факторов А, В, С и D. Фактор А представляет собой соединение, характеризуемое формулой (VI), в которой R1 - изопропил и R3-водород; фактор В представляет собой соединение, характеризуемое формулой (VI), в которой R1-метил и R3-метил; фактор С представляет собой соединение, характеризуемое формулой (VI), в которой R1-метил и R3-водород; и фактор D представляет собой соединение, характеризуемое формулой (VI), в которой R1-этил, а R3-водород.

П р и м е р 1. 23 (Е)-Метоксиимино Фактор А
(а) 5,23-дикето Фактор А.
Охлажденный льдом раствор, полученный из концентрированной серной кислоты (1,2 мл) и дихромата натрия (120 мг) в воде (2 мл), добавляли в течение 15 мин к охлажденному льдом раствору 5-кето Фактор А (200 мг) и сульфату кислого тетрабутиламмония (15 мг) в этилацетате (4 мл) при интенсивном перемешива-нии. Спустя час смесь разбавляли этилацетатом, органическую фазу промывали насыщенным водным рас-твором бикарбоната натрия. Высушенную органическую фазу выпаривали. Полученную смолу очищали путем хроматографирования на “Мер Кизельгель 60” 230-400 меш в количестве 100 мл. В результате элюи-рования с помощью 10%-ного раствора этилацетата в дихлорметане было получено соединение, указанное в заголовке, в виде палево-желтой пены в количестве 86 мг; (ССl3) включает 6,57 (мультиплет, 1Н), 2,50 (синглет, 2Н) и 1,89 (мультиплет, 3Н).
(в) 5-кето, 23(Е)-метоксиимино Фактор А.
В соответствии с этим примером 5,23-дикето Фактор А (475 мг), гидрохлорид метоксиламина (69 мг) и безводный ацетат натрия (175 мг) растворяли в метаноле. После 1,5-часового нахождения при комнатной температуре раствор выдерживали в течение 16 ч при -180С, разбавляли этилацетатом и тщательно промы-вали однонормальной хлористоводородной кислотой, водой и рассолом. высушенную органическую фазу подвергали выпариванию. Образовавшуюся пену желтого цвета подвергали хроматографированию исполь-зованием “Мер Кизельгель 60” 230-400 меш (120 мл). В результате элюирования колонки смесью, состоя-щей из гексана и этилацетата в соотношении 4:1, получено соединение, указанное в заголовке, в виде жел-той пены в количестве 255 мг / +800; (с 1,20, СНСl3), max (EtOH) 241 нм (27,500), Vmax (CHBr3), 3530,3460 (OH) 1708 (C=O), 1676 (C=C-C=O), 986 (C-O),  (CDCl3) включает 6,58 (синглет, 1Н), 3,84 (синглет, 4Н), 3,80 (синглет, 1Н), 3,58 (мультиплет, 1Н), 3,30 (дублет 14, 1Н), 1,00 (дублет 6, 3Н), 0,96 (дублет, 6, 3Н), 0,92 (дублет 6, 3н).
(с) 23 (Е)-метоксиимино Фактор А.
(I) Боргидрид натрия (6,5 мг) добавляли к охлажденному льдом раствору 5-кето, 23(Е)-метоксиимино Фактор А (83 мг) в изопропаноле (20 мг). Полученную смесь желтого цвета подвергали перемешиванию в течение 35 мин в ледяной ванне, затем разбавляли этилацетатом и тщательно промывали однонормальной хлористоводородной кислотой, водой и рассолом. Высушенную органическую фазу далее выпаривали. Полученную смолу желтого цвета подвергали очистке путем хроматографирования через “Мер Кизельгель 60” 230-400 меш (60 мл). Элюирование содержимого колонки осуществляли смесью, состоящей из гексана и этилацетата в соотношении 2:1, что позволило получить соединение, указанное в заголовке, в виде желтой пены в количестве 58 мг.
