Описываются способы ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста при лечении млекопитающего путем введения млекопитающему бициклического производного пиримидина общей формулы (I)
где
R - R4, A, B, D, E, Ar и n имеют указанные в формуле изобретения значения, или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве. Данные соединения могут также представлять собой активное вещество фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью и композиции, обладающей контрацептивным действием.
СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ ТИРОЗИНКИНАЗЫ РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РО-СТА, БИЦИКЛИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИМИДИНА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ИНГИБИРУЮЩЕЙ ТИРОЗИНКИНАЗУ РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА АКТИВНОСТЬЮ, И КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ КОНТРАЦЕПТИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
(51) МПК: 7 C07D 471/04, 487/04, 495/04, A61K 31/519, A61P 35/00, 15/00 //(C07D 471/04, 239:00, 213:00) (C07D 487/04, 239:00, 239:00) (C07D 495/04, 239:00, 333:00)
Сведения о документе ▾
- (11) Номер документа
- 381
- (13) Код типа документа
- P
- (51) МПК
- 7 C07D 471/04, 487/04, 495/04, A61K 31/519, A61P 35/00, 15/00 //(C07D 471/04, 239:00, 213:00) (C07D 487/04, 239:00, 239:00) (C07D 495/04, 239:00, 333:00)
- (45) Дата публикации
- 29.12.2003
- Статус
- Прекратил действие
Заявка ▾
- (21) Рег. номер заявки
- 96000352
- (22) Дата подачи заявки
- 23.01.1995
- (31) Конвенционный приоритет
- 186735
- (32) Дата подачи конв. заявки
- 25.01.1994
- (33) Страна приоритета
- US
Лица ▾
- (71) Заявитель(и)
- ВАРНЕР-ЛАМБЕРТ КОМПАНИ (US)
- (72) Автор(ы)
- Бриджес, Александер, Джеймс (US); Дэнни, Уилли-ам, Александер (NZ); Фрай, Дэвид (US); Крейкер, Алан (US); Майер, Роберт (US); Рукасл, Гордон, Уиллиам (NZ); Томпсон, Андри, Марк (NZ)
- (73) Патентообладатель(и)
- ВАРНЕР-ЛАМБЕРТ КОМПАНИ (US)
Реферат
Формула изобретения
1. Способ ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста при лече-нии млекопитающего путем введения млекопитаю-щему бициклического производного, отличаю-щийся тем, что в качестве бициклического произ-водного используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 -2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 4 атомами
углерода,
n-0,1или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1-4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиснил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, п - 0,1 или 2, Аr фенил, замещенный галоге-ном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, -амино или гидроксилом, или если n означает 1 .или 2 и Аr тиснил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е -углерод, ради-кал А азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой алкоксил с 1-4 атомами углеро-да.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - аминогруппу.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной части.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1 Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е -углерод, ради-кал А - азот, радикалы R1 и R2 означают алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает алкил с 1 - 4 атомами углерода.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает аминогруппу, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углеро-да.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - аминогруппу.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D- азот, а R1 - алкоксил с 1-4 атомами углерода.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 - аминогруппу.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = О или 1, Аг - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 -алкил с 1 - 4 атомами углерода.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода.
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - аминогруппу.
20. Способ по п.1 отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
22. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, радикалы R1 и R2 означают алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
23. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, радикалы R1 и R2 означают алкил с 1 - 4 атомами углерода.
24. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещеннный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает аминогруппу, а другой - алкоксил с 1 -4 атомами углерода.
25. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает моно- или диалкиломиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
26. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, а R2 алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
27. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, R2 -моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
28. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, R2 - аминогруппу.
29. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - означают углерод, А и Е - азот, а R1 и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода.
30. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - углерод, А и Е - азот, а R1 и R2 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
31. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - углерод, А и Е - азот, один из радикалов R1 и R2 означает алкоксил, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода.
32. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В - вместе означают атом азота, D и Е - углерод, или же А и В - углерод, а D и Е вместе означают атом азота, R1 и R2 озна-чают водород, алкил с 1 - 4 атомами, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу или же моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
33. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В вместе означают атом серы, D - азот, и Е - углерод, или А и В вместе означают атом углерода, D - азот и Е - серу, R1/4 означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода или же моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
34. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В вместе означают атом азота, D - азот, и Е - углерод, R1/4 означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода или же моно- или диалки-ламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, если они связаны с углеродом.
35. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение формулы (1) в виде отдель-ных стереоизомеров или рацемических и/или диастереомерных смесей.
36. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
37. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - аминогруппа.
38. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - моно- или диалкиламиногруппа с с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
39. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
41. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
42. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - аминогруппа.
43. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
44. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
45. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R, R1 и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
46. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
47. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R1 имеют указанные в п. 1 значения.
48. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R, R1 и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
49. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
50. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение, выбранное из группы, включающей 6-амино-4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2-d]пиримидин: 4-(З-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин; 7-амино-4-0-нитроан- илино)пиридо [4,3-d]пиримидин: 7-амино-4-(3-броманилино) пиридо[4,3-d]- пирими-дин: 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин: 7-амино-4- (3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин: 7-ацетиламино-4-(3- броманилино) пиридо[4,3-d]пиримидин: 4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-6-метоксипиридо [3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-тиено[3,4-d]пиримидин; 4-бензиламинотиено[3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-тиено[3,2-d]пиримидин; 4-бензиламинотиена[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-тиено[2,3-d]пиримидин; и N6-(3-бромфенил)аденин.
51. Бициклические производные пиримидина обшей формулы 1:
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы -углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X- группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если п означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части,
их отдельные стереоизомеры, рацемат или смесь диастереомеров или их фармацевтические соли или гидраты.
52. Бициклические производные пиримидина общей формулы (1) по п. 51, выбранные из группы, включающей 6-амино-4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]- пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2-d]пиримидин1 4-(3- броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин, 7-амино-4-(3-нитроанилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо- [4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7- амино-4-(3-трифторометиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетиламино-4(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]- пиримидин.
53. Фармацевтическая композиция, обладаю-щая ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпи-дермального фактора роста активностью, включа-ющая бициклическое соединение в смеси с фарма-цевтически приемлемым эксципиентом, разбавите-лем или носителем, отличающаяся тем, что в каче-стве бициклического соединения она содержит бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший ал-кил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диал- киламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтическую соль в эффективном количе-стве.
54. Способ ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста при лече-нии раковых заболеваний путем введения млекопи-тающему бициклического производного, отлича-ющийся тем, что в качестве бициклического произ-водного используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазолльное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший ал-кил с 1 - 4 атомами угле- рода,
n - 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсут-ствуют или означают водород, алкил с 1 - 4 атома-ми углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аr - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аг тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
55. Способ ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста для предотвращения имплантации бластоцита путем введения млекопитающему бициклического соеди-нения, отличающийся тем, что в качестве бицик-лического соединения используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазолльное кольцо, X- группы NH, NHR5, где R5 означает низ-ший алкил с 1 - 4 атомами
углерода,
n - 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аг- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-логкси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
56. Композиция, обладающая контрацептив-ным действием, включающая бициклическое со-единение в смеси с контрацептивно приемлемым эксципиентом, разбавителем или носителем, отли-чающаяся тем, что в качестве бициклического соединения она содержит бициклическое произ-водное пиримидина обшей формулы (1)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X- группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами угле- рода,
n- 0,1 или2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе,
Аr- фенил, тиeнил;
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1- 4 атомами углерода, аминогруппу, мопс-или диалкиламиногруппус 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или2, Ar - фенил, замещенный галоге-ном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтическую соль в эффективном количе-стве.
где
1 -2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 4 атомами
углерода,
n-0,1или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1-4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиснил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, п - 0,1 или 2, Аr фенил, замещенный галоге-ном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, -амино или гидроксилом, или если n означает 1 .или 2 и Аr тиснил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е -углерод, ради-кал А азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой алкоксил с 1-4 атомами углеро-да.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - аминогруппу.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной части.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1 Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е -углерод, ради-кал А - азот, радикалы R1 и R2 означают алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает алкил с 1 - 4 атомами углерода.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает аминогруппу, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, В, D и Е - углерод, ради-кал А - азот, один из радикалов R1 или R2 означает моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углеро-да.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - аминогруппу.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, ради-кал В - азот, а R2 - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D- азот, а R1 - алкоксил с 1-4 атомами углерода.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 - аминогруппу.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = О или 1, Аг - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, ради-кал D - азот, а R1 -алкил с 1 - 4 атомами углерода.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода.
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - аминогруппу.
20. Способ по п.1 отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной груп-пе.
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает водород, а другой - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
22. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, радикалы R1 и R2 означают алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
23. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, радикалы R1 и R2 означают алкил с 1 - 4 атомами углерода.
24. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещеннный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает аминогруппу, а другой - алкоксил с 1 -4 атомами углерода.
25. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и D - углерод, ради-кал Е - азот, один из радикалов R1 или R2 означает моно- или диалкиломиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, а другой - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
26. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, а R2 алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
27. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, R2 -моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
28. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, А и D - углерод, В и Е - азот, R2 - аминогруппу.
29. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - означают углерод, А и Е - азот, а R1 и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода.
30. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - углерод, А и Е - азот, а R1 и R2 - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
31. Способ по п.1, отличающийся тем, что ис-пользуют соединение, в котором X означает NH, n = 0, Ar - R-замещенный фенил, где R имеет значе-ния, указанные в п.1, В и D - углерод, А и Е - азот, один из радикалов R1 и R2 означает алкоксил, а другой - моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода.
32. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В - вместе означают атом азота, D и Е - углерод, или же А и В - углерод, а D и Е вместе означают атом азота, R1 и R2 озна-чают водород, алкил с 1 - 4 атомами, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу или же моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
33. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В вместе означают атом серы, D - азот, и Е - углерод, или А и В вместе означают атом углерода, D - азот и Е - серу, R1/4 означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода или же моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
34. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X означает NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А и В вместе означают атом азота, D - азот, и Е - углерод, R1/4 означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода или же моно- или диалки-ламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, если они связаны с углеродом.
35. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение формулы (1) в виде отдель-ных стереоизомеров или рацемических и/или диастереомерных смесей.
36. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
37. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - аминогруппа.
38. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - моно- или диалкиламиногруппа с с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
39. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, D и Е - углерод, В - азот и R2 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
41. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - алкоксил с 1 - 4 атомами углерода.
42. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - аминогруппа.
43. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе.
44. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение, в котором X = группа NH, n = 0 или 1, Аr - R-замещенный фенил, где R имеет значения, указанные в п.1, А, В и Е - углерод, D - азот и R1 - алкил с 1 - 4 атомами углерода.
45. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R, R1 и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
46. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
47. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R1 имеют указанные в п. 1 значения.
48. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R, R1 и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
49. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение следующей циклической структуры:
где R и R2 имеют указанные в п. 1 значения.
50. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют соединение, выбранное из группы, включающей 6-амино-4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2-d]пиримидин: 4-(З-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин; 7-амино-4-0-нитроан- илино)пиридо [4,3-d]пиримидин: 7-амино-4-(3-броманилино) пиридо[4,3-d]- пирими-дин: 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин: 7-амино-4- (3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин: 7-ацетиламино-4-(3- броманилино) пиридо[4,3-d]пиримидин: 4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-6-метоксипиридо [3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин; 4-(З-броманилино)-тиено[3,4-d]пиримидин; 4-бензиламинотиено[3,4-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-тиено[3,2-d]пиримидин; 4-бензиламинотиена[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-тиено[2,3-d]пиримидин; и N6-(3-бромфенил)аденин.
51. Бициклические производные пиримидина обшей формулы 1:
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы -углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X- группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если п означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части,
их отдельные стереоизомеры, рацемат или смесь диастереомеров или их фармацевтические соли или гидраты.
52. Бициклические производные пиримидина общей формулы (1) по п. 51, выбранные из группы, включающей 6-амино-4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]- пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2-d]пиримидин1 4-(3- броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин, 7-амино-4-(3-нитроанилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо- [4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7- амино-4-(3-трифторометиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетиламино-4(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]- пиримидин.
53. Фармацевтическая композиция, обладаю-щая ингибирующей тирозинкиназу рецептора эпи-дермального фактора роста активностью, включа-ющая бициклическое соединение в смеси с фарма-цевтически приемлемым эксципиентом, разбавите-лем или носителем, отличающаяся тем, что в каче-стве бициклического соединения она содержит бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший ал-кил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диал- киламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе, ациламиногруп-пу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Ar - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтическую соль в эффективном количе-стве.
54. Способ ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста при лече-нии раковых заболеваний путем введения млекопи-тающему бициклического производного, отлича-ющийся тем, что в качестве бициклического произ-водного используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазолльное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший ал-кил с 1 - 4 атомами угле- рода,
n - 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсут-ствуют или означают водород, алкил с 1 - 4 атома-ми углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аr - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аг тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
55. Способ ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста для предотвращения имплантации бластоцита путем введения млекопитающему бициклического соеди-нения, отличающийся тем, что в качестве бицик-лического соединения используют бициклическое производное пиримидина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазолльное кольцо, X- группы NH, NHR5, где R5 означает низ-ший алкил с 1 - 4 атомами
углерода,
n - 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углеро-да, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, Аг- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-логкси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1-4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Ar - фенил, замещенный гало-геном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффек-тивном количестве.
56. Композиция, обладающая контрацептив-ным действием, включающая бициклическое со-единение в смеси с контрацептивно приемлемым эксципиентом, разбавителем или носителем, отли-чающаяся тем, что в качестве бициклического соединения она содержит бициклическое произ-водное пиримидина обшей формулы (1)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы - углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилегающими ато-мами углерода означают пиридиновое, пиримиди-новое, тиенильное, пиррольное, имидазольное кольцо,
X- группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами угле- рода,
n- 0,1 или2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами угле-рода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1 - 4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппа, моно- или диалкиламиногруппа с 1-4 атомами углерода в каждой алкильной группе,
Аr- фенил, тиeнил;
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсутству-ют или означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, аци-локси с 1- 4 атомами углерода, аминогруппу, мопс-или диалкиламиногруппус 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или2, Ar - фенил, замещенный галоге-ном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водоро-да, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, или его фармацевтическую соль в эффективном количе-стве.
Описание
Настоящее изобретение относится к области ингибирования протеинкиназы, более конкретно, к способам ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста, новым бицикличе-ским производным пиримидина, фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей тирозин-киназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, и композиции, обладающей контра-цептивным действием.
Поверностные клеточные рецепторы семей-ства тирозинкиназных рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR) играют роль в ряде заболе-ваний, например раковых заболеваний. Это семей-ство состоит из EGF рецептора (также называемого Erb-B1), Erb-62 рецептора и его существенно ак-тивного онкопротеинового мутанта Neu, Еrb-В3 рецептора и Erb-64 рецептора. EGFR имеет в каче-стве наиболее важных лигандов эпидермальный фактор роста (EGF) и трансформирующий фактор роста альфа (TGF альфа). По-видимому, рецепторы проявляют только минимальные функции у взрос-лых людей, но возможно вовлекаются в процесс заболевания в значительной части всех видов рака, особенно рака ободочной кишки и груди. Близко родственные рецепторы Erb-B2, Еrb-В3 и Erb-B4 имеют в качестве основных лигандов семейство герегулинов, а рецептор сверхэкспрессии и мута-ции был четко определен как основной фактор риска при плохом прогнозе рака груди. Кроме того, также было показано, что все четыре члена этого семейства рецепторов могут образовывать гетеро-димерные сигнальные комплексы с другими члена-ми семейства и что это может привести к синерги-ческой трансформирующей способности, если бо-лее одного члена семейства проявляет сверхэкс-прессию при злокачественной опухоли.
Сверхэкспрессия более чем одного члена се-мейства, как было показано, является относительно обычной для злокачественных опухолей у людей.
Пролиферативное заболевание кожи псориаз в настоящее время не может успешно лечиться. Его часто лечат противораковыми средствами, такими, как метотрексат, который имеет очень серьезные побочные эффекты и который является не очень эффективным при ограниченных токсичностью дозах, которые могут быть использованы. Полага-ют, что TGF альфа является основным фактором роста, сверхпродуцирующим при псориазе, по-скольку у 50% трансгенных мышей, которые сверх-экспрессируют TGF альфа, развивается псориаз. Это наводит на мысль, что хороший ингибитор EGFR сигнализации может быть использован в качестве противопсориазного средства, предпо-чтительно, но не обязательно, при местном дозиро-вании.
EGF является мощным митогеном для клеток почечных канальцев. Четырехкратное увеличение как EGF секреции мочи, так и EGF и мРНК было отмечено у мышей на ранней стадии диабета, вы-званного стрептозойцином. Кроме того, повышен-ная экспрессия EGFR была отмечена у пациентов с пролиферативным гломерулонефритом (Roychaudhury и др., Pathology, 1993, 25, 327).
Сообщалось, что хронический панкреатит коррелирует с большим увеличением эксперссии как EGFR, так и TGF альфа. (Коrс и др., 1994, 35,1468). У пациентов с более серьезной формой заболевания, обычно при увеличении верхней ча-сти поджелудочной железы, также была показана сверхэкспрессия Еrb-В2 рецептора (Friess и др., Ann. Surg. 1994, 220,183).
В процессах созревания бластоцита, имплан-тации бластоцита в маточный эндометриум и в других случаях переимплантации ткани матки продуцируют EGF и TGF альфа (Таgа Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi, 1992, 44, 939), имеют повы-шенные уровни EGFR (Brown и др., Endocrinology, 1989,124, 2882) и легко могут быть индуцированы на продуцирование гепарин-связующих EGF за счет близости развившегося, но не прекратившего развития бластоцита. (Das и др., Development, 1994, 120, 1071). В свою очередь, бластоцит имеет до-статочно высокий уровень TGF альфа и EGFR экс-прессии (Adamson, Mol. Reprod. Dev., 1990, 27, 16). Хирургическое удаление подчелюстных желез, основного участка секреции EGF в организме, и лечение анти-EGFR моноклональными антителами, обе меры значительно снижают фертильность мы-шей (Tsutsumi и др., Endocrinology, 1993, 138, 437) за счет успешного снижения имплантации бласто-цита.
Известны бис-моно- и бициклические арило-вые и гетероариловые соединения, которые можно применять для ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста и/или ре-цептора фактора роста тромбоцитов (см. заявку WO 92/20642, С 07 С 43/21, А 61 К 31/44, 31/50, 31/495, 26.11.1992 г.).
Задачей изобретения является расширение ар-сенала возможностей ингибирования тирозинкина-зы рецептора эпидермального фактора роста, например, Еrb- b2, Еrb-bЗ или Еrb-b4.
Поставленная задача решается нижеописан-ными объектами.
Первым объектом изобретения является спо-соб ингибирования тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста при лечении млекопи-тающего путем введения млекопитающему бицик-лического производного, который заключается в том, что в качестве бициклического производного используют бициклическое производное пирими-дина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилега-ющими атомами углерода означают пиридиновое, пиримидиновое, тиенильное, пиррольное, имида-зольное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углерода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1-4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе,
Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсут-ствуют или означают водород, алкил с 1 - 4 атома-ми углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радика-лов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или ал-коксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутству-ют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аг - фенил, замещен-ный галогеном, амино или гидроксилом, или если п означает 1 или 2 и
Ar тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламино-группы с 1-4 атомами углерода в каждой алкиль-ной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.
Предпочтительные признаки предлагаемого способа включены в подпункты 2 - 50 формулы изобретения.
Вторым объектом изобретения являются би-циклические производные пиримидина вышеприве-денной формулы (1),
где
R - R4, X, Ar, А, В, D, Е и n имеют вышеуказан-ные значения, при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от во-дорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода, б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсут-ствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аг - фе-нил, замещенный галогеном, амино или гидрокси-лом, или если n означает 1 или 2 и Аг- фенил, заме-щенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, их отдельные стерео-изомеры, рацемат или смесь диастереомеров или их фармацевтические соли или гидраты.
Предпочтительными бициклическими произ-водными пиримидина формулы (1) являются соеди-нения, выбранные из группы, включающей 6-амино-4-(3-бром- анилино)пиридо[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2- d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин, 7- амино-4-(3-нитроанилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-броманилино) пиридо[4.3-d]пиримидин; 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-трифторометиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетиламино-4(3- броманили-но)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо [4,3- d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
Третьим объектом изобретения является фар-мацевтическая композиция, обладающая ингиби-рующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, которая в смеси с фармацевтически приемлемым эксципиентом, раз-бавителем или носителем включает бициклическое производное пиримидина вышеприведенной общей формулы (1) или его фармацевтическую соль в эффективном количестве.
Четвертым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста при лечении рако-вых заболеваний, псориаза, панкреатита или по-чечных заболеваний путем введения млекопитаю-щему бициклического производного пиримидина вышеприведенной общей формулы (1) или его фар-мацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
Данный способ может также применяться при лечении псориаза, панкреатита или почечных за-болеваний.
Пятым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста для предотвращения имплантации бластоцита путем введения млекопи-тающему бициклического производного пиримиди-на вышеприведенной общей формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
Шестым объектом изобретения является ком-позиция, обладающая контрацептивным действием, которая включает в смеси с контрацептивно при-емлемым эксципиентом, разбавителем или носите-лем бициклическое производное пиримидина вы-шеприведенной обшей формулы (1) или его фарма-цевтическую соль в эффективном количестве.
Бициклические производные пиримидина вы-шеприведенной общей формулы (1) можно полу-чать известными способами, например, представ-ленными на следующих схемах I - XIX, в которых Аr означает замещенный фенил или тиeнил.
Схема I
Замещение 2-хлора в 2,6-дихлор-3-нитропиперидине проводят с помощью цианида одновалентной меди в N-метил-2-пирролидоне (NMП). Замещение второго хлора в этом нитриле на фторид на этой стадии может быть предпочти-тельным. Затем проводят мягкое восстановление нитрогруппы в условиях, когда галоген не гидроли-зуется. Гидролиз нитрила с последующей кристал-лизацией ортоформита и хлорирование по типу Вильсмейера приводят к дигалогенпиридопирими-дину. Замещение более реактивного 4-хлора на соответствующий амин проводят после замещения 6-галогена на соответствующий нуклеофил для образования конечных продуктов. Данным спосо-бом можно получать также соединения, у которых один из R1 или R2 означает водород, а другой явля-ется низшим алкоксилом; или один из R1 или R2 является водородом, а другой - аминогруппой; или один из R1 или R2 означает водород, а другой явля-ется низшей моно- или диалкиламиногруппой; или один из R1 или R2 означает водород, а другой - низший алкил.
Схема II
Замещение хлора в 2-хлор-3,5-динитропиридине проводят с помощью цианида меди в NМП. Восстановление нитрогрупп в амино-группы проводят после гидролиза нитрила в амид. Его циклизуют в пиримидон с помощью ортофор-миата, который превращают в хлорид с помощью хлорангидрида ортофосфорной кислоты, или при желании превращают в тиометильное производное путем обработки пентасульфидом фосфора, потом метилйодидом и мягким основанием. Замещение соответствующим амином дает целевое 7-аминосоединение. Аминная функция может быть восстановительно алкилирована или активирована диазотированием аминогруппы в кислых или ще-лочных условиях, затем восстановлена в гидразид или превращена в низший алкил, простой эфир или в галоген при действии купрата или сочетанием Стилла по методикам, известным специалистам в данной области. Альтернативно, амин может быть восстановительно аминирован с образованием алкиламинной боковой цепи. Данным способом можно также получать соединения, упомянутые выше в связи с описанием схемы I.
Схема III
Обработка ЛДА (диизопропиламид лития) с последующей обработкой боратом/ пероксидом водорода позволяет ввести 3-гидрокси-заместитель. Если пиридин подвергают 2-му металлированию в положении 4, спирт может быть защищен как ТИПС (триизопропилсилиловый) простой эфир, который будет вызывать второе металлирование в положе-нии 5. Могут быть использованы альтернативные нитрования, такие, как превращение литиевого промежуточного производного в станнан и обра-ботка тетранитрометаном, или использование NO2BF4 (нитроний-тетрафторборат). С1 - замещение может быть проведено с использованием цианида одновалентной меди или других источников ионов цианида. После гидролиза нитрила и восстановле-ния нитрогруппы может быть использован орто-формиат вместо формамида для циклизации, и воз-можно, что некоторые циклизации будут требовать замещения F на MeS перед реакцией. Положение 4 активируют хлорированием, а затем вводят амин с боковой цепью. Окончательное замещение может быть выполнено с помощью алкоксидных или аминных нуклеофилов. Данным способом можно также получать соединения, у которых R1 и R2 яв-ляются низшими алкоксилами; один из R1 или R2 означает аминогруппу, а другой является низшим алкоксилом; или один из R1 или R2 означает моно- или диалкиламиногруппу, а другой - низший ал-коксил.
Схема IV
Применение 6-алкилхинальдиновой кислоты после ионного бромирования в жестких условиях дает ангидрид, который раскрывают аммиаком, рециклизуют в имид и затем проводят разложение по Гофману с потерей активного карбонила. Цик-лизацию и присоединение циклической боковой цепи обычным образом проводят путем сочетания по Стиллу для введения алкильной группы, ради-кала R1 и/или R2.
Схема V
Динитрование 2,6-диоксипиридина проводят для превращения в очень реактивное дихлорсоеди-нение. Динитродихлорпиридин просто замешают цианидом одновалентной меди в NMП, а затем соединение восстанавливают в мягких условиях в диамин. Нитрил гидролизуют до амида, который затем циклизуют в пиридопиримидон, который хлорируют обычным путем. Замещение более ре-активного хлора в 4-боковой цепи проводят после замещения 6-хлора алкоксидом. Для получения соединений, у которых R1 или R2 означает моно- или диалкиламино, а другой - низший алкоксил, амин должен быть соответственно алкилирован по методикам, известным специалистам в данной об-ласти.
Схема VI
2,4-диамино-5-цианопиридин может быть цик-лизован непосредственно во многие производные 4-бензиламинопиридопиримидина при обработке бензиламином и муравьиной кислотой при высокой температуре. Для менее нуклеофильных аминов 2,4-диамино-5-цианопиридин превращают путем обработки этилортоформиатом/уксусным ангид-ридом, последующей циклизацией с помощью гид-росульфид-иона в безводных условиях с получени-ем 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидина. S-алкилирование и замещение соответствующим амином дают целевой продукт. Если R2 не является аминогруппой, амин может быть ацилирован или восстановительно алкилирован. Альтернативно, 2,4-диамино-5-цианопиридин может быть гидроли-зован в соответствующий амид и эта группа может быть циклизована в 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидин с помощью ортоформиата. Диазоти-рование 7-аминогруппы и замещение фтором поз-воляют ввести другие аминные и алкоксидные нук-леофилы в конце синтеза, после того, как С4-заместитель был введен обычным образом. Диазо-тирование и замена аминогруппы бромом позво-ляют провести сочетания Стилла в положении 7.
Данным способом можно получать соедине-ния, у которых R2 означает низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема VII
2-хлор-5-нитропиридин превращают в соот-ветствующее 2-фторсоединение с помощью фтори-да калия в диметилсульфоксиде. Восстановление нитрогруппы с последующей обработкой Вос-ангидридом (Вос = трет.-бутоксикарбонил) дает Вос-аминопроизводное, которое металлируют и карбоксилируют в 4-положении. Удаление Вос-группы с помощью трифторуксусной кислоты и циклизация пиримидонового цикла формамидом дают 6-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(3,4-d)пиримидин. Его хлорируют в положении 4 обычным образом и вводят 4-боковую цепь через замещение соответ-ствующим амином. Замещение 6-фтора соответ-ствующими нуклеофилами приводит к различным конечным продуктам. Если фтор замещают на тио-метоксид, то он, в свою очередь, может быть заме-щен алкильными группами в катализируемых ни-келем замещениях Гриньяра. Данным способом можно получать соединения, у которых R1 означа-ет низший алкил или алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема VIII
Нитрование 2-метоксиникотиновой кислоты с последующим замещением активированной меток-сигруппы и циклизацией пиримидонового цикла можно проводить в одну стадию с помощью фор-мамидина, или, альтернативно, в две стадии с по-мощью аммиака с последующей циклизацией с помощью эквивалента формамида. Карбонил пре-вращают в хлорид и замещают боковой цепью обычным способом, а затем селективно восстанав-ливают нитрогруппу в аминогруппу. Она может быть алкилирована, ацилирована или диазотиро-вана. Диазосоединение может быть превращено в гидроксильное или в бромидное или иодидное со-единения, и эти последние могут быть введены в реакцию сочетания Стилла для введения низшего алкила, алкоксила, аминогруппы, моно- или диал-киламиногруппы радикала R1.
Схема IX
Этот путь использует известное металлирова-ние и карбоксилирование 2,6-дифторпиридина с последующим замещением 2-фтор-заместителя. Циклизация пиримидонового кольца с помощью формамида, последущее превращение карбонила в хлорид обычным способом дает хлорфторпиридо-пиримидин. Арил(алкил)аминная боковая цепь вводится путем замещения более реакивного пири-мидинового хлора, затем вводят заместитель R2 путем фторидного замещения. Для введения алкила используют замещение фтора алкоксидом, послед-ний простой эфир расщепляют до пиридина, про-водят O-трифлатирование и сочетание Стилла. Данным способом получают соединения, у кото-рых R2 означает низший алкил или алкоксил, ами-ногруппу, моно- или диалкиламиногруппу.
Схема X
Эта схема основана на металлировании 2,6-дифторпиридина подобно схеме IX. Первое метал-лирование используют для введения кислорода, а второе - для введения карбоновой кислоты. Если требуется провести второе металлирование в по-ложении 5, кислород может быть защищен как очень массивный ТИПС- простой эфир и может потребоваться более сильное основание, чем ЛДА. Аммиак вводят в положение 2 при высокой темпе-ратуре и давлении, циклизуют пиридиновое коль-цо, активируют в положении 4 обычным способом, а затем замещают в положении 4 боковой цепью. Замещение 7-фтор-заместителя соответствующим нуклеофилом, последующие превращения, как опи-сано в предыдущих схемах, завершают синтез. Данным способом можно также получать соедине-ния, у которых R1 и R2 означают низший алкоксил, или один из R1 и R2 означает аминогруппу, а дру-гой является низшим алкоксилом, или один из R1 или R2 означает низшую моно- или диалкипамино-группу, а другой означает низший алкоксил.
Схема XI
Нитрование коммерчески доступной дихлор-никотиновой кислоты проводят путем селективного замещения более реактивного хлора в мягких усло-виях, а затем более жесткого замещения другого хлора в соответствующем порядке. Полученную в результате 6-алкокси-2-амино-5-нитроникотиновую кислоту циклизуют в пирими-дон и превращают 4-карбонил в хлорид и замеща-ют обычном образом на подходящий амин, полу-чая 4-амино-7-алкокси-6-нитропиридо(2,3-d) пири-мидин. Восстановление нитрогруппы с последую-щим любым желаемым алкилированием дает целе-вые продукты.
Схема XII
Реакция подходящей 5-алкилизотиурониевой соли с метоксиметилидинмалононитрилом приво-дит к полностью функционализированному пири-мидиновому предшественнику. Первоначально образовавшийся пиримидин может быть замещен по S-этильной группе на R2 до или после гидролиза нитрила, если замещение или окисление позже оказывается проблематичным. Замещение S-этильной группы также может быть достигнуто без окисления для активации серы. Циклизацию второ-го пиримидинового цикла проводят после актива-ции 4-карбонила осернением и алкилированием. Даже если 7-тиогруппа не была замещена в этот момент, предпочтительно происходит введение 4-амино-боковой цепи. Данным способом можно получать соединения, у которых R2 означает низ-ший алкоксил, низшую моно-или диалкиламино-группу или аминогруппу.
Схема XIII
3Н-тиено(3,2-d)пиримид-4-он может быть по-лучен по стандартным методикам из коммерчески доступного этил-3-аминотиофенкарбоксилата и формамида. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замеще-нием подходящим амином дает целевые тиено(3,2-d)пиримидины. Если R2 не является водородом, подходящий электрофил, например, нитрогруппа, для заместителей, основанных на аминогруппе или диазотированных производных, или бром для ко-нечных продуктов, получаемых сочетанием Стил-ла, может быть введен на показанной или более ранней стадии, а затем превращен в R2 путем вос-становления или аминирования, например, или с помощью сочетания Стилла, или другими извест-ными специалистам в данной области способами. Данным способом можно также получать соедине-ния, у которых А и В означают углерод, а D и Е, взятые вместе, означают атом серы, R1 или R2 озна-чают водород, низший алкил, низший алкоксил, амино или низшую моно- или диалкиламиногруп-пу.
Схема XIV
Тиено(2,3-d)пиримид-4-он получают путем синтеза Гриньяра из 2,5-дитиана и этилцианоаце-тата с последующей циклизацией с формамидом. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замещением подходя-щим амином дает целевые тиено(2,3-d)пиримидины.
