СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАЗА

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и может быть использовано для неинвазивной и ранней диагностики псориаза.
Цель изобретения - неинвазивно, по волосам больных и на ранней стадии установить достоверный диагноз, псориаз.
У больных пациентов срезают определенное количество волос (30 мг), измеряют параметры сигналов электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) и определяют по известной формуле концентрацию свободных радикалов (КСР). Аналогичным образом измеряется сигнал ЭПР эталонных образцов волос и определяется КСР. Полученные значения КСР, сопоставляют и при совпадении ставят диагноз псориаз. В качества эталона берут образец волос больных, которым известными способами достоверно установлены диагноз псориаз. Значения КСР эталона устанавливают по отношению амплитуды сигналов ЭПР при регистрации спектров стандарта.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и может быть использовано для ранней и неивазивной диагностики псориаза.
Известны ряд способов диагностики псориаза: химический, энзиматический, клинический, лабораторный и другие. Более близким является, лабораторный [1] способ диагностики псориаза.
Лабораторный способ диагностики, это патоморфологический способ [1], для осуществления которого делается срез кожи на пораженных участках и берется кусочек ткани для исследования. Материал обрабатывается, фиксируется на предметных стеклах, смотрится под микроскопом и при обнаружении значительного акантоза, наличие удлиненных тонких и несколько утолщенных в нижней части энидермальных выростов над вершинами сосочков дермы эпидермис истончен, иногда состоит из 2 - 3 рядов клеток. Характерен паракетроз, а в старых очагах - гиперкератози, нередко роговой слой частично или полностью отшелушен.
Зернистый слой выражен неравномерно, под участками паракератоза, как правило, отсутствует. В период прогрессирования в шипатовом слое отмечается меж и внутриклеточный отек, экзоцитоз с образованием очаговых скоплений нейтрофильных гранулоцитов, которые мигрируя в роговой слой или паракератотические участки, образуют микроабцессы Монро.
В базальном и нижних рядах шипатовых слоев часто обнаруживают митозы. Соответственно удлинению эпидермальных отростков сосочки дермы увеличены, колбообразно расширены, отечны, капилляры в них извитые, переполненные кровью. В подсосочковом слое, кроме расширенных сосудов, отмечаются небольшой перева-скулярный инфильтрат из лимфоцитов, гистиоцитов с наличием нейтрофильных гранулицитов.
Недостатком лабораторного способа диагностики является вторжение в организм пациента: во-первых, для исследования делается срез кожи на пораженных участках; во-вторых, не всегда возможно на ранней стадии достоверно установить диагноз; в-третьих, он трудоемкий, дорогой и является инвазивным способом. Часто заканчивается образованием различных рубцовых изменений на местах среза кожи, которые в дальнейшем могут приве-сти к срезным осложнениям.
Поэтому, нами был разработан способ использования спектроскопии электронного парамагнитного резонан-са (ЭПР), для установления диагноза на ранней стадии проявления очагов болезни, без вторжения в организм пациента.
Цель изобретения – неивазивно, по волосам больных на ранней стадии установить достоверный диагноз псориаз.
Способ осуществляется следующим образом. У пациентов впервые обратившихся к врачу, срезают незначительный кусок волос, тщательно промывают, высушивают и затем взвешивают определенное количество (30 мг) и помещают в стеклянную ампулу, с внутренним диаметром 3 мм, который вставляется в прибор и записывается спектр ЭПР.
Спектры ЭПР записываются при следующих условиях: затухание СВЧ мощность 5 дБ, амплитуда развертки магнитного поля 200 Э, амплитуда ВЧ -модуляции 0,3 Э, частота ВЧ - модуляции 100 кГц.
При вышеописанных условиях записывают синглетный сигнал ЭПР свободных радикалов волос. Из записан-ного спектра определяют линейную интенсивность сигнала IR, аналогично определяют IR эталона и стандарта.
В качестве линейной интенсивности стандартного сигнала ЭПР при определении количества парамагнитных центров используется Мn+2, значения концентрации свободных радикалов (КСР) для которого составляет RCT = 5,1*1012 снин/мг, установленный заводом изготовителем прибора.
Аналогично вышеописанным способом, берут волосы у больных, которые известными в дерматологии спосо-бами установлен диагноз псориаз, и стоят на учете у врача, записывают сигнал ЭПР, который служит эталонным спектром.
Полученный сигнал ЭПР из эталонного волоса, сравнивают с сигналом стандарта, навески двухвалентного Мn+2 в окиси магния (МgO) и определяют количество парамагнитных центров по формуле ( 1).

СR = (IX / ICT )* RCT (1)