В результате кристаллизации из гексана получено соединение, указанное в заголовке, имеющее точку плавления 2030С, / +1330 (c 1,12, CHCl3), (EtOH) 244 нм (26,200),  (CDCl3) включает 4,29 (триплет 7, 1Н), 3,84 (синглет, 3Н), 3,29 (дублет 15, 1Н).
(II) Раствор 5-кето, 23(Е)-метоксиимино Фактора А (50 мг) в безводном тетрагидрофуране (1 мл) добав-ляли к охлажденному до -780С раствору гидрида литий-трис-трет-бутоксиалюминия в количестве 261 мг в безводном тетрагидрофуране в количестве 3 мл. После 0,75 ч выдержки при -780С полученный раствор раз-бавляли этилацетатом в количестве 30 мл и тщательно промывали 0,5 н. хлористоводородной кислотой и водой. Высушенную органическую фазу подвергали выпариванию, а полупродукт-сырец - очистке путем хроматографирования на “Мерк Кизельгель 60” 230-400 меш, 40 мл. Элюирование осуществляли 25%-ным этилацетатом в гексане с получением соединения, указанного в заголовке, в виде пены белого цвета / +1280 (с 0,95, СНСl3),  (CDCl3), включал 4,29 (триплет 7, 1Н), 3,84 (синглет, 3Н), 3,29 (дублет 15, 1Н).
П р и м е р 2. 23(Е)-метоксиимино Фактор А, 5-ацетат.
(I) Добавляли трехмолярный раствор иодида метилмагния в простом эфире (0,16 мл) к перемешанному раствору продукта, полученного в примере № 3 (120 мг), в безводном гексаметилфосфорном триамиде (5 мл) в атмосфере азота. Далее добавляли иодметан в количестве (0,09 мл). Спустя час смесь разбавляли этила-цетатом (30 мл) и тщательно промывали 2 н. хлористоводородной кислотой и водой. Высушенную органи-ческую фазу выпаривали. Образовавшуюся смолу подвергали очистке хроматографированием на “Мерк Кизельгель 60” 230-400 меш (80 мл). В результате элюирования содержимого колонки получено соедине-ние, указанное в заголовке. Для элюирования использовали смесь, состоящую из гексана и этилацетата в соотношении 2:1; продукт представлял собой белую пену; / +1230 (с 1,25, СНСl3), max (EtOH) 245 нм (max 30,300); (CDCl3) 5,5-5,6 (м, 2Н), 3,84 (с, 3Н), 3,29 (д. 15, Н), 2,16 (с., 3Н).
(II) 23(Е)-оксиимино Фактор А, 5-ацетат (0,082 г) растворяли в простом диэтиловом эфире (10 мл), со-держащем окись серебра (0,4 г) в свежеприготовленном растворе (водном) нитрата серебра и в 2 М раство-ре гидроокиси натрия. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего фильровали. Растворитель выпаривали. В результате получили полупродукт-сырец в форме смолы желтого цвета. Остаток подвергали очистке путем препаративной тонкослойной хроматографии на “Мерк 5717” при элюировании смесью, состоящей из дихлорметана и ацетона в соотношении 25:1. Основную полосу экстрагировали ацетоном и упаривали. В результате получили соединение, указанное в заголовке (0,059 г). Спектр ядерно-магнитного резонанса соответствует указанному выше.
П р и м е р 3. 23(Е)-метоксиимино Фактор А, 5-метилкарбамат.