Схема XV
Для получения пирроло(2,3-d)пиримидина циклизуют пиримидиновый цикл в цианоамино-пиррол известными способами. Активация и заме-щение тиола боковой цепью могут быть проведены до или после возможного электрофильного заме-щения пиррольного цикла. Данным способом мож-но также получать соединения, у которых А и В, взятые вместе, означают атом азота, а D и Е озна-чают углерод, R1 или R2 означают водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема XVI
Получение пирроло(3,2-d)пиримидина прово-дится с помощью известной конденсации ортофор-миата с подкисленной 4-метильной группой 6-пиримидонов с образованием пирролопиримидина, как показано выше. Боковая цепь может быть вве-дена по стандартным методикам, таким, как в схе-ме 1, и заместитель R2 может быть введен по стан-дартной методике в химии электрофильного заме-щения, как описано выше.
Схема XVII
Эти соединения могут быть получены при непосредственном замещении галогена в соответ-ствующих 6-хлорпуринах по хорошо известным из уровня техники методикам. Заместитель R1 может быть введен путем легкого электрофильного заме-щения в активированном положении 8 пуринового цикла с последующими типами превращений, опи-санных в нижеприведенных примерах. Данным способом можно также получать соединения, у которых А и В, взятые вместе, означают атом азо-та, D означает углерод, Е означает азот, R1, R3 и/или R4 означают водород или низший алкил, а R2 означает водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкилами-ногруппу.
Схема XVIII
Реакция 6-хлор-4-метилтиопиримидина с ЛДА и потом с диметилформамидом дает соответству-ющий 5-альдегид, который обрабатывают гидра-зином, чтобы замкнуть цикл, получая 4-метилтиопиразоло(3,4-d)пиримидин, при замеще-нии которого соответствующим амином получают целевые производные пиразоло (3,4-d)пиримидина. Данным способом можно получать соединения, у которых R1/4 означают водород, низший алкил, если находятся на азоте, или Н, низший алкил, низший алкоксил, амино-или низшую моно- или диалкиламиногруппу, если находятся на углероде.
Схема XIX
Нитрование пиразол-3-карбоновой кислоты с последующем восстановлением приводит к 4-аминопиразол-3-карбоновой кислоте. Ее циклизу-ют в пиразоло(3,4- d)пиримид-4-он с помощью со-ляно-кислого формамидина и проводят замещение карбонила на галоид по стандартным методикам, затем замешают хлор на соответствующий амин, получая целевой пиразоло(4,3-d)пиримидин.
Получение бициклических производных пи-римидина вышеприведенной общей формулы (1) поясняется следующими примерами.
ПРИМЕР 1
4-Анилинопиридо(3,2-d)пиримидин мезилат 3Н-Пиридо(3,2-d)пиримидин-4-oн
Раствор 2,00 г (9,91 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинамида в 100 мл смеси этилацетата с метанолом (1:1) гидрируют на 0,40 г 5%-го палла-дия-на-угле при 60 фунт/дюйм2 [=4,219 кг/см2] в течение 6 дней с добавлением свежего катализато-ра через 2 и 4 дня. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентрируют досуха, получают 3-аминопиколинамид в виде оранжевого масла, которое используют непосредственно на следующей стадии. Сырой продукт перемешивают при кипячении с обратным холодильником в 50 мл триэтилортоформиата в течение 42 часов; в тече-ние этого времени образуется каштановый осадок. После охлаждения твердый продукт отфильтровы-вают, тщательно промывают петролейньш эфиром и сушат в вакууме, получают 1,27 г (87%) 3Н-пиридо(3.2-в)пиримидин-4-она т. пл. 343 -345°С.
4-Хлорпиридо(3,2-в)пиримидин
Суспензию 1,00 г (6,80 ммоля) указанного вы-ше пиримидона в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов, за-тем концентрируют досуха при пониженном дав-лении. Остаток распределяют между дихлормета-ном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, отделяют и обрабатывают органический слой, получают 0,97 г (86%) 4-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого про-дукта, т. пл. 335°С (разложение), который исполь-зуют без дополнительной характеристики.
4-Анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилат
Раствор 84 мг 4-хлорпиридо [3,2-d]-пиримидина (0,5 ммоля), 56 мг (0,6 ммоля) анилина и 62 мг триэтиламина (0,6 ммоля) в 2 мл этанола кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов. Сырую реакционную смесь очищают препаративной ТСХ (тонкослойная хроматография) на пластинах с диоксидом крем-ния, элюируют один раз 3% метанола в хлорофор-ме. Экстрагируют основную полосу и выпаривают досуха при пониженном давлении, твердый оста-ток растворяют в 5 мл ацетона, фильтруют и мед-ленно при перемешивании прибавляют 32 мкл (0,5 ммоля) метансульфоновой кислоты. Остаток соби-рают фильтрованием, промывают ацетоном и су-шат в вакуумнойпечи; получают 91 мг (57%) 4-анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилата в виде матовых желтых игл.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :11,75 (1Н, с.шир); 9,11 (1Н, дд, J = 1,5, 4,3 Гц); 8,97 (1Н, с); 8,32 (1Н, дд, J = 1,5; 8,4 Гц); 8,12 (1Н, дд, J = 4,3, 8,5 Гц); 7,88 (2Н, д, J = 8,2 Гц); 7,49 (2Н, т, J = 8,0 Гц); 7,32 (1Н, т, J = 7,0 Гц); 2,34 (3Н, с).
ПРИМЕР 2
4-Бензиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Раствор 0,10 г (0,60 ммоля) свежеприготовлен-ного 4-хлорпиридо(3,2-в)пиримидина [полученно-го, как описано в предыдущем эксперименте] и 0,13 мл (1,20 ммоля) бензиламина в 15 мл пропан-2-oлa, содержащий следы концентрированной соляной кислоты, нагревают в течение 30 минут при 50°С, затем концентрируют досуха. Остаток распреде-ляют между водой и этилацетатом, органический слой отделяют и обрабатывают, хроматографиру-ют на силикагеле. Этилацетат элюирует головную фракцию, тогда как смесь метанола с этилацетатом (1:9) элюирует 4-(бензиламино)пиридо[3,2-d)пиримидин(0,11 г,77%);
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,67 (1Н, с); 6,50 (1Н, дд, J = 4,3, 1,5 Гц); 8,10 (1Н, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,63 (1Н. дд, J = 8,8, 4,3 Гц); 7,55 (1Н, шир.); 7,41-7,29 (5Н, м); 4,86 (2Н, д, J = 5,9 Гц).
ПРИМЕР 3
4-(3-Броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидин
Проводят реакцию полученного, как описано в предыдущем примере, хлорпиридо(3,2-d)пиримидина с 3-броманилином в пропан-2-oлe, содержащем следы концентрированной соляной кислоты при 50°С в течение 30 минут, затем про-дукт хроматографируют на силикагеле и получают с выходом 87% 4-(3-бромфенил) аминопиридо[3,2-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 9,19 (1Н, ш); 8,83 (1Н, с); 8,80 (1Н, дд, J = 4,3, 1,5 Гц); 8,29 (1Н, шир.); 8,19 (1Н, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,83 (1Н,м); 7,76 (1Н, дд, J = 8,5; 4,3 Гц); 7,29-7,27 (2Н, м).
ПРИМЕР 4
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,2-d]пиримидин
2-Циано-б-фтор-3-нитропиридин
Смесь 10,0 г (0,054 моля) б-хлор-2-циано-3-нитропиридина и 9,48 г (0,163 моля) фторида калия в 200 мл ацетонитрила кипятят с обратным холо-дильником в течение 18 часов при перемешивании, затем выливают в воду и экстрагируют этилацета-том. Экстракт промывают водой и обрабатывают, остаток хроматографируют на силикагеле, элюи-руют смесью этилацетата с петролейным эфиром (3:7), получают, после удаления растворителя при пониженном давлении, 7,2 г (79%) 2-циано-б-фтор-3-нитропиридина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,79 (1Н, дд, J = 9,0, 6,0 Гц); 7,48 (1Н, дд, J = 9,0, 3,0 Гц).
6-фтор-3-нитропиридин-2-карбоксамид
Раствор 1,40 г 2-циано-б-фтор-3-нитропиридина (8,39 ммоля) в 30 мл 90%-й серной кислоты нагревают при 70°С в течение 90 мин., затем охлаждают, выливают на лед и подщелачи-вают концентрированным аммиаком. Экстракция этилацетатом и обработка дают 0,94 г (61%) 6-фтор-3-нитропиримидин-2-карбоксамида.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,70 (1Н, дд, J = 8,9 Гц, 6,5 Гц); 8,30 и 8,03 (1Н, 1Н шир. с); 7,62 (1Н, дд, J = 8,9, 2,9 Гц).
6-Фтор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримид-4-он
Раствор 1,50 г (8,10 ммоля) 6-фтор-3-нитропиридин-2-карбоксамида в этилацетате гид-рируют на 5%-м палладии-на-угле (0,30 г) при 60 фунт/дюйм2 (= 4,219 кг/см2) в течение 2 часов. По-сле удаления катализатора фильтрованием рас-творитель отгоняют при пониженном давлении, получают остаток сырого 3-амино-6- фторпирими-дин-2-карбоксамида, который используют непо-средственно на следующей стадии. Добавляют 60 мл триэтилортоформиата, после чего смесь нагре-вают и кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 18 часов. Охлажденную смесь разбавляют равным объемом петролейного эфира, полученный осадок собирают фильтрова-нием и тщательно промывают петролейным эфи-ром, получают 6-фтор-3Н-пиридо (3,2-d)пиримид-4-он (1,26 г, 84%).
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:12,72 (1Н, шир. с); 8,31 (1Н, дд, J = 8,6, 7,7 Гц); 8,20 (1Н, с); 7,66 (1Н, дд, J = 8,6, 3,0 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидин
Суспензию 0,2 г (1,21 ммоля) 6-фтор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримид-4-она в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником при перемешивании до тех пор, пока она не станет гомогенной (2 часа), а затем еще 1 час. Удаляют избыток хлорокиси фосфора при пониженном дав-лении, остаток распределяют между дихлормета-ном и насыщенным водным раствором дикарбона-та натрия. Обработка органической части дает сырой 4-хлор-б-фторпиридо(3,2-d)пиримидин (100%) в виде нестабильного твердого продукта, который используют непосредственно на следую-щей стадии. Раствор 0,20 г (1,1 ммоля) 4-хлор-б-фторпиридо(3,2-d)пиримидина и 0,12 мл (2,18 ммо-ля) 3-броманилина в 20 мл пропанола-2, содержа-щего 1 каплю конц. соляной кислоты, кипятят с обратным холодильником в течение 15 минут, за-тем охлаждают, выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Экстракт обрабатывают и хромо-графируют остаток на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/петролейный эфир (1:2); после удале-ния растворителя при пониженном давлении полу-чают 0,18 г (52%) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,82 (1Н, с); 8,65 (1Н, шир. с); 8,31 (1Н, т, J = 7,4 Гц); 8,27 (1Н, шир. с); 7,77 (1Н, м); 7,41 (1Н, дд, J = 8,9 Гц, 2,2 Гц); 7,29 (2Н, шир.с).
ПРИМЕР 5
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидин 6-Хлор-3-нитропиколинамид
Раствор 1,00 г (5,45 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинонитрила в 15 мл 90%-й серной кис-лоты нагревают при 70°С в течение 3,5 часов, а затем выливают в ледяную воду. Смесь экстраги-руют четыре раза этилацетатом, а затем объеди-ненные экстракты обрабатывают, получая 0,80 r (73%) 6-хлор-3-нитропиколинамида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,55 (1Н, д, J = 8,5 Гц); 8,31 и 8,04 (1Н, 1Н, 2
шир.с); 7,93 (1Н, д,. 1=8,5 Гц).
6-хлор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримидин-4-он
Раствор 0,30 г 6-хлор-3-нитро-пиколинамида (1,49 ммоля) в 30 мл этилацетата гидрируют при 60 фунт/дюйм2 (= 4,219 кг/см2) на 0,10 г 5%-гo палла-дия-на-угле в течение 20 минут. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентри-руют досуха, получают 3-амино-6-хлорпиколинамид в виде желтого масла, которое непосредственно используют на следующей ста-дии. Его растворяют в 30 мл триэтилортоформиата и смесь кипятят с обратным холодильником в тече-ние 18 часов. Добавляют 30 мл петролейного эфи-ра к охлажденному раствору, отфильтровывают полученный в результате осадок сырого 6-хлор-3Н-пиридо (3,2-d)пиримидина-4-она (0,27 г, 99%) и сушат в вакуумной печи.
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)примидин
Суспензию вышеуказанного хиназолона (0,20 г; 1,10 ммоля) в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, об-рабатывают органическую часть, получают 0,16 г (73%) 4,6-дихлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого продукта, который исполь-зуют непосредственно на следующей стадии. Рас-твор 0,16 г (0,80 ммоля) сырого дихлорпиридопи-римидина и 0,17 мл (1,60 ммоля) 3-броманилина в 25 мл пропанола-2, содержащего следы конц. со-ляной кислоты, нагревают при 50°С в течение 30 минут. Охлажденную смесь выливают в насыще-ный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом, экстракт обрабатывают и хромато-графируют на силикагеле. Элюирование смесью этилацетата с петролейным эфиром (1:4) дает 3-бромалин, тогда как смесь этилаце-тат/петролейный эфир (1:1) элюирует 0,17 г (63%) 4-(3-броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,90 (1Н, шир. с); 8,84 (1Н, с); 8,30 (1Н, дд, J = 2,1, 2,20 Гц); 8,17 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 7,82-7,78 (1Н, м); 7,73 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 7,32-7,29 (2Н, м).
ПРИМЕР 6
4-(3-Броманилино)-6-аминопиридо(3,2-d)пиримидин
Реакция 0,12 г (0,38 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] с насыщенным раство-ром аммиака в этаноле в сосуде под давлением при 100°С в течение 18 часов дает 87 мг (72%) 6-амино-4-[3-броманилино]пиридо[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,76 (1Н, шир. с); 8,64 (1Н, с); 8,23 (1Н, шир. с); 7,93 (1Н, д, J = 9,0 Гц); 7,81 (1Н, дт, Jd = 7,7 Гц, Jt = 1,8 Гц); 7,28-7,22 (2Н, м); 7,00 (1Н, д, J = 9,0 Гц); 4,90 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 7
4-(3-Броманилино)-6-метиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Реакция 50 Mr (0,16 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] с 32 мг (0,47 ммоля) солянокислого метиламина и 70 мкл (0,55 ммоля) триэтиламина в 10 мл этанола в сосу-де под давлением при 100°С в течение 18 часов приводит к 43 мг (81%) 6-метиламино- 4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,81 (1Н, шир. с); 8,61 (1Н, с); 8,19 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,86 (1Н, д, J = 9,1 Гц); 7,83 (1Н, дт, Jd = 7,7 Гц, Jt = 1,8 Гц); 7,28-7,21 (2Н, м); 6,92 (1Н, к, J = 9,1 Гц); 4,97 (1Н, к., J = 5,0 Гц); 3,13 (3Н, к., J = 5,0 Гц).
ПРИМЕР 8
4-(3-Броманилино)-6-диметиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Смесь 0,15 г (0,47 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте], 0,11 г (1,41 ммоля) солянокислого диметиламина и 0,23 мл (1,64 ммо-ля) триэтиламина в 15 мл этанола нагревают в сосуде под давлением при 100°С в течение 18 ча-сов. Растворитель отгоняют при пониженном дав-лении и распределяют остаток между этилацета-том и водой. Обрабатывают органическую часть и остаток хроматографируют на силикагеле. Элюи-рование этилацетатом/петролейным эфиром (1:1) дает головную фракцию, тогда как этилацетат элюирует 0,14 г (86%) 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,72 (1Н, шир. с); 8,56 (1Н, с); 8,17 (1H, T, J = 1,9 Гц); 7,85 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 7,77 (1Н, дт, Jd = 7,5 Гц, Jt = 1,9 Гц); 7,27-7,18 (2Н, м); 7,08 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 3,21 (6Н, с).
ПРИМЕР 9
4-(3-Броманилино)-6-метоксипиридо (3,2-d)пиримидин
Прибавляют 0,11 г (0,34 мл/юля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо (3,2-d) пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] к рас-твору метоксида натрия [приготовленному при добавлении металлического натрия (31 мг, 1,38 ммоля) к 15 мл безводного метанола]. После нагре-вания в сосуде под давлением при 90°С в течение 3 часов раствор концентрируют досуха и остаток распределяют между этилацетатом и водой. Обра-ботка органической части приводит к 92 Mr (82%) 4-(3-бромфенил)-амино-6-метоксипиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,73 (1Н, с); 8,66 (1Н, шир. с), 8,18 (1Н, м); 8,05 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 7,83-7,80 (1Н, м); 7,30-7,24 (2Н, м); 7,23 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 4,12 (3Н, с).
ПРИМЕР 10
4-Анилинопиридо(4,3-d)пиримидин 4-N-трет.бутоксикарбониламино)пиридин
К смеси 2 г (21,24 ммоля) 4-аминопиридина, 3,57 г (63,72 ммоля) гидроксида калия, 10 мл воды и 4 мл 2-метил-2-пропанола на льду прибавляют 6,95 г (31,87 ммоля) ди-трет.бутил-дикарбоната. Полу-ченный в результате двухфазный раствор переме-шивают при 25°С в течение 1 недели, затем при-бавляют 20 мл воды. Раствор экстрагируют 1 раз метиленхлоридом и 2 раза этилацетатом. Органи-ческий слой сушат над сульфатом магния и кон-центрируют при пониженном давлении; получают 4.08г (99%) 4-(N-трет.бутоксикарбониламино) пи-ридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,84 (1Н, с); 8,35 (2Н, д, J = 6 Гц); 7,44 (2Н, д, J = 7 Гц); 1.49 (9Н, с).
4-(N-трет.бутоксикарбониламино)никотиновая кислота
Медленно прибавляют 24 мл (2,18 М; 52,51 ммоля) н-бутиллития к раствору 4.08г (21 ммоля) 4-(N-tpet. бутоксикарбониламино)пиридина в 50 мл тетрагидрофурана при перемешивании в атмосфе-ре азота при -78°С. Раствору дают нагреться до 0°С, перемешивают 3 часа, затем охлаждают снова до - 78°С и выливают в 100 мл эфира, содержащего сухой лед. Раствор нагревают до комнатной темпе-ратуры при постоянном перемешивании. Прибав-ляют воду и нейтрализуют смесь уксусной кисло-той. Полученный твердый продукт собирают ваку-умным фильтрованием и сушат в вакуумной печи; получают 2,72 г (54%) 4- [N-трет.бутоксикарбониламино] никотиновой кислоты в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,75 (1Н, шир. с); 8,95 (1Н, с); 8,50 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 8,20 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 1,49 (9Н, с).
4-Аминоникотиновая киcлота
Смесь 2,72 г (11,4 ммоля) 4-N-трет.-бутоксикарбониламино)никотиновой кислоты, 10 мл трифторуксусной кислоты и 20 мл метиленхло-рида перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Отгоняют летучие компоненты при пониженном давлении и полученную в резуль-тате сырую 4-аминоникотиновую кислоту исполь-зуют непосредственно в следующей реакции.
3Н-Пиридо(4,3-d)пиримидин-4-он
Нагревают 2,72 г (11,4 ммоля) сырой амино-никотиновой кислоты в 20 мл формамида при 170°С в течение 12 часов. Отгоняют летучие ком-поненты при пониженном давлении (0,8 мм рт. ст.). Твердый остаток затем очищают при среднем дав-лении на колонке с силикагелем, элюируя смесью 10% метанола в хлороформе; получают 780 мг (47%) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-она в виде беловато-желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,64 (1Н, шир. с); 9,28 (1Н, с); 8,83 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 8,30 (1Н, с); 7,58 (1Н, д, J = 5,8 Гц).
3Н-Пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тион
Прибавляют 2,59 г (5,83 ммоля) пятисернисто-го фосфора к 780 мг (5,3 ммоля) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-она в 5 мл пиридина. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. При охлаждении образуется осадок и надосадочный слой сливают. Твердый продукт суспендирутот в 20 мл воды, а затем фильтруют: получают 676 мг (78%) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тиона в виде черного твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 14,53 (1Н, шир. с); 9,65 (1Н, с); 8,84 (1Н, д, J = 7,0 Гц); 8,32 (1Н, с); 7,64 (1Н, д, J = 8,0 Гц).
4-Метилтиопиридо(4,3-d)пиримидин
Перемешивают 12 часов при 25°С в атмосфере азота смесь 676 Mr (4,14 ммоля) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тиона, 1,4 мл (10,31 ммоля) триэти-ламина, 4 мл диметилсульфоксида и 0,48 мл (7,72 ммоля) подметана. Смесь выливают в воду и экс-трагируют этилацетатом. Органические экстракты сушат над сульфатом магния, отгоняют раствори-тель при пониженном давлении, получают 1,15 г (выход количественный) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина в виде коричневого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 9,52 (1Н, с), 9,16 (1Н, с), 8,95 (1Н, д, J = 6 Гц), 7,86 (1Н, д,.= 8Гц); 2,75 (1Н,с).
4-Анилинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 174 мг (0,97 ммоля) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 186,2 мг (1,99 ммоля) анилина в 2 мл этанола кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. При охлажде-нии до 0°С образуется твердый продукт, который отфильтровывают; получают 34,5 мг (16%) 4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 10,29 (1Н, шир. с), 9,86 (1Н, с); 8,82 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,72 (1Н, с), 7,85 (2Н, д, J = 7,5 Гц); 7,66 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 7,45 (2Н, т, J = 8.0 Гц); 7,23 (1Н, т, J = 7.3 Гц).
4-(3-Броманилино)пиридо(4.3-d)пиримидин
Смесь 171 мг (0,96 ммоля) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина, (см. предыду-щий эксперимент) и 1 мл 3-броманилина нагревают при 100°С в течение 2 часов. При охлаждении оса-ждается твердый продукт, его собирают вакуумной фильтрацией, затем перекристаллизовывают из этанола, получая 30 мг (10%) 4- (3-броманилино)пиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :10,33 (1Н, с); 9,86 (1Н, с); 8,84 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,79 (1Н, с); 8,22 (1Н, с); 7,89 (1Н, д, J = 7,2 Гц); 7,69 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,40 (2Н, дт, J = 8,0 Гц, J = 1.5Гц).
ПРИМЕР 12
4-(3-броманилино)-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидин 3-циано-4,6-диаминопиридин
Гидрируют 15,1 г (0,071 моля) сырого 2-бром-3-циано-4.6-диаминопиридина [см. также следую-щий эксперимент] в 200 мл смеси тетрагидрофу-ран/метанол (2:1), содержащей 7,0 г (0,071 моля) ацетата калия и 4 г 5%-го палладия-на-угле при 55 фунт/дюйм2 [= 3,867 кг/см2] при 20°С в течение 7 дней. После фильтрации через цеолит, промывки смесью тетрагидрофуран/метанол и удаления рас-творителей получают твердый продукт, который растворяют в разбавленной соляной кислоте и воде. Устанавливают рН раствора = 10 с помощью концентрированного раствора гидроксида натрия и охлаждают; получают 6,58 г (69%) 3-циано-4.6-диаминопиридина в виде твердого желтого продук-та, т. пл. 197°-198°С. При экстракции маточной жидкости 4 раза по 200 мл этилацетата получают дополнительно 2,12 г (22%) продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,91 (1Н, с); 6,26 и 6,24 (2Н, 2Н, шир. с); 5,63 (1Н,с).
4,6-Диамино-3-пиридилкарбоксамид
Прибавляют 4,30 г (0,032 моля) 3-циано-4,6-диаминопиридина к 25 мл 90%-й серной кислоты, затем перемешивают при 60-70°С в течение 3 ча-сов. Полученный раствор прибавляют к холодному концентрированному (40%) раствору гидроксида натрия, получают смесь 4,6-диамино-3-пиридилкарбоксамида и неорганических солей. Аналитически чистый образец получают путем хроматографии на оксиде алюминия [10-50% мета-нола в хлороформе]; получают светло-желтый твердый продукт.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,15 (1Н, с); 6,91 (2Н, шир. с); 7,7-6,3 (2Н, шир. м); 5,78 (2Н, шир. с); 5,56 (1Н, с).
7-Амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Нагревают 9,2 г сырого 4,6-диамино-З-пиридилкарбоксамида в очищенном триэтоксиме-тане [60мл; перегнан над натрием] при 170°С в течение 1,5 дней. После удаления растворителя остаток растворяют в горячем 2М растворе гид-роксида натрия, фильтруют, нейтрализуют конц. соляной кислотой и охлаждают; получают 3,57 г (69% в расчете на нитрил) 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :11,79 (1Н, шир. с); 8,74 (1Н, с); 7,79 (1Н, с); 6,67 (2Н, шир.с):6,38(1Н,с).
7-Фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Раствор 1,00 г (6,17 ммоля) 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 25 мл 60%-й тет-рафтороборной кислоты при 0°С обрабатывают 0,85 г (12,3 ммоля) твердого нитрита натрия, до-бавляемого порциями в течение 2-х часов, затем перемешивают при 0°С еще 1 час и при 20°С в те-чение 30 минут. Полученную смесь охлаждают на льду, нейтрализуют насыщенным водным раство-ром карбоната натрия и экстрагируют 4 раза по 100 мл этилацетата. Экстракт промывают водой, затем фильтруют через силикагель [этилацетат]; получают 0,48 г (47%) 7-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-(1 пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:12,69 (1Н, шир. с); 9,01 (1Н, с); 8,31 (1Н, с); 7,34 (1Н,с).
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо(4.3-d)пиримидин
Суспензию 0,23 г (1,39 ммоля) 7-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 10 мл хлорокиси фосфора перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 3,5 часов, затем концен-трируют в вакууме. Полученное масло охлаждают на льду, разбавляют 100 мл метиленхлорида, 40 мл насыщенного водного раствора карбоната натрия и льдом, перемешивают 2 часа при 20°С. Отделяют метиленхлоридный экстракт и водную часть до-полнительно экстрагируют 2 раза по 100 мл мети-ленхлорида, затем сушат объединенные экстракты над сульфатом натрия и фильтруют, получают сырой 4-хлор-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидин. Прибавляют 1,26 г 3-броманилина (7,35 ммоля), 20 мг солянокислого 3-броманилина и 5 мл безводного изопропанола, затем полученный раствор концен-трируют в вакууме, чтобы удалить метиленхлорид, и перемешивают 1 час при 20°С. При добавлении разбавленного раствора бикарбоната натрия и воды продукт кристаллизуется. После фильтрации, промывки водой и метиленхлоридом получают 297 Mr чистого 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидина (67%) в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,38 (1Н, шир. с); 9,59 (1Н, с); 8,72 (1Н, с) 8,17 (1Н, с); 7,85 (1Н, м); 7,38 (3Н,м).
ПРИМЕР 13
7-Амино-4-анилинопиридо (4,3-d)пиримидин 4,6-Диамино-2-бром-3-пианопиридин
Барботируют 2 часа бромистый водород в смесь 16,3 г малононитрила (0,247 моля) и 400 мл толуола при 0°С. Осаждается светло-коричневый продукт. Затем реакционную смесь нагревают 2 часа при 100С, причем наблюдается интенсивное выделение газа. После охлаждения до комнатной температуры желтый твердый продукт отделяют фильтрованием, промывают толуолом и сушат на воздухе. Смешивают 25,96 г твердого продукта с 500 мл воды, устанавливают рН суспензии =9-10 добавлением 15 мл концентрированного аммиака. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа смесь фильтруют. При перекри-сталлизации из этанола получают твердый желтый продукт. После сушки при 60°С в вакуумной печи получают 12,95 г (49%) 4.6-диамино-2-бром-3-цианопиридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 6,67 (2Н, шир. с); 5,59 (1Н, с).
2,4-Диамино-5-цианопиридиний-ацетат
Гидрируют 12,77 г (60 ммолей) 4.6-диамино-2-бром-3-цианопиридина в 240 мл смеси тетрагидро-фуран/метанол (2:1), содержащей 5,9 г (60 ммолей) ацетата калия и 0,5 г 20%-ного палладия-на-угле, при давлении 18 фунтов/дюйм2 [=1,266 кг/см2] при 25°С в течение 4 часов. Смесь фильтруют через целит и отгоняют растворитель при пониженном давлении; получают 11,15 г твердого продукта, который перемешивают со 100 мл тетрагидрофу-рана при комнатной температуре в течение 20 ми-нут. Смесь снова фильтруют и фильтрат выпари-вают досуха, получая целевой продукт. После сушки в вакуумной печи собирают 10,65 г (92%) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,90 (1Н, с); 6,26 (4Н, шир. с); 5,62 (1Н, с); 1,90 (3Н, с).
7-Амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 0,199 г (1,0 моль) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, 1,95 мл триэтилорто-формиата и 1,95 мл уксусного ангидрида кипятят с обратными холодильником в атмосфере азота при перемешивании в течение 3 часов. Затем отгоняют растворитель и остаток растворяют в 10 мл мета-нола, содержащего 0,81 г (15 ммолей) метоксида натрия. Через смесь барботируют сероводород в течение 5 минут, затем смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. После отгонки рас-творителя, остаток растворяют в горячей воде и кипятят с активированным углем. После фильтра-ции, нейтрализуют фильтрат уксусной кислотой, пока он еще горячий, чтобы вызвать образование желтого твердого продукта. После охлаждения собирают твердый продукт фильтрованием и су-шат его в вакуумной печи в течение ночи. Выделя-ют 84 г (51%) 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 9,82 (1Н, с), 9,34 (1Н, с); (1Н, с); 8,37 (1Н, с); 7,80 (2Н, д, J = 7,5 Гц); 7,38 (2Н, т, J = 7,5 Гц); 7,12 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с).
7-Амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидин
Прибавляют 6 мл (43 ммоля) триэтиламина к раствору 0,77 г (4,3 ммоля) 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 7 мл диметилсульфок-сида при перемешивании в атмосфере азота при 25°С. После перемешивания двух фаз в течение 20 минут прибавляют 0,26 мл (4,2 ммоля) метилиоди-да. Через 2 часа реакционную смесь выливают при перемешивании в смесь воды со льдом. Мгновенно образуется твердый продукт. После дополнитель-ного охлаждения при 0°С, отфильтровывают твер-дый продукт и сушат его в вакуумной печи, полу-чая 0,564 г (68%) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,98 (1Н, с); 8,71 (1Н, с); 6,94 (2Н, шир. с); 6,49 (1Н, с); 2,63 (3Н, с).
7-Амино-4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 0,136 г (0,7 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 0,5 мл (5,5 ммоля) анилина в атмосфере азота кипятят с об-ратным холодильником при 180°С в течение 2 ча-сов. Реакционную смесь охлаждают до 25°С, при этом образуется осадок. Твердый продукт отфиль-тровывают и перекристаллизовывают из изопропа-нола, сушат в вакуумной печи в течение ночи. Вы-деляют 84 мг (51%) 7-амино-4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,82 (1Н, с); 9,34 (1Н, с); 8,37 (1Н, с); 7,80 (2Н, д, J = 7,5 Гц), 7,38 (2Н, т, J = 7,5 Гц), 7,12 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с).
ПРИМЕР 14
7-Амино-4-(3-гидроксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 299 мг (1,56 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,60 г (14,7 ммоля) 3-аминофенола перемешивают при 160°С в течение 15 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [9% мета-нола/ метиленхлорид], получают 108 мг (18%) 7-амино-4-(3-гидроксианилино)пиридо (4,3-d) пири-мидина в виде светло-оранжевого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,69 (1Н, с); 9,44 (1Н, шир. с); 9,33 (1Н, с); 8,38 (1Н. с); 7,37 (1Н, т, J = 2,1 Гц); 7,21 (1Н, шир. д, J = 8,4 Гц); 7,14 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,59 (2Н, шир. с); 6,53 (1Н, ддд, J = 7,9; 2,2; 0,8 Гц); 6,43 (1Н, с).
ПРИМЕР 15
7-Амино-4-(3-метоксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 226 мг (1,18 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,00 мл (8,90 ммоля) м-анизидина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 1,5 часов. Полученный продукт хроматографируют на силикагеле [5-7% этано-ла/этилацетат], получают 136 мг (43%) 7-амино-4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
25 381 26
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,78 (1Н, шир, с); 9,34 (1Н, с); 8,40 (1Н, с); 7,50 (1Н, шир. с); 7,44 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,28 (1Н, т, J = 8,2 Гц); 6,71 (1Н, дд, J = 8,2 и 2,3 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,45 (1Н, с); 3,77 (3Н, с).
ПРИМЕР 16
7-Амино-4-(2-метоксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 227 мг (1,18 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,00 мл (8,87 ммоля) о-анизидина перемешивают в атмосфере азота при 180°С в течение 2,5 часов. Полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле (5% этанола/этилацетет), получают 147 мг (47%) 7-амино-4-(2-метокси- анилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,44 (1Н, шир. с); 9,25 (1Н, с); 8,22 (1Н, с), 7,54 (1Н, ДД, J = 7,7 и 1,4 Гц); 7,24 (1Н, ддд, J = 8,1; 7,4;1,5 Гц); 7,10 (1Н, дд, J = 8,2 и 1,2 Гц); 6,98 (1Н, дт, J = 1,3 Гц, J = 7,5 Гц); 6,52 (2Н, шир. с); 6,41 (1Н, с); 3,79 (3Н, с).
