СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРООКИСЬАЛЮМИНИЕВОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЦЕНУРОЗА ОВЕЦ

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и иммунологии, а именно к получению вакцины для профилактики ценуроза овец.
Способ получения включает ферментативное расщепление исходного материала с последующим гидролизом соляной кислотой и осаждение спиртом ректификатом.
В дисперсный порошок, который получается после осаждения спиртом, добавляют физиологический раствор, формалин и иммуноадъювант геля (гидроокиси алюминия), фасуют, проверяют на стерильность, безвредность и активность.

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и иммунологии, а именно к получению вакцины для профилактики ценуроза овец.
В настоящее время известен способ получения противоценурозной вакцины, основаный на изготовлении ее из двухсуточной культуры онкосферы М.Mueticeps [I].
Прототипом заявленного изобретения является способ получения вакцины для профилактики ценуроза овец, согласно которому стенки ценурозного пузыря и протосколексы после тщательного измельчения меха-ническим способом в ценурозной жидкости используют в качестве полуфабриката для производства вакци-ны.
В полученном полуфабрикате определяют: содержащие антигены по сухому остатку (мг/мл), после чего добавляют гидроокись алюминия, формалин и физиологический раствор, доводя содержание антигена до 0,2-0,3 мг/мл [2]. Однако при известном способе получения, кроме антигенного белка в вакцине содержатся поли-сахариды и другие балластные вещества, которые могут повысить реактогенность вакцины и вызвать ослож-нение у привитых животных.
Целью настоящего изобретения является извлечение иммуногенного белка из исходного материала и полное очищение его от балластных веществ и видоспецифического антигена для профилактики ценуроза овец.
Указанная цель достигается путем ферментативного расщепления исходного материала с последующим гидролизом соляной кислотой.
Принципиальное отличие предложенного способа заключается в том, что в качестве антигена служит не сам исходный материал, а иммунный белок, извлеченный из него.
Использование предложенного способа изготовления вакцины по срвнению с существующим способом имеет следующие преимущества:
- обеспечивает повышение иммуногенности вакцины вследствие непосредственной переработки путем расщепления и гидролиза антигенного материала и извлечения из него иммунного белка;
- формирует более напряженный иммунитет, что способствует полному предохранению животных от массового заражения возбудителем ценуроза;
- исключает побочные действия балластного вещества и других неспецифических раздражителей.
Пример: Исходный материал (стенки ценурозного пузыря, протосколексы и ценурозная жидкость) подверга-ется механическому измельчению на размельчителей тканей и их фильтрации. Полученный фильтрат рас-щепляется пепсином, для чего порошок из сколексов жидкости и герментативной оболочки с небольшим ко-личеством раствора тщательно растирают в ступке, затем всю массу смешивают с остальным количеством раствора пепсина и сливают в двухлитровую колбу Эрленмейера. В колбу добавляют 20 мл толуола (толуол имеет pH-5, за счет которого снижается кислотность), смесь тщательно взбалтывают и путем добавления концентрированной химически чистой соляной кислоты устанавливают pH-3.
Полученную смесь помещают на 42 ч в термостат (темп.+ 38+390 С), взбалтывают через каждые 6 часов, а рH среды проверяют через 1,5 18 и 24 часа, при этом показатель pH должен быть не выше 4,5 - поэтому его необходимо восстанавливать подкислением. Через 48-часов с поверхности гидролизной жидкости снимают ватным тампоном толуоловую пленку - жидкость при этом взбалтывать нельзя.
Гидролизат центрифугируют при 2 тыс. оборотах 3 мин. Центрифугат фильтруют через ватно-марлевой тампон (непереваренный остаток выбрасывают). Из полученного гидролизата осаждают антиген путем до-бавления 4 объемов 960С этилового спирта (при комнатной температуре). Затем pH доводят до 7-7,2 путем добавления 20% раствора двууглекислой соды ( в начале 1 мл, затем по каплям) с целью получения лучшего осаждения антигена. Выпавший осадок (антиген) собирают центрифугированием при 4 тыс. оборотах в тече-ние 5 мин. Надосадочный спирт сливают, а осадок (антиген) в начале с небольшим количеством дистиллиро-ванной воды (50мл) тщательно растирают в сметанообразную массу, а затем переливают в цилиндр, добав-ляют 750мл дистиллированной воды и оставляют на 5 мин (выпавший осадок удаляется).
В дальнейшем взвесь антигена в дистиллированной воде смешивают с 4 объемами спирта и проводят осаждение в цилиндрах, которые помещают в холодильник при 40С на 18-20 ч. Антиген после второго оса-ждения собирают центрифугированием при 6 тыс. оборотах в течение 5 мин.
Плотный осадок, рассыпчатый осадок размещают в открытые чашки Петри и ставят в термостат при температуре + 38+39О С. Через 16-18 ч высушенную массу растирают электромельнице или в ступке в дис-персный порошок, который служит как исходный материал для изготовления вакцины. Для изготовления вакцины 0.1-0.3 г сухого порошка для исходного материала растворяют в 100 мл физиологического раствора, добавляют 0,6% раствора формалина и 15% к объему вакцины гелья гидроокиси алюминия. Загружают все компоненты в реактор и перемешивают, затем расфасовывают по 100 см3.. Готовую вакцину проверяют на стерильность, безвредность и активность.

1. SU 1237214 А1 (МОСКОВСКИЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ МЯСНОЙ И МОЛОЧНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ), 15.06.1986, пример 1.
2. SU 368863 А (КАЗАХСКИЙ НАУЧНО_ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ), 28.06.1973 – описание – кол.2-4
3. WO 92/01051 A1 (INSTITUT PASTEUR), 23.01.1992, реферат