Метилизоцианат (С, 13 мл), 125 мг триэтиламина (2 капли) добавляли к раствору 23(Е)-метоксиимино Фактор А (350 мл) в безводном диметилформамиде (0,75 мл). Колбу с полученной смесью плотно закрыли и нагревали в течение 5,5 ч при 800С, перемешивая. Полученную смесь вылил в воду (50 мл) и филтровали через кизельгур. Осадок на фильтре промывали водой (150 мл) и экстрагировали дихлорметаном (75 мл). Полученный экстракт сушили с помощью сульфата магния и концентрировали. В результате получена пена желтого цвета, которую подвергли очистке на хроматографической колонке, заполненной силикагелем, при среднем давлении (125 г, “Мерк Кизельгель 60”, 230-400 меш). В результате элюирования смесью, состоя-щей из гексана и этилацетата в соотношении 1:1, получено соединение, указанное в заголовке, в виде пены белого цвета в количестве 206 мг / +990 (с 0,55, СН2Сl2), max (EtOH) 244,4 нм ( 28710), Vmax (CHBr3) 3530 (OH), 3455 (NH), 1720 (сложный эфир), 1720+1510 (карбамат) и 993 см-1 (С-О),  (CDCl3) включает 1,78 (син-глет, 3Н), 2,86 (дублет, 5 Гц, 3Н), 3,29 (дублет 14 Гц, 1Н), 3,83 (синглет, 3Н), 4,80 (квинтет, 5 Гц, 1Н) и 5,50 (мультиплет, 2Н).
П р и м е р 4. 23(Е)-метоксиимино Фактор А, 5-метилкарбонат.
К раствору 23(Е)-метоксиимино Фактор А (150 мг) в дихлорметане (15 мл) и пиридине (0,3 мл), переме-шивая, при 00С добавляли метилхлорформат (0,7 мл 1,0 М раствора в дихлорметане).
Полученную реакционную смесь перемешивали при 0-30С в течение 20 мин, а затем добавляли к ди-хлорметану (70 мл) и промывали 2 н. хлористоводородной кислотой (50 мл) и водой (50 мл). Органическую фазу сушили сульфатом магния, растворитель удаляли. Образовавшуюся пену подвергали очистке путем хроматографирования при среднем давлении на колонке, заполненной двуокисью кремния (40 г, “Мерк Кизельгель 60”, 230-400 меш). В результате элюирования смеси, состоящей из дихлорметана и этилацетата в соотношении 30:1, получено соединение, указанное в заголовке, в виде белой пены в количестве 127 мг / +1450 (с 0,41, СН2Сl2), max (EtOH) 244,4 нм ( 3121)  (CНBr3) 3460+3540, (OH), 1342 (карбонат) 1710 (сложный эфир) и 992 (см-1) (С-О),  (CDCl3) включает 1,82 (синглет, 3Н), 329 (дублет, 14 Гц, 1Н), 3,82 (син-глет, 3Н), 3,83 (синглет, 3Н), 5,2-5,4 (мультиплет, 3Н), 5,56 (синглет, 1Н).
Полученные соединения характеризуются антибиотической, например противогельминтной (противо-глистной), активностью в отношении нематод, антиэндопаразитической и анти-эктопаразитической актив-ностью.
Экто- и эндопаразиты поражают людей и различных животных, в особенности сельскохозяйственных (свиньи, овцы, крупный рогатый скот, козы), а также домашнюю птицу (например, кур и индеек), лошадей, кроликов, домашних животных (собаки, кошки), морских свиной, хомяков и т.д. Паразитическая инфекция в живых организмах приводит к анемии и потере веса, что является важной причиной экономических потерь во всем мире.
Примерами эндопаразитов, поражающих животных и/или людей, являются Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Cyathostomes, Dictyocaules, Diropilaria, Dracunculus, Enterobius, Castrophilus, Haemonchus, Heterakis, Hyostrongylus, Loa, Metastrongylus, Necator, Nematodirus, Nematospiroides, Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Oestertayia, Oxywris, Poerahilaria, Parascaris, Probstmayria, Stromgylus, Strongyloides, Syphacia, Thelazia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Triodontophorus, Uncinaria, Wuchereria.