ПРИМЕР 17
7-Амино-4-(3-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 307 мг (1,60 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 2,00 г (14,5 ммоля) 3-нитроанилина перемешивают при 200°С в течение 1,5 часов и суспендируют сырой продукт в 250 мл смеси метанол/тетрагидрофуран (4:1), гидрируют на 2 г 5%-го палладия-на-угле при давлении 60 фунт/дюйм2 [= 4,219 кг/см2] и 20°С в течение 24 часов. Раствор фильтруют через цеолит, тщательно промывают горячим метанолом и затем абсорби-руют оксидом алюминия и хроматографируют на оксиде алюминия [4-8% этанола/хлороформ], что-бы получить 66 мг (16%) 7-амино-4-(3-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде зеленого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,57 (1Н, шир. с): 8.33 (1Н, с); 7,04 (1Н, т, J = 2,0 Гц); 6,99 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,88 (1Н, шир. д, J = 8,0 Гц); 6,55 (2Н, шир. с); 6,40 (1Н, с); 6,34 (1Н, дд, J = 7,9 Гц и 1,3 Гц); 5,10 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 18
7-Амино-4-(4-миноанилино)пиридо(4,3-d)иримидин
7-Амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 138 мг (0,72 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,50 г (10,0 ммоля) 4-аминоацетанилида перемешивают в ат-мосфере азота при 200°С в течение 1 часа. Полу-ченный продукт хроматографируют на оксиде алюминия (8-10% метанола/метиленхлорид), полу-чают 110 мг (52%) 7-амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,94, 9,79 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 9,31 (1Н, с); 8,34 (1Н, с); 7,69 (2Н, д, J = 8,9 Гц), 7,57 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,57 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с); 2,05 (3Н, с).
7-Амино-4-(4-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Раствор 0,30 г (1,02 ммоля) 7-амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в 10 мл 2М водного раствора гидроксида натрия и 10 мл метанола перемешивают при 100°С в течение 7 часов. Полученный в результате продукт хромато-графируют на оксиде алюминия [3-4% этано-ла/хлороформ]; получают 86 мг (33%) 7-амино-4-(4-аминоанилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде оранжевого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,58 (1Н, с); 9,24 (1Н, с); 8,25 (1Н, с); 7,31 (2Н, д, J = 8,6 Гц); 6,58 (2Н, д, J = 8,6 Гц); 6,48 (2Н, шир.с); 6,39 (1Н, с); 5,00 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 19
7-Амино-4-(3-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 245 мг (1,28 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,60 г (11,8 ммоля) N,N-диметил-1,3-фенилендиамина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 1 часа и хро-матографируют полученный продукт (дважды) на оксиде алюминия [3% этапола/хлороформ]; полу-чают 113 мг (32%) 7-амино-4-(3-диметиламиноанилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,66 (1Н, шир. с); 9,33 (1Н, с); 8,36 (1Н, с); 7,22 (1Н, шир. д, J = 7,8 Гц); 7,16 (2Н, м); 6,57 (2Н, шир. с); 6,51 (1Н, ддд, J = 8,0; 2,3; 1,2 ГЦ); 6,42 (1Н. с); 2,91 (6Н, с).
ПРИМЕР 20
7-Амино-4-(4-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 256 мг (1,33 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,95 г (14,4 ммоля) N,N-диметил-1,4-фенилендиамина переме-шивают в атмосфере азота при 190°С в течение 20 минут. Полученный в результате продукт хромато-графируют на оксиде алюминия [3-7°/о этано-ла/хлороформ]; получают 198 мг (53%) 7-амино-4-(4-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде оранжевого твердого продук-та.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,67 (1Н, шир. с); 9,27 (1Н, с); 8,27 (1Н, с), 7,51 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,75 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,51 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 2,89 (6Н, с).
ПРИМЕР 21
7-Амино-4(2-нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 220 мг (1,15 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 2,00 г (14,5 ммоля) 2-нитроанилина нагревают до 100°С, затем в горячий раствор при перемешивании вводят из-быток сухого газообразного хлористого водорода и перемешивают смесь при 160°С в течение 20 ми-нут. Полученный в результате продукт нейтрали-зуют избытком бикарбоната натрия, растворенного в смеси метанола с хлороформом, сушат над сили-кагелем и хроматографируют на силикагеле [2-4% метанола/метиленхлорид]; получают 108 мг (33%) 7-амино-4-(2- нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде желто-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,40 (1Н, шир. с); 8,20 (1Н, шир. с); 8,12 (1Н, шир. с): 8,01 (2Н, шир. с): 7,75 (1Н, шир. с); 6,70 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, шир. с).
ПРИМЕР 22
7-Амино-4-(3-нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 127 мг (0,66 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,70 г (12,3 ммоля) 3-нитроанилина перемешивают в атмосфере азота при 200°С в течение 1,5 часов. Полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на оксиде алюминия [5-20 % этанола/ хлороформ]; получают 81 мг (39%) 7-амино-4-(3-нитроанилино) пиридо (4,3-d)пиримидина в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:10,17 (1Н, шир. с); 9,37 (1Н, с); 8,87 (1Н, шир. с); 8,48 (1Н, с); 8,33 (1Н, шир. д, J = 7,5 Гц), 7,95 (1Н, ддд, J = 8,21 2,1;1,0 Гц); 7,67 (1Н, т, J = 8,2 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6,47 (1Н, с).
ПРИМЕР 23
7-Амино-4-(3-фторанилино)пиридо(4.3-d)пиримидин
Смесь 215 мг (1,12 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 1,16 г (10,4 ммоля) 3-фторанилина перемешивают при 160°С в течение 30 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [6-7% ме-танола/метиленхлорид], получают 185 мг (65%) 7-амино-4-(3-фторанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 9,94 (1Н, шир. с); 9,36 (1Н, с); 8,46 (1Н, с); 7,91 (1Н, шир. д, J = 11,9 Гц); 7,63 (1Н, шир. д, J = 8,1 Гц); 7,41 (1Н, дд, J = 15,7 и 7,7 Гц); 6,93 (1Н, дт, J = 8,5 Гц, J = 2,4 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с).
ПРИМЕР 24
7-Амино-4-(3-хлоранилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 208 мг (1,08 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]-пиримидина и 1,21 г (9,48 ммоля) 3-хлоранилина перемешивают при 150°С в течение 20 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на оксиде алюминия [5-10% метанола/метиленхлорид]; получают 177 Mr (60%) 7-амино-4-(3-хлоранилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,92 (1Н, шир. с); 9,35 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 8,08 (1Н, шир. с); 7,79 (1Н, шир. д, J = 8,0 Гц), 7,40 (1Н, т, J = 8,1 Гц); 7,16 (1Н, дд, J= 7,9 Гц и 1,3 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н, с).
ПРИМЕР 25
7-амино-4-(3,4-дихлоранилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 247 мг (1,29 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 1,50 г (9,26 ммоля) 3,4-дихлоранилина перемешивают при 165°С в течение 30 минут. Полученный в результа-те продукт хроматографируют на силикагеле [7-8 % метанола/метил енхлорид]; получают 252 мг (64%) 7-амино-4-0.4-дихлоранилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,97 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,47 (1Н, с); 8,29 (1Н, шир. с); 7,86 (1Н, шир. д, J = 8,6 Гц); 7,62 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н, с).
ПРИМЕР 26
7-Амино-4-(2-броманилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 198 мг (1,03 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,00 мл (9,18 ммоля) 2-броманилина перемешивают в атмосфере азота при 180°С в течение 2,5 часов; полученный про-дукт хроматографируют на оксиде алюминия [1% этанола/хлороформ]; получают 108 мг (33%) 7-амино-4-(2-броманилино)пиридо[3,4-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,91 (1Н, шир. с); 9,27 (1Н, с); 8,20 (1Н, с); 7,73 (1Н, д, J = 7,9 Гц), 7,50 (1Н, м); 7,44 (1Н, т, J = 6,9 Гц); 7,25 (1Н, м); 6,59 (2Н, шир. 01 6,42 (1Н, с).
ПРИМЕР 27
7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 167 Mr (0,87 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,75 мл (7,8 ммоля) 3-броманилина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 2,5 часов и перекристаллизо-вывают образовавшийся при охлаждении осадок из изопропанола.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,91 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,84 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,34 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,29 (1Н, д, J = 8,2 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); б, 45 (1Н, с).
ПРИМЕР 28
7-Амино-4-(4-броманилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 264 мг (1,36 ммоля) 7-амино-4-металтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 1,00 г (5,81 ммоля) 4-броманилина перемешивают а атмосфере азота при 200°С в течение 15 минут. Полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле [10-15°/о этанола/этилацетат], получают 200 Mr (46%) 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,88 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,40 (1Н, с); 7,83 (2Н, д, J = 8,8 Гц); 7,55 (2Н, д, J = 8,8 Гц): 6,64 (2Н, шир. с); 6,44 (1Н, с).
ПРИМЕР 29
7-Амино-4-(3-иоданилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 72 мг (0,37 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,25 г (5,71 ммоля) 3-иоданилина перемешивают при 160°С в течение 30 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [5-7% ме-танола/метиленхлорид]; получают 83 Mr (61%) 7-амино-4-(3-иоданилино)пиридо[4,3-d] пиримидина в виде светло-коричневых розеток.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,84 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,44 (1Н, с); 8,30 (1Н, шир. с); 7,90 (1Н, дд, J = 7,9 и 0,8 Гц); 7,47 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,18 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,66 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н. с).
ПРИМЕР 30
7-Амино-4-(2-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 300 мг (1,56 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина, 1,00 г (5,06 ммоля) солянокислого 2-аминобензотрифторида и 2,00 г (12,4 ммоля) 2- аминобензотрифторида пере-мешивают при 160°С в течение 10 минут. Получен-ный в результате продукт нейтрализуют избытком бикарбоната натрия, растворяют в смеси метанола с хлороформом, сушат над силикагелем и хромато-графируют на силикагеле [6-7% метано-ла/метиленхлорид]; получают 194 мг (41%) 7-амино-4-(2-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема; т. пл. {мета-нол/хлороформ/петролейный эфир} = 126-130°С [разложение].
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,60 (1Н, шир. с); 9,17 (1Н, шир. с); 8,13 (1Н, шир. с); 7,76 и 7,69 (1Н, 1Н, м, м); 7,45 (2Н, м); 6,66 (2Н, шир. с); 6,36 (1Н, с).
ПРИМЕР 31
7-Амино-4-(3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 234 мг (1,22 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [опи- санного в предыдущем эксперименте] и 3-амино-бензотрифторида (2 мл, 16,0 ммоль) перемешивают в атмосфере азота при 190-200°С в течение 2 часов, затем полученный продукт хроматографируют на силикагеле [5-10% этанола/эти- лацетат], и затем на оксиде алюминия [5-7% этанола/хлороформ]; получают 157 мг (42%) 7-амино-4-(3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,04 (1Н, с); 9,37 (1Н, с); 8,46 (1Н, с)1 8,31 (1Н, с); 8,19 (1Н, д, J = 8,2 Гц); 7,62 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,45 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 6,69 (2Н, шир.с):6,47(1Н,с).
ПРИМЕР 32
7-Амино-4-(4-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 390 мг (2,03 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина, 0,40 г (2,02 ммоля) солянокислого 4-аминобензотрифторида и 1,61 г (10,0 молей) 4- аминобензотрифторида пере-мешивают в течение 2 минут при 180°С. Получен-ный продукт нейтрализуют избытком бикарбоната натрия, растворяют в смеси метанола с хлорофор-мом, сушат над оксидом алюминия и хроматогра-фируют на оксиде алюминия [4-7% метано-ла/хлороформ]; получают 7-амино-4-(4-трифторметиланилино)пиридо [4,3-d]пиримидин (390 мг, 63%) в виде твердого крема. Аналитически чистый материал получают при дополнительной хроматографии на силикагеле [5% метано-ла/метиленхлорид]; получают светло-желтые иглы.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, шир. с); 9,40 (1Н, с); 8,48 (1Н, с); 8,13 (2Н, д, J = 8,2 Гц); 7,74 (2Н, д, J = 8,7 Гц); 6,72 (2Н, шир. с); 6,40 (1Н, с).
ПРИМЕР 33
4-(3-Броманилино)-7-метиламинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 74 мг (0,23 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 7 мл (50 ммолей) триэтиламина и 3,0 г (44 ммоля) соляно-кислого метиламина в 30 мл изопропанола, нахо-дящуюся в стальном автоклаве, перемешивают при 95°С (масляная баня) в течение 5 часов. Получен-ную смесь концентрируют в вакууме, подщелачи-вают водным раствором карбоната натрия, раз-бавляют водой и экстрагируют 3 раза по 100 мл этилацетата. Хроматография этого экстракта на силикагеле [3% метанола/метиленхлорид] дает 4-(3-броманилино)-7-метиламинопиридо [4.3-d]пиримидин (50 мг, 65 %) в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,93 (1Н, шир. с); 9,37 (1Н, с); 8,47 (1Н, с); 8,18 (1Н. с); 7,84 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,34 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,30 (1Н, шир. д, J = 8,1); 7,19 (1Н, к, J = 4,7 Гц); 6,35 (1Н, с): 2,85 (ЗН, д, J = 4,8 Гц).
ПРИМЕР 34
4-(3-Броманилино)-7-диметиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 101 мг (0,32 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 4,4 мл триэтиламина (32 ммоля) и 2,58 г (32 ммоля) соля-нокислого диметиламина в 30 мл изопропанола, находящуюся в стальном автоклаве, перемешива-ют при 100°С (масляная баня) в течение 4 часов. Полученный раствор концентрируют в вакууме, подщелачивают водным раствором карбоната натрия и разбавляют водой; получают твердый продукт. После фильтрации и перекристаллизации из смеси метанола с хлороформом получают 102 Mr (94%) 7-диметиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,93 (1Н, шир. с); 9,42 (1Н, с); 8,48 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,85 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,35 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,30 (1Н, шир. д, J = 7,8 Гц); 6,53 (1Н,с); 3,16 (6Н,с).
ПРИМЕР 35
4-[N-(3-Бромфенил)-N-метиламино]-7-метиламинопиридо[4,3-d]пиридин
Смесь 100 мг (0,31 ммоля) 7-фтор-4-(3-боманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 4,4 мл (32 ммоля) триэтиламина и 2,12 г (32 ммоля) соляно-кислого метиламина в 30 мл изопропанола, нахо-дящуюся в стальном автоклаве, перемешивают при 100°С (масляная баня) в течение 5 часов. Получен-ную смесь концентрируют в вакууме, подщелачи-вают водным раствором карбоната натрия, раз-бавляют водой и экстрагируют 3 раза по 100 мл этилацетата. Хроматография этого экстракта на силикагеле [1-2% метанола/метиленхлорид] дает 23 мг (21%) 4-[N-(3-бромфенил)-N-метиламино]-7-метиламинопиридо[4,3-d]пиримидина в виде свет-ло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,14 (1н, с); 7,79 (1Н, с); 7,30 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,20 (1Н, дод, J = 7,8 Гц, 1,8 Гц, 0,8 Гц); 7,03 (1Н, шир. к., J = 4,9 Гц); 7,01 (1Н, т, J = 1,9 Гц); 6,82 (1Н, ддд, J = 7,8 Гц; 1,8 Гц; 0,9 Гц); 6,25 (1Н, с); 3,40 (3Н, с); 2,73 (3Н, д, J = 4,9 Гц).
ПРИМЕР 36
7-Ацетиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 0.154 г (0,49 ммоля) 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 0,14 мл (1,5 ммоля) уксусного ангидрида, 0,14 мл триэти-ламина (1,0 ммоль) и каталитического количества 4-(N,N-диметиламино)пиридина перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем реакцию прекращают до-бавлением воды со льдом. Собирают темный оса-док фильтрованием на воронке Бюхнера и очища-ют препаративной ТСХ [Rf= 0,25; 7% метано-ла/хлороформ]. При перекристаллизации из этано-ла получают 13,5 мг (7,7%) 7-ацетиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:10,92 (1Н, с); 10,22 (1Н, с); 9,64 (1Н, с); 8,70 (1Н, с); 8,28 (1Н, с); 8,21 (1Н, с); 7,88 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,41-7,34 (3Н, м); 2,16 ОН, с).
ПРИМЕР 37
4-(3-Броманилино)-7-метоксипиридо[4,3-d]пиримидин
Раствор 100 мг (0,31 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в 30 мл 1М раствора метоксида натрия в метаноле перемеши-вают при кипячении с обратным холодильником в течение 42 часов. Полученную смесь концентри-руют при пониженном давлении, разбавляют водой и нейтрализуют разбавленной соляной кислотой; получают 92 мг (89%) 7-метокси-4-(3-броманилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,22 (1Н, шир. с); 9,57 (1Н, с); 8,63 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,86 (1Н, шир. д, J = 7,9 1-ц); 7,39 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,35 (1Н, дд, J = 7,9 Гц, 1,5 Гц); 6,96 (1Н, с); 4,00 (3Н, с).
ПРИМЕР 38
4-Бензиламинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 160,4 мг (0,902 ммоля) 4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 106,3 мг (0,992 ммоля) бензиламина в 2 мл этанола нагре-вают при 80°С в течение 12 часов, затем раствори-тель отгоняют при пониженном давлении. Полу-ченный в результате твердый продукт суспендиру-тот в метиленхлориде, фильтруют и полученный в результате твердый продукт очищают препаратив-ной ТСХ на силикагеле, элюируя 5% метанола в хлороформе. После удаления растворителя при пониженном давлении получают 36 мг (17%) 4-бензиламинопиридо[4.3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,60 (1Н, с); 9,37 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,72 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,57 (1Н, с); 7,54 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,37 (2Н, д, J = 7,0 Гц); 7,33 (2Н, т, J = 7,3 Гц); 7,25 (1Н, т, J = 7,2 Гц); 4,81 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 39
К смеси 85 мг (0,48 ммоля) 4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 2,5 мл этано-ла прикалывают 0,13 мл (1,0 ммоль) R-метилбензиламина. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником при 80°С в течение 20 часов. Удаляют растворитель при пониженном давлении, получают масло, которое кристаллизу-ют из метанола; получают 41,6 мг (35%) 4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина; т. пл. 138-138,5°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,77 (1Н, д, J = 0,7 Гц); 9,00 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 8,73 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,54 (1Н, с); 7,53 (1Н, дд, J = 5,8, 0,5 Гц); 7,45 (2Н, д, J = 7,2 Гц); 7,33 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 7,23 (1Н, тт. J = 7,5;1,2 Гц); 5,63 (1Н, п, J = 7,2 Гц); 1,61 (3Н, т, J = 7,0 Гц).
ПРИМЕР 40
7-Амино-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 8,78 г (45 ммолей) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, (10,66 г, 0,204 моля) муравьиной кислоты и 45 мл (0,41 моля) бензила-мина нагревают при 200°С в атмосфере азота в течение 2 часов. При охлаждении она затвердева-ет. Прибавляют 500 мл воды и перемешивают смесь твердая смола/вода в течение 20 минут при 0°С. Жидкость декантируют. Твердый продукт промы-вают водой, затем перекристаллизовывают из 25 мл изопропанола. После сушки в вакуумной печи в течение ночи получают 8,29 г (73%) 7-амино-2-бензиламинопиридо[4.3- d]пиримидина в виде светло-желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,10 (1Н, с); 8,85 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,25 (1Н, с); 7,21-7,36 (5Н, м); 6,46 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 4,74 (2Н, д, J = 6,0 Гц).
ПРИМЕР 41
7-Амино-4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 0,072 мл (0,55 ммоля) [R]-1-фенилэтиламина и 97 мг (0,5 ммоля) 7-амино- 4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] нагревают при 180°С в атмосфере азота в течение 1,5 часов. Затем охла-ждают реакционную смесь до комнатной темпера-туры, получая осадок. Смесь прибавляют к воде и хлороформу, обрабатывают ультразвуком и филь-труют. Разделяют фазы и водную фазу экстраги-руют хлороформом. Объединенные экстракты про-мывают водой, рассолом и сушат над сульфатом магния. Отгоняют растворитель при пониженном давлении и очищают остаток с помощью препара-тивной ТСХ [5% метанола в хлороформе] и пере-кристаллизации из хлороформа; получают 14,5 мг (11%) 7-амино-4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина; т. пл. 231,8-232,1°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,23 (1Н, с); 8,50 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 8,19 (1Н, с); 7,41 (2Н, д, J = 7,0 Гц); 7,31 (2Н, т, J = 8,0 Гц); 7,21 (1Н, тт, J = 7,4 и 1,2 Гц); 6,45 (2Н, с); 6,33 (1Н, с); 5,56 (1Н, п, J = 7,2 Гц); 1,55 (3Н, д, J = 7,0 Гц).
ПРИМЕР 42
7-Амино-4-(2-аминобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 136 мг (0,71 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,70 г (13,8 ммоля) в 5 мл изопропанола перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 1 часа, полу-ченный в результате продукт хроматографируют на силикагеле [7-20% этанола в этилацетате] и оксиде алюминия [6-10% этанола/хлороформ]; получают 89 мг (47%) 7-амино-4-(2-аминобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,08 (1Н, с); 8,68 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,05 (1Н, д, J = 7,4 Гц); 6,96 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 6,63 (1Н, д. J = 7,9 Гц); 6,51 (1Н, т, J = 7,4 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 5,20 (2Н, шир. с); 4,56 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 43
7-Амино-4-(3-диметиламинобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 236 мг (1,23 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,36 r (9,07 ммоля) 3-диметиламинобензиламина в 5 мл изопропанола перемешивают в атмосфере азота при кипячении с обратным холодильником в течение 1 часа, полу-ченный продукт хроматографируют на силикагеле [10-15% этанола/этилацетат], затем на оксиде алюминия [1% этанола/хлороформ] и получают 145 мг (40%) 7-амино-4-(3-диметиламинобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,11 (1Н, с); 8,79 (1Н, т, J = 5,9 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,11 (1Н, дд, J = 8,0 Гц; 7,7 Гц); 6,73 (1Н, шир. с); 6,63 (1Н, д, J = 7,6 Гц); 6,60 (1Н, дд, J = 8,1 и 2,2 Гц); 6,44 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 4,67 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 2,86 (6Н, с).
ПРИМЕР 44
7-Амино-4-(3-нитробензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 228 мг (1,19 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем примере] и 0,81 г (5,33 ммоля) 3-нитробензиламина перемешивают в атмосфере азота при 150-160°С в течение 1,5 часов; получен-ный в результате продукт хроматографируют на силикагеле [5-10% этанола/ этилацетат]; получают 151 мг (43%) 7-амино-4-(3-нитробензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,11 (1Н, с); 8,98 (1Н, т, J = 5,5 Гц); 8,26 (1Н, с); 8,22 (1Н, шир. с); 8,12 (1Н, дд, J = 8,0;1,8 Гц); 7,83 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,63 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 6,50 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,85 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 45
7-Амино-4-(3-метоксибензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 136 мг (0,71 ммоля) 7-амино-4-метилтиопирида[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем примере] и 1,37 г (10,0 ммоля) 3-метоксибензиламина в 3 мл изопропанола переме-шивают в атмосфере азота при кипячении с обрат-ным холодильником в течение 3 часов. Выпарива-ние растворителя и хроматография на силикагеле (5-10% этанола/этилацетат) приводят к получению 153 мг (77%) 7- амино-4-(3-метоксибензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,11 (1Н, с); 8,83 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,24 (1Н, дт, J = 0,8 Гц, J = 8,1 Гц); 6,92 (2Н, м); 6,81 (1Н, дт, J = 8,2 Гц, J = 1,2 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,37 (1Н, с); 4,71 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 3,73 (3Н, с).
ПРИМЕР 46
7-aмино-4-(4-хлорбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин-мезилат
Осаждают 56 мг (0,20 ммоля) свободного ос-нования [полученного из 2,4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, муравьиной кислоты и 4-хлорбензиламина при 200°С, как описано в преды-дущем примере] из ацетонового раствора с помо-щью 105 мкл (0,23 ммоля) метансульфоновой кис-лоты; получают полимезилатную соль.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 10,59 (1Н, т, J = 5,6 Гц); 9,24 (1Н, с); 8,69 (1Н, с); 7,42 (4Н, с); 6,42 (1Н, с); 5,8 (6Н, очень шир. с); 4,89 (2Н, д., J = 5,8 Гц); 2,41 (7,5 Н, с).
ПРИМЕР 47
7-Амино-4-(2-бромбензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 2-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа, полученный про-дукт хроматографируют на силикагеле [1-5% эта-нола/этилацетат], получают 175 мг (45%) 7-амино-4-(2-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,16 (1Н, с); 8,85 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,24 (1Н, с); 7,64 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,34 (1Н, дд, J = 7,7 и 7,1 Гц); 7,31 (1Н, дд, J = 7,7 и 2,4 Гц); 7,21 (1Н, ддд, J = 7,8; 6,9; 2,4 Гц); 6,50 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 4,74 (2Н, д, J = 5,7 Гц).
ПРИМЕР 48
7-Амино-4-(3-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 228 мг (1,19 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 3-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа. Полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на силикаге-ле [2-10% этанола/этилацетат]; получают 203 м (52°/о) 7-амино-4-[(3-бромфенил)метиламино]-пиридо [4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,09 (1Н, с); 8,86 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,54 (1Н, с), 7,44 (1Н, д, J = 7,8 Гц), 7,36 (1Н, д, J = 7,6 Гц); 7,29 (1Н, т, J = 7,7 Гц); 6,48 (2Н, с); 6,37 (1Н, с); 4,73 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 49
7-Амино-4-(4-бромбензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 234 мг (1,22 ммоля) 7-амино-4-метитиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 4-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа, полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на силикаге-ле [10% этанола/этилацетат], получают 192 мг (48%) 7-амино-4-(4-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,09 (1Н, с); 8,87 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,25 (1Н, с); 7,51 (2Н, д, J = 8,3 Гц); 7,31 (2Н, д, J = 8,3 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,37 (1Н, с); 4,70 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 50
7-Амино-4-(2-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,90 мл (6,42 ммоля) 2-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 150°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на силикагеле [5% этанола/этилацетат], получают 0,22 г (59%) 7- амино-4-(2-трифторметилбензил)аминопиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,16 (1Н, с); 8,88 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,23 (1Н, с); 7,75 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,62 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,51 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 4,92 (2Н, д, J = 5,5 Гц).
ПРИМЕР 51
7-Амино-4-(3-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,63 мл (4,40 ммоля) 3-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на силикагеле [3-5% этанола/этилацетат], получают 0,24 г (63%) 7- амино-4-[(3-трифторметилфенил)метиламино]пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,10 (1Н, с); 8,92 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,71 (1Н, с); 7,66 (1Н, д, J = 7,4 Гц), 7,62 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,57 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 6,49 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,82 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 52
7-Амино-4-(4-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,63 мл (4,42 ммоля) 4-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на оксиде алюминия [5-10% этано-ла/хлороформ], затем на силикагеле [2-10% этано-ла/этилацетат], получают 0,21 г (56%) 7-амино-4-К4-трифторметилфенил) метиламино]пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,12 (1Н, с); 8,94 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,24 (1Н, с); 7,69 (2Н, д, J = 8,1 Гц); 7,56 (2Н, д, J = 8,1 Гц); 6,48 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,82 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 53
7-Амино-4-(тиен-2-ил-метиламино)[4,3-d]пиримидин-димезилат
Соединение получают из 190 мг (0,98 мл/юля) 2,4-диамино-5-циано-пиридиний- ацетата, 0,23 г (4,4 ммоля) муравьиной кислоты и 1,07 мл (10 ммо-лей) тиенилметиламина, как описано в предыду-щем эксперименте. Сырой продукт превращают в димезилатную соль, как описано ранее, и перекри-сталлизовывают из изопропанола; получают 7-амино-4-(тиен-2-ил-метиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин-димезилат с выходом 19%.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,67 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 9,21 (1Н, с); 8,77 (1Н, с); 7,48 (1Н, дд, J = 5,1 и 1,2 Гц); 7,16 (1Н, дд, J = 3,4 и 0,7 Гц); 7,02 (1н, дд, J = 4,8; 3,4 Гц); 6,42 (1Н, с); 5,06 (2Н, д, J = 5,7 Гц); 2,41 (6Н, с).
ПРИМЕР 54
7-Ацетиламино-4-бензиламинопиридо[4.3-d]пиримидин 7-Ацетиламино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидин
Прибавляют 0,70 мл (9,84 ммоля) ацетилхло-рида к раствору 0,20 г (1,04 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,51 мл триэтилами-на (10,8 ммоля) в тетрагидрофунане при 0°С, затем смесь перемешивают при 20°С в течение 4-х часов, прибавляют 50 мл воды, затем раствор экстраги-руют 3 раза по 50 мл этилацетатом. Выпаривание и хроматография на оксиде алюминия [1% этано-ла/хлороформ] дают 0,12 г (49%) 7-ацетиламино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,05 (1Н, с); 9,30 (1Н, с); 9,02 (1Н, с); 8,38 (1Н, с): 2,71 (3Н,с); 2,18 (3Н,с).
7-Ацетиламино-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 0,40 г (1,71 ммоля) 7-ацетиламино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,8 мл (9,15 мл/юля) бензиламина перемешивают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 часа, полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле (этилацетат), получают 0,31 г (62%) 7-ацетиламино-4-бензиламинопиридо [4,3-d] пири-мидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,79 (1Н, с); 9,42 (1Н, с); 9,23 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,49 (1Н, с); 8,18 (1Н, с); 7,39 (1Н, дт, J = 6,9 Гц, J = 1,7 Гц); 7,34 (1Н, тт. J = 7,3 и 1,7 Гц); 7,25 (1Н, тт. J = 7,1 и 1,7 Гц); 4,80 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 2,15 (3Н, с).
ПРИМЕР 55
4-Анилинопиридо[3,4-d]пиримидин 4-Карбоксамидоникотиновая кислота
Прибавляют 8,3 г (55,6 ммоля) ангидрида 3,4-пиридиндикарбоновой кислоты к 12 мл кони. ам-миака в 60 мл воды, перемешивают при 0°С в тече-ние 5 минут. Во время прибавления образуется паста, которую перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Белого цвета пасту продувают азотом в течение 30 минут и разбавля-ют 10 мл воды при образовании прозрачного рас-твора. Затем барботируют сернистый ангидрид через раствор в течение 15 минут, понижая его рН до 2. При охлаждении, образовавшийся твердый продукт отфильтровы- вают, промывают водой и сушат в печи; получают 7 г (76%) 4-карбоксамидоникотиновой кислоты в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,93 (1Н, с); 8,76 (1Н, д, J = 5,0 Гц); 8,08 (1Н, с): 7,62 (1Н, с); 7,45 (1H, J = 5,0 Гц).
Изохинолинимид
Нагревают 280 мг (1,68 ммоля) 4-карбоксамидоникотиновой кислоты примерно при 200°С в течение 5 часов, получают 177,2 мг (71%) имида изохинолиновой кислоты в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,68 (1Н, с); 9,12-9,03 (2Н, м); 7,80 (1Н, д, J = 5,1 Гц).
3-Аминоизоникотиновая кислота
Прибавляют 1,71 г брома к 30 мл 10%-го рас-твора гидроксида калия при охлаждении на льду. Полученный раствор прибавляют к тонко измель-ченному изохинолинимиду (1,46 г, 9,86 ммоля). При добавлении смесь начинает пениться. После рас-творения всего твердого продукта прибавляют 7 мл 15%-го водного раствора гидроксида калия и нагревают смесь при 80°С в течение 1 минуты, затем охлаждают. Смесь нейтрализуют сернистым ангидридом и охлаждают до 0°С до тех пор, пока не осядет продукт. Твердый продукт собирают фильтрованием и промывают водой, сушат в ваку-умной печи; получают 485 Mr (36%) 3- аминоизо-никотиновой кислоты в виде белого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,5-8,8 (2Н, шир. с); 8,20 (1Н, с); 7,70 (1Н, д, J =5 Гц); 7,46 (1Н, д,. J=5 Гц).
3Н-пиридо[3,4-d]пиримид-4-он
Смесь 485 мг (3,51 ммоля) 3-аминоизоникотиновой кислоты в 3 мл формамида нагревают при 160°С в течение 12 часов. После охлаждения отфильтровывают полученный твер-дый продукт и промывают его водой, сушат в ваку-умной печи; получают 373 мг (72%) 3Н-пиридо[3.4-d]пиримид-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,60 (1Н, шир. с); 8,68 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,23 (1Н.с); 7,96 (1Н, д, J=5.l Гц).
