СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА ЖИВОТНЫХ.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к паразитологии и биотехнологии и может быть применено для диагностики эхинококкоза животных.
Способ включает сбор эхинококковых цист и выделение сколексов. Затем проводят процесс расщепления пепсином. После чего 0,1-нормальной уксусной кислотой осуществляют гидролиз. В результате центрифугирования отделяют центрифугат, в котором спиртом осаждают аллерген. Далее осуществляют ресуспендирование в дистиллированной воде и высушивание.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к паразитологии и биотехнологии и может быть применено для диагностики эхинококкоза животных.
Прототипом является способ получения аллергена для диагностики эхинококкоза [Патент Республики Казахстан KZ № 14177], включающий сбор эхинококковых цист, выделение сколексов, одновременно проводят процессы рас-щепления (пепсином) и гидролиз (соляной кисло-той), центрифугирование гидролизата, отделение центрифугата, осаждение аллергена спиртом, ресуспендирование в дистиллированной воде и высушивание.
Недостатками способа являются:
- длительность по времени проведения процесса расщепления и гидролиза;
-процесс расщепления и гидролиз производятся одновременно, что приводит к неполному расщеплению и гидролизу;
-использование соляной кислоты является недостаточно эффективным реагентом.
Целью изобретения является упрощение способа и получение максимального выхода аллергена.
Поставленная цель достигается использованием уксусной кислоты, поэтапным осуществлением процессов расщепления и гидролиза.
Способ осуществляется следующим образом. Из отобранных эхинококковых цист, полученных из эхинококковой жидкости у животных больных эхинококкозом, выделяют сколексы, которые осаждают 2 мл этилового спирта из расчета на 1 г сколекса 2 мл спирта. Далее сколексы подвергают расщеплению 2л.0,1% водным раствором пепсина(медицинским). Порошок из сколексов (32 г) с небольшим количеством раствора тщательно растирают в ступке. Затем всю массу смешивают с остальным количеством раствора пепсина и сливают в 2 л колбу Эрлен-мейера. В колбу добавляют 20 мл толуола (толуол имеет рH-5, за счет которого снижается кислотность). Полученную смесь тщательно взбалтывают и путем добавления 0,1-нормальной уксусной кислоты устанавливают среду до рН-3. Смесь на 42 часа помещают в термостат (+37-38°С) и взбалтывают через каждые 6 часов. При этом рH среду проверяют через 1, 5, 18, 24 часа, наблюдая за тем, чтобы показатель рH не был выше 4,5.Через 42 часа с поверхности гидролизной жидкости ватным тампоном снимают толуоловую пленку без взбалтывания жидкости.
Гидролизат центрофугируют в течение 3 мин. Центрифугат фильтруют через ватно-марлевый тампон (непереваренный остаток выбрасывают). Из полученного гидролизата аллерген осаждают при комнатной температуре путем добавления 4 объемов 96% этилового спирта. Затем рН доводят до 7 и 7,2 путем добавления 20% раствора двууглекислой соды. В начале выпавший осадок (аллерген) собирают в не-большом количестве центрифугированием при 4000 оборотов в течение 5 минут. Над осадочный спирт сливают, а осадок (аллерген) сначала в небольшом количестве дистиллированной воды (50мл) тщательно растирают до сметано-образной массы, а затем переливают в цилиндр, куда добавляют 750 мл дистиллированной воды и оставляют на 5 мин (выпавший осадок удаляется).
В дальнейшем взвесь аллергена в дистиллированной воде смешивают с 4 объемами спирта и проводят осаждение в цилиндре, который помещают в холодильник при +40С на 18-20 часов. Аллерген после второго осаждения собирают центрифугированием при 6000 оборотов в течение 5 мин.
Плотный рассыпчатый осадок размещают в открытые чашки Петри и ставят в термостат при температуре 38-390С. Через 16-18 часов высушенный аллерген растирают в ступке в дисперсный порошок и получают конечный продукт.

1.[Патент Республики Казахстан KZ № 14177],