Примерами эктопаразитов, поражающих животных и/или людей, являются артроподные эктопаразиты, (жалящие, кусающие насекомые, мясные мухи, блохи, вши, кровососущие насекомые, клещи и другие дву-крылые насекомые: Ambylomma, Anopheles, Boophilus, Chorioptes, Culexpipiens, Culliphore, Demodex, Demalinia, Dermatobia, Halmatobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyaloma, Hypoderma, Ixodes, Linognathus, Lusilia, Melophugus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psoreryates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Solenopotes, Stomaxys и Tabanus.
Найдено, что соединения по изобретению являются эффективными как in vitro, так и in vivo против широ-кого спектра эндо- и эктопаразитов. Антибиотическая активность соединений может быть продемонстриро-вана на свободноживущих нематодах, таких, как Caenothabditis elegans и Nematospiroides dubius.
Соединение, характеризуемое формулой (I), в котором R4- изопропильная группа, R2- метильная группа и ОR3- гидроксильная группа, активно действует против широкого диапазона эндо- и эктопаразитов, например, является активным в живом организме против паразитических нематод (Ascari, Cooperia curticei, Cooperia oncophora, Cyathostomes, Dictyoceculus viviparus, Dirofilaria immitis, Gastrophilus, Halmonchus contortus, Nemutodirus battus, Nematodirus helvetianus, Nematodirus spathiger, Nematospiroides dubius, Nippostrongysus brazilientis, Oesophaosiomum, Onehoeera gutturosa, Osterragia circumcineta, Ostertagia ostertagi, Oxyuris egui, Parascaris eguorum, Probstmayria, Strongylus edentalus, Strongylus vulgaris, Toxocara canis, Trichostrogylesaxei, Trochostrongyles vitrinus, Triodontophorus и Uncinaria stenocephala), а также против пара-зитических личинок, гучениц, чесоточных клещей, блох, вшей (Amblyomma hebraeum, Anopheles stevensi, Boophilus dicolarartus, Boophilus microplus, Chorioptes ovis, Culexpipcens molestus, Damalinia bovis, Dermatobia, Halmatopinus, Hypoderma, Linognathus vituli, Lucilia sericata, Psoroptes ovis, Rhipicephulus appendiculatus и Sarcoptes).
Соединения по изобретению могут быть также использованы в качестве инсектицидов, акарицидов и нематоцидов для уничтожения насекомых в сельском, лесном хозяйстве, на плантациях фруктовых деревь-ев, а также в общественных местах и на складах. Уничтожаются насекомые, живущие в почве или на сель-скохозяйственных культурах, включая злаки (например, пшеницу, ячмень, маис и рис), хлопчатник, табак, овощи, такие, как соя, фрукты, такие, как яблоки и цитрусовые, а также на клубневых растениях, таких, как сахарная свекла и картофель. Характерными примерами таких насекомых являются различные виды фрук-товых клещей и тлей (Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Myzus persicae, Nephotettix cincticeps, Nilparoutu lugens, Panonychus ulmi, Phorolon Rumuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urticae), а также насекомые вида Trialewroides; нематоды, например представители вида Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne и Panagrellus lepidoptera, такие, как Heliothis, Plutella и Spodoptera, а также долгоно-сики (Anthonomus grandis и Sitophilus granarius); мучные жуки (Tribolium castaneum), мухи (Musca domestica), муравьи, термиты (Pear psylla, Thrips tabaci), тараканы (Blatella germanica и Periplaneta americana), а также москиты (Aedes degypti).
Соединение по изобретению, характеризуемое формулой (I), в котором R1- изопропильная группа, R2-метильная группа и ОR3-гидроксильная группа, является активным по отношению к Tetranychus urticae, находящимся на листве французских бобов, против Myzus persicae на листьях китайской капусты, против Heliothis virescens на листьях хлопчатника, против Nilaparvatu lugens на ростках риса, против Musca domestica в пластиковых коробочках, в которые помещен раствор сахара и хлопчатобумажная пряжа, про-тив Blutella Gocmanica в пластиковых коробочках с кусочками пищи, против Spodoptera exiqua на листьях хлопчатника и против Meloidogyne incognita.