4-тиопиридо[3.4-d]пиримидин
К раствору 366 мг (2,49 ммоля) 3Н-пиридо[3,4-d]пиримид-4-она в 4 мл пиридина прибавляют 1,25 г (2,74 ммоля) пятисернистого фосфора. Смесь ки-пятят с обратным холодильником в течение 4 часов в атмосфере азота. Полученную черную смолу растворяют в воде и получают твердый продукт. Его отфильтровывают и промывают водой, сушат в вакуумной печи; получают 369,8 мг (91%) 4- тио-пиридо[3.4-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 14,48 (1Н, шир. с), 9,13 (1Н, с); 8,70 (1Н, д, J = 5,4 Гц).
4-Метилтиопиридо[3.4-d]пиримидин
Смесь 369,8 мг (2,26 ммоля) 4-тиопиридо[3,4-d]пиримидина, 0,6 мл (4,5 ммоля) триэтиламина, 2 мл диметилсульфоксида и 0,24 мл (3,96 ммоля) иодметана перемешивают в атмосфере азота при 25°С в течение 12 часов. Смесь выливают в воду и полученный твердый продукт отфильтровывают и сушат в вакуумной печи; получают 222 мг (55%) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина в виде коричне-вого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,51 (1Н, с); 9,18 (1Н, с); 8,79 (1Н, д, J = 8 Гц); 7,97 (1Н, д, = 8 Гц).
4-Анилинопиридо[3,4-d]пиримидин
Смесь 75 мг (0,42 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина и 1 мл анилина нагревают при 100°С в атмосфере азота в течение 2 часов. Затем реакционную смесь хроматографи-руют на двуокиси кремния, используя жидкостную хроматографию среднего давления, и элюируя градиентной системой [от хлороформа до 5% ме-танола в хлороформе]. Концентрируют фракции при пониженном давлении и полученный твердый продукт перекристаллизовывают из эфира, полу-чая 21,2 мг (23%) 4-анилинопиридо[3.4-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, с); 9,18 (1Н, с); 8,74 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,46 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,89 (2Н, д, J = 8,5 Гц); 7,45 (2Н, т, J = 7,9 Гц); 7,21 (1H, T,J=7,4).
ПРИМЕР 56
4-(3-Броманилино)пиридо[3,4-]пиримидин
Смесь 75 мг (0,42 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыду-щий эксперимент] и 1 мл 3-броманилина нагревают в атмосфере азота при 100°С в течение 2 часов. Затем реакционную смесь хроматографируют на двуокиси кремния, используя жидкостную хрома-тографию среднего давления и элюируя градиент-ной системой (от хлороформа до 5% метанола в хлороформе). Фракции концентрируют при пони-женном давлении и полученный в результате твер-дый продукт перекристаллизовывают из эфира, получая 66 мг (52,7%) 4-(3- броманили-но)пиридо[3,4-]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 10,15 (1Н, с); 9,21 (1н, с); 8,80 (1Н, с); 8,76 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,44 (1Н, д, J = 5,6 Гц); 8,25 (1н, с), 7,93 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,45-7,37 (2Н, м).
ПРИМЕР 57
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидин
5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-фторпиридин
5-Амино-2-фторпиридин получают при гидри-ровании на палладии-на-угле 2- фтор-5-нитропиридина [полученного из 2-хлор-5-нитропиридина при взаимодействии с фторидом калия в ацетонитриле с тетрафенилбромидом фос-фора. При взаимодействии сырого амина с трет.-Воc-ангидридом получают 5-[N-(трет.- бутокси-карбонил)амино]-2-фторпиридин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,07 (1Н, с); 8,05 (1Н, м); 6,89 (1Н, дд, J = 9,2; 3,3 Гц); 6,66 (1Н, м); 1,52 (9Н, с).
5-[N-(трет.-Бутоксикарбонил)амино1-2-фторпиридин-4-карбоновая кислота
При взаимодействии 5,3 г (25 ммолей) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- фторпиридина последовательно с н-бутиллитием и углекислым газом, как описано в следующем примере, получа-ют 1,60 г (25%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,83 (1Н, шир. с); 8,84 (1Н, с); 7,49 (1Н, д, J = 2.9 Гц); 1.47 (9Н, с).
5-Амино-2-фторпиридин-4-карбоновая кисло-та
При взаимодействии 1,0 г (3,9 ммоля) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- фторпиридин-4-карбоновой кислоты с трифторуксусной кислотой, как описано выше, получают 0,46 г (74%) 5-амино-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,85 (1Н, д, J = 1,5 Гц); 7,23 (1Н, д, J = 2,5 Гц).
6-Фтор-3Н-пиридо[3.4-d]пиримидин-4-он
При взаимодействии 5-амино-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты с формамидом при 140°С, как описано выше, получают 6-фтор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин- 4-он (20-%).
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,48 (1Н, м); 8,74 (1Н, с); 8,16 (1н, с); 7,63 (1Н, Д, J = 3 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидин
При взаимодействии 0,60 г (3,6 ммоля) 6-фтор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин-4-она с хлорокисью фосфора с последующей реакцией сырого 4,6-дигалоидного соединения с 3-броманилином полу-чают 0,73 г (63%) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3.4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, шир. с); 8,96 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 8, 25 (2Н, м); 7,90 (1Н, шир. д, J = 6,5 Гц); 7,44-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 58
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридин
Смесь 12,86 г (0,1 моля) 5-амино-2-хлорпиридина, 24,0 г (0,11 моля) ди-трет.- бутил-карбоната и 12,1 г (1,12 моля) триэтиламина в 150 мл метиленхлорида кипятят с обратным холодиль-ником в течение 12 часов и отфильтровывают оса-док. Органический слой промывают водой, сушат над хлоридом кальция и фильтруют через корот-кую колонку с оксидом алюминия. Удаление рас-творителя приводит к получению 11,9 г (52%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- хлорпиридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,31 (1Н, д, J = 2,9 Гц); 7,94 (1Н, дд, J = 8,6; 2,6 Гц); 7,24 (1Н, д, J = 8,7 Гц); 7,15 (1Н, м); 1,51 (9Н, с).
5-[N-(трет.-Бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридин-4-карбоновая кислота
Раствор 22,87 г (0,1 моля) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридина и 47 мл (0,31 моля) тетраметилендиамина в 600 мл безвод-ного эфира охлаждают до -78°С и прибавляют по каплям 30 мл [0,3 моля] 10М гексанового раствора н- бутиллития. Раствору дают нагреться до -10°С, а затем выдерживают при этой температуре 2 часа, и повторно охлаждают до -78°С. После этого барбо-тируют сухой углекислый газ и дают нагреться полученной смеси до комнатной температуры (20°С), потом приливают 300 мл воды, содержащей незначительное количество гидроксида аммония. Полученный в результате водный слой промывают этилацетатом, затем медленно подкисляют разбав-ленной соляной кислотой для осаждения 15,5 г (57%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпириди-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,00 (1Н, с); 9,13 (1Н, с); 7,74 (1Н, с); 1,47 (9Н, с).
5-Амино-2-хлорпиридин-4-карбоновая кисло-та
Суспензию 1,91 г (7 ммолей) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)-амино]-2-хлорпиридин--карбоновой кислоты в 200 мл метиленхлорида медленно обрабатывают трифторуксусной кисло-той до гомогенности (примерно 12 мл). Раствор перемешивают в течение ночи и экстрагируют раз-бавленной соляной кислотой; получают в виде осадка 1,05 г (выход 87%) 5-амино-2-хлорпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) и: 9,01 (2Н, м); 8,03 (1Н, с); 7,48 (1Н, с).
6-Хлор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин-4-он
Раствор 8,1 г (4,7 ммоля) 5-амино-2-хлорпиридин-4-карбоновой кислоты в 100мл фор-мамида перемешивают при 140°С в течение 12 часов. Разбавление холодной смеси водой дает в виде осадка 7,3 г (выход 86%) 6-хлор-3Н-пиридо[3,4-d] пиримидин-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,73 (1Н, м); 8,90 (1Н, д, J = 0,7 Гц); 8,23 (1Н, с); 7,97 (1Н, д, J=0,7Гц).
4,6-Дихлорпиридо[3,4-d]пиримидин
Кипятят с обратным холодильником при пе-ремешивании суспензию 1,82 г (10 ммолей) 6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин-4-она в 10 мл хлоро-киси фосфора до полного растворения [примерно 2 часа и еще дополнительно 30 минут]. Избыток реа-гента удаляют в вакууме, остаток обрабатывают смесью метиленхлорида и охлажденным на льду водным раствором карбоната натрия. Полученный в результате органический слой сушат над сульфа-том натрия и выпаривают; получают с количе-ственным выходом сырой нестабильный 4.6-дихлорпиридо[4.3-с1]пиримидин, который исполь-зуют непосредственно в следующей стадии.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,38 (1Н, д, J = 0,5 Гц); 9,19 (1Н, с); 8,09 (1Н, д, J = 0,5 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь полученного выше сырого дихлорпи-римидина и 3,8 г (22 ммоля) 3-броманилина рас-творяют в 100 мл изопропанола. Прибавляют одну каплю концентрированной соляной кислоты, чтобы вызвать реакцию, а затем кипятят смесь с обратным холодильником в течение 30 минут, охлаждают и разбавляют водой для осаждения 1,26 г (выход 38%) 4-(3-броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,12 (1Н, с); 9,03 (1Н, с); 8,77 (1Н, с); 8,63 (1Н, с); 8,21 (1Н, с); 7,89 (1Н, д, J = 8,1 Гц); 7,43-7,32 (2Н, м).
ПРИМЕР 59
4-(3-Броманилино)-6-метоксипиридо[3,4-d]пиримидин
Обработка 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] при 100°С в автоклаве с помощью метоксида натрия в метаноле дает 4-(3-броманилино)-6-метоксипиридо[3.4-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 9,93 (1Н, с); 8,94 (1Н, с); 8,61 (1Н, с); 8,26 (1Н, шир. с); 7,94 (1Н, шир. д. J= 7,6 Гц); 7,88 (1Н, с); 7,43-7,32 (2Н, м); 4,01 (3Н, с).
ПРИМЕР 60
4-0-Броманилино)-6-метиламинопиридо[3.4-d]пиримидин
Обработка 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] при 100°С в автоклаве с помощью метиламина в этаноле с последующей хроматографией на оксиде алюминия [метилен- хлорид/метанол = 99:1] дает 0,07 г (34%) 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3.4-d] пирими-дина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,69 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 8.41 (1Н, с); 8,21 (1Н, шир. с); 7,93 (1Н, шир. д, J = 7,6 Гц); 7,41-7,28 (2Н, м); 7,06 (1Н, с); 6,82 (1Н, к, J = 5,0 Гц); 4,95 ОН, д, J = 5,0 Гц).
ПРИМЕР 61
4-0-Броманилино)-6-диметиламинопиридо[3.4-d]пиримидин
Обработка 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина (см. предыдущий эксперимент) при 100°С в автоклаве с помощью диметиламина в этаноле дает 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,71 (1Н, с); 8,83 (1Н, с); 8,43 (1Н, с); 8,21 (1Н, шир. с); 7,94 (1Н, шир. д, J = 7,5 Гц); 7,42-7,29 (2Н, м), 7,26 (1Н, с); 3,17 (6Н, с).
ПРИМЕР 62
4-(Бензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 74 мг (0,41 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыду-щий зксперимент] и 1 мл бензиламина нагревают 2 часа при 100°С. Охлажденную смесь концентри-руют при пониженном давлении и очищают сразу препаративной ТСХ на силикагеле, элюируя мети-ленхлоридом; получают 21,2 Mr (20%) 4- (бензи-ламино)пиридо[3,4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,21 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 9,19 (1Н, с); 8,63 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,58 (1Н, с); 8,20 (1Н, д, J = 5,1 Гц); 7,41-7,30 (4Н, м); 7,26 (1Н, т, J = 7,1 Гц).
ПРИМЕР 63
4-(3-Броманилино)пирило[2,3-d]пиримидин
3Н-Пиридо[2,3-d]пиримидин-4-он
Нагревают 15 г (108,6 ммоля) 2-аминоникотиновой кислоты в 35 мл формамида при 165-170°С в течение 3,5 часов. При охлаждении осаждается твердый продукт. Его отфильтровыва-ют и промывают водой, сушат в вакуумной печи; получают 7,87 г (49,4%) 3Н-пиридо[2,3-d]пиримидин-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,50 (1Н, с); 8,97 (1Н, дд, J = 1,9 и 4,5 Гц); 8,53 (1Н, дд, J = 2,1 и 7,9 Гц), 8,34 (1Н, с); 7,57 (1Н, дд, J = 4,6 и 8,0 Гц).
4-Тиопиридо[2,3-d]пиримидин
Прибавляют 6 г (13,5 ммоля) пятисернистого фосфора к раствору 2 г (13,5 ммоля) 3Н-пиридо[2.3-d]пиримидин-4-она в 50 мл пиридина. Смесь кипя-тят с обратным холодильником в течение 3 часов. При охлаждении образуется твердый осадок и пиридин декантируют. Твердый продукт суспенди-руют в 20 мл воды, затем фильтруют и сушат в вакуумной печи; получают 1,72 г (78%) 4- тиопи-ридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,06 (1Н, дд, J = 1,9 и 4,3 Гц); 8,90 (1Н, дд, J = 1,9 и 8,2 Гц); 8,36 (1Н, с); 7,65 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,2 Гц).
4-Метилтиопиридо[2,3-d]пиримидин
Смесь 100 мг (0,76 ммоля) 4-тиопиридо[2.3-d]пиримидина, 154 мг (1,52 ммоля) триэтиламина, 2 мл диметилсульфоксида и 161 мг (1,14 ммоля) под-метана перемешивают 12 часов при 25°С. Смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Объединенные экстракты промывают водой, рас-солом и сушат над сульфатом магния, раствори-тель отгоняют в вакууме; получают 134 мг (коли-чественный выход) 4-метилтиопиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,25 (1Н, дд. J = 1,8 и 4,2 Гц); 9,17 (1Н, с); 8,59 (1Н, дд, J = 1,9 и 8,2 Гц); 7,75 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,2 Гц); 2,73 (3Н, с).
4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидин
Смесь 157 мг (0,89 ммоля) 4-метилтиопиридо[2,3-d]пиримидина и 1 мл 3-броманилина нагревают при 100°С в течение 2 часов. При охлаждении образуется осадок, кото-рый отфильтровывают, затем промывают этанолом и сушат на воздухе; получают 55,5 мг (20%) 4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,13 (1Н, с); 9,11 (1Н, дд, J = 1,7 и 4,3 Гц), 9,01 (1Н, дд, J = 1,7 и 8,2 Гц); 8,81 (1Н, с); 8,22 (1Н, с); 7,90 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,71 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,0 Гц); 7,40 (2Н, м).
ПРИМЕР 64
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин
2,6-Дифторникотиновая кислота
2,6-Дифторпиридин (7,89 мл, 0,087 ммоля) прибавляют по каплям в атмосфере азота при 78°С к перемешиваемому раствору диизопропиламида лития (59,0 мл 1.5н раствора в циклогексане; 0,089 ммоля) в 250 мл ТГФ. После 2 часов при 78°С через раствор пропускают ток сухого углекислого газа, разбавляют смесь водой и промывают этилацета-том. Водную часть нейтрализуют 3н соляной кис-лотой, экстрагируют этилацетатом и обрабатыва-ют, чтобы получить 13,4 г (97%) 2,6-дифторникотиновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,59 (1Н, дд, J = 9,2 и 8,2 Гц); 7,30 (1Н, дд, J = 8,2 и 2,1 Гц); 4,03 (1Н.шир.с).
2,6-Дифторникотинамид
Раствор 7,4 г (0,046 ммоля) 2,6-дифторникотиновой кислоты и 20 мл тионилхлори-да в 60 мл 1,2-дихлорэтана, содержащего 1 каплю диметилформамида, кипятят с обратным холо-дильником в течение 4 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Растворяют осадок в 100 мл эфира, охлаждают до 0°С и обра-батывают, добавляя по каплям 10,0 мл (0,17 ммоля) концентрированного аммиака. Через 10 минут рас-твор промывают водным раствором бикарбоната натрия и обрабатывают; получают 5,61 r (76%) 2,6-дифторникотинамида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,70 (1Н, дд, J = 9,6 и 8,3 Гц); 7,00 (1Н, ддд, J = 8,3; 2,9;1,1 Гц); 6,71 и 6,55 (1Н, 1Н, 2 шир. с).
2-Амино-6-фторникотинамид
Раствор 4,68 г (0,029 ммоля) 2,6-дифторникотинамида в 30 мл безводного формами-да насыщают аммиаком и оставляют при комнат-ной температуре на 24 часа. Прибавляют 50 мл воды и отфильтровывают полученный осадок, промывают его водой; получают 1,41 г (31%) 6-амино-2-фторникотинамида; т. пл. 236- 237°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,89 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 7,31 и 7,16 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 6,93 (2Н, шир. с); 6,36 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,4 Гц).
Фильтрат и промывные воды объединяют и исчерпывающе экстрагируют этилацетатом; экс-тракт хроматографируют на силикагеле. Смесью этилацетат/петролейный эфир (1:1) элюируют предварительную фракцию, тогда как смесь этила-цетата с петролейным эфиром (2:1) и затем этила-цетат дают 1,57 г (35%) 2-амино-6-фторникотинамида; т. пл. (из смеси этилацетата с петролейным эфиром) 199-200°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,13 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 7,90, 7,30 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 7,65 (2Н, шир. с); 6,23 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,6 Гц).
Суспензию 0,74 г (4,77 ммоля) 2-амино-6-фторникотинамида в 25 мл триэтилортоформиата кипятят с обратным холодильником в течение 8 часов. После охлаждения до комнатной темпера-туры отфильтровывают осадок и тщательно про-мывают петролейным эфиром; получают 0,76 г (96%) 7-фторпиридо[2,3-d] пиримид-4(3Н)-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,75 (1Н, шир. с); 8,66 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 8,38 (1Н, с); 7,33 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,6 Гц).
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин
Суспензию 0,20 г (1,21 ммоля) 7-фторпиридо[2,3-d]пиримид-4(3Н)-она в 10 мл хло-рокиси фосфора кипятят с обратным холодильни-ком в течение 2 часов. Затем отгоняют летучие компоненты в вакууме, остаток распределяют меж-ду водным раствором бикарбоната натрия и эти-лацетатом. Органический экстракт обрабатывают, получая сырой 4-хлор-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин, который используют непосредствен-но на следующей стадии. Раствор 0,20 г этого про-дукта (1,09 ммоля) и 0,23 мл (2,18 ммоля) 3-броманилина в 1,0 мл пропан-2-oлa и 10 мл тетра-гидрофурана, содержащий следовые количества концентрированной соляной кислоты, перемеши-вают 1 час при 20°С, затем концентрируют досуха. Остаток растворяют в этилацетате, промывают водным раствором бикарбоната натрия и обраба-тывают; получают масло, которое хроматографи-руют на силикагеле. Элюирование смесью этила-цетат/петролейный эфир (1:5) дает 3- броманилин, тогда как смесь этилацетат/петролейный эфир (1:1) элюирует 0,18 г (47%) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина; т. пл. (из метанола); 211-213°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,18 (1Н, шир. с); 9,17 (1Н, т, J = 8,6 Гц); 8,80 (1Н, с); 8,17 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,85 (1Н, дт, J = 7,6 Гц; J = 1,8 Гц); 7,53 (1Н, дд, J = 8,6 и 2,7 Гц); 7,41-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 65
7-Амино-4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидин
Раствор 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина в 20 мл этанола насыщают аммиаком и нагревают при 100°С в автоклаве в течение 30 часов. Отгоняют раствори-тель при пониженном давлении; получают 0,18 г (90%) 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,97 (1Н, шир. с); 8,59 (1Н, с); 8,51 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 8,11 (1Н, шир. с); 7,77 (1Н, шир, д, J = 6,3 Гц); 7,44 (2Н, шир. с); 7,37-7,30 (2Н.м); 6,81 (1Н.д, J =9.3 Гц).
ПРИМЕР 66
4-(3-Броманилино)-7-метиламинопиридо[2,3-d]пиримидин
Раствор 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент], 0,13 г (1,88 ммоля) солянокислого метиламина и 0,30 мл (2,19 ммоля) триэтиламина в 15 мл этанола нагревают при 100°С в автоклаве в течение 18 часов. Растворитель удаляют при по-ниженном давлении, остаток распределяют между этилацетатом и водой. Обработка органического слоя дает 0,16 г (77%) 4-(3-броманилино)-7-(метиламино)пиридо[2,3-d] пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,53 (1Н, с); 8,54 (1Н, с); 8,41 (1Н, д. J = 8,1 Гц); 8,17 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,83 (1Н, дд, J = 8,0 Гц и 1,9 Гц); 7,66 (1Н, шир. с); 7,32 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,24 (1Н, дд, J = 8,0 и 1,8 Гц); 6,77 (1Н, д, J = 8,1 Гц); 2,92 ОН, Д, J = 4,8 Гц).
ПРИМЕР 67
4-(3-Броманилино)-7-диметиламинопиридо[2,3-d]пиримидин
При взаимодействии 0,12 г (0,38 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3- d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] с 92 мг (1,13 ммоля) солянокислого диметиламина и 0,18 мл (1,32 ммо-ля) триэтиламина в 15 мл этанола при 100°С в те-чение 18 часов в автоклаве с последующим выпа-риванием растворителя и обработкой получают 0,11 г (84%) 4-(3-броманилино)-7-(диметиламино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,58 (1Н, шир. с); 8,56 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 8,54 (1Н, с); 8,18 (1Н, т, J = 1,9 Гц); 7,84 (дт, Jd = 8,0 Гц; Jt = 1,9 Гц); 7,33 (1Н, дд, J = 8,1 и 8,0 Гц); 7,25 (1Н, дт, Jd = 9,3 Гц, Jt = 1,9 Гц); 7,10 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 3,18 (6Н, с).
ПРИМЕР 68
4-(3-Броманилино)-7-метоксипиридо[2.3-d]пиримидин
Раствор 0,26 г (0,81 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина и метоксида натрия (приготовленного из 75 Mr натрия, 3,26 ммоля) в 15 мл безводного метанола нагревают при 90°С в автоклаве в течение 18 часов. Смесь выли-вают в воду и экстрагируют этилацетатом; полу-чают 0,23 г (86%) 4-(3- броманилино)-7-метоксипиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,88 (1Н, шир. с); 8,82 (1Н, д, J = 8,9 Гц), 8,71 (1Н, с); 8,18 (1Н, дд, J = 8,0 и 1,9 Гц); 7,36 (1Н, дд, J = 8,1 и 8,0 Гц); 7,29 (1Н, ддд, J = 8,1;1,911,9 Гц); 7,15 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 4,01 (3Н. с).
ПРИМЕР 69
4-Бензиламино-7-метиламинопиримидо[4,5-d]пиримидин S-Этилизотиуроний-иодид
Раствор 3,80 г (50 ммолей) тиомочевины и 4 мл (50 ммолей) иодэтана в 100 мл метанола кипятят с обратным холодильником в течение 24 часов. От-гоняют растворитель при пониженном давлении и оставшееся светло-желтое масло сушат в вакууме; оно самопроизвольно затвердевает. Целевое со-единение (13,98 г) получают с количественным выходом.
4-Амино-5-циано-2-этилтиопиримидин
Прибавляют суспензию 2,7 г (50 ммолей) ме-токсида натрия в 200 мл этанола к смеси 11,58 г (50 ммолей) 5-этилизотиомочевино-гидроиодида, 6,1 г (50 ммолей) этоксиметилиденмалононитрила и 250 мл этанола при 25°С. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов, затем концентрируют раствор на горячей плите до тех пор, пока не появится осадок. После охлаждения отфильтровывают твердый про-дукт и перемешивают в воде при 25°С. После филь-трации и сушки в вакуумной печи получают 4,02 г (45%) 4- амино-5-циано-2-этилтиопиримидина в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,45 (1Н, с); 7,90 (2Н, шир. с); 3,00 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,27 (3H, т, J = 7,3 Гц).
4-Амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамид
Прибавляют 4,0 г (22,3 ммоля) 4-амино-5-циано-2-этилтиопиримидина к 4,3 мл концентриро-ванной серной кислоты, маленькими порциями. Затем смесь перемешивают в атмосфере азота при 40°С в течение 1,5 часов. Реакцию прекращают добавлением льда с водой и используют гидроксид аммония для установления pH=9. Твердый продукт собирают фильтрованием и сушат в вакуумной печи в течение ночи. Получают 4-амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамид (2,58 г, 58%) в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,52 (1Н, с); 7,98 (2Н, шир. с); 7,42 (2Н, шир. с); 3,04 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,27 (3Н, т, J = 7,3 Гц).
4-Оксо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4,5-d]пиримидин
Смесь 4,66 г (23,5 ммоля) 4-амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамида и 150 мл три-этилортоформиата кипятят с обратным холодиль-ником в атмосфере азота в течение 24 часов, затем охлаждают до 25°С. Отфильтровывают коричне-вый твердый продукт и сушат в вакуумной печи; получают 3,54 г (72%) 4-оксо-7- этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,80 (1Н, с); 9,20 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 3,18 (1Н, к, J = 7,4 Гц); 1,35 (3Н, т, J = 7,4 Гц).
4-Тионо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидин
Смесь 1,33 г (6,7 ммоля) 4-оксо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидина, 1,48 г (6,6 ммоля) пятисернистого фосфора и 15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 3 часов. Затем отгоняют пиридин при по-ниженном давлении и растворяют остаток в 75 мл 0,5 М раствора гидроксида натрия и кипятят с ак-тивированным углем. После фильтрации нейтрали-зуют фильтрат уксусной кислотой; образуется золотисто-коричневый твердый продукт. Фильтру-ют на воронке Бюхнера и сушат в вакуумной печи; получают 1,42 г (95%) 4-тионо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4,5-в]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,47 (1Н, с); 8,46 (1Н, с); 3,20 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,35 (3Н,т, J = 7,3 Гц).
7-Этилтио-4-метилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин
Работают по методике примера 21, описанной для 7-амино-4-метилтиопиридо [4,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,52 (1Н, с); 9,15 (1Н, с); 3,23 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 2,72 (3Н, т, J = 7,3 Гц).
4-Бензиламино-7-этилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин. Работают по методике примера 21, описанной для 7-аминоd-4-анилинопиридо [4,3-d]пиримидина.
4-Бензиламино-7-метиламинопиримидо[4,5-d]пиримидин
Нагревают 4-бензиламино-7-этилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин в этаноле, со-держащем избыток метиламина, при 150°С в стальном автоклаве в течение 5 часов. Отфильтро-вывают твердый продукт и сушат его, получая 4-бензиламино-7-метиламинопиримидо[4.5-d]пиримидин.
ПРИМЕР 70
4-Бензиламино-7-гидразинопиримидо[4,5-d]пиримидин
Нагревают 4-бензиламино-7-этилтиопиримидо[4.5-d]пиримидин в этаноле, со-держащем избыток гидразина, при 150°С в сталь-ном автоклаве в течение 5 часов. Отфильтровыва-ют твердый продукт и сушат его; получают 4-бензиламино-7-гидразинопиримидо[4,5-d]пиримидин.
ПРИМЕР 71
гидрохлорид 4-(3-Броманилино)тиено[3,2-dпиримидина
3Н-Тиено[3,2-d]пиримип-4-он
Смесь 1 г (6,3 ммоля) метил-3-аминотиофен-2-карбоксилата и 2 г формамида нагревают при 240°С в течение 10 минут. При охлаждении обра-зуется осадок. Его растворяют в этаноле и филь-труют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении и очищают остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 10% метанола в метиленхло-риде; получают 249 мг (26%) 3Н-тиено-[3,2-d]пиримид-4- она в виде твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,61 (1Н, шир. с); 8,20 (1Н, с); 8,17 (1Н, д, J = 5 Гц); 7,42 (1Н, д, J = 5 Гц).
4-Хлортиено[3,2-d]пиримидин
К раствору 170,3 мкл (2,2 ммоля) диметил-формамида и 1,2 мл дихлорэтана при 0°С в атмо-сфере азота медленно и при перемешивании в тече-ние 10 минут прибавляют 279,2 мг (3,2 ммоля) ок-салилхлорида. Прибавляют 152,2 мг (1,0 ммоль) 3Н-тиено[3.2-d]пиримид-4-она и кипятят с обрат-ным холодильником в течение 5 часов. Реакцион-ную смесь выливают в воду и экстрагируют мети-ленхлоридом. Органический слой разгоняют при пониженном давлении, получают 140 мг (82%) 4-хлортиено[3,2-d]пиримидина в виде желтого твер-дого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,05 (1Н, с); 8,62 (1Н, д, J = 5 Гц); 7,79 (1Н, д, J = 5 Гц).
4-(3-Броманилино)тиено[3,2-d]пиримидин-гидрохлорид
Смесь 135 мг (0,79 ммоля) 4-хлортиено[3,2-d]пиримидина и 95 мкл (0,89 ммоля) 3-броманилина в 2 мл 2-метоксиэтанола нагревают при 79°С в течение 30 минут. Отфильтровывают образовавшийся осадок и промывают метиленхло-ридом; получают 195,5 мг (72%) гидрохлорида 4-(3-броманилино)тиено[3,2-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,33 (1Н, с); 8,94 (1Н, с); 8,23 (1Н, с); 8,53 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,07 (1Н, с); 7,77 (1Н, д, J = 7,9 Гц); 7,6 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 7,48 (3Н, м).
ПРИМЕР 72
4-Бензиламинотиено[3,2-d]пиримидин
По методике предыдущего эксперимента, из 100 мг (0,586 ммоля) 4-хлортиено [3,2-d]пиримидина и 710 мкл (0,645 ммоля) бензилами-на в 2 мл 2-метоксиэтанола получают 37 мг (26%) 4-бензиламинотиено[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,42 (1Н, с); 8,12 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 7,39 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 7,40-7,30 (4Н, м); 7,24 (1Н, т, J = 6,8 Гц).
ПРИМЕР 73
4-(3-Броманилино)тиено[2.3-d]пиримидин
Метил-2-аминотиофен-3-карбоксилат
Смесь 3,25 г (32,3 ммоля) метилцианоацетата, 5 г (32,8 ммоля) 1.4-дитиан-2.5- диола, 1 мл (7,71 ммоля) триэтиламина в 50 мл этанола перемеши-вают при 40°С в течение 1 часа. Охлажденный раствор элюируют через слой двуокиси кремния метиленхлоридом. Фильтрат выпаривают досуха; получают сырой метил-2-аминотиофен-3-карбоксилат, который используют в следующей стадии.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,26 (1Н, с); 6,82 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 6,28 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 3,69 (3Н, с).
3Н-Тиено[2,3-d]пиримид-4-он
Нагревают раствор 602,1 мг (3,83 ммоля) ме-тил-2-аминотиофен-3-карбоксилата в 5 мл форма-мида при 200°С в течение 12 часов. Полученную в результате смолу растворяют в 10 мл метиленхло-рида, затем помещают на слой двуокиси кремния и элюируют 10% метанола в метиленхлориде. Филь-трат выпаривают при пониженном давлении и по-лученный твердый продукт промывают этанолом; получают 231,4 мг (40%) 3Н-тиено[2.3-d]пиримид-4-она в виде оранжевого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,50 (1Н, шир. с); 7,60 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,41 (1Н, д, = 6,0 Гц).
4-Хлортиено[2.3-d]пиримидин
К раствору 90 мкл диметилформамида и 2 мл метиленхлорида при 0°С в атмосфере азота мед-ленно прибавляют 148 мг (1,2 ммоля) оксалилхло-рида и перемешивают 10 минут. К раствору при-бавляют 81 Mr (0,52 ммоля) 3Н-тиено[2.3- d]пиримид-4-она в виде твердого продукта и нагре-вают струей теплого воздуха до тех пор, пока твердый продукт не растворится. Реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 12 часов в атмосфере азота. Затем выливают ее в воду и экс-трагируют метиленхлоридом. Разделяют фазы и сушат органический слой над сульфатом натрия, отгоняют растворитель при пониженном давлении, получая 87,6 мг 97%) 4-хлортиено[2.3-d]пиримидина в виде твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 8,96 (1Н, с); 8,17 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 7,62 (1Н, д, J = 6,0 Гц).
4-(3-Броманилино)тиено[2,3-d]пиримидин-гидрохлорид
Смесь 135 мг (0,79 ммоля) 4-хлортиено[2,3-d]пиримидина и 95 мкл (0,89 ммоля) 3-броманилина в 2 мл 2-метоксиэтанола нагревают при 79°С в течение 30 минут при перемешивании. Отфильтровывают полученный твердый продукт и промывают метиленхлоридом; получают 197 мг (73%) 4-(3-броманилино)тиено [2,3-d]пиримидин-гидрохлорида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,99 (1H, с); 8,60 (1H, с); 8,23 (1H, с); 7,98 (1H, д, J = 6,0 Гц); 7,88 (1H, д, J = 8,0 Гц); 7,79 (1H, д, J = 6,0 Гц), 7,37 (1H, т, J = 8,0 Гц); 7,30 (1Н, д, J = 8,0 Гц).
ПРИМЕР 74
4-Бензиламинопирроло[2,3-d]пиримидин
4-Бензиламинопирроло[2,3-d]пиримидин изве-стен из Chem. Abstr. 1962, 57, 15130с.
