ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ БИОПРЕПАРАТ СУБТИЛБЕН

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биопрепаратам, используемым для защиты животных от болезней (колибактериоза, сальмонеллеза, пастереллеза, протейоза), протекающих как в отдельности, так и в сочетании.
Биопрепарат для защиты животных от болезней, содержащий биомассу Bacillus subtilis, отличающийся тем, что в его состав включают бентонито-пектиновую смесь (9:1) в следующем соотношении компонентов, об.%:
биомасса Bacillus subtilis (штамм 26Д ТаджНИВИ 09) в концентрации 60-70х109 м.к./г – 70-80,
бетонито-пектиновая смесь (9:1) –20 – 30.
Препарат вводят перорально в дозах 0,3; 0,5 г/кг массы тела для лечения и профилактики инфекционных энтеритов телят. Лечебно-профилактическая эффективность составляет 87,5 – 97,5%.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биопрепаратам, используемым для защиты жи-вотных от болезней.
Известны биопрепараты ацидофилин, протовит (1) для профилактики диареи у молодняка сельскохо-зяйственных животных. Недостатком этих препаратов является отсутствие ингибирующей активности по отношению к патогенным возбудителям болезней животных.
Известны препараты, изготовленные на основе «Bacillus species» - бактисубтил (2,), «Bacillus subtilis» и «Bacillus licheniformis» - биоспорин (3), содержащие живые бактерии и наполнитель, высушенные лиофиль-ным способом, расфасованные во флаконы или ампулы.
Недостатками этих препаратов являются:
отсутствие в их составе минеральных и растительных адсорбентов, способствующих сохранению жизнедеятельности бактерий в неблагоприятных условиях внешней среды и усиливающих их антимикроб-ную активность; слабая бактерицидная активность препарата при смешанных инфекциях желудочно-кишечного тракта.
Известен биопрепарат бактерии-sl (4), содержащий живые микробные клетки (м.к.) и споры (биомассу) Bacillus и наполнитель - белково-сахарозо-желатиновую смесь. Бактерии-sl высушен лиофильным способом и расфасован во флаконы или ампулы. Препарат применяют как средство для лечения и профилактики желу-дочно-кишечных болезней животных. Однако препарат, принятый за прототип, имеет ряд недостатков:
микробная культура, входящая в состав бактерии-sl, характеризуется невысокой ингибирующей ак-тивностью по отношению к возбудителям желудочно-кишечных болезней животных как в отдельности, так и в ассоциации; не содержит минеральных и растительных адсорбентов в качестве наполнителя, повышающих бактерицидную активность Bacillus subtilis и способствующих локальной адсорбции бактериальных токси-нов.
Цель изобретения - улучшение лечебных и профилактических свойств биопрепарата.
Поставленная цель достигается тем, что в состав биопрепарата для защиты животных от болезней, со-держащего живые микробные клетки и споры бактерий (биомассу) Bacillus subtilis и белково-сахароза-желатиновую смесь, для улучшения его лечебно-профилактических свойств вместо белково-сахароза-желатиновой смеси включают бентонито-пектиновую (9:1) в следующем соотношении компонентов, об.%:
биомасса Bacillus subtilis (штамм 26Д ТаджНИВИ 09) в концентрации 60 - 70х109 м.к./г - 70-80,
бентонито-пектиновая смесь (9:1) -20 - 30.
Были изготовлены 9 вариантов препарата с различным количественным содержанием биомассы и бентонито-пектиновой смеси.
Вариант 1.
Состав препарата, об.%:
биомасса Bacillus subtilis (60х109 м.к./г) - 70,
бентонита-пектиновая смесь (9:1) - 30.
Варианнт 2
Став препарата,об.%:биомасса
Bacillus subtilis (65х109м.к,/г) - 70,
бентонито-пектиновая смесь (9:1) -30.
Вариант 3.
Состав препарата, об.%
биомасса Bacillus subtilis (70х109м.к./г) –70,
бетонито пектиновая смесь (9:1) –30.
Вариант 4.
Состав препарата, об.%
биомасса Bacillus subtilis (60х109м.к./г) - 75,
бентонито-пектиновая смесь (9:1) - 25.
Вариант 5.
Состав препарата, 0б.%:
биомасса Bacillus subtilis (65х109м.к./г) - 75,
бентнито-пектиновая смесь (9:1) - 25.
Вариант 6.
Состав препарата, 0б.%:
биомасса Bacillus subtilis (70х109м.к./г) – 75,
бентонито-пектиновая смесь (9:1)- 25.
Вариант 7.
Состав препарата, об.%
биомасса Bacillus subtilis (60х109м.к./г) - 80,
бентонито-пектиновая смесь (9:1.) - 20,
Вариант 8
Состав препарата, 06.%:
биомасса Bacillus subtilis (65х109 м.к./г) - 80,
бентонито-пектиновая смесь (9:1) - 20.
В ариант 9.
Состав препарата, об.%
биомасса Bacillus subtilis (70х109м.к,/г) – 80
бентонито-пектиновая смесь (9:1) - 20
Полученные варианты препарата проверяли на безвредность для жвотных, бактерицидную активность в отношении тест-культур возбудителей болезней животных (Esherichia coli, Salmonella dublin, Pasterella mul-tosida, Proteus vulgaris).