где IX - амплитуда сигнала ЭПР волос, мм;
ICT - амплитуда сигнала стандарта;
RCT - количество свободных радикалов стандарта, спин/мг.
Сравнивая параметры сигналов ЭПР полученных из волос впервые обратившихся больных, донора и эталона, определяют концентрации свободных радикалов по формуле (1), только вместо Rст и Iст, вставляется значения Rэт и Iэт. Где, Iэт амплитуда сигнала эталона:, Rэт - количество свободных радикалов эталона (спин/мг).
Диагностика форм заболевания определяется по изменению количества стабильных свободных радикалов. Регистрируется синглетный сигнал ЭПР свободных радикалов волос больных, по которому измеряется линейная интенсивность сигнала Ix, аналогично определяется IЭТ эталона и донора. Полученные значения концентрация Сr впервые обратившихся больных сопоставляется со значениями, полученными из образцов волос эталона и донора.
В качестве донора берутся волосы здоровых пациентов, а в качеств эталона образцы волос больных, кото-рым достоверно установлен диагноз, псориаз и состоять на учете у врача дерматолога. Выше описанным способом измеряются спектры ЭПР волос донора и эталона, и также определяются КСР.
Результаты экспериментально записанных спектров ЭПР волос приведены на фиг.1, (крив, а и б), а численно рассчитанных значений КСР представлены в таблице. Как видно из приведенного рисунка амплитуда сигнала у больных возрастаете, о чем свидетельствует их численное значение. Число свободных радикалов, рассчитанных используя формулу 1 лежат в интервале: донора 0,2 - 0,52*1012, эталона 0,7 - 1,7*1012 , у впервеы обратившихся больных 0,6 - 1,7. .1012 спин/мг, соответственно. Полученные рассчитанные численные значения показывают, что число свободных радикалов у больных всегда больше по сравнению у донора.
На фиг.1 приведены спектры ЭПР волос донора (крив.а) и больного (крив.б), до и после облачения ультрафиолетовым лучом (УФО).
Пример 1. Пациентка А., 1988 года рождения, болеет в течение 6 месяцев впервые обратилась к дерматологам с первичным белковым высыпанием на коже. Было срезано определенное количество волос и измерены спектры ЭПР. Из регистрированных параметров сигналов ЭПР (фиг.1 крив, б), определяется КСР по приведенной формуле (1) и сравниваются с эталонными значениями. Диагноз «распространенная форма, вульгарный псориаз, весенняя форма», последующие наблюдения подтвердили диагноз.
Пример 2. Пациент Б. 1952 года рождения, впервые обратился к дерматологам с жалобами на наличии единичных, пятнистых высыпаний на коже волосистой части головы, сопровождающиеся зудом. Традиционными методами не удалось установить точный диагноз. Было срезано определенное количество волос и проведен спек-тров ЭПР и определено количество свободных радикалов по вышеописанному способу. Полученные значения СR близко совпали со значением эталона 0,68 - 1,7 * 1012 спин/мг. Вынесен диагноз – «Ограниченная форма псориаза волосистой части головы». Последующие наблюдения подтвердили правильность диагноза.
Наблюдаемый разброс значения концентрации СR связаны от типа волос и возраста, а у больных еще от формы течения псориаза.
Известно, что при УФО биоткань, происходит накопление количества свободных парамагнитных частиц, которые приводит к увеличению выхода количества СR. Исходя из этого, с целью более убедительности полученных данных и достоверности установления диагноза, а также определения зависимости концентрации СR проба волос донора, эталона и больных пациентов, были подвергнуты УФО. Затем были записаны также по выше описанному способу спектры ЭПР. Зависимость выхода количества СR от времени облучения для здоровых и больных образцов приведены на фиг.2 (крив.1-6), а рассчитанные численные значения по формуле 1 приведены в таблице.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при УФО в образцах волос больных по сравнению с образцами волос донора, происходит увеличение концентрации СR. У доноров она увеличивается от 2,5 до 4,3 раза, а у больных от 5,1 до 11,43 раза, соответственно. Наблюдаемые увеличения концентрации СR, связаны за счет перераспределении энергии между радикалами и образованием дополнительных свободных радикалов. У больных увеличения выхода КСР связаны еще ослаблением энергии межмолекулярных связей между макромолекулами составляющих волос, т. е. происходит разрыхление волос. Возрастание времени перехода количество СR у больных по сравнению с донорами в 2,5-3 раза также свидетельствует о том, что происходит ослабление энергии связи между макромолекулами волос.


Зависимости количества парамагнитных радикалов в образцах
волос доноров и больных до и после УФО
Таблица

№ п/п волосы СR, спин/мг
до облучения СR, спин/мг после 10 часов облучения tП (час)
время пере-хода
1 донор 0,3 * 1012 1,6 * 1012 4
2 донор 0,2 * 1012 0,5 * 1012 3
3 больной 0,52 * 1012 3,25 * 1012 4
4 больной 1,68 * 1012 6,7 * 1012 10
5 эталон 1,7 * 1012 7,3 * 1012 6
6 эталон 0,7 * 1012 8,0 * 1012 10

Были проведены анализы волос 11-ти пациентов, впервые обратившихся к дерматологам, с первичными при-знаками высыпанием и зуда на разных участках кожи. Были взяты пробы волос и сняты спектры ЭПР вышеописанным методом. В 8-ми случаях, рассчитанные численные значения число свободных радикалов лежали в интервале численных значений эталона, т. е. диагностировался псориаз, последующие наблюдение подтвердили правильность диагноза.
Заявляемый способ применение ЭПР для диагностики по волосам соответствует критерию новизны, которое до настоящего момента не использовалось в медицинской практике.
Таким образом, полученные результаты показывают, что, измеряя спектры ЭПР волос больных и определяя количество парамагнитных частиц, можно без вторжения в организм диагностировать псориаз на ранней стадии.

1. UA 52433 А (НМУ им. А.А.Богомольца), 15.12.2002 (реферат).
2. RU 2241992 С1 (РМАПО), 10.12.2004 (формула)
3. SU 1814858 А1 (ИЭБ АН КазССР), 15.05.1993 (реферат)
4. US 5885842 А (МЕDINOX, INC), 23.03.1999 (реферат)
5. МОТТЕN АG еt аl, Аn ЕРR study of free radicals formed by antipsoriatic and tumorpromoting 9-anthrones in nonpolar solvents, Chem Res Toxicol. 1994 Nov-Dec; 7(6):877-81 (реферат) [онлайн].