ПРИМЕР 75
N6-(3-Бромфенил)аденин
Смесь 1,0 г (6,47 ммоля) 6-хлорпурина, 0,78 мл (7,12 ммоля) 3-броманилина и 4- х капель концен-трированной соляной кислоты в 10 мл изопропано-ла перемешивают при 80°С в течение 5 часов. При охлаждении образуется осадок. Твердый продукт отфильтровывают, промывают изопропанолом и сушат на воздухе; получают 1,93 г (91%) N6-(3-бромфенил)аденина в виде светло-желтого твердо-го продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,38 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 7,90 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,38-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 76
N6-Бензиладенин
N6-Бензиладенин является коммерческим про-дуктом фирмы Олдрич Кемикал Компани, 1001, West Saint Paul Avenue, Milwaukee, Wisconsin 53233.
ПРИМЕР 77
7-Амино-4-(3-метиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 217 мг (1,13 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 1,50 г (14.0 ммоля) м-толуидина перемешивают при 155°С в течение 30 минут. Полученный продукт хромато-графируют на силикагеле [5% метано-ла/метиленхлорид]; получают 190 Mr (67%) 7-амино-4-(3-метиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,81 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,38 (1Н, с); 7,60 (2Н, с); 7,26 (1Н, дд, J = 8,5 Гц, 7,6 Гц); 6,95 (1Н, д, J = 7,4 Гц); 6,63 (2Н, с); 2,33 (3Н, с).
ПРИМЕР 78
7-Амино-4-(4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 129 мг (0,62 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 0,15 г (1,2 ммоля) 4-метоксианилина в 5 мл этанола нагрева-ют при 40°С в течение 16 часов, затем кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. Реак-ционную смесь охлаждают при 0°С в течение ночи, собирают твердый продукт фильтрацией в вакууме и перекристаллизовывают из изопропанола; полу-чают 42 мг (25%) 7-амино-4-(4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,00 (1Н, шир. с); 9,31 (1Н, с); 8,35 (1Н, с); 7,62 (2Н, д, J = 9,2 Гц); 6,96 (2Н, д, J = 9,2 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6.41 (1Н, с); 3,77 (3Н, с).
ПРИМЕР 79
4-(3-Броманилино)-6-(пиперидин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин
При обработке 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина (см. предыдущий эксперимент) при 100°С в автоклаве с помощью пиперидина в этаноле получают 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
Предлагаемые способы ингибирования тиро-зинкиназы рецептора эпидермального фактора роста иллюстируются следующими опытами.
Биологические опыты
Материалы и методы
Очистка тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста (далее "рецептор EGF")
Тирозинкиназу рецептора человеческого EGF изолируют из клеток А431 человеческой эпи-дермальной карциномы, которые сверхэкспресси-руют рецептор EGF по обычным методикам. Клет-ки выращивают во вращающихся колбах в пита-тельной среде из 50% среды Дельбукко, модифици-рованной Иглам, и 50% среды НАМ F-12 (Гибко), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки. Примерно 109 клеток лизируют в двух объемах буфера, содержащего 20 мм (4N- [2-гидроксиэтил]пиперазин-1-ил)-этансульфоновой кислоты (Гепес), рН = 7,4, 5 мм этиленгликоль-бис-12-аминоэтиловый простой эфир]-N, N, N', N' - тет-раукусной кислоты (ЭГТК), 1% Тритона Х-100, 10% глицерина, 0,1 мM ортованадата натрия, 5мМ фторида натрия, 4мМ пирофосфата, 4мМ бензами-да, 1мM дитиореитола, 80 мкг/мл апротинина, 40 мкг/мл лейпептина и 1 мм фенилметилсульфонил-фторида. После центрифугирования при 25000 g в течение 10 минут, супернатант (надосадочную жидкость) уравновешивают в течение 2-х часов при 4°С с 10 мл сефарозы агглютинина зародышей пшеницы, которая была предварительно уравно-вешена с раствором, содержащем 50мМ Гепес, 10% глицерина, 0,1% Тритона X-100 и 150 мм хлорида натрия, рН = 7,5 (уравновешивающий буфер). За-грязняющие протеины вымывают из смолы с помо-щью 1 М раствора хлорида натрия в уравновеши-вающем буфере, и фермент элюируют 0,5 М рас-твором N-ацетил-1-0-глюкоз амина в уравновеши-вающем буфере, затем 1 мм раствором мочевины. Фермент элюируют с помощью раствора 0,1 мг/мл EGF. Рецептор по-видимому гомогенный по оценке на полиакриламидных электрофоретических гелях, окрашенных Кумасси-голубым.
Определение концентрации ингибирования (ИK50): анализы ферментов для определения ИК50 проводят в общем объеме 0,1 мл, содержащем 25 мМ Гепес, рН = 7, 4, 5 мМ хлорида магния, 2м, М хлорида марганца, 50 мкМ ванадата натрия, 5-10 нг тирозинкиназы рецептора EGF, 200 мкМ пептида в качестве субстрата, (Ac-Lys-His-Lys-Lys-Leu-Ala-er-Ala-Tyr472Glu-Glu-Val-NH2), происходящего от аминокислоты (было показано, что Туг472 является одним из четырех тирозинов в PLC (фосфолипаза С)-гамма-1, который фосфорилируется тирозинки-назой рецептора EGF [Wahl М.I., Nishibe S., Кип J.W., Rhee S.G., Carpenter G., J. Biol. Chem. (1990), 265, 3944-3948], и пептиды, происходящие из по-следовательности фермента, окружающего этот участок, являются отличными субстратами для фермента), 10 мкМ АТФ, содержащих 1 мкйю [32Р] АТФ, и инкубируют в течение 10 минут при ком-натной температуре. Реакцию заканчивают добав-лением 2 мл 75 мм фосфорной кислоты и пропус-кают через фильтровальный диск диаметром 2,5 см из фосфоцелюлозы для связывания пептида. Фильтр промывают пять раз 75 мМ фосфорной кислотой и помешают в пробирку вместе с 5 мл сцинтиллирующей жидкости (Роди-гель, Бекман).
Таблица 1
Ингиибирование тирозинкиназы рецептора EGF
Соединение примера № ИК50
1 8 мкМ
2 3.6 мкМ
3 1.1 мкМ
4 225 нМ
5 1.9 мкМ
6 7.6 нМ
7 3.1 нМ
8 9.6 нМ
9 405 нМ
10 6.1 мкМ
11 194 нМ
12 13 нМ
13 250 нМ
14 70 нМ
15 134 нМ
16 3.7 мкМ
17 1.55 мкМ
18 173 нМ
19 1.8 мкМ
20 4.9 мкМ
21 1.25 мкМ
22 39 нМ
23 840 нМ
24 123 нМ
25 377 нМ
26 241 нМ
27 10 нМ
28 94 нМ
29 262 нМ
30 10 мкМ
31 15 нМ
32 4.7 мкМ
33 130 пМ
34 91 пМ
35 3.1 нМ
36 29 нМ
37 39 нМ
38 71 нМ
39 590 нМ
40 578 нМ
41 220 нМ
42 226 нМ
43 10 мкМ
44 10 мкМ
45 2.87 мкМ
46 1.42 мкМ
47 1.67 мкМ
48 1.0 мкМ
49 2.5 мкМ
50 10 мкМ
51 1.95 мкМ
Продолжение таблицы
52 8 мкМ
53 1.8 мкМ
54 100 нМ
55 400 нМ
56 110 нМ
57 124 нМ
58 40 нМ
59 2.6 нМ
60 8 пМ
61 6 пМ
62 6.1 мкМ
63 6.1 мкМ
64 11 нМ
65 5.1 мкМ
66 190 нМ
67 6.1 мкМ
68 263 нМ
69 7.0 мкМ
70 473 нМ
71 11 нМ
72 35 нМ
73 36 нМ
74 11.5 мкМ
75 55 нМ
76 10 мкМ
77 670 нМ
78 6.7 нМ
Клетки
Фибробласты мыши Swiss 3Т3, клетки А431 человеческой эпидермальной карциномы и MCF-7 [клетки карциномы человеческой молочной железы из Мичиганского ракового фонда], SK-BR-3 [клетки карциномы человеческой молочной железы], MDA-MB-231- и MDA-MB-468- [клетки карциномы чело-веческой молочной железы] клетки карциномы груди были получены из Коллекции культур аме-риканского типа, Роквилл, Мериленд, и поддержи-вались в виде монослоев в dMEM [среде Дельбукко, модифицированной Иглам] [FI2, 50:50 (Гибко)ВКЦ, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки. Для получения кондиционированной среды, MDA-MB-231 -клетки выращивают до слияния во вра-щающихся колбах емкостью 850 см3 и заменяют среду на 50 мл среды, не содержащей сыворотки. Через 3 дня кондиционированную среду удаляют, замораживают аликвотными порциями и исполь-зуют как источник герегулина для стимуляции еebВ-2, 3, 4.
Антитела
Моноклональные антитела, выведенные к PDGF [фактор роста целевого тромбоцита] рецеп-тору или фосфотирозину, были получены из Upstate Biotechnology, Inc., Lake Placid, NY. Анти-рр39jun [антитело к c-jun фактору транскрипции, который представляет собой фосфопротеин вели-чиной 39 кДальтон] и антитела рецептора анти-EGF были получены из Oncogene Science, Uniondale, NY.
Иммуноосаждение и Вестерн-блоттинг
Клетки выращивают до 100% слияния в чаш-ках Петри диаметром 100мм (Корцинг). После об-работки клеток в течение 5 минут с помощью или EGF [эпидермальный фактор роста], PDGF, или bFGF [основной фактор роста фибробластов] [20 нг/мл] или 1 мл кондиционированной среды от клеток MDA-MB-231, среду удаляют и монослой соскабливают в 1 мл охлажденного льдом лизиру-ющего буфера [50 мм Гепес, рН = 7,5, 150 мм хло-рида натрия, 10% глицерина, 1% Тритона Х-100, 1 мM ЭДТК (этилендиаминтетрауксусная кислота), 1 мм ЭГТК, 10 мм пирофосфата натрия, 30 мм п-нитрофенилфосфата, 1 мм ортованадата, 50 мм фторида натрия, 1 мм фенилметилсульфонилфто-рида, 10 мкг/мл апротинина и 10 мкг/мл лейпепти-на]. Лизат переносят в микроцентрифужную про-бирку [маленькая центрифуга, у которой имеются пластиковые центрифужные пробирки емкостью 1-2 мл], помешают на 15 минут на лед и 5 минут цен-трифу- гируют при 10000 g. Супернатант переносят в чистую микроцентрифужную пробирку и добав-ляют к этим образцам 5 мкг антитела. Пробирки центрифугируют в течение 2 часов при 4°С, после чего прибавляют 25 мкл протеин-А-сефарозы и продолжают центрифугирование еще по крайней мере 2 часа. Протеин-А-сефарозу промывают 5 раз с помощью раствора, содержащего 50 мм Гепеса, рН 7,5, 150 мм хлорида натрия, 10% глицерина и 0,2% азида натрия. Осадки ресуспендируют в 30 мкл буфера Леммли (Laemmli, Nature, т.727, стр. 680-685,1970), нагревают при 100° в течение 5 минут и центрифугируют для получения суперна-танта. Полный клеточный экстракт получают при соскабливании клеток, выросших на стенках пла-стин с шестьюячейками, в 0,2 мл кипящего буфера Леммли. Экстракт переносят в микроцентрифуж-ную пробирку и в течение 5 минут нагревают при 100. Весь супернатант от иммуноосаждения или 35 мкл цельного клеточного экстракта наносят на полиакриламидный гель (4-20%) и проводят элек-трофорез по методу Леммли (Laemmli, 1970). Про-теины в геле электрофоретически переносят на нитроцеллюлозу, и мембрану промывают один раз раствором, содержащим 10 мм Трис-буфера, рН 7,2, 150 мм хлорида натрия, 0,01% Азида (буфер, называемый далее ТНА) и блокируют в течение ночи в ТНА, содержащем 5% бычьего сывороточ-ного альбумина и 1% яичного альбумина (блоки-рующий буфер). Мембрану подвергают блоттингу в течение 2 часов с первичным антителом [1 мкг/мл в блокирующем буфере], а затем промывают по-следова- тельно 2 раза с помощью ТНА, ТНА, со-держащего 0,05% Твин-20 и 0,05% Нонидет П-40 [коммерчески доступный детергент], и ТНА. Затем мембраны инкубируют в течение 2 часов в блоки-рующем буфере, содержащем 0,1 мкКю/мл [125]протеина-А и снова промывают, как указано выше. После сушки блотов их вносят в кассету с пленкой и экспонируют рентгеновскую пленку X-AR в течение 1-7 дней. Протеин А является бакте-риальным протеином, который специфически свя-зывает некоторые lgG подтипы, и полезен при свя-зывании и выделении комплексов антитело-антиген.
Нозерн-блоттинг
Всю клеточную РНК изолируют из необрабо-танного контроля или обработаных Swiss 3Т3 кле-ток, используя RNAzol-B [торговое название Те1 Test Inc. для набора, используемого для изоляции РНК из тканей] и следуют рекомендациям, приве-денным производителем. Загружают в 1%-й ага-розный гель 40-50 мкг РНК и проводят электрофо-рез в течение 3-4 часов при напряжении 65 вольт. РНК в геле переносится под действием капилляр-ных сил на нейлоновую мембрану (Гибонд-N, Амерсхам). 40-mer-с-jun-Зонд метят [32Р]АТФ, ис-пользуя Т4 нуклеотидкиназу (Промега), и очищают на колонке с G25 сефадексом, следуя процедуре, рекомендованной производителем, Онкоген Сай-енс. Гибридизацию проводят в течение ночи при 65°С (c-jun является немедленно-ранним фактором транскрипции; он является одним из компонентов АР-1, тогда как FOS является вторым компонентом АР-1).
Митогенез, опосредованный фактором роста
Выращивают фибробласты Swiss 3Т3 до 90-100% слияния на пластинках с 24 ячейками (1,7 х 1,6 см, плоское дно) и задерживают рост в несо-держащей сыворотки среде в течение 18 часов. Лекарство добавляют в определенные ячейки за 2 часа до введения факторов роста, а затем клетки подвергают действию или 20 нг/мл EGF, PDGF или bFGF, или 10% сыворотки в течение 24 часов. До-бавляют 2 мкКю [метил-3P] тимидина в каждую ячейку и инкубируют 2 часа при 37°С. Клетки трипсинизируют и инжектируют в 2 мл охлажден-ной на льду 15%-й трихлоруксусной кислоты. По-лученный в результате осадок собирают на стек-ловолокнистых фильтрах, промывают пять раз по 2 мл аликвотами охлажденной на льду 15%-й три-хлоруксусной кислоты, сушат и помещают в сцин-тилляционную колбу с 10 мл Рeди-геля (Бекман, Ирвин, СА). Определяют радиоактивность с помо-щью сцинтилляционного счетчика Бекмана ЛС 6800.
Анализ ингибирования роста
Клетки (2 х 104) высевают в пластины с 24 ячейками (1,7 х 1,6 см, плоское дно) в 2 мл среды с добавками или без них различных концентраций лекарства. Пластины инкубируют 3 дня при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% углекисло-го газа в воздухе. Рост клеток определяют подсче-том клеток с помощью электронного счетчика кле-ток Культер Модель AM [Культер Электроник, Инк.]. Результаты по ингибированию вызванного EGF аутофосфорилирования в клетках А431 эпи-дермальной карциномы и аутофосфорилирования, вызванного кондиционированной средой, в клетках опухоли груди SKBR-3 соединениями настоящего изобретения сведены в таблице 2.
Таблица 2
Соединение примера № EGFR; ИК50 нМ А 431; ИК50 нМ SKBR-3; ИК50 нМ
4 225 >1000 >10,000
6 7.6 53 2660
7 3.1 20 100
8 9.6 32 71
22 39 252 -1500
27 10 110 -800
59 2.6 12 <10
60 0.008 13 >1000
61 0.006 21 39
70 11 124 <10
74 55 >1000 >1000
Противопролиферативные свойства ингибито-ров тирозинкиназы [ИК50 (нМ)] сведены в таблице 3
Таблица 3
Cоединение при-мера 60 Соединение при-мера 61
BI04-1-1 2100 1000
SK-BR-3 600 900
MDA-468 3000 12000
BI04-1-1 = NIH-3Т3 фибропласты, зараженные neu-онкогеном, Stem. et. al., Science, 234, стр. 321-324 (1987);
SK-BR-3 = Человеческая карцинома груди, сверх-экспрессирующая еrbВ-2 и erbB-3;
MDA-468 = Человеческая карцинома груди, сверх-экспрессирующая EGF рецептор.
Вышеуказанные гели, более детально описан-ные в экспериментальной части, демонстрируют эффективность соединений настоящего изобрете-ния при блокировании некоторых EGF-стимулированных митогенных сигнальных пре-вращений в целых клетках. Числа слева от гелей указывают положения стандартов молекулярной массы в килоДальтонах. Полоска меченого кон-троля показывает степень экспрессии относящегося к росту сигнала в отсутствие EGF стимуляции, то-гда как полоска меченого EGF [или PDGF или b-FGF) показывает величину стимулированного фак-тором роста сигнала. Другие полоски показывают влияние установленных количеств названного ле-карства на стимулированную фактором роста ак-тивность, измерение которой показывает, что со-единения настоящего изобретения обладают мощ-ным действием на целые клетки, согласованным с их способностью ингибировать тирозинкиназную активность рецептор EGF.
Гель с соединением примера 40 детектирует мРНКдля c-jun путем гибридизации со специфиче-ским радиомеченым РНК зондом для c-jun. Гель показывает, что EGF, PDGF и b-FGF факторы роста стимулируют продуцирование c-jun в клетках Swiss ЗТЗ и что соединение примера 40 блокирует это продуцирование EGF- стимулированными клетка-ми, но не PDGF или b-FGF стимулированными клет-ками.
Влияние соединения примера 40 на экспрес-сию р39c-jun, опосредованную фактором роста
Этот гель показывает количество индуциро-ванных c-jun в Swiss 3Т3 клеток под действием фак-тора роста EGF, PDGF и b-FGF, путем определения с помощью анти-с-jun-специфического монокло-нального антитела. Он показывает способность соединения примера 40 блокировать с-jun-экспрессию в Swiss 3Т3 при стимуляции EGF, но не при стимуляции PDGF или b-FGF.
Следует учитывать, что соединения согласно изобретению могут быть использованы в сочетании с другими компонентами для усиления их активно-сти. Такими дополнительными компонентами яв-ляются антинеопластические материалы, на- при-мер, доксорубицин, таксол, циспластин и т.п.
Было обнаружено, что соедиения согласно изобретению могут ингибировать как Erb-b2, так и Erb-b4 рецепторы и, следовательно, обладают су-щественно высокой клинической активностью, целесообразной для сочетания с вышеупомянуты-ми анти-непластическими агентами.
Для иллюстрации вышеописанных биологиче-ских опытов представляются еще рис. 1 - 17, по которым даются следующие пояснения.
На рис. 1 показано влияние соединений при-меров 6 и 7 на рецептор EGF ауто- фосфорилиро-вания при А431 человеческой эпидермальной кар-циноме;
На рис.2 представлено влияние соединения примера 8 на рецептор аутофосфорилирования при А431 человеческой эпидермальной карциноме;
На рис.3 показано время ингибирования ре-цептора EGF аутофосфорилирования при А431 соединением примера 27;
На рис.4 показано влияние соединения приме-ра 27 на рецептор EGF аутофосфорилирования вА431 клетках;
На рис.5 представлено ингибирование рецеп-тора EGF аутофосфорилирования при А431 чело-веческой эпидермальной карциноме соединением примера 40;
На рис.6 представлено влияние соединения примера 40 на фосфорилирование тирозина, опо-средованное фактором роста, в Swiss 313;
На рис.7 представлено влияние соединения примера 40 на зависящую от фактора роста экс-прессию c-jun мРНК в фибробластах мыши Swiss 3Т3;
На рис.8 представлено влияние соединения примера 40 на экспрессию р39c-jun, опосредованную фактором роста;
На рис.9 представлено влияние соединения примера 59 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.10 представлено влияние соединения примера 60 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.11 представлено влияние соединения примера 61 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.12 представлено влияние соединения примера 70 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.13 представлен график, показывающий ингибирование рецептора EGF тирозинкиназы со-единением примера 27;
На рис.14 представлен график, показывающий влияние соединения примера на митогенез, опосре-дованный фактором роста в фибробластах мыши Swiss 3Т3;
Рис.15 представляет собой фотографию линии фибробластов мыши НIН 3Т3, трансфицированных человеческим EGFR геном, показывающую нор-мально выравненную морфологию;
Рис.16 представляет собой фотографию той же клеточной линии, обработанной 100 нг/мл EGF, показывающую типичную веретенообразную трансформированную морфологию; и
Рис.17 представляет собой фотографию той же клеточной линии в присутствии одновременно 100 нг/мл EGF и 5 мкмоль соединения примера 27, по-казывающую морфологию, возвращенную обратно от трансформированного типа к нормальному ти-пу.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут выпускаться в виде разнооб-разных дозировочных форм для орального или парентерального применения. Дозировочные фор-мы в качестве активных компонентов содержат вышеуказанный ингибитор.
Для получения фармацевтических композиций используют инертные, фармацевтически приемле-мые носители, которые могут быть либо твердыми, либо жидкими. Твердая форма препаратов включа-ет порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, облатки и суппозитории. Твердый носи-тель может представлять собой одно или более веществ, которые также могут действовать как разбавители, вкусовые вещества, солюбилизаторы, придающие скользкость таблеткам агенты, суспен-дирующие агенты, связующие или дезинтеграторы таблеток; твердый носитель также может быть инкапсулирующим материалом. В порошках носи-тель представляет собой тонко измельченное твер-дое вещество, которое смешано с тонко измельчен-ными активными соединениями. В таблетках ак-тивные соединения смешаны с носителем, облада-ющим необходимыми связывающими свойствами, в соответствующих пропорциях, и спрессованы в виде желательной формы и размера. Предпочти-тельно порошки и таблетки содержат от 5% или 10% до примерно 70% активных ингредиентов. Подходящими твердыми носителями являются кар-бонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лакто-за, пектин, декстрин, крахмал, желатина, трага-кант, метилцеллюлоза, натриевая соль карбокси-метилцеллюлозы, низкоплавкие воски, масло какао, и т.п. Термин “препарат” означает совокупность активных соединений с инкапсулирующими мате-риалами в качестве носителя, обеспечивающими образование капсулы, в которой активные компо-ненты (с другими носителями или без них) окруже-ны носителем, находясь таким образом в ассоциа-ции с ним. То же самое относится к облаткам. Таб-летки, порошки, облатки и капсулы могут быть использованы как твердые дозировочные формы, пригодные для орального введения.
Жидкая форма препаратов включает раство-ры, суспензии и эмульсии. В качестве примера можно указать водные растворы или растворы на основе воды с пропиленгликолем для парентераль-ной инъекции. Жидкие препараты могут также находиться в виде раствора в водном растворе полиэтиленгликоля. Водные растворы, пригодные для орального применения, можно приготовлять путем растворения активного компонента в воде с добавлением подходящих красителей, вкусовых веществ, стабилизаторов и, если желательно, загу-щающих агентов. Водные суспензии, пригодные для орального применения, могут быть получены путем диспергирования тонко измельченных ак-тивных компонентов в воде вместе с вязким мате-риалом, например, природными или синтетически-ми смолами, камедью, метилцеллюлозой, натрие-вой солью карбоксиметилцеллюлозы и другими хорошо известными суспендирующими агентами.
Предпочтительно, фармацевтический препа-рат представляет собой форму единичной дозы. В такой форме препарат может быть разделен на единичные дозы, содержащие соответствующие количества ингибитора или других противорако-вых соединений, индивидуально или в сочетании, например, в смеси. Форма единичной дозы может находится в упаковке, причем упаковка содержит отдельные количества препарата, например, таб-летки, капсулы и порошки, упакованные во флако-ны или ампулы. Форма единичной дозы также мо-жет быть капсулой, облаткой или таблеткой или она может представлять собой соответствующее количество любых из них в упаковке. Кроме того, форма единичной дозы может быть разделенной формой, содержащей в одной части ингибитор, а в другой части - другие противораковые вещества, такой, как, например, разделенная капсула, разде-ленная упаковка или двухкамерная ампула, флакон и т.п.
Количество ингибитора в единичных дозах препарата можно изменять или регулировать при-мерно от 0,01 мг/кгдо 100,0 мг/кг, предпочтительно от 0,03 мг/кгдо менее, чем 1,0 Mr /кг массы тела.
Фармацевтические композиции предпочти-тельно приготовляют так, что их можно вводить парентерально или орально. Растворы активных соединений в виде свободных оснований и свобод-ных кислот или фармацевтически приемлемых солей, могут быть приготовлены в воде, смешанной с подходящим поверхостно- активным агентом, таким, как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также могут быть приготовлены в глицерине, жид-ких полиэтиленгликолях и их смесях или в маслах. При обычных условиях хранения и использования эти препараты содержат консервант для предот-вращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические формы, пригодные для инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приго-товления стерильных растворов или дисперсий для инъекций в момент употребления. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы она могла легко проходить через шприц. Она должна быть ста-бильной в условиях производства и хранения и должна быть предохранена от вредного воздей-ствия микроорганизмов, таких, как бактерии и гри-бы. Носитель может представлять собой раствори-тель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль, и т.п.), их соответствующие смеси, и растительные масла. Соответствующую текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого, как лецитин, пу-тем соблюдения требуемого размера частиц в слу-чае дисперсии и путем использования поверхостно- активных агентов. Предотвращение действия мик-роорганизмов можно осуществлять с помощью различных антибактериальных и противогрибко-вых агентов, например, как парагены, хлорбута-нол, фенол, сорбиновая кислота, тимеросаль, и т.п. Во многих случаях предпочтительно включать изотонические агенты, например, сахара или хло-рид натрия. Пролонгированная абсорбация компо-зиций для инъекций обеспечивается агентами, за-медляющими абсорбацию, например, желатиной.
Стерильные растворы для инъекций готовят путем введения активных соединений в требую-щемся количестве в соответствующий раствори-тель с различными другими ингредиентами, пере-численными выше, по потребности, с последующей стерилизацией путем фильтрования. Обычно дис-персии готовят путем введения различных стерили-зованных активных ингредиентов в стерильный эксципиент, который содержит основную диспер-гирующую среду и необходимые другие ингреди-енты, выбираемые из перечисленных выше. В слу-чае стерильных порошков для приготовления сте-рильных растворов для инъекций, предпочтитель-ными способами получения являются вакуумная сушка и сушка вымораживанием, которые обеспе-чивают получение порошка активных ингредиен-тов плюс дополнительный требуемый ингредиент из их предварительно стерильно профильтрованно-го раствора. Используемое здесь понятие "фарма-цевтически приемлемый носитель" включает любой и все растворители, дисперсионные среды, покры-тия, антибактериальные и противогрибковые аген-ты, изотонические и замедляющие абсорбацию агенты, и т.п. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо из-вестно специалистам в данной области техники. За исключением случаев несовместимости сред или агентов с активным ингредиентом, является воз-можным применение любых обычных сред или агентов в терапевтических композициях. Дополни-тельные активные ингредиенты также могут быть включены в композиции.
Особенно предпочтительно приготовлять па-рентеральные композиции в форме единичной дозы для облегчения введения и однородности дозиро-вания. Термин "форма единичной дозы", использу-емый здесь, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для подвергаемых лечению млекопитающих; каж-дая единица содержит заранее определенное коли-чество активных материалов, рассчитанное для достижения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требующимся фармацевтическим носителем. Состав новых форм единичных доз согласно изобретению обусловлен и непосред-ственно зависит от (а) индивидуальных характери-стик активных веществ и конкретно ожидаемого терапевтического эффекта, и (б) от ограничения, свойственного технологии смешивания таких ак-тивных веществ, для лечения пациентов, страдаю-щих вышеуказанными заболеваниями.
Основные активные ингредиенты смешивают для удобного и эффективного введения в эффектив-ных количествах с фармацевтически пригодным носителем в форме единичной дозы, как описано выше. Форма единичной дозы для парентерального введения может, например, содержать основное активное соединение, например, ингибитор, в коли-чествах примерно от 0,5 до примерно 100 мг, пред-почтительно в пределах 0,1-50 мг. Суточные дозы для парентерального введения млекопитающим находятся в пределах от 0,01 мг/кг до 10 мг/кг мас-сы тела. Предпочтительная суточная доза состав-ляет 0,1-1 мг/кг.
Для оральных доз, суточное количество может находиться в пределах от 0,01 мг активного соеди-нения /кг массы тела млекопитающего до 100 мг/кг, предпочтительно 0,1-10 мг/кг массы тела.
Соединения согласно изобренению могут об-разовывать хорошо известные фармацевтически приемлемые соли, такие, как соли щелочных ме-таллов и другие обычные основные соли или соли присоединения кислот, и т.п. Указания на основные вещества, следовательно, означают включение этих общеизвестых солей, практически эквива-лентных родственному соединению и его гидратам.
Далее, соединения согласно изобретению, способны образовывать фармацевтически прием-лемые соли присоединения как кислот, так и/или соли присоединения оснований. Все эти формы входят в рамки настоящего изобретения. Фарма-цевтически приемлемые соли присоединения кис-лот активных соединений включают соли, произ-водимые от нетоксичных неорганических кислот, таких, как соляная кислота, азотная кислота, фос-форная кислота, серная кислота, бромоводородная кислота, иодоводородная кислота, фтороводород-ная кислота, фосфоновая кислота и т.п., а также соли, производимые от нетоксичных органических кислот, таких, как алифатические моно- и дикарбо-новые кислоты, фенилз вмещенные алкановые кис-лоты, гидроксиалкановые кислоты, алкандиовые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты, и т.п. Такие соли, следовательно, включают сульфат, пиро-сульфат. бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, бромид, иодид, ацетат, трифторацетат, пропионат, каприлат, изобутират, оксалат, малонат, сукцинат, соль пробковой кислоты, себацинат, фумарат, ма-леат, соль миндальной кислоты, бензоат, хлорбен-зоат, метилбензоат, динитробензоат, фталат, бен-золсульфонат, толуолсульфонат, фенилацетат, Нитрат, лактат, тартрат, метансульфонат, и т.п. Также пригодными являются соли аминокислот, такие, как аргинат и т.п. и глюконат, галактуронат (см., например, Berge S.M. и др., "Pharmaceutical Salts" Journal of Phar- maceutical Science, 66, с. 1-19,1977).
Соли присоединения кислот вышеуказанных основных соединений получают путем контакти-рования формы свободного основания с достаточ-ным количеством желательной кислоты, получая соль обычным образом. Предпочтительно активное соединение можно превращать в кислую соль пу-тем обработки раствором желательной кислоты так, чтобы результирующее значение рН было ниже 4. Раствор можно пропускать через колонку с С\s-фазой, чтобы абсорбировать соединение, про-мывать обильным количеством воды, элюировать соединение полярным органическим растворите-лем, таким, как, например, метанол, ацетонитрил, и т.п., и выделять путем концентрирования при по-ниженном давлении с последующей лиофилизаци-ей. Форма свободного основания может быть реге-нерирована путем введения солевой формы в кон-такт с основанием и выделения свободного основа-ния обычным образом. Формы свободных основа-ний отчасти отличаются от их соответствующих солевых форм некоторыми физическими свойства-ми, такими, как растворимость в полярных раство-рителях, однако в других отношениях, для целей настоящего изобретения, соли эквивалентны соот-ветствующим им свободным основаниям.
Фармацевтически приемлемые соли присо-единения оснований представляют собой соли металлов или аминов, таких, как щелочные и ще-лочноземельные металлы и органические амины. Примерами металлов, используемых в качестве катионов, являются натрий, калий, магний, кальций и т.п. Примерами пригодных аминов являются N.N-дибензилэтилендиамин, этилендиамин, N-метилглюкамин и прокаин (см., например, Berge S.M. и др., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66, с. 1-19,1977).
Основные соли присоединения вышеуказан-ных кислых соединений получают путем введения в контакт свободной кислотной формы с достаточ-ным количеством желательного основания с полу-чением соли обычным образом. Предпочтительно, активное соединение может быть превращено в основную соль путем обработки водным раствором желательного основания, так, чтобы результирую-щее значение рН было выше 9. Раствор можно про-пускать через колонку с C|8-фазой, чтобы абсорби-ровать соединение, промывать обильным количе-ством воды, элюировать соединение полярным органическим растворителем, таким, как, напри-мер, метанол, ацетонитрил и т.п., и выделять путем концентрирования при пониженном давлении с последующей лиофилизацией. Свободная кислот-ная форма может быть регенерирована путем кон-тактирования солевой формы с кислотой и выделе-ния свободной кислоты обычным образом. Сво-бодные кислотные формы отчасти отличаются от их соответствующей солевой формы некоторыми физическими свойствами, такими, как раствори-мость в полярных растворителях, однако в других отношениях, для целей настоящего изобретения, соли являются эквивалентными соответствующим им свободным кислотам.