Для определения безвредности содержимое каждого варианта препарата в количестве 0,3 г на кг мас-сы тела с водой перорально вводили белым мышам массой 16 - 18 г (по 10 голов для каждого варианта) и новорожденным (2- 3-дневного возраста) телятам массой 30 - 35 кг (по 4 головы для каждого варианта) 2 раза в день в течение 10 дней.
Препарат считали безвредным, если все мыши и телята оставались живыми в течение 14 суток наблю-дения. Результаты испытаний представлены в таблице 1.
Результаты опытов показали, что все варианты субтилбена безвредны. Все животные остались живы-ми в течение всего периода наблюдения, ни у одного из них не выявлены признаки заболеваний и другие нарушения функций организма
Данные исследований, приведенные в примерах 1 - 4, свидетельствуют, что препарат субтилбен обла-дает высокой лечебно-профилактической эффективностью при желудочно-кишечных болезнях телят, вызван-ных ассоциациями эшерихии коли, сальмонеллы, пастерелы и протея.
Пример 1. Антибактериальную активность препарата субтилбен изучали по отношению к тест-культурам, антимикробную - в жидкой питательной среде методом серийных разведений (5).
По минимальному количеству препарата, соответствовавшему наименьшей его концентрации, дающе-му полную задержку роста тест-культуры, определяли чувствительность тест-микробов к препарату. Резуль-таты опытов оценивали микроскопически путем исследования мазков культуральной жидкости, окрашенных по Гаму.
Опыты проводили в трех повторах. Результаты представлены в таблице 2.
Установлено, что препарат обладает высокой бактерицидной активностью по отношению к тест-микробам. Минимальное количество препарата, дающее полную задержку роста и развития тест-микробов, составило 15,1 - 31,2 млн м.к. в мл, тогда как известный препарат бактерин-sl задерживал рост и развитие тест-микробов возбудителей болезней животных в концентрации 125 - 250 млн м.к. в мл.
Пример 2. Эффективность 9 вариантов субтилбена в различных дозах при профилактике желудочно-кишечных болезней телят испытали на 180 телятах (1 - 4- дневного возраста) неблагополучного по инфекци-онным энтеритам хозяйства. Схема проведения опытов и результаты применения субтилбена представлены в таблице 3.
Результаты исследований свидетельствуют, что препарат субтилбен в дозах 0,3; 0,5 г на кг массы тела при содержании биомассы (60 - 70х109 м.к./г) в количестве 70 - 80% и наполнителя - бентонито-пектиновой смеси - в количестве 20 - 30% имеет высокий эффект в профилактике желудочно-кишечных болезней телят.
Пример 3. Исходя из полученных результатов, препарат субтилбен испытан в сравнительном аспекте с препаратом бактериy-sl на 80 новорожденных телятах.
Животных по принципу аналогов, разделили на 2 группы по 40 голов в каждой. Телятам первой груп-пы до кормления молоком выпаивали субтилбен (вариант 6), содержащий биомассу В. subtilis (70х109 м.к./г) в количестве 75% и бентонито-пектиновую смесь - 25%, в дозе 0,3 г на кг массы тела один раз в день в течение 10 дней.
Телятам второй группы вводили бактерии-sl в соответствии с наставлением по применению препарата.
Результаты опытов представлены в таблице 4.
Из данных таблицы видно, что профилактическая и экономическая эффективность препарата суб-тилбен по сравнению с щюпаратом бактерин-sl выше.
Пример 4. Лечебную эффективность препарата субтилбен (вариант 6) изучали на 4 группах больных диареей телят 4- - 7-дневного возраста. При бактериологическом исследовании у больных телят были выяв-лены ассоциации бактериальных агентов (эшерихии коли, протей и сальмонелл).
Телятам первой группы (16 гол.) препарат субтилбен из расчета 0,2 г на кг массы тела растворяли в 300 мл воды и выпаивали дважды в сутки. Телятам второй группы (16 гол.) препарат субтилбен из расчета 0,3 г на кг массы тела растворяли в 300 мл воды и выпаивали дважды в сутки. Телятам третьей группы (16 гол.) препарат субтилбен из расчета 0,5 г на кг массы тела растворяли в 300 мл воды и выпаивали дважды в сутки.
Контрольную группу больных телят (16 гол.) лечили бактерином-sl согласно наставлению по его при-менении.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что субтилбен обладает высоким терапевти-ческим эффектом. Пероральное введение его подавляло в желудочно-кишечном тракте развитие патогенных возбудителей и обеспечивало более быстрое выздоровление телят на 1,0 - 2,2 суток, чем при использовании бактерин-sl.
Испытание разных доз субтилбена при лечении диареи показало, что разовая дача препарата в коли-честве 0,3 и 0,5 г на кг массы тела дважды в день до выздоровления обеспечивает хороший терапевтический эффект, затраты на лечение больных телят в 2 раза сокращаются по сравнению с бактерин-sl.
Результаты опытов представлены в таблице 5.
Для изучения срока годности препарата cубтилбен его серии, изготовленные в 2000 г., были заложены на хранение при комнатной температуре и подвергались переконтролю на содержание живых колониеобра-зующих клеток (КОК) через каждые 2 месяца. Количество живых КОК определяли высевом препарата на плотные питательные среды (Гаузе-2 или картофельный агар) и подсчетом выросших колоний.
В таблице 6 представлены данные контроля 9 вариантов препарата субтилбен.

1. RU 2181596 C1, 27.04.2002
2. RU 2190390 C2, 10.10.1992
3. SU 1717156 A1, 07.03.1992
4. US 5374425 A, 20.12.1994