Данные соединения могут быть использованы в качестве фунгицидов, например, против штаммов вида Candida sp. (Candida albicans и Candida glabrata), против дрожжевых грибков (Saccharomyces carlsbergensis).
Соединения, характеризуемые формулой (I), могут быть использованы в качестве антибиотиков, в осо-бенности для лечения или обработки животных и людей, зараженных эндо-, эктопаразитами и/или плесне-выми инфекциями, в сельском и лесном хозяйстве - для обработки плантаций в качестве пестицидов для уничтожения насекомых, а также в качестве акарицидов и нематоцидов. В качестве пестицидов эти соеди-нения могут быть использованы для уничтожения насекомых, например, в хранилищах, зданиях и других общественных местах, в местах обитания насекомых. Соединения могут быть применены непосредственно в организмах, где обитают эти паразиты (в организмах животного, человека, растения или овощей), по месту обитания или непосредственно на самих насекомых.
Соединения по изобретению могут быть использованы в ветеринарии или медицине в виде композиций, приготовленных с помощью одного или нескольких пригодных носителей или разбавителей для паренте-рального ввода, включая ввод в молочную железу, а также для орального, ректального, топического, внут-рижелудочного (внутрь рубца), имплантированного, офтальмического применения, через нос или генито-уринального введения.
Биологическая активность.
Определялась эффективность действия соединений по изобретению против инфекционного заражения мышей Nematospiroides dulius. В организм самок мышей СR/H (весом 18-22 г) вводили 100 личинок L3 Nematospiroides dubius и обеспечивали возможность развития инфекции (обычно три недели). Затем в орга-низм мышей однократно оральным путем вводили соединение по изобретению (в пропиленгликоле). Мышей оставляли не менее чем на три дня (обычно на пять дней), после чего животных с полностью развившейся инфекцией умерщвляли и удаляли из них тонкую кишку. Вырезанную часть кишки рассекали ножницами с затупленными краями для экспонирования слизистой оболочки кишечника. Созревших гельминтов собира-ли посредством модифицированного устройства Берманна. Время миграции составляло 5 ч. В процессе миграции гельминты находились при температуре 370С. По прошествии пяти часов исследовали найлоно-вую сетку, через которую мигрировали гельминты, с использованием увеличительного стекла 2Х. Гельмин-тов захватывали найлонвой сеткой, рассчитывали число мигрирующих гельминтов, получали общее число гельминтов, приходящихся на каждую мышь, и сравнивали их с контрольными мышами.
При такой обработке соединением, полученным по изобретению (2 мг/кг), значительно снижалось пора-жение гельминтами обработанных мышей. Так, например, каждое из соединений примеров 3 и 4 дает про-цент снижения среднего поражения гельминтами обработанных мышей по сравнению с контрольными мы-шами более чем на 85%.
23 Е-Метоксиамино Фактор А.
Оценка фактора А для борьбы с Trichostrongylus colubriformis у песчанок.
В данных исследованиях пятинедельных самцов песчанок заражали инфицирующими личинками T.clubriformis (400-600) от овцы 0-го дня развития. На седьмой день личинок взвешивали и начинали обра-ботку. Лекарства вводили путем кормления через желудочный зонд на 7-й день после обработки. На 2-й день песчанок умерщвляли и подсчитывали оставшихся гельминтов. Процент эффективности рассчитывали путем сравнения количества гельминтов в обработанных животных с количеством гельминтов в необрабо-танных животных, подвергнутых заражению, с использованием следующей формулы. В данных исследова-ниях каждую обработку повторяли три раза.

Среднее значение Среднее значение
для контр. живот. для обраб. живот.