Некоторые из соединений настоящего изобре-тения могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратированные формы. Обычно сольва-тированные формы, включая гидратированные формы, являются эквивалентными несольватиро-ванным формам и, следовательно, входят в рамки настоящего изобретения.
Некоторые из соединений настоящего изобре-тения содержат один или несколько хиральных центров и такой центр может существовать в R(D)- или S(L)- конфигурации. Настоящее изобретение включает все энантиомерные и эпимерные формы, а также их соответствующие смеси.
Предлагаемые фармацевтические композиции иллюстрируются следующими примерами.
Пример 80
Таблетки следующего состава:
60 мг активного вещества, например, целевого продукта примера 1,
45 мг крахмала,
35 мг микрокристаллической целлюлозы,
4 мг поливинилпирролидона в виде 10%-ного раствора в воде,
4,5 мг натриевой соли карбоксиметилового крахмала,
0,5 мг стеарата магния,
1,0 мг талька
приготовляют следующим образом.
Активное вещество, крахмал и целлюлозу пропускают через сито с размером отверстий 45 меш, после чего тщательно перемешивают. Полу-чаемый порошок смешивают с раствором поливи-нилпирролидона, и получаемую смесь пропускают через сито с размером отверстий 14 меш. Получае-мые гранулы сушат при 50 - 60°С, после чего про-пускают через сито с размером отверстий 18 меш и смешивают со смесью натриевой соли карбоксиме-тилового крахмала, стеарата магния и талька, предварительно пропущенной через сито с разме-ром отверстий 60 меш. Получаемую смесь перера-батывают в таблетки весом 150 мг.
Пример 81
Парентеральный препарат состава:
100 мг активного вещества, например, целево-го продукта примера 17,
250 мл 0,9 %-ного водного хлористого натрия приготовляют путем интенсивного перемешивания. рН препарата: 7,0.
Пример 82
Инъекционный раствор состава
20,0 г активного вещества, например, целевого продукта примера 28,
700 мл пропиленгликоля,
200 мл воды для инъекций
смешивают, стерилизуют, наполняют в ампулы емкостью 50 мл, которые герметично закрывают в атмосфере азота.
Поверностные клеточные рецепторы семей-ства тирозинкиназных рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR) играют роль в ряде заболе-ваний, например раковых заболеваний. Это семей-ство состоит из EGF рецептора (также называемого Erb-B1), Erb-62 рецептора и его существенно ак-тивного онкопротеинового мутанта Neu, Еrb-В3 рецептора и Erb-64 рецептора. EGFR имеет в каче-стве наиболее важных лигандов эпидермальный фактор роста (EGF) и трансформирующий фактор роста альфа (TGF альфа). По-видимому, рецепторы проявляют только минимальные функции у взрос-лых людей, но возможно вовлекаются в процесс заболевания в значительной части всех видов рака, особенно рака ободочной кишки и груди. Близко родственные рецепторы Erb-B2, Еrb-В3 и Erb-B4 имеют в качестве основных лигандов семейство герегулинов, а рецептор сверхэкспрессии и мута-ции был четко определен как основной фактор риска при плохом прогнозе рака груди. Кроме того, также было показано, что все четыре члена этого семейства рецепторов могут образовывать гетеро-димерные сигнальные комплексы с другими члена-ми семейства и что это может привести к синерги-ческой трансформирующей способности, если бо-лее одного члена семейства проявляет сверхэкс-прессию при злокачественной опухоли.
Сверхэкспрессия более чем одного члена се-мейства, как было показано, является относительно обычной для злокачественных опухолей у людей.
Пролиферативное заболевание кожи псориаз в настоящее время не может успешно лечиться. Его часто лечат противораковыми средствами, такими, как метотрексат, который имеет очень серьезные побочные эффекты и который является не очень эффективным при ограниченных токсичностью дозах, которые могут быть использованы. Полага-ют, что TGF альфа является основным фактором роста, сверхпродуцирующим при псориазе, по-скольку у 50% трансгенных мышей, которые сверх-экспрессируют TGF альфа, развивается псориаз. Это наводит на мысль, что хороший ингибитор EGFR сигнализации может быть использован в качестве противопсориазного средства, предпо-чтительно, но не обязательно, при местном дозиро-вании.
EGF является мощным митогеном для клеток почечных канальцев. Четырехкратное увеличение как EGF секреции мочи, так и EGF и мРНК было отмечено у мышей на ранней стадии диабета, вы-званного стрептозойцином. Кроме того, повышен-ная экспрессия EGFR была отмечена у пациентов с пролиферативным гломерулонефритом (Roychaudhury и др., Pathology, 1993, 25, 327).
Сообщалось, что хронический панкреатит коррелирует с большим увеличением эксперссии как EGFR, так и TGF альфа. (Коrс и др., 1994, 35,1468). У пациентов с более серьезной формой заболевания, обычно при увеличении верхней ча-сти поджелудочной железы, также была показана сверхэкспрессия Еrb-В2 рецептора (Friess и др., Ann. Surg. 1994, 220,183).
В процессах созревания бластоцита, имплан-тации бластоцита в маточный эндометриум и в других случаях переимплантации ткани матки продуцируют EGF и TGF альфа (Таgа Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi, 1992, 44, 939), имеют повы-шенные уровни EGFR (Brown и др., Endocrinology, 1989,124, 2882) и легко могут быть индуцированы на продуцирование гепарин-связующих EGF за счет близости развившегося, но не прекратившего развития бластоцита. (Das и др., Development, 1994, 120, 1071). В свою очередь, бластоцит имеет до-статочно высокий уровень TGF альфа и EGFR экс-прессии (Adamson, Mol. Reprod. Dev., 1990, 27, 16). Хирургическое удаление подчелюстных желез, основного участка секреции EGF в организме, и лечение анти-EGFR моноклональными антителами, обе меры значительно снижают фертильность мы-шей (Tsutsumi и др., Endocrinology, 1993, 138, 437) за счет успешного снижения имплантации бласто-цита.
Известны бис-моно- и бициклические арило-вые и гетероариловые соединения, которые можно применять для ингибирования тирозинкиназы ре-цептора эпидермального фактора роста и/или ре-цептора фактора роста тромбоцитов (см. заявку WO 92/20642, С 07 С 43/21, А 61 К 31/44, 31/50, 31/495, 26.11.1992 г.).
Задачей изобретения является расширение ар-сенала возможностей ингибирования тирозинкина-зы рецептора эпидермального фактора роста, например, Еrb- b2, Еrb-bЗ или Еrb-b4.
Поставленная задача решается нижеописан-ными объектами.
Первым объектом изобретения является спо-соб ингибирования тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста при лечении млекопи-тающего путем введения млекопитающему бицик-лического производного, который заключается в том, что в качестве бициклического производного используют бициклическое производное пирими-дина общей формулы (I)
где
1 - 2 из радикалов А - Е означает азот, а остальные радикалы углерод, или два смежных радикала А - Е вместе представляют гетероатом из группы азот, сера, при этом А - Е вместе с прилега-ющими атомами углерода означают пиридиновое, пиримидиновое, тиенильное, пиррольное, имида-зольное кольцо,
X - группы NH, NHR5, где R5 означает низший алкил с 1 - 4 атомами углерода,
n- 0,1 или 2,
R - отсутствует или означает водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкоксил с 1-4 атомами углерода, нитрогруппу, галоген, перфторалкил с 1-4 атомами углерода, гидроксил, аминогруппу, мо-но- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами угле-рода в каждой алкильной группе,
Аr- фенил, тиeнил,
R1, R2, R3 и R4 независимо друг от друга отсут-ствуют или означают водород, алкил с 1 - 4 атома-ми углерода, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, ацилокси с 1 - 4 атомами углерода, аминогруппу, моно- или диалкиламиногруппу с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной группе, ациламино-группу с 1 - 4 атомами углерода,
при этом а) по крайней мере один из радика-лов R1 - R4 имеет значение, отличное от водорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или ал-коксила с 1 - 4 атомами углерода; б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсутству-ют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аr - фенил, замещенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аг - фенил, замещен-ный галогеном, амино или гидроксилом, или если п означает 1 или 2 и
Ar тиенил, то R2 имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламино-группы с 1-4 атомами углерода в каждой алкиль-ной части, или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.
Предпочтительные признаки предлагаемого способа включены в подпункты 2 - 50 формулы изобретения.
Вторым объектом изобретения являются би-циклические производные пиримидина вышеприве-денной формулы (1),
где
R - R4, X, Ar, А, В, D, Е и n имеют вышеуказан-ные значения, при этом а) по крайней мере один из радикалов R1 - R4 имеет значение, отличное от во-дорода, низшего алкила с 1 - 4 атомами углерода или алкоксила с 1 - 4 атомами углерода, б) если Е и В означают азот, D и А - углерод, R1 и R4 отсут-ствуют, R3 - водород, X - NH, n - 0,1 или 2, Аг - фе-нил, замещенный галогеном, амино или гидрокси-лом, или если n означает 1 или 2 и Аг- фенил, заме-щенный галогеном, амино или гидроксилом, или если n означает 1 или 2 и Аr тиeнил, то R2 имеет значение, отличное от водорода, амино или моно- или диалкиламиногруппы с 1 - 4 атомами углерода в каждой алкильной части, их отдельные стерео-изомеры, рацемат или смесь диастереомеров или их фармацевтические соли или гидраты.
Предпочтительными бициклическими произ-водными пиримидина формулы (1) являются соеди-нения, выбранные из группы, включающей 6-амино-4-(3-бром- анилино)пиридо[3,2-d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3,2- d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,2-d]пиримидин, 7- амино-4-(3-нитроанилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-броманилино) пиридо[4.3-d]пиримидин; 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-амино-4-(3-трифторометиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетиламино-4(3- броманили-но)пиридо[4,3-d]пиримидин; 7-ацетамидо-4-бензиламинопиридо [4,3- d]пиримидин; 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
Третьим объектом изобретения является фар-мацевтическая композиция, обладающая ингиби-рующей тирозинкиназу рецептора эпидермального фактора роста активностью, которая в смеси с фармацевтически приемлемым эксципиентом, раз-бавителем или носителем включает бициклическое производное пиримидина вышеприведенной общей формулы (1) или его фармацевтическую соль в эффективном количестве.
Четвертым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста при лечении рако-вых заболеваний, псориаза, панкреатита или по-чечных заболеваний путем введения млекопитаю-щему бициклического производного пиримидина вышеприведенной общей формулы (1) или его фар-мацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
Данный способ может также применяться при лечении псориаза, панкреатита или почечных за-болеваний.
Пятым объектом изобретения является способ ингибирования тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста для предотвращения имплантации бластоцита путем введения млекопи-тающему бициклического производного пиримиди-на вышеприведенной общей формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
Шестым объектом изобретения является ком-позиция, обладающая контрацептивным действием, которая включает в смеси с контрацептивно при-емлемым эксципиентом, разбавителем или носите-лем бициклическое производное пиримидина вы-шеприведенной обшей формулы (1) или его фарма-цевтическую соль в эффективном количестве.
Бициклические производные пиримидина вы-шеприведенной общей формулы (1) можно полу-чать известными способами, например, представ-ленными на следующих схемах I - XIX, в которых Аr означает замещенный фенил или тиeнил.
Схема I
Замещение 2-хлора в 2,6-дихлор-3-нитропиперидине проводят с помощью цианида одновалентной меди в N-метил-2-пирролидоне (NMП). Замещение второго хлора в этом нитриле на фторид на этой стадии может быть предпочти-тельным. Затем проводят мягкое восстановление нитрогруппы в условиях, когда галоген не гидроли-зуется. Гидролиз нитрила с последующей кристал-лизацией ортоформита и хлорирование по типу Вильсмейера приводят к дигалогенпиридопирими-дину. Замещение более реактивного 4-хлора на соответствующий амин проводят после замещения 6-галогена на соответствующий нуклеофил для образования конечных продуктов. Данным спосо-бом можно получать также соединения, у которых один из R1 или R2 означает водород, а другой явля-ется низшим алкоксилом; или один из R1 или R2 является водородом, а другой - аминогруппой; или один из R1 или R2 означает водород, а другой явля-ется низшей моно- или диалкиламиногруппой; или один из R1 или R2 означает водород, а другой - низший алкил.
Схема II
Замещение хлора в 2-хлор-3,5-динитропиридине проводят с помощью цианида меди в NМП. Восстановление нитрогрупп в амино-группы проводят после гидролиза нитрила в амид. Его циклизуют в пиримидон с помощью ортофор-миата, который превращают в хлорид с помощью хлорангидрида ортофосфорной кислоты, или при желании превращают в тиометильное производное путем обработки пентасульфидом фосфора, потом метилйодидом и мягким основанием. Замещение соответствующим амином дает целевое 7-аминосоединение. Аминная функция может быть восстановительно алкилирована или активирована диазотированием аминогруппы в кислых или ще-лочных условиях, затем восстановлена в гидразид или превращена в низший алкил, простой эфир или в галоген при действии купрата или сочетанием Стилла по методикам, известным специалистам в данной области. Альтернативно, амин может быть восстановительно аминирован с образованием алкиламинной боковой цепи. Данным способом можно также получать соединения, упомянутые выше в связи с описанием схемы I.
Схема III
Обработка ЛДА (диизопропиламид лития) с последующей обработкой боратом/ пероксидом водорода позволяет ввести 3-гидрокси-заместитель. Если пиридин подвергают 2-му металлированию в положении 4, спирт может быть защищен как ТИПС (триизопропилсилиловый) простой эфир, который будет вызывать второе металлирование в положе-нии 5. Могут быть использованы альтернативные нитрования, такие, как превращение литиевого промежуточного производного в станнан и обра-ботка тетранитрометаном, или использование NO2BF4 (нитроний-тетрафторборат). С1 - замещение может быть проведено с использованием цианида одновалентной меди или других источников ионов цианида. После гидролиза нитрила и восстановле-ния нитрогруппы может быть использован орто-формиат вместо формамида для циклизации, и воз-можно, что некоторые циклизации будут требовать замещения F на MeS перед реакцией. Положение 4 активируют хлорированием, а затем вводят амин с боковой цепью. Окончательное замещение может быть выполнено с помощью алкоксидных или аминных нуклеофилов. Данным способом можно также получать соединения, у которых R1 и R2 яв-ляются низшими алкоксилами; один из R1 или R2 означает аминогруппу, а другой является низшим алкоксилом; или один из R1 или R2 означает моно- или диалкиламиногруппу, а другой - низший ал-коксил.
Схема IV
Применение 6-алкилхинальдиновой кислоты после ионного бромирования в жестких условиях дает ангидрид, который раскрывают аммиаком, рециклизуют в имид и затем проводят разложение по Гофману с потерей активного карбонила. Цик-лизацию и присоединение циклической боковой цепи обычным образом проводят путем сочетания по Стиллу для введения алкильной группы, ради-кала R1 и/или R2.
Схема V
Динитрование 2,6-диоксипиридина проводят для превращения в очень реактивное дихлорсоеди-нение. Динитродихлорпиридин просто замешают цианидом одновалентной меди в NMП, а затем соединение восстанавливают в мягких условиях в диамин. Нитрил гидролизуют до амида, который затем циклизуют в пиридопиримидон, который хлорируют обычным путем. Замещение более ре-активного хлора в 4-боковой цепи проводят после замещения 6-хлора алкоксидом. Для получения соединений, у которых R1 или R2 означает моно- или диалкиламино, а другой - низший алкоксил, амин должен быть соответственно алкилирован по методикам, известным специалистам в данной об-ласти.
Схема VI
2,4-диамино-5-цианопиридин может быть цик-лизован непосредственно во многие производные 4-бензиламинопиридопиримидина при обработке бензиламином и муравьиной кислотой при высокой температуре. Для менее нуклеофильных аминов 2,4-диамино-5-цианопиридин превращают путем обработки этилортоформиатом/уксусным ангид-ридом, последующей циклизацией с помощью гид-росульфид-иона в безводных условиях с получени-ем 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидина. S-алкилирование и замещение соответствующим амином дают целевой продукт. Если R2 не является аминогруппой, амин может быть ацилирован или восстановительно алкилирован. Альтернативно, 2,4-диамино-5-цианопиридин может быть гидроли-зован в соответствующий амид и эта группа может быть циклизована в 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо/4,3-d/-пиримидин с помощью ортоформиата. Диазоти-рование 7-аминогруппы и замещение фтором поз-воляют ввести другие аминные и алкоксидные нук-леофилы в конце синтеза, после того, как С4-заместитель был введен обычным образом. Диазо-тирование и замена аминогруппы бромом позво-ляют провести сочетания Стилла в положении 7.
Данным способом можно получать соедине-ния, у которых R2 означает низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема VII
2-хлор-5-нитропиридин превращают в соот-ветствующее 2-фторсоединение с помощью фтори-да калия в диметилсульфоксиде. Восстановление нитрогруппы с последующей обработкой Вос-ангидридом (Вос = трет.-бутоксикарбонил) дает Вос-аминопроизводное, которое металлируют и карбоксилируют в 4-положении. Удаление Вос-группы с помощью трифторуксусной кислоты и циклизация пиримидонового цикла формамидом дают 6-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(3,4-d)пиримидин. Его хлорируют в положении 4 обычным образом и вводят 4-боковую цепь через замещение соответ-ствующим амином. Замещение 6-фтора соответ-ствующими нуклеофилами приводит к различным конечным продуктам. Если фтор замещают на тио-метоксид, то он, в свою очередь, может быть заме-щен алкильными группами в катализируемых ни-келем замещениях Гриньяра. Данным способом можно получать соединения, у которых R1 означа-ет низший алкил или алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема VIII
Нитрование 2-метоксиникотиновой кислоты с последующим замещением активированной меток-сигруппы и циклизацией пиримидонового цикла можно проводить в одну стадию с помощью фор-мамидина, или, альтернативно, в две стадии с по-мощью аммиака с последующей циклизацией с помощью эквивалента формамида. Карбонил пре-вращают в хлорид и замещают боковой цепью обычным способом, а затем селективно восстанав-ливают нитрогруппу в аминогруппу. Она может быть алкилирована, ацилирована или диазотиро-вана. Диазосоединение может быть превращено в гидроксильное или в бромидное или иодидное со-единения, и эти последние могут быть введены в реакцию сочетания Стилла для введения низшего алкила, алкоксила, аминогруппы, моно- или диал-киламиногруппы радикала R1.
Схема IX
Этот путь использует известное металлирова-ние и карбоксилирование 2,6-дифторпиридина с последующим замещением 2-фтор-заместителя. Циклизация пиримидонового кольца с помощью формамида, последущее превращение карбонила в хлорид обычным способом дает хлорфторпиридо-пиримидин. Арил(алкил)аминная боковая цепь вводится путем замещения более реакивного пири-мидинового хлора, затем вводят заместитель R2 путем фторидного замещения. Для введения алкила используют замещение фтора алкоксидом, послед-ний простой эфир расщепляют до пиридина, про-водят O-трифлатирование и сочетание Стилла. Данным способом получают соединения, у кото-рых R2 означает низший алкил или алкоксил, ами-ногруппу, моно- или диалкиламиногруппу.
Схема X
Эта схема основана на металлировании 2,6-дифторпиридина подобно схеме IX. Первое метал-лирование используют для введения кислорода, а второе - для введения карбоновой кислоты. Если требуется провести второе металлирование в по-ложении 5, кислород может быть защищен как очень массивный ТИПС- простой эфир и может потребоваться более сильное основание, чем ЛДА. Аммиак вводят в положение 2 при высокой темпе-ратуре и давлении, циклизуют пиридиновое коль-цо, активируют в положении 4 обычным способом, а затем замещают в положении 4 боковой цепью. Замещение 7-фтор-заместителя соответствующим нуклеофилом, последующие превращения, как опи-сано в предыдущих схемах, завершают синтез. Данным способом можно также получать соедине-ния, у которых R1 и R2 означают низший алкоксил, или один из R1 и R2 означает аминогруппу, а дру-гой является низшим алкоксилом, или один из R1 или R2 означает низшую моно- или диалкипамино-группу, а другой означает низший алкоксил.
Схема XI
Нитрование коммерчески доступной дихлор-никотиновой кислоты проводят путем селективного замещения более реактивного хлора в мягких усло-виях, а затем более жесткого замещения другого хлора в соответствующем порядке. Полученную в результате 6-алкокси-2-амино-5-нитроникотиновую кислоту циклизуют в пирими-дон и превращают 4-карбонил в хлорид и замеща-ют обычном образом на подходящий амин, полу-чая 4-амино-7-алкокси-6-нитропиридо(2,3-d) пири-мидин. Восстановление нитрогруппы с последую-щим любым желаемым алкилированием дает целе-вые продукты.
Схема XII
Реакция подходящей 5-алкилизотиурониевой соли с метоксиметилидинмалононитрилом приво-дит к полностью функционализированному пири-мидиновому предшественнику. Первоначально образовавшийся пиримидин может быть замещен по S-этильной группе на R2 до или после гидролиза нитрила, если замещение или окисление позже оказывается проблематичным. Замещение S-этильной группы также может быть достигнуто без окисления для активации серы. Циклизацию второ-го пиримидинового цикла проводят после актива-ции 4-карбонила осернением и алкилированием. Даже если 7-тиогруппа не была замещена в этот момент, предпочтительно происходит введение 4-амино-боковой цепи. Данным способом можно получать соединения, у которых R2 означает низ-ший алкоксил, низшую моно-или диалкиламино-группу или аминогруппу.
Схема XIII
3Н-тиено(3,2-d)пиримид-4-он может быть по-лучен по стандартным методикам из коммерчески доступного этил-3-аминотиофенкарбоксилата и формамида. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замеще-нием подходящим амином дает целевые тиено(3,2-d)пиримидины. Если R2 не является водородом, подходящий электрофил, например, нитрогруппа, для заместителей, основанных на аминогруппе или диазотированных производных, или бром для ко-нечных продуктов, получаемых сочетанием Стил-ла, может быть введен на показанной или более ранней стадии, а затем превращен в R2 путем вос-становления или аминирования, например, или с помощью сочетания Стилла, или другими извест-ными специалистам в данной области способами. Данным способом можно также получать соедине-ния, у которых А и В означают углерод, а D и Е, взятые вместе, означают атом серы, R1 или R2 озна-чают водород, низший алкил, низший алкоксил, амино или низшую моно- или диалкиламиногруп-пу.
Схема XIV
Тиено(2,3-d)пиримид-4-он получают путем синтеза Гриньяра из 2,5-дитиана и этилцианоаце-тата с последующей циклизацией с формамидом. Превращение карбонила в хлорид по стандартным методикам с последующим замещением подходя-щим амином дает целевые тиено(2,3-d)пиримидины.
Схема XV
Для получения пирроло(2,3-d)пиримидина циклизуют пиримидиновый цикл в цианоамино-пиррол известными способами. Активация и заме-щение тиола боковой цепью могут быть проведены до или после возможного электрофильного заме-щения пиррольного цикла. Данным способом мож-но также получать соединения, у которых А и В, взятые вместе, означают атом азота, а D и Е озна-чают углерод, R1 или R2 означают водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкиламиногруппу.
Схема XVI
Получение пирроло(3,2-d)пиримидина прово-дится с помощью известной конденсации ортофор-миата с подкисленной 4-метильной группой 6-пиримидонов с образованием пирролопиримидина, как показано выше. Боковая цепь может быть вве-дена по стандартным методикам, таким, как в схе-ме 1, и заместитель R2 может быть введен по стан-дартной методике в химии электрофильного заме-щения, как описано выше.
Схема XVII
Эти соединения могут быть получены при непосредственном замещении галогена в соответ-ствующих 6-хлорпуринах по хорошо известным из уровня техники методикам. Заместитель R1 может быть введен путем легкого электрофильного заме-щения в активированном положении 8 пуринового цикла с последующими типами превращений, опи-санных в нижеприведенных примерах. Данным способом можно также получать соединения, у которых А и В, взятые вместе, означают атом азо-та, D означает углерод, Е означает азот, R1, R3 и/или R4 означают водород или низший алкил, а R2 означает водород, низший алкил, низший алкоксил, аминогруппу или низшую моно- или диалкилами-ногруппу.
Схема XVIII
Реакция 6-хлор-4-метилтиопиримидина с ЛДА и потом с диметилформамидом дает соответству-ющий 5-альдегид, который обрабатывают гидра-зином, чтобы замкнуть цикл, получая 4-метилтиопиразоло(3,4-d)пиримидин, при замеще-нии которого соответствующим амином получают целевые производные пиразоло (3,4-d)пиримидина. Данным способом можно получать соединения, у которых R1/4 означают водород, низший алкил, если находятся на азоте, или Н, низший алкил, низший алкоксил, амино-или низшую моно- или диалкиламиногруппу, если находятся на углероде.
Схема XIX
Нитрование пиразол-3-карбоновой кислоты с последующем восстановлением приводит к 4-аминопиразол-3-карбоновой кислоте. Ее циклизу-ют в пиразоло(3,4- d)пиримид-4-он с помощью со-ляно-кислого формамидина и проводят замещение карбонила на галоид по стандартным методикам, затем замешают хлор на соответствующий амин, получая целевой пиразоло(4,3-d)пиримидин.
Получение бициклических производных пи-римидина вышеприведенной общей формулы (1) поясняется следующими примерами.
ПРИМЕР 1
4-Анилинопиридо(3,2-d)пиримидин мезилат 3Н-Пиридо(3,2-d)пиримидин-4-oн
Раствор 2,00 г (9,91 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинамида в 100 мл смеси этилацетата с метанолом (1:1) гидрируют на 0,40 г 5%-го палла-дия-на-угле при 60 фунт/дюйм2 [=4,219 кг/см2] в течение 6 дней с добавлением свежего катализато-ра через 2 и 4 дня. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентрируют досуха, получают 3-аминопиколинамид в виде оранжевого масла, которое используют непосредственно на следующей стадии. Сырой продукт перемешивают при кипячении с обратным холодильником в 50 мл триэтилортоформиата в течение 42 часов; в тече-ние этого времени образуется каштановый осадок. После охлаждения твердый продукт отфильтровы-вают, тщательно промывают петролейньш эфиром и сушат в вакууме, получают 1,27 г (87%) 3Н-пиридо(3.2-в)пиримидин-4-она т. пл. 343 -345°С.
4-Хлорпиридо(3,2-в)пиримидин
Суспензию 1,00 г (6,80 ммоля) указанного вы-ше пиримидона в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов, за-тем концентрируют досуха при пониженном дав-лении. Остаток распределяют между дихлормета-ном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, отделяют и обрабатывают органический слой, получают 0,97 г (86%) 4-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого про-дукта, т. пл. 335°С (разложение), который исполь-зуют без дополнительной характеристики.
4-Анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилат
Раствор 84 мг 4-хлорпиридо [3,2-d]-пиримидина (0,5 ммоля), 56 мг (0,6 ммоля) анилина и 62 мг триэтиламина (0,6 ммоля) в 2 мл этанола кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов. Сырую реакционную смесь очищают препаративной ТСХ (тонкослойная хроматография) на пластинах с диоксидом крем-ния, элюируют один раз 3% метанола в хлорофор-ме. Экстрагируют основную полосу и выпаривают досуха при пониженном давлении, твердый оста-ток растворяют в 5 мл ацетона, фильтруют и мед-ленно при перемешивании прибавляют 32 мкл (0,5 ммоля) метансульфоновой кислоты. Остаток соби-рают фильтрованием, промывают ацетоном и су-шат в вакуумнойпечи; получают 91 мг (57%) 4-анилинопиридо(3,2-d)пиримидин-мезилата в виде матовых желтых игл.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :11,75 (1Н, с.шир); 9,11 (1Н, дд, J = 1,5, 4,3 Гц); 8,97 (1Н, с); 8,32 (1Н, дд, J = 1,5; 8,4 Гц); 8,12 (1Н, дд, J = 4,3, 8,5 Гц); 7,88 (2Н, д, J = 8,2 Гц); 7,49 (2Н, т, J = 8,0 Гц); 7,32 (1Н, т, J = 7,0 Гц); 2,34 (3Н, с).
ПРИМЕР 2
4-Бензиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Раствор 0,10 г (0,60 ммоля) свежеприготовлен-ного 4-хлорпиридо(3,2-в)пиримидина [полученно-го, как описано в предыдущем эксперименте] и 0,13 мл (1,20 ммоля) бензиламина в 15 мл пропан-2-oлa, содержащий следы концентрированной соляной кислоты, нагревают в течение 30 минут при 50°С, затем концентрируют досуха. Остаток распреде-ляют между водой и этилацетатом, органический слой отделяют и обрабатывают, хроматографиру-ют на силикагеле. Этилацетат элюирует головную фракцию, тогда как смесь метанола с этилацетатом (1:9) элюирует 4-(бензиламино)пиридо[3,2-d)пиримидин(0,11 г,77%);
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,67 (1Н, с); 6,50 (1Н, дд, J = 4,3, 1,5 Гц); 8,10 (1Н, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,63 (1Н. дд, J = 8,8, 4,3 Гц); 7,55 (1Н, шир.); 7,41-7,29 (5Н, м); 4,86 (2Н, д, J = 5,9 Гц).
ПРИМЕР 3
4-(3-Броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидин
Проводят реакцию полученного, как описано в предыдущем примере, хлорпиридо(3,2-d)пиримидина с 3-броманилином в пропан-2-oлe, содержащем следы концентрированной соляной кислоты при 50°С в течение 30 минут, затем про-дукт хроматографируют на силикагеле и получают с выходом 87% 4-(3-бромфенил) аминопиридо[3,2-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 9,19 (1Н, ш); 8,83 (1Н, с); 8,80 (1Н, дд, J = 4,3, 1,5 Гц); 8,29 (1Н, шир.); 8,19 (1Н, дд, J = 8,5, 1,5 Гц); 7,83 (1Н,м); 7,76 (1Н, дд, J = 8,5; 4,3 Гц); 7,29-7,27 (2Н, м).
ПРИМЕР 4
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,2-d]пиримидин
2-Циано-б-фтор-3-нитропиридин
Смесь 10,0 г (0,054 моля) б-хлор-2-циано-3-нитропиридина и 9,48 г (0,163 моля) фторида калия в 200 мл ацетонитрила кипятят с обратным холо-дильником в течение 18 часов при перемешивании, затем выливают в воду и экстрагируют этилацета-том. Экстракт промывают водой и обрабатывают, остаток хроматографируют на силикагеле, элюи-руют смесью этилацетата с петролейным эфиром (3:7), получают, после удаления растворителя при пониженном давлении, 7,2 г (79%) 2-циано-б-фтор-3-нитропиридина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,79 (1Н, дд, J = 9,0, 6,0 Гц); 7,48 (1Н, дд, J = 9,0, 3,0 Гц).
6-фтор-3-нитропиридин-2-карбоксамид
Раствор 1,40 г 2-циано-б-фтор-3-нитропиридина (8,39 ммоля) в 30 мл 90%-й серной кислоты нагревают при 70°С в течение 90 мин., затем охлаждают, выливают на лед и подщелачи-вают концентрированным аммиаком. Экстракция этилацетатом и обработка дают 0,94 г (61%) 6-фтор-3-нитропиримидин-2-карбоксамида.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,70 (1Н, дд, J = 8,9 Гц, 6,5 Гц); 8,30 и 8,03 (1Н, 1Н шир. с); 7,62 (1Н, дд, J = 8,9, 2,9 Гц).
6-Фтор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримид-4-он
Раствор 1,50 г (8,10 ммоля) 6-фтор-3-нитропиридин-2-карбоксамида в этилацетате гид-рируют на 5%-м палладии-на-угле (0,30 г) при 60 фунт/дюйм2 (= 4,219 кг/см2) в течение 2 часов. По-сле удаления катализатора фильтрованием рас-творитель отгоняют при пониженном давлении, получают остаток сырого 3-амино-6- фторпирими-дин-2-карбоксамида, который используют непо-средственно на следующей стадии. Добавляют 60 мл триэтилортоформиата, после чего смесь нагре-вают и кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 18 часов. Охлажденную смесь разбавляют равным объемом петролейного эфира, полученный осадок собирают фильтрова-нием и тщательно промывают петролейным эфи-ром, получают 6-фтор-3Н-пиридо (3,2-d)пиримид-4-он (1,26 г, 84%).
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:12,72 (1Н, шир. с); 8,31 (1Н, дд, J = 8,6, 7,7 Гц); 8,20 (1Н, с); 7,66 (1Н, дд, J = 8,6, 3,0 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидин
Суспензию 0,2 г (1,21 ммоля) 6-фтор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримид-4-она в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником при перемешивании до тех пор, пока она не станет гомогенной (2 часа), а затем еще 1 час. Удаляют избыток хлорокиси фосфора при пониженном дав-лении, остаток распределяют между дихлормета-ном и насыщенным водным раствором дикарбона-та натрия. Обработка органической части дает сырой 4-хлор-б-фторпиридо(3,2-d)пиримидин (100%) в виде нестабильного твердого продукта, который используют непосредственно на следую-щей стадии. Раствор 0,20 г (1,1 ммоля) 4-хлор-б-фторпиридо(3,2-d)пиримидина и 0,12 мл (2,18 ммо-ля) 3-броманилина в 20 мл пропанола-2, содержа-щего 1 каплю конц. соляной кислоты, кипятят с обратным холодильником в течение 15 минут, за-тем охлаждают, выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Экстракт обрабатывают и хромо-графируют остаток на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/петролейный эфир (1:2); после удале-ния растворителя при пониженном давлении полу-чают 0,18 г (52%) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,82 (1Н, с); 8,65 (1Н, шир. с); 8,31 (1Н, т, J = 7,4 Гц); 8,27 (1Н, шир. с); 7,77 (1Н, м); 7,41 (1Н, дд, J = 8,9 Гц, 2,2 Гц); 7,29 (2Н, шир.с).
ПРИМЕР 5
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидин 6-Хлор-3-нитропиколинамид
Раствор 1,00 г (5,45 ммоля) 6-хлор-3-нитропиколинонитрила в 15 мл 90%-й серной кис-лоты нагревают при 70°С в течение 3,5 часов, а затем выливают в ледяную воду. Смесь экстраги-руют четыре раза этилацетатом, а затем объеди-ненные экстракты обрабатывают, получая 0,80 r (73%) 6-хлор-3-нитропиколинамида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,55 (1Н, д, J = 8,5 Гц); 8,31 и 8,04 (1Н, 1Н, 2
шир.с); 7,93 (1Н, д,. 1=8,5 Гц).
6-хлор-3Н-пиридо(3,2-d)пиримидин-4-он
Раствор 0,30 г 6-хлор-3-нитро-пиколинамида (1,49 ммоля) в 30 мл этилацетата гидрируют при 60 фунт/дюйм2 (= 4,219 кг/см2) на 0,10 г 5%-гo палла-дия-на-угле в течение 20 минут. После удаления катализатора фильтрованием раствор концентри-руют досуха, получают 3-амино-6-хлорпиколинамид в виде желтого масла, которое непосредственно используют на следующей ста-дии. Его растворяют в 30 мл триэтилортоформиата и смесь кипятят с обратным холодильником в тече-ние 18 часов. Добавляют 30 мл петролейного эфи-ра к охлажденному раствору, отфильтровывают полученный в результате осадок сырого 6-хлор-3Н-пиридо (3,2-d)пиримидина-4-она (0,27 г, 99%) и сушат в вакуумной печи.
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)примидин
Суспензию вышеуказанного хиназолона (0,20 г; 1,10 ммоля) в 30 мл хлорокиси фосфора кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным раствором бикарбоната натрия, об-рабатывают органическую часть, получают 0,16 г (73%) 4,6-дихлорпиридо(3,2-d)пиримидина в виде каштанового твердого продукта, который исполь-зуют непосредственно на следующей стадии. Рас-твор 0,16 г (0,80 ммоля) сырого дихлорпиридопи-римидина и 0,17 мл (1,60 ммоля) 3-броманилина в 25 мл пропанола-2, содержащего следы конц. со-ляной кислоты, нагревают при 50°С в течение 30 минут. Охлажденную смесь выливают в насыще-ный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом, экстракт обрабатывают и хромато-графируют на силикагеле. Элюирование смесью этилацетата с петролейным эфиром (1:4) дает 3-бромалин, тогда как смесь этилаце-тат/петролейный эфир (1:1) элюирует 0,17 г (63%) 4-(3-броманилино)-6-хлорпиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,90 (1Н, шир. с); 8,84 (1Н, с); 8,30 (1Н, дд, J = 2,1, 2,20 Гц); 8,17 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 7,82-7,78 (1Н, м); 7,73 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 7,32-7,29 (2Н, м).
ПРИМЕР 6
4-(3-Броманилино)-6-аминопиридо(3,2-d)пиримидин
Реакция 0,12 г (0,38 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] с насыщенным раство-ром аммиака в этаноле в сосуде под давлением при 100°С в течение 18 часов дает 87 мг (72%) 6-амино-4-[3-броманилино]пиридо[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,76 (1Н, шир. с); 8,64 (1Н, с); 8,23 (1Н, шир. с); 7,93 (1Н, д, J = 9,0 Гц); 7,81 (1Н, дт, Jd = 7,7 Гц, Jt = 1,8 Гц); 7,28-7,22 (2Н, м); 7,00 (1Н, д, J = 9,0 Гц); 4,90 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 7
4-(3-Броманилино)-6-метиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Реакция 50 Mr (0,16 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] с 32 мг (0,47 ммоля) солянокислого метиламина и 70 мкл (0,55 ммоля) триэтиламина в 10 мл этанола в сосу-де под давлением при 100°С в течение 18 часов приводит к 43 мг (81%) 6-метиламино- 4-(3-броманилино)пиридо[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,81 (1Н, шир. с); 8,61 (1Н, с); 8,19 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,86 (1Н, д, J = 9,1 Гц); 7,83 (1Н, дт, Jd = 7,7 Гц, Jt = 1,8 Гц); 7,28-7,21 (2Н, м); 6,92 (1Н, к, J = 9,1 Гц); 4,97 (1Н, к., J = 5,0 Гц); 3,13 (3Н, к., J = 5,0 Гц).
ПРИМЕР 8
4-(3-Броманилино)-6-диметиламинопиридо(3,2-d)пиримидин
Смесь 0,15 г (0,47 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо(3,2-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте], 0,11 г (1,41 ммоля) солянокислого диметиламина и 0,23 мл (1,64 ммо-ля) триэтиламина в 15 мл этанола нагревают в сосуде под давлением при 100°С в течение 18 ча-сов. Растворитель отгоняют при пониженном дав-лении и распределяют остаток между этилацета-том и водой. Обрабатывают органическую часть и остаток хроматографируют на силикагеле. Элюи-рование этилацетатом/петролейным эфиром (1:1) дает головную фракцию, тогда как этилацетат элюирует 0,14 г (86%) 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,72 (1Н, шир. с); 8,56 (1Н, с); 8,17 (1H, T, J = 1,9 Гц); 7,85 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 7,77 (1Н, дт, Jd = 7,5 Гц, Jt = 1,9 Гц); 7,27-7,18 (2Н, м); 7,08 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 3,21 (6Н, с).
ПРИМЕР 9
4-(3-Броманилино)-6-метоксипиридо (3,2-d)пиримидин
Прибавляют 0,11 г (0,34 мл/юля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо (3,2-d) пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] к рас-твору метоксида натрия [приготовленному при добавлении металлического натрия (31 мг, 1,38 ммоля) к 15 мл безводного метанола]. После нагре-вания в сосуде под давлением при 90°С в течение 3 часов раствор концентрируют досуха и остаток распределяют между этилацетатом и водой. Обра-ботка органической части приводит к 92 Mr (82%) 4-(3-бромфенил)-амино-6-метоксипиридо(3,2-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (дейтер. хлороформ) : 8,73 (1Н, с); 8,66 (1Н, шир. с), 8,18 (1Н, м); 8,05 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 7,83-7,80 (1Н, м); 7,30-7,24 (2Н, м); 7,23 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 4,12 (3Н, с).
ПРИМЕР 10
4-Анилинопиридо(4,3-d)пиримидин 4-N-трет.бутоксикарбониламино)пиридин
К смеси 2 г (21,24 ммоля) 4-аминопиридина, 3,57 г (63,72 ммоля) гидроксида калия, 10 мл воды и 4 мл 2-метил-2-пропанола на льду прибавляют 6,95 г (31,87 ммоля) ди-трет.бутил-дикарбоната. Полу-ченный в результате двухфазный раствор переме-шивают при 25°С в течение 1 недели, затем при-бавляют 20 мл воды. Раствор экстрагируют 1 раз метиленхлоридом и 2 раза этилацетатом. Органи-ческий слой сушат над сульфатом магния и кон-центрируют при пониженном давлении; получают 4.08г (99%) 4-(N-трет.бутоксикарбониламино) пи-ридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,84 (1Н, с); 8,35 (2Н, д, J = 6 Гц); 7,44 (2Н, д, J = 7 Гц); 1.49 (9Н, с).
4-(N-трет.бутоксикарбониламино)никотиновая кислота
Медленно прибавляют 24 мл (2,18 М; 52,51 ммоля) н-бутиллития к раствору 4.08г (21 ммоля) 4-(N-tpet. бутоксикарбониламино)пиридина в 50 мл тетрагидрофурана при перемешивании в атмосфе-ре азота при -78°С. Раствору дают нагреться до 0°С, перемешивают 3 часа, затем охлаждают снова до - 78°С и выливают в 100 мл эфира, содержащего сухой лед. Раствор нагревают до комнатной темпе-ратуры при постоянном перемешивании. Прибав-ляют воду и нейтрализуют смесь уксусной кисло-той. Полученный твердый продукт собирают ваку-умным фильтрованием и сушат в вакуумной печи; получают 2,72 г (54%) 4- [N-трет.бутоксикарбониламино] никотиновой кислоты в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,75 (1Н, шир. с); 8,95 (1Н, с); 8,50 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 8,20 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 1,49 (9Н, с).
4-Аминоникотиновая киcлота
Смесь 2,72 г (11,4 ммоля) 4-N-трет.-бутоксикарбониламино)никотиновой кислоты, 10 мл трифторуксусной кислоты и 20 мл метиленхло-рида перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Отгоняют летучие компоненты при пониженном давлении и полученную в резуль-тате сырую 4-аминоникотиновую кислоту исполь-зуют непосредственно в следующей реакции.
3Н-Пиридо(4,3-d)пиримидин-4-он
Нагревают 2,72 г (11,4 ммоля) сырой амино-никотиновой кислоты в 20 мл формамида при 170°С в течение 12 часов. Отгоняют летучие ком-поненты при пониженном давлении (0,8 мм рт. ст.). Твердый остаток затем очищают при среднем дав-лении на колонке с силикагелем, элюируя смесью 10% метанола в хлороформе; получают 780 мг (47%) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-она в виде беловато-желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,64 (1Н, шир. с); 9,28 (1Н, с); 8,83 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 8,30 (1Н, с); 7,58 (1Н, д, J = 5,8 Гц).
3Н-Пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тион
Прибавляют 2,59 г (5,83 ммоля) пятисернисто-го фосфора к 780 мг (5,3 ммоля) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-она в 5 мл пиридина. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. При охлаждении образуется осадок и надосадочный слой сливают. Твердый продукт суспендирутот в 20 мл воды, а затем фильтруют: получают 676 мг (78%) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тиона в виде черного твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 14,53 (1Н, шир. с); 9,65 (1Н, с); 8,84 (1Н, д, J = 7,0 Гц); 8,32 (1Н, с); 7,64 (1Н, д, J = 8,0 Гц).
4-Метилтиопиридо(4,3-d)пиримидин
Перемешивают 12 часов при 25°С в атмосфере азота смесь 676 Mr (4,14 ммоля) 3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин-4-тиона, 1,4 мл (10,31 ммоля) триэти-ламина, 4 мл диметилсульфоксида и 0,48 мл (7,72 ммоля) подметана. Смесь выливают в воду и экс-трагируют этилацетатом. Органические экстракты сушат над сульфатом магния, отгоняют раствори-тель при пониженном давлении, получают 1,15 г (выход количественный) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина в виде коричневого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 9,52 (1Н, с), 9,16 (1Н, с), 8,95 (1Н, д, J = 6 Гц), 7,86 (1Н, д,.= 8Гц); 2,75 (1Н,с).
4-Анилинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 174 мг (0,97 ммоля) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 186,2 мг (1,99 ммоля) анилина в 2 мл этанола кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. При охлажде-нии до 0°С образуется твердый продукт, который отфильтровывают; получают 34,5 мг (16%) 4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 10,29 (1Н, шир. с), 9,86 (1Н, с); 8,82 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,72 (1Н, с), 7,85 (2Н, д, J = 7,5 Гц); 7,66 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 7,45 (2Н, т, J = 8.0 Гц); 7,23 (1Н, т, J = 7.3 Гц).
4-(3-Броманилино)пиридо(4.3-d)пиримидин
Смесь 171 мг (0,96 ммоля) 4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина, (см. предыду-щий эксперимент) и 1 мл 3-броманилина нагревают при 100°С в течение 2 часов. При охлаждении оса-ждается твердый продукт, его собирают вакуумной фильтрацией, затем перекристаллизовывают из этанола, получая 30 мг (10%) 4- (3-броманилино)пиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :10,33 (1Н, с); 9,86 (1Н, с); 8,84 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,79 (1Н, с); 8,22 (1Н, с); 7,89 (1Н, д, J = 7,2 Гц); 7,69 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,40 (2Н, дт, J = 8,0 Гц, J = 1.5Гц).
ПРИМЕР 12
4-(3-броманилино)-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидин 3-циано-4,6-диаминопиридин
Гидрируют 15,1 г (0,071 моля) сырого 2-бром-3-циано-4.6-диаминопиридина [см. также следую-щий эксперимент] в 200 мл смеси тетрагидрофу-ран/метанол (2:1), содержащей 7,0 г (0,071 моля) ацетата калия и 4 г 5%-го палладия-на-угле при 55 фунт/дюйм2 [= 3,867 кг/см2] при 20°С в течение 7 дней. После фильтрации через цеолит, промывки смесью тетрагидрофуран/метанол и удаления рас-творителей получают твердый продукт, который растворяют в разбавленной соляной кислоте и воде. Устанавливают рН раствора = 10 с помощью концентрированного раствора гидроксида натрия и охлаждают; получают 6,58 г (69%) 3-циано-4.6-диаминопиридина в виде твердого желтого продук-та, т. пл. 197°-198°С. При экстракции маточной жидкости 4 раза по 200 мл этилацетата получают дополнительно 2,12 г (22%) продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,91 (1Н, с); 6,26 и 6,24 (2Н, 2Н, шир. с); 5,63 (1Н,с).
4,6-Диамино-3-пиридилкарбоксамид
Прибавляют 4,30 г (0,032 моля) 3-циано-4,6-диаминопиридина к 25 мл 90%-й серной кислоты, затем перемешивают при 60-70°С в течение 3 ча-сов. Полученный раствор прибавляют к холодному концентрированному (40%) раствору гидроксида натрия, получают смесь 4,6-диамино-3-пиридилкарбоксамида и неорганических солей. Аналитически чистый образец получают путем хроматографии на оксиде алюминия [10-50% мета-нола в хлороформе]; получают светло-желтый твердый продукт.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,15 (1Н, с); 6,91 (2Н, шир. с); 7,7-6,3 (2Н, шир. м); 5,78 (2Н, шир. с); 5,56 (1Н, с).
7-Амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Нагревают 9,2 г сырого 4,6-диамино-З-пиридилкарбоксамида в очищенном триэтоксиме-тане [60мл; перегнан над натрием] при 170°С в течение 1,5 дней. После удаления растворителя остаток растворяют в горячем 2М растворе гид-роксида натрия, фильтруют, нейтрализуют конц. соляной кислотой и охлаждают; получают 3,57 г (69% в расчете на нитрил) 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) :11,79 (1Н, шир. с); 8,74 (1Н, с); 7,79 (1Н, с); 6,67 (2Н, шир.с):6,38(1Н,с).
7-Фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Раствор 1,00 г (6,17 ммоля) 7-амино-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 25 мл 60%-й тет-рафтороборной кислоты при 0°С обрабатывают 0,85 г (12,3 ммоля) твердого нитрита натрия, до-бавляемого порциями в течение 2-х часов, затем перемешивают при 0°С еще 1 час и при 20°С в те-чение 30 минут. Полученную смесь охлаждают на льду, нейтрализуют насыщенным водным раство-ром карбоната натрия и экстрагируют 4 раза по 100 мл этилацетата. Экстракт промывают водой, затем фильтруют через силикагель [этилацетат]; получают 0,48 г (47%) 7-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-(1 пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:12,69 (1Н, шир. с); 9,01 (1Н, с); 8,31 (1Н, с); 7,34 (1Н,с).
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо(4.3-d)пиримидин
Суспензию 0,23 г (1,39 ммоля) 7-фтор-4-оксо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 10 мл хлорокиси фосфора перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 3,5 часов, затем концен-трируют в вакууме. Полученное масло охлаждают на льду, разбавляют 100 мл метиленхлорида, 40 мл насыщенного водного раствора карбоната натрия и льдом, перемешивают 2 часа при 20°С. Отделяют метиленхлоридный экстракт и водную часть до-полнительно экстрагируют 2 раза по 100 мл мети-ленхлорида, затем сушат объединенные экстракты над сульфатом натрия и фильтруют, получают сырой 4-хлор-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидин. Прибавляют 1,26 г 3-броманилина (7,35 ммоля), 20 мг солянокислого 3-броманилина и 5 мл безводного изопропанола, затем полученный раствор концен-трируют в вакууме, чтобы удалить метиленхлорид, и перемешивают 1 час при 20°С. При добавлении разбавленного раствора бикарбоната натрия и воды продукт кристаллизуется. После фильтрации, промывки водой и метиленхлоридом получают 297 Mr чистого 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо(4,3-d)пиримидина (67%) в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,38 (1Н, шир. с); 9,59 (1Н, с); 8,72 (1Н, с) 8,17 (1Н, с); 7,85 (1Н, м); 7,38 (3Н,м).
ПРИМЕР 13
7-Амино-4-анилинопиридо (4,3-d)пиримидин 4,6-Диамино-2-бром-3-пианопиридин
Барботируют 2 часа бромистый водород в смесь 16,3 г малононитрила (0,247 моля) и 400 мл толуола при 0°С. Осаждается светло-коричневый продукт. Затем реакционную смесь нагревают 2 часа при 100С, причем наблюдается интенсивное выделение газа. После охлаждения до комнатной температуры желтый твердый продукт отделяют фильтрованием, промывают толуолом и сушат на воздухе. Смешивают 25,96 г твердого продукта с 500 мл воды, устанавливают рН суспензии =9-10 добавлением 15 мл концентрированного аммиака. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа смесь фильтруют. При перекри-сталлизации из этанола получают твердый желтый продукт. После сушки при 60°С в вакуумной печи получают 12,95 г (49%) 4.6-диамино-2-бром-3-цианопиридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 6,67 (2Н, шир. с); 5,59 (1Н, с).
2,4-Диамино-5-цианопиридиний-ацетат
Гидрируют 12,77 г (60 ммолей) 4.6-диамино-2-бром-3-цианопиридина в 240 мл смеси тетрагидро-фуран/метанол (2:1), содержащей 5,9 г (60 ммолей) ацетата калия и 0,5 г 20%-ного палладия-на-угле, при давлении 18 фунтов/дюйм2 [=1,266 кг/см2] при 25°С в течение 4 часов. Смесь фильтруют через целит и отгоняют растворитель при пониженном давлении; получают 11,15 г твердого продукта, который перемешивают со 100 мл тетрагидрофу-рана при комнатной температуре в течение 20 ми-нут. Смесь снова фильтруют и фильтрат выпари-вают досуха, получая целевой продукт. После сушки в вакуумной печи собирают 10,65 г (92%) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,90 (1Н, с); 6,26 (4Н, шир. с); 5,62 (1Н, с); 1,90 (3Н, с).
7-Амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 0,199 г (1,0 моль) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, 1,95 мл триэтилорто-формиата и 1,95 мл уксусного ангидрида кипятят с обратными холодильником в атмосфере азота при перемешивании в течение 3 часов. Затем отгоняют растворитель и остаток растворяют в 10 мл мета-нола, содержащего 0,81 г (15 ммолей) метоксида натрия. Через смесь барботируют сероводород в течение 5 минут, затем смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. После отгонки рас-творителя, остаток растворяют в горячей воде и кипятят с активированным углем. После фильтра-ции, нейтрализуют фильтрат уксусной кислотой, пока он еще горячий, чтобы вызвать образование желтого твердого продукта. После охлаждения собирают твердый продукт фильтрованием и су-шат его в вакуумной печи в течение ночи. Выделя-ют 84 г (51%) 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 9,82 (1Н, с), 9,34 (1Н, с); (1Н, с); 8,37 (1Н, с); 7,80 (2Н, д, J = 7,5 Гц); 7,38 (2Н, т, J = 7,5 Гц); 7,12 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с).
7-Амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидин
Прибавляют 6 мл (43 ммоля) триэтиламина к раствору 0,77 г (4,3 ммоля) 7-амино-4-тионо-3Н-пиридо(4,3-d)пиримидина в 7 мл диметилсульфок-сида при перемешивании в атмосфере азота при 25°С. После перемешивания двух фаз в течение 20 минут прибавляют 0,26 мл (4,2 ммоля) метилиоди-да. Через 2 часа реакционную смесь выливают при перемешивании в смесь воды со льдом. Мгновенно образуется твердый продукт. После дополнитель-ного охлаждения при 0°С, отфильтровывают твер-дый продукт и сушат его в вакуумной печи, полу-чая 0,564 г (68%) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,98 (1Н, с); 8,71 (1Н, с); 6,94 (2Н, шир. с); 6,49 (1Н, с); 2,63 (3Н, с).
7-Амино-4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 0,136 г (0,7 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 0,5 мл (5,5 ммоля) анилина в атмосфере азота кипятят с об-ратным холодильником при 180°С в течение 2 ча-сов. Реакционную смесь охлаждают до 25°С, при этом образуется осадок. Твердый продукт отфиль-тровывают и перекристаллизовывают из изопропа-нола, сушат в вакуумной печи в течение ночи. Вы-деляют 84 мг (51%) 7-амино-4-анилинопиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,82 (1Н, с); 9,34 (1Н, с); 8,37 (1Н, с); 7,80 (2Н, д, J = 7,5 Гц), 7,38 (2Н, т, J = 7,5 Гц), 7,12 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с).
ПРИМЕР 14
7-Амино-4-(3-гидроксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 299 мг (1,56 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,60 г (14,7 ммоля) 3-аминофенола перемешивают при 160°С в течение 15 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [9% мета-нола/ метиленхлорид], получают 108 мг (18%) 7-амино-4-(3-гидроксианилино)пиридо (4,3-d) пири-мидина в виде светло-оранжевого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,69 (1Н, с); 9,44 (1Н, шир. с); 9,33 (1Н, с); 8,38 (1Н. с); 7,37 (1Н, т, J = 2,1 Гц); 7,21 (1Н, шир. д, J = 8,4 Гц); 7,14 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,59 (2Н, шир. с); 6,53 (1Н, ддд, J = 7,9; 2,2; 0,8 Гц); 6,43 (1Н, с).
ПРИМЕР 15
7-Амино-4-(3-метоксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 226 мг (1,18 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,00 мл (8,90 ммоля) м-анизидина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 1,5 часов. Полученный продукт хроматографируют на силикагеле [5-7% этано-ла/этилацетат], получают 136 мг (43%) 7-амино-4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
25 381 26
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,78 (1Н, шир, с); 9,34 (1Н, с); 8,40 (1Н, с); 7,50 (1Н, шир. с); 7,44 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,28 (1Н, т, J = 8,2 Гц); 6,71 (1Н, дд, J = 8,2 и 2,3 Гц); 6,61 (2Н, шир. с); 6,45 (1Н, с); 3,77 (3Н, с).
ПРИМЕР 16
7-Амино-4-(2-метоксианилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 227 мг (1,18 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,00 мл (8,87 ммоля) о-анизидина перемешивают в атмосфере азота при 180°С в течение 2,5 часов. Полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле (5% этанола/этилацетет), получают 147 мг (47%) 7-амино-4-(2-метокси- анилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,44 (1Н, шир. с); 9,25 (1Н, с); 8,22 (1Н, с), 7,54 (1Н, ДД, J = 7,7 и 1,4 Гц); 7,24 (1Н, ддд, J = 8,1; 7,4;1,5 Гц); 7,10 (1Н, дд, J = 8,2 и 1,2 Гц); 6,98 (1Н, дт, J = 1,3 Гц, J = 7,5 Гц); 6,52 (2Н, шир. с); 6,41 (1Н, с); 3,79 (3Н, с).
ПРИМЕР 17
7-Амино-4-(3-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 307 мг (1,60 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 2,00 г (14,5 ммоля) 3-нитроанилина перемешивают при 200°С в течение 1,5 часов и суспендируют сырой продукт в 250 мл смеси метанол/тетрагидрофуран (4:1), гидрируют на 2 г 5%-го палладия-на-угле при давлении 60 фунт/дюйм2 [= 4,219 кг/см2] и 20°С в течение 24 часов. Раствор фильтруют через цеолит, тщательно промывают горячим метанолом и затем абсорби-руют оксидом алюминия и хроматографируют на оксиде алюминия [4-8% этанола/хлороформ], что-бы получить 66 мг (16%) 7-амино-4-(3-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде зеленого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,57 (1Н, шир. с): 8.33 (1Н, с); 7,04 (1Н, т, J = 2,0 Гц); 6,99 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,88 (1Н, шир. д, J = 8,0 Гц); 6,55 (2Н, шир. с); 6,40 (1Н, с); 6,34 (1Н, дд, J = 7,9 Гц и 1,3 Гц); 5,10 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 18
7-Амино-4-(4-миноанилино)пиридо(4,3-d)иримидин
7-Амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 138 мг (0,72 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,50 г (10,0 ммоля) 4-аминоацетанилида перемешивают в ат-мосфере азота при 200°С в течение 1 часа. Полу-ченный продукт хроматографируют на оксиде алюминия (8-10% метанола/метиленхлорид), полу-чают 110 мг (52%) 7-амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,94, 9,79 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 9,31 (1Н, с); 8,34 (1Н, с); 7,69 (2Н, д, J = 8,9 Гц), 7,57 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,57 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, с); 2,05 (3Н, с).
7-Амино-4-(4-аминоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Раствор 0,30 г (1,02 ммоля) 7-амино-4-(4-ацетамидоанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в 10 мл 2М водного раствора гидроксида натрия и 10 мл метанола перемешивают при 100°С в течение 7 часов. Полученный в результате продукт хромато-графируют на оксиде алюминия [3-4% этано-ла/хлороформ]; получают 86 мг (33%) 7-амино-4-(4-аминоанилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде оранжевого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,58 (1Н, с); 9,24 (1Н, с); 8,25 (1Н, с); 7,31 (2Н, д, J = 8,6 Гц); 6,58 (2Н, д, J = 8,6 Гц); 6,48 (2Н, шир.с); 6,39 (1Н, с); 5,00 (2Н, шир. с).
ПРИМЕР 19
7-Амино-4-(3-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 245 мг (1,28 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,60 г (11,8 ммоля) N,N-диметил-1,3-фенилендиамина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 1 часа и хро-матографируют полученный продукт (дважды) на оксиде алюминия [3% этапола/хлороформ]; полу-чают 113 мг (32%) 7-амино-4-(3-диметиламиноанилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,66 (1Н, шир. с); 9,33 (1Н, с); 8,36 (1Н, с); 7,22 (1Н, шир. д, J = 7,8 Гц); 7,16 (2Н, м); 6,57 (2Н, шир. с); 6,51 (1Н, ддд, J = 8,0; 2,3; 1,2 ГЦ); 6,42 (1Н. с); 2,91 (6Н, с).
ПРИМЕР 20
7-Амино-4-(4-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 256 мг (1,33 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,95 г (14,4 ммоля) N,N-диметил-1,4-фенилендиамина переме-шивают в атмосфере азота при 190°С в течение 20 минут. Полученный в результате продукт хромато-графируют на оксиде алюминия [3-7°/о этано-ла/хлороформ]; получают 198 мг (53%) 7-амино-4-(4-диметиламиноанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде оранжевого твердого продук-та.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,67 (1Н, шир. с); 9,27 (1Н, с); 8,27 (1Н, с), 7,51 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,75 (2Н, д, J = 8,9 Гц); 6,51 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 2,89 (6Н, с).
ПРИМЕР 21
7-Амино-4(2-нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 220 мг (1,15 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 2,00 г (14,5 ммоля) 2-нитроанилина нагревают до 100°С, затем в горячий раствор при перемешивании вводят из-быток сухого газообразного хлористого водорода и перемешивают смесь при 160°С в течение 20 ми-нут. Полученный в результате продукт нейтрали-зуют избытком бикарбоната натрия, растворенного в смеси метанола с хлороформом, сушат над сили-кагелем и хроматографируют на силикагеле [2-4% метанола/метиленхлорид]; получают 108 мг (33%) 7-амино-4-(2- нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде желто-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,40 (1Н, шир. с); 8,20 (1Н, шир. с); 8,12 (1Н, шир. с): 8,01 (2Н, шир. с): 7,75 (1Н, шир. с); 6,70 (2Н, шир. с); 6,43 (1Н, шир. с).
ПРИМЕР 22
7-Амино-4-(3-нитроанилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 127 мг (0,66 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,70 г (12,3 ммоля) 3-нитроанилина перемешивают в атмосфере азота при 200°С в течение 1,5 часов. Полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на оксиде алюминия [5-20 % этанола/ хлороформ]; получают 81 мг (39%) 7-амино-4-(3-нитроанилино) пиридо (4,3-d)пиримидина в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:10,17 (1Н, шир. с); 9,37 (1Н, с); 8,87 (1Н, шир. с); 8,48 (1Н, с); 8,33 (1Н, шир. д, J = 7,5 Гц), 7,95 (1Н, ддд, J = 8,21 2,1;1,0 Гц); 7,67 (1Н, т, J = 8,2 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6,47 (1Н, с).
ПРИМЕР 23
7-Амино-4-(3-фторанилино)пиридо(4.3-d)пиримидин
Смесь 215 мг (1,12 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 1,16 г (10,4 ммоля) 3-фторанилина перемешивают при 160°С в течение 30 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [6-7% ме-танола/метиленхлорид], получают 185 мг (65%) 7-амино-4-(3-фторанилино)пиридо(4,3-d)пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 9,94 (1Н, шир. с); 9,36 (1Н, с); 8,46 (1Н, с); 7,91 (1Н, шир. д, J = 11,9 Гц); 7,63 (1Н, шир. д, J = 8,1 Гц); 7,41 (1Н, дд, J = 15,7 и 7,7 Гц); 6,93 (1Н, дт, J = 8,5 Гц, J = 2,4 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с).
ПРИМЕР 24
7-Амино-4-(3-хлоранилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 208 мг (1,08 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]-пиримидина и 1,21 г (9,48 ммоля) 3-хлоранилина перемешивают при 150°С в течение 20 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на оксиде алюминия [5-10% метанола/метиленхлорид]; получают 177 Mr (60%) 7-амино-4-(3-хлоранилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,92 (1Н, шир. с); 9,35 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 8,08 (1Н, шир. с); 7,79 (1Н, шир. д, J = 8,0 Гц), 7,40 (1Н, т, J = 8,1 Гц); 7,16 (1Н, дд, J= 7,9 Гц и 1,3 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н, с).
ПРИМЕР 25
7-амино-4-(3,4-дихлоранилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 247 мг (1,29 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 1,50 г (9,26 ммоля) 3,4-дихлоранилина перемешивают при 165°С в течение 30 минут. Полученный в результа-те продукт хроматографируют на силикагеле [7-8 % метанола/метил енхлорид]; получают 252 мг (64%) 7-амино-4-0.4-дихлоранилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,97 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,47 (1Н, с); 8,29 (1Н, шир. с); 7,86 (1Н, шир. д, J = 8,6 Гц); 7,62 (1Н, д, J = 8,8 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н, с).
ПРИМЕР 26
7-Амино-4-(2-броманилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 198 мг (1,03 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,00 мл (9,18 ммоля) 2-броманилина перемешивают в атмосфере азота при 180°С в течение 2,5 часов; полученный про-дукт хроматографируют на оксиде алюминия [1% этанола/хлороформ]; получают 108 мг (33%) 7-амино-4-(2-броманилино)пиридо[3,4-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,91 (1Н, шир. с); 9,27 (1Н, с); 8,20 (1Н, с); 7,73 (1Н, д, J = 7,9 Гц), 7,50 (1Н, м); 7,44 (1Н, т, J = 6,9 Гц); 7,25 (1Н, м); 6,59 (2Н, шир. 01 6,42 (1Н, с).
ПРИМЕР 27
7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 167 Mr (0,87 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,75 мл (7,8 ммоля) 3-броманилина перемешивают в атмосфере азота при 190°С в течение 2,5 часов и перекристаллизо-вывают образовавшийся при охлаждении осадок из изопропанола.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,91 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,84 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,34 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,29 (1Н, д, J = 8,2 Гц); 6,68 (2Н, шир. с); б, 45 (1Н, с).
ПРИМЕР 28
7-Амино-4-(4-броманилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 264 мг (1,36 ммоля) 7-амино-4-металтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 1,00 г (5,81 ммоля) 4-броманилина перемешивают а атмосфере азота при 200°С в течение 15 минут. Полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле [10-15°/о этанола/этилацетат], получают 200 Mr (46%) 7-амино-4-(4-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,88 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,40 (1Н, с); 7,83 (2Н, д, J = 8,8 Гц); 7,55 (2Н, д, J = 8,8 Гц): 6,64 (2Н, шир. с); 6,44 (1Н, с).
ПРИМЕР 29
7-Амино-4-(3-иоданилино)пиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 72 мг (0,37 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо(4,3-d)пиримидина и 1,25 г (5,71 ммоля) 3-иоданилина перемешивают при 160°С в течение 30 минут. Полученный в результате про-дукт хроматографируют на силикагеле [5-7% ме-танола/метиленхлорид]; получают 83 Mr (61%) 7-амино-4-(3-иоданилино)пиридо[4,3-d] пиримидина в виде светло-коричневых розеток.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,84 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,44 (1Н, с); 8,30 (1Н, шир. с); 7,90 (1Н, дд, J = 7,9 и 0,8 Гц); 7,47 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,18 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 6,66 (2Н, шир. с); 6,46 (1Н. с).
ПРИМЕР 30
7-Амино-4-(2-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 300 мг (1,56 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина, 1,00 г (5,06 ммоля) солянокислого 2-аминобензотрифторида и 2,00 г (12,4 ммоля) 2- аминобензотрифторида пере-мешивают при 160°С в течение 10 минут. Получен-ный в результате продукт нейтрализуют избытком бикарбоната натрия, растворяют в смеси метанола с хлороформом, сушат над силикагелем и хромато-графируют на силикагеле [6-7% метано-ла/метиленхлорид]; получают 194 мг (41%) 7-амино-4-(2-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема; т. пл. {мета-нол/хлороформ/петролейный эфир} = 126-130°С [разложение].
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,60 (1Н, шир. с); 9,17 (1Н, шир. с); 8,13 (1Н, шир. с); 7,76 и 7,69 (1Н, 1Н, м, м); 7,45 (2Н, м); 6,66 (2Н, шир. с); 6,36 (1Н, с).
ПРИМЕР 31
7-Амино-4-(3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 234 мг (1,22 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [опи- санного в предыдущем эксперименте] и 3-амино-бензотрифторида (2 мл, 16,0 ммоль) перемешивают в атмосфере азота при 190-200°С в течение 2 часов, затем полученный продукт хроматографируют на силикагеле [5-10% этанола/эти- лацетат], и затем на оксиде алюминия [5-7% этанола/хлороформ]; получают 157 мг (42%) 7-амино-4-(3-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,04 (1Н, с); 9,37 (1Н, с); 8,46 (1Н, с)1 8,31 (1Н, с); 8,19 (1Н, д, J = 8,2 Гц); 7,62 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,45 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 6,69 (2Н, шир.с):6,47(1Н,с).
ПРИМЕР 32
7-Амино-4-(4-трифторметиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 390 мг (2,03 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина, 0,40 г (2,02 ммоля) солянокислого 4-аминобензотрифторида и 1,61 г (10,0 молей) 4- аминобензотрифторида пере-мешивают в течение 2 минут при 180°С. Получен-ный продукт нейтрализуют избытком бикарбоната натрия, растворяют в смеси метанола с хлорофор-мом, сушат над оксидом алюминия и хроматогра-фируют на оксиде алюминия [4-7% метано-ла/хлороформ]; получают 7-амино-4-(4-трифторметиланилино)пиридо [4,3-d]пиримидин (390 мг, 63%) в виде твердого крема. Аналитически чистый материал получают при дополнительной хроматографии на силикагеле [5% метано-ла/метиленхлорид]; получают светло-желтые иглы.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, шир. с); 9,40 (1Н, с); 8,48 (1Н, с); 8,13 (2Н, д, J = 8,2 Гц); 7,74 (2Н, д, J = 8,7 Гц); 6,72 (2Н, шир. с); 6,40 (1Н, с).
ПРИМЕР 33
4-(3-Броманилино)-7-метиламинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 74 мг (0,23 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 7 мл (50 ммолей) триэтиламина и 3,0 г (44 ммоля) соляно-кислого метиламина в 30 мл изопропанола, нахо-дящуюся в стальном автоклаве, перемешивают при 95°С (масляная баня) в течение 5 часов. Получен-ную смесь концентрируют в вакууме, подщелачи-вают водным раствором карбоната натрия, раз-бавляют водой и экстрагируют 3 раза по 100 мл этилацетата. Хроматография этого экстракта на силикагеле [3% метанола/метиленхлорид] дает 4-(3-броманилино)-7-метиламинопиридо [4.3-d]пиримидин (50 мг, 65 %) в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,93 (1Н, шир. с); 9,37 (1Н, с); 8,47 (1Н, с); 8,18 (1Н. с); 7,84 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,34 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,30 (1Н, шир. д, J = 8,1); 7,19 (1Н, к, J = 4,7 Гц); 6,35 (1Н, с): 2,85 (ЗН, д, J = 4,8 Гц).
ПРИМЕР 34
4-(3-Броманилино)-7-диметиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 101 мг (0,32 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 4,4 мл триэтиламина (32 ммоля) и 2,58 г (32 ммоля) соля-нокислого диметиламина в 30 мл изопропанола, находящуюся в стальном автоклаве, перемешива-ют при 100°С (масляная баня) в течение 4 часов. Полученный раствор концентрируют в вакууме, подщелачивают водным раствором карбоната натрия и разбавляют водой; получают твердый продукт. После фильтрации и перекристаллизации из смеси метанола с хлороформом получают 102 Mr (94%) 7-диметиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,93 (1Н, шир. с); 9,42 (1Н, с); 8,48 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,85 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,35 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,30 (1Н, шир. д, J = 7,8 Гц); 6,53 (1Н,с); 3,16 (6Н,с).
ПРИМЕР 35
4-[N-(3-Бромфенил)-N-метиламино]-7-метиламинопиридо[4,3-d]пиридин
Смесь 100 мг (0,31 ммоля) 7-фтор-4-(3-боманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 4,4 мл (32 ммоля) триэтиламина и 2,12 г (32 ммоля) соляно-кислого метиламина в 30 мл изопропанола, нахо-дящуюся в стальном автоклаве, перемешивают при 100°С (масляная баня) в течение 5 часов. Получен-ную смесь концентрируют в вакууме, подщелачи-вают водным раствором карбоната натрия, раз-бавляют водой и экстрагируют 3 раза по 100 мл этилацетата. Хроматография этого экстракта на силикагеле [1-2% метанола/метиленхлорид] дает 23 мг (21%) 4-[N-(3-бромфенил)-N-метиламино]-7-метиламинопиридо[4,3-d]пиримидина в виде свет-ло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,14 (1н, с); 7,79 (1Н, с); 7,30 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,20 (1Н, дод, J = 7,8 Гц, 1,8 Гц, 0,8 Гц); 7,03 (1Н, шир. к., J = 4,9 Гц); 7,01 (1Н, т, J = 1,9 Гц); 6,82 (1Н, ддд, J = 7,8 Гц; 1,8 Гц; 0,9 Гц); 6,25 (1Н, с); 3,40 (3Н, с); 2,73 (3Н, д, J = 4,9 Гц).
ПРИМЕР 36
7-Ацетиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 0.154 г (0,49 ммоля) 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина, 0,14 мл (1,5 ммоля) уксусного ангидрида, 0,14 мл триэти-ламина (1,0 ммоль) и каталитического количества 4-(N,N-диметиламино)пиридина перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем реакцию прекращают до-бавлением воды со льдом. Собирают темный оса-док фильтрованием на воронке Бюхнера и очища-ют препаративной ТСХ [Rf= 0,25; 7% метано-ла/хлороформ]. При перекристаллизации из этано-ла получают 13,5 мг (7,7%) 7-ацетиламино-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5:10,92 (1Н, с); 10,22 (1Н, с); 9,64 (1Н, с); 8,70 (1Н, с); 8,28 (1Н, с); 8,21 (1Н, с); 7,88 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,41-7,34 (3Н, м); 2,16 ОН, с).
ПРИМЕР 37
4-(3-Броманилино)-7-метоксипиридо[4,3-d]пиримидин
Раствор 100 мг (0,31 ммоля) 7-фтор-4-(3-броманилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в 30 мл 1М раствора метоксида натрия в метаноле перемеши-вают при кипячении с обратным холодильником в течение 42 часов. Полученную смесь концентри-руют при пониженном давлении, разбавляют водой и нейтрализуют разбавленной соляной кислотой; получают 92 мг (89%) 7-метокси-4-(3-броманилино) пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,22 (1Н, шир. с); 9,57 (1Н, с); 8,63 (1Н, с); 8,19 (1Н, с); 7,86 (1Н, шир. д, J = 7,9 1-ц); 7,39 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 7,35 (1Н, дд, J = 7,9 Гц, 1,5 Гц); 6,96 (1Н, с); 4,00 (3Н, с).
ПРИМЕР 38
4-Бензиламинопиридо(4,3-d)пиримидин
Смесь 160,4 мг (0,902 ммоля) 4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 106,3 мг (0,992 ммоля) бензиламина в 2 мл этанола нагре-вают при 80°С в течение 12 часов, затем раствори-тель отгоняют при пониженном давлении. Полу-ченный в результате твердый продукт суспендиру-тот в метиленхлориде, фильтруют и полученный в результате твердый продукт очищают препаратив-ной ТСХ на силикагеле, элюируя 5% метанола в хлороформе. После удаления растворителя при пониженном давлении получают 36 мг (17%) 4-бензиламинопиридо[4.3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,60 (1Н, с); 9,37 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,72 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,57 (1Н, с); 7,54 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,37 (2Н, д, J = 7,0 Гц); 7,33 (2Н, т, J = 7,3 Гц); 7,25 (1Н, т, J = 7,2 Гц); 4,81 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 39
К смеси 85 мг (0,48 ммоля) 4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 2,5 мл этано-ла прикалывают 0,13 мл (1,0 ммоль) R-метилбензиламина. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником при 80°С в течение 20 часов. Удаляют растворитель при пониженном давлении, получают масло, которое кристаллизу-ют из метанола; получают 41,6 мг (35%) 4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина; т. пл. 138-138,5°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,77 (1Н, д, J = 0,7 Гц); 9,00 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 8,73 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,54 (1Н, с); 7,53 (1Н, дд, J = 5,8, 0,5 Гц); 7,45 (2Н, д, J = 7,2 Гц); 7,33 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 7,23 (1Н, тт. J = 7,5;1,2 Гц); 5,63 (1Н, п, J = 7,2 Гц); 1,61 (3Н, т, J = 7,0 Гц).
ПРИМЕР 40
7-Амино-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 8,78 г (45 ммолей) 2.4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, (10,66 г, 0,204 моля) муравьиной кислоты и 45 мл (0,41 моля) бензила-мина нагревают при 200°С в атмосфере азота в течение 2 часов. При охлаждении она затвердева-ет. Прибавляют 500 мл воды и перемешивают смесь твердая смола/вода в течение 20 минут при 0°С. Жидкость декантируют. Твердый продукт промы-вают водой, затем перекристаллизовывают из 25 мл изопропанола. После сушки в вакуумной печи в течение ночи получают 8,29 г (73%) 7-амино-2-бензиламинопиридо[4.3- d]пиримидина в виде светло-желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,10 (1Н, с); 8,85 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,25 (1Н, с); 7,21-7,36 (5Н, м); 6,46 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 4,74 (2Н, д, J = 6,0 Гц).
ПРИМЕР 41
7-Амино-4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 0,072 мл (0,55 ммоля) [R]-1-фенилэтиламина и 97 мг (0,5 ммоля) 7-амино- 4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] нагревают при 180°С в атмосфере азота в течение 1,5 часов. Затем охла-ждают реакционную смесь до комнатной темпера-туры, получая осадок. Смесь прибавляют к воде и хлороформу, обрабатывают ультразвуком и филь-труют. Разделяют фазы и водную фазу экстраги-руют хлороформом. Объединенные экстракты про-мывают водой, рассолом и сушат над сульфатом магния. Отгоняют растворитель при пониженном давлении и очищают остаток с помощью препара-тивной ТСХ [5% метанола в хлороформе] и пере-кристаллизации из хлороформа; получают 14,5 мг (11%) 7-амино-4-([R]-1-фенилэтиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина; т. пл. 231,8-232,1°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,23 (1Н, с); 8,50 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 8,19 (1Н, с); 7,41 (2Н, д, J = 7,0 Гц); 7,31 (2Н, т, J = 8,0 Гц); 7,21 (1Н, тт, J = 7,4 и 1,2 Гц); 6,45 (2Н, с); 6,33 (1Н, с); 5,56 (1Н, п, J = 7,2 Гц); 1,55 (3Н, д, J = 7,0 Гц).
ПРИМЕР 42
7-Амино-4-(2-аминобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 136 мг (0,71 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,70 г (13,8 ммоля) в 5 мл изопропанола перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 1 часа, полу-ченный в результате продукт хроматографируют на силикагеле [7-20% этанола в этилацетате] и оксиде алюминия [6-10% этанола/хлороформ]; получают 89 мг (47%) 7-амино-4-(2-аминобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,08 (1Н, с); 8,68 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,05 (1Н, д, J = 7,4 Гц); 6,96 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 6,63 (1Н, д. J = 7,9 Гц); 6,51 (1Н, т, J = 7,4 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 5,20 (2Н, шир. с); 4,56 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 43
7-Амино-4-(3-диметиламинобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 236 мг (1,23 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,36 r (9,07 ммоля) 3-диметиламинобензиламина в 5 мл изопропанола перемешивают в атмосфере азота при кипячении с обратным холодильником в течение 1 часа, полу-ченный продукт хроматографируют на силикагеле [10-15% этанола/этилацетат], затем на оксиде алюминия [1% этанола/хлороформ] и получают 145 мг (40%) 7-амино-4-(3-диметиламинобензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,11 (1Н, с); 8,79 (1Н, т, J = 5,9 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,11 (1Н, дд, J = 8,0 Гц; 7,7 Гц); 6,73 (1Н, шир. с); 6,63 (1Н, д, J = 7,6 Гц); 6,60 (1Н, дд, J = 8,1 и 2,2 Гц); 6,44 (2Н, шир. с); 6,35 (1Н, с); 4,67 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 2,86 (6Н, с).
ПРИМЕР 44
7-Амино-4-(3-нитробензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 228 мг (1,19 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем примере] и 0,81 г (5,33 ммоля) 3-нитробензиламина перемешивают в атмосфере азота при 150-160°С в течение 1,5 часов; получен-ный в результате продукт хроматографируют на силикагеле [5-10% этанола/ этилацетат]; получают 151 мг (43%) 7-амино-4-(3-нитробензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,11 (1Н, с); 8,98 (1Н, т, J = 5,5 Гц); 8,26 (1Н, с); 8,22 (1Н, шир. с); 8,12 (1Н, дд, J = 8,0;1,8 Гц); 7,83 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,63 (1Н, т, J = 7,9 Гц); 6,50 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,85 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 45
7-Амино-4-(3-метоксибензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 136 мг (0,71 ммоля) 7-амино-4-метилтиопирида[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем примере] и 1,37 г (10,0 ммоля) 3-метоксибензиламина в 3 мл изопропанола переме-шивают в атмосфере азота при кипячении с обрат-ным холодильником в течение 3 часов. Выпарива-ние растворителя и хроматография на силикагеле (5-10% этанола/этилацетат) приводят к получению 153 мг (77%) 7- амино-4-(3-метоксибензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,11 (1Н, с); 8,83 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,24 (1Н, дт, J = 0,8 Гц, J = 8,1 Гц); 6,92 (2Н, м); 6,81 (1Н, дт, J = 8,2 Гц, J = 1,2 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,37 (1Н, с); 4,71 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 3,73 (3Н, с).
ПРИМЕР 46
7-aмино-4-(4-хлорбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин-мезилат
Осаждают 56 мг (0,20 ммоля) свободного ос-нования [полученного из 2,4-диамино-5-цианопиридиний-ацетата, муравьиной кислоты и 4-хлорбензиламина при 200°С, как описано в преды-дущем примере] из ацетонового раствора с помо-щью 105 мкл (0,23 ммоля) метансульфоновой кис-лоты; получают полимезилатную соль.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 10,59 (1Н, т, J = 5,6 Гц); 9,24 (1Н, с); 8,69 (1Н, с); 7,42 (4Н, с); 6,42 (1Н, с); 5,8 (6Н, очень шир. с); 4,89 (2Н, д., J = 5,8 Гц); 2,41 (7,5 Н, с).
ПРИМЕР 47
7-Амино-4-(2-бромбензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 2-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа, полученный про-дукт хроматографируют на силикагеле [1-5% эта-нола/этилацетат], получают 175 мг (45%) 7-амино-4-(2-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,16 (1Н, с); 8,85 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,24 (1Н, с); 7,64 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,34 (1Н, дд, J = 7,7 и 7,1 Гц); 7,31 (1Н, дд, J = 7,7 и 2,4 Гц); 7,21 (1Н, ддд, J = 7,8; 6,9; 2,4 Гц); 6,50 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 4,74 (2Н, д, J = 5,7 Гц).
ПРИМЕР 48
7-Амино-4-(3-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 228 мг (1,19 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 3-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа. Полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на силикаге-ле [2-10% этанола/этилацетат]; получают 203 м (52°/о) 7-амино-4-[(3-бромфенил)метиламино]-пиридо [4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,09 (1Н, с); 8,86 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,54 (1Н, с), 7,44 (1Н, д, J = 7,8 Гц), 7,36 (1Н, д, J = 7,6 Гц); 7,29 (1Н, т, J = 7,7 Гц); 6,48 (2Н, с); 6,37 (1Н, с); 4,73 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 49
7-Амино-4-(4-бромбензиламино)пиридо[4.3-d]пиримидин
Смесь 234 мг (1,22 ммоля) 7-амино-4-метитиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 0,84 г (4,52 ммоля) 4-бромбензиламина перемешивают в атмосфере азо-та при 140°С в течение 1 часа, полученный в ре-зультате продукт хроматографируют на силикаге-ле [10% этанола/этилацетат], получают 192 мг (48%) 7-амино-4-(4-бромбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде твердого крема.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 9,09 (1Н, с); 8,87 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,25 (1Н, с); 7,51 (2Н, д, J = 8,3 Гц); 7,31 (2Н, д, J = 8,3 Гц); 6,46 (2Н, шир. с); 6,37 (1Н, с); 4,70 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 50
7-Амино-4-(2-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,90 мл (6,42 ммоля) 2-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 150°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на силикагеле [5% этанола/этилацетат], получают 0,22 г (59%) 7- амино-4-(2-трифторметилбензил)аминопиридо[4,3-d]пиримидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,16 (1Н, с); 8,88 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,23 (1Н, с); 7,75 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,62 (1Н, т, J = 7,5 Гц); 6,51 (2Н, шир. с); 6,39 (1Н, с); 4,92 (2Н, д, J = 5,5 Гц).
ПРИМЕР 51
7-Амино-4-(3-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,63 мл (4,40 ммоля) 3-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на силикагеле [3-5% этанола/этилацетат], получают 0,24 г (63%) 7- амино-4-[(3-трифторметилфенил)метиламино]пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,10 (1Н, с); 8,92 (1Н, т, J = 5,7 Гц); 8,26 (1Н, с); 7,71 (1Н, с); 7,66 (1Н, д, J = 7,4 Гц), 7,62 (1Н, д, J = 7,8 Гц); 7,57 (1Н, т, J = 7,6 Гц); 6,49 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,82 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 52
7-Амино-4-(4-трифторметилбензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 225 мг (1,17 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,63 мл (4,42 ммоля) 4-(трифторметил)бензиламина перемеши-вают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 ча-са. Полученный в результате продукт хроматогра-фируют на оксиде алюминия [5-10% этано-ла/хлороформ], затем на силикагеле [2-10% этано-ла/этилацетат], получают 0,21 г (56%) 7-амино-4-К4-трифторметилфенил) метиламино]пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,12 (1Н, с); 8,94 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,24 (1Н, с); 7,69 (2Н, д, J = 8,1 Гц); 7,56 (2Н, д, J = 8,1 Гц); 6,48 (2Н, шир. с); 6,38 (1Н, с); 4,82 (2Н, д, J = 5,8 Гц).
ПРИМЕР 53
7-Амино-4-(тиен-2-ил-метиламино)[4,3-d]пиримидин-димезилат
Соединение получают из 190 мг (0,98 мл/юля) 2,4-диамино-5-циано-пиридиний- ацетата, 0,23 г (4,4 ммоля) муравьиной кислоты и 1,07 мл (10 ммо-лей) тиенилметиламина, как описано в предыду-щем эксперименте. Сырой продукт превращают в димезилатную соль, как описано ранее, и перекри-сталлизовывают из изопропанола; получают 7-амино-4-(тиен-2-ил-метиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин-димезилат с выходом 19%.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,67 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 9,21 (1Н, с); 8,77 (1Н, с); 7,48 (1Н, дд, J = 5,1 и 1,2 Гц); 7,16 (1Н, дд, J = 3,4 и 0,7 Гц); 7,02 (1н, дд, J = 4,8; 3,4 Гц); 6,42 (1Н, с); 5,06 (2Н, д, J = 5,7 Гц); 2,41 (6Н, с).
ПРИМЕР 54
7-Ацетиламино-4-бензиламинопиридо[4.3-d]пиримидин 7-Ацетиламино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидин
Прибавляют 0,70 мл (9,84 ммоля) ацетилхло-рида к раствору 0,20 г (1,04 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина [описанного в предыдущем эксперименте] и 1,51 мл триэтилами-на (10,8 ммоля) в тетрагидрофунане при 0°С, затем смесь перемешивают при 20°С в течение 4-х часов, прибавляют 50 мл воды, затем раствор экстраги-руют 3 раза по 50 мл этилацетатом. Выпаривание и хроматография на оксиде алюминия [1% этано-ла/хлороформ] дают 0,12 г (49%) 7-ацетиламино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,05 (1Н, с); 9,30 (1Н, с); 9,02 (1Н, с); 8,38 (1Н, с): 2,71 (3Н,с); 2,18 (3Н,с).
7-Ацетиламино-4-бензиламинопиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 0,40 г (1,71 ммоля) 7-ацетиламино-4-метилтиопиридо[4,3-d]пиримидина и 0,8 мл (9,15 мл/юля) бензиламина перемешивают в атмосфере азота при 140°С в течение 1 часа, полученный в результате продукт хроматографируют на силика-геле (этилацетат), получают 0,31 г (62%) 7-ацетиламино-4-бензиламинопиридо [4,3-d] пири-мидина в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,79 (1Н, с); 9,42 (1Н, с); 9,23 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 8,49 (1Н, с); 8,18 (1Н, с); 7,39 (1Н, дт, J = 6,9 Гц, J = 1,7 Гц); 7,34 (1Н, тт. J = 7,3 и 1,7 Гц); 7,25 (1Н, тт. J = 7,1 и 1,7 Гц); 4,80 (2Н, д, J = 5,8 Гц); 2,15 (3Н, с).
ПРИМЕР 55
4-Анилинопиридо[3,4-d]пиримидин 4-Карбоксамидоникотиновая кислота
Прибавляют 8,3 г (55,6 ммоля) ангидрида 3,4-пиридиндикарбоновой кислоты к 12 мл кони. ам-миака в 60 мл воды, перемешивают при 0°С в тече-ние 5 минут. Во время прибавления образуется паста, которую перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Белого цвета пасту продувают азотом в течение 30 минут и разбавля-ют 10 мл воды при образовании прозрачного рас-твора. Затем барботируют сернистый ангидрид через раствор в течение 15 минут, понижая его рН до 2. При охлаждении, образовавшийся твердый продукт отфильтровы- вают, промывают водой и сушат в печи; получают 7 г (76%) 4-карбоксамидоникотиновой кислоты в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,93 (1Н, с); 8,76 (1Н, д, J = 5,0 Гц); 8,08 (1Н, с): 7,62 (1Н, с); 7,45 (1H, J = 5,0 Гц).
Изохинолинимид
Нагревают 280 мг (1,68 ммоля) 4-карбоксамидоникотиновой кислоты примерно при 200°С в течение 5 часов, получают 177,2 мг (71%) имида изохинолиновой кислоты в виде белого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,68 (1Н, с); 9,12-9,03 (2Н, м); 7,80 (1Н, д, J = 5,1 Гц).
3-Аминоизоникотиновая кислота
Прибавляют 1,71 г брома к 30 мл 10%-го рас-твора гидроксида калия при охлаждении на льду. Полученный раствор прибавляют к тонко измель-ченному изохинолинимиду (1,46 г, 9,86 ммоля). При добавлении смесь начинает пениться. После рас-творения всего твердого продукта прибавляют 7 мл 15%-го водного раствора гидроксида калия и нагревают смесь при 80°С в течение 1 минуты, затем охлаждают. Смесь нейтрализуют сернистым ангидридом и охлаждают до 0°С до тех пор, пока не осядет продукт. Твердый продукт собирают фильтрованием и промывают водой, сушат в ваку-умной печи; получают 485 Mr (36%) 3- аминоизо-никотиновой кислоты в виде белого твердого про-дукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,5-8,8 (2Н, шир. с); 8,20 (1Н, с); 7,70 (1Н, д, J =5 Гц); 7,46 (1Н, д,. J=5 Гц).
3Н-пиридо[3,4-d]пиримид-4-он
Смесь 485 мг (3,51 ммоля) 3-аминоизоникотиновой кислоты в 3 мл формамида нагревают при 160°С в течение 12 часов. После охлаждения отфильтровывают полученный твер-дый продукт и промывают его водой, сушат в ваку-умной печи; получают 373 мг (72%) 3Н-пиридо[3.4-d]пиримид-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,60 (1Н, шир. с); 8,68 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,23 (1Н.с); 7,96 (1Н, д, J=5.l Гц).
4-тиопиридо[3.4-d]пиримидин
К раствору 366 мг (2,49 ммоля) 3Н-пиридо[3,4-d]пиримид-4-она в 4 мл пиридина прибавляют 1,25 г (2,74 ммоля) пятисернистого фосфора. Смесь ки-пятят с обратным холодильником в течение 4 часов в атмосфере азота. Полученную черную смолу растворяют в воде и получают твердый продукт. Его отфильтровывают и промывают водой, сушат в вакуумной печи; получают 369,8 мг (91%) 4- тио-пиридо[3.4-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 14,48 (1Н, шир. с), 9,13 (1Н, с); 8,70 (1Н, д, J = 5,4 Гц).
4-Метилтиопиридо[3.4-d]пиримидин
Смесь 369,8 мг (2,26 ммоля) 4-тиопиридо[3,4-d]пиримидина, 0,6 мл (4,5 ммоля) триэтиламина, 2 мл диметилсульфоксида и 0,24 мл (3,96 ммоля) иодметана перемешивают в атмосфере азота при 25°С в течение 12 часов. Смесь выливают в воду и полученный твердый продукт отфильтровывают и сушат в вакуумной печи; получают 222 мг (55%) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина в виде коричне-вого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,51 (1Н, с); 9,18 (1Н, с); 8,79 (1Н, д, J = 8 Гц); 7,97 (1Н, д, = 8 Гц).
4-Анилинопиридо[3,4-d]пиримидин
Смесь 75 мг (0,42 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина и 1 мл анилина нагревают при 100°С в атмосфере азота в течение 2 часов. Затем реакционную смесь хроматографи-руют на двуокиси кремния, используя жидкостную хроматографию среднего давления, и элюируя градиентной системой [от хлороформа до 5% ме-танола в хлороформе]. Концентрируют фракции при пониженном давлении и полученный твердый продукт перекристаллизовывают из эфира, полу-чая 21,2 мг (23%) 4-анилинопиридо[3.4-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, с); 9,18 (1Н, с); 8,74 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,46 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,89 (2Н, д, J = 8,5 Гц); 7,45 (2Н, т, J = 7,9 Гц); 7,21 (1H, T,J=7,4).
ПРИМЕР 56
4-(3-Броманилино)пиридо[3,4-]пиримидин
Смесь 75 мг (0,42 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыду-щий эксперимент] и 1 мл 3-броманилина нагревают в атмосфере азота при 100°С в течение 2 часов. Затем реакционную смесь хроматографируют на двуокиси кремния, используя жидкостную хрома-тографию среднего давления и элюируя градиент-ной системой (от хлороформа до 5% метанола в хлороформе). Фракции концентрируют при пони-женном давлении и полученный в результате твер-дый продукт перекристаллизовывают из эфира, получая 66 мг (52,7%) 4-(3- броманили-но)пиридо[3,4-]пиримидина в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) б: 10,15 (1Н, с); 9,21 (1н, с); 8,80 (1Н, с); 8,76 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,44 (1Н, д, J = 5,6 Гц); 8,25 (1н, с), 7,93 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,45-7,37 (2Н, м).
ПРИМЕР 57
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидин
5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-фторпиридин
5-Амино-2-фторпиридин получают при гидри-ровании на палладии-на-угле 2- фтор-5-нитропиридина [полученного из 2-хлор-5-нитропиридина при взаимодействии с фторидом калия в ацетонитриле с тетрафенилбромидом фос-фора. При взаимодействии сырого амина с трет.-Воc-ангидридом получают 5-[N-(трет.- бутокси-карбонил)амино]-2-фторпиридин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,07 (1Н, с); 8,05 (1Н, м); 6,89 (1Н, дд, J = 9,2; 3,3 Гц); 6,66 (1Н, м); 1,52 (9Н, с).
5-[N-(трет.-Бутоксикарбонил)амино1-2-фторпиридин-4-карбоновая кислота
При взаимодействии 5,3 г (25 ммолей) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- фторпиридина последовательно с н-бутиллитием и углекислым газом, как описано в следующем примере, получа-ют 1,60 г (25%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,83 (1Н, шир. с); 8,84 (1Н, с); 7,49 (1Н, д, J = 2.9 Гц); 1.47 (9Н, с).
5-Амино-2-фторпиридин-4-карбоновая кисло-та
При взаимодействии 1,0 г (3,9 ммоля) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- фторпиридин-4-карбоновой кислоты с трифторуксусной кислотой, как описано выше, получают 0,46 г (74%) 5-амино-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,85 (1Н, д, J = 1,5 Гц); 7,23 (1Н, д, J = 2,5 Гц).
6-Фтор-3Н-пиридо[3.4-d]пиримидин-4-он
При взаимодействии 5-амино-2-фторпиридин-4-карбоновой кислоты с формамидом при 140°С, как описано выше, получают 6-фтор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин- 4-он (20-%).
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,48 (1Н, м); 8,74 (1Н, с); 8,16 (1н, с); 7,63 (1Н, Д, J = 3 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидин
При взаимодействии 0,60 г (3,6 ммоля) 6-фтор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин-4-она с хлорокисью фосфора с последующей реакцией сырого 4,6-дигалоидного соединения с 3-броманилином полу-чают 0,73 г (63%) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3.4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,09 (1Н, шир. с); 8,96 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 8, 25 (2Н, м); 7,90 (1Н, шир. д, J = 6,5 Гц); 7,44-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 58
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридин
Смесь 12,86 г (0,1 моля) 5-амино-2-хлорпиридина, 24,0 г (0,11 моля) ди-трет.- бутил-карбоната и 12,1 г (1,12 моля) триэтиламина в 150 мл метиленхлорида кипятят с обратным холодиль-ником в течение 12 часов и отфильтровывают оса-док. Органический слой промывают водой, сушат над хлоридом кальция и фильтруют через корот-кую колонку с оксидом алюминия. Удаление рас-творителя приводит к получению 11,9 г (52%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2- хлорпиридина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,31 (1Н, д, J = 2,9 Гц); 7,94 (1Н, дд, J = 8,6; 2,6 Гц); 7,24 (1Н, д, J = 8,7 Гц); 7,15 (1Н, м); 1,51 (9Н, с).
5-[N-(трет.-Бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридин-4-карбоновая кислота
Раствор 22,87 г (0,1 моля) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпиридина и 47 мл (0,31 моля) тетраметилендиамина в 600 мл безвод-ного эфира охлаждают до -78°С и прибавляют по каплям 30 мл [0,3 моля] 10М гексанового раствора н- бутиллития. Раствору дают нагреться до -10°С, а затем выдерживают при этой температуре 2 часа, и повторно охлаждают до -78°С. После этого барбо-тируют сухой углекислый газ и дают нагреться полученной смеси до комнатной температуры (20°С), потом приливают 300 мл воды, содержащей незначительное количество гидроксида аммония. Полученный в результате водный слой промывают этилацетатом, затем медленно подкисляют разбав-ленной соляной кислотой для осаждения 15,5 г (57%) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)амино]-2-хлорпириди-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,00 (1Н, с); 9,13 (1Н, с); 7,74 (1Н, с); 1,47 (9Н, с).
5-Амино-2-хлорпиридин-4-карбоновая кисло-та
Суспензию 1,91 г (7 ммолей) 5-[N-(трет.-бутоксикарбонил)-амино]-2-хлорпиридин--карбоновой кислоты в 200 мл метиленхлорида медленно обрабатывают трифторуксусной кисло-той до гомогенности (примерно 12 мл). Раствор перемешивают в течение ночи и экстрагируют раз-бавленной соляной кислотой; получают в виде осадка 1,05 г (выход 87%) 5-амино-2-хлорпиридин-4-карбоновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) и: 9,01 (2Н, м); 8,03 (1Н, с); 7,48 (1Н, с).
6-Хлор-3Н-пиридо[3,4-d]пиримидин-4-он
Раствор 8,1 г (4,7 ммоля) 5-амино-2-хлорпиридин-4-карбоновой кислоты в 100мл фор-мамида перемешивают при 140°С в течение 12 часов. Разбавление холодной смеси водой дает в виде осадка 