% эффективности = ------------------------------------------------------------------- х 100
Среднее значение для контрол. животных

В данных испытаниях лекарство растворяли в полиэтиленгликоле диметилсульфоксиде (РЕG:ДМСО) (1:2 об/об) в количестве, достаточном для обработок, чтобы в организм каждого животного вводилось от 0,0313 до 0,1250 мг/кг лекарства. данные испытаний представлены в табл. 1.

Таблица 1

Соединение Единичная вводимая орально доза (мг/кг) Процент эффективности
Фактор А 0,125 98 86*
0,0625 88 72*
0,313 68 30*
23-метоксиимино 0,125 100 100*
Фактор А 0,625 93 96*
0,0313 93 89*
* Повторение испытания.
Инсектицидное действие.
Все указанные концентрации относятся к концентрациям активного ингредиента. Испытательные рас-творы приготавливали путем растворения активного ингредиента в 35%-ном растворе ацетона в воде (1000 ч./млн), а затем разбавляли их водой по мере необходимости.
Tetranychus urticae (P. стойкий штамм) клещ паутинный 2-пятнитый.
Для исследования была отобрана фасоль лимская с листвой, развившейся до размера 7-8 см. Растение обрезали, высаживая одно растение на горшок. Отрезали небольшой кусочек от листа, взятого из основной колонии, и накладывали на каждый лист испытуемых растений примерно за 2 ч до обработки, с тем чтобы клещи могли перемещаться к испытуемому растению и откладывать яйца. Размер отрезанного кусочка ва-рьировали так, чтобы получалось примерно 100 клещей на лист. В момент обработки кусочек листа, ис-пользуемый для переноса клещей, удаляли. Зараженные клещами растения погружали в испытательный раствор на 3 с с перемешиванием и помещали под вытяжной колпак для сушки. Растения выдерживали в течение 2 дней, после чего определяли умерщвленных взрослых особей, используя первый лист. Второй лист находился на растении еще пять дней, после чего определяли количество погибших яиц и/или вновь появившихся бабочек.
Empasca abrupta, взрослые особи, цикадка картофельная.
Листья фасоли лимской длиной 5 см погружали в испытательный раствор на 3 с с перемешиванием, а за-тем помещали под вытяжной колпак для сушки. Лист помещали в чашку Петри 100х10 мм, содержащую на дне увлажненную фильровальную бумагу. В каждую чашку вводили примерно 10 взрослых особей цика-док. Обработку осуществляли в течение 3 дней, после чего рассчитывали смертность насекомых.
Heliothis virexens, листоверткапочкоед табачная, третьей возрастной стадии.
Семядоли хлопчатника погружали в испытательный раствор и затем высушивали под вытяжным колра-ком. После сушки каждую семядолю разрезали на четыре доли, каждый разрез помещали в пластмассовые медицинские чашки объемом 30 мл, содержащие кусочек смоченного зубного тампона длиной 5-7 мм. В каждую чашку помещали гусеницу третьей возрастной стадии и накрывали чашку картонной крышкой. Обработку осуществляли в течение трех дней, после чего рассчитывали смертность насекомых и определя-ли снижение степени повреждения (см. табл. 2).

Таблица 1

Соединение Насекомые, ч./млн
Клещ паутинный Цикадка картофельная Листовертка-почкоед табачная
Фактор А 10 1 0,1 100 10 1 1000 100 10
9 9 3 5 0 - 0 0 0
23-Метоксиимино
Фактор А
9
9
9
9
8
0
9
9
9

Шкала оценки:
0 = отсутствие эффекта
1 = 10-25% умерщвления
2 = 26-35% умерщвления
3 = 36-45% умерщвления
4 = 46-55% умерщвления
5 = 56-66% умерщвления
6 = 66-75% умерщвления
7 = 76-85% умерщвления
8 = 86-99% умерщвления
9 = 100% умерщвления
Соединения формулы 1 относятся к малотоксичным соединениям.

Патент Великобритании №2166436, кл. С 07 D 493/22, опубл. 08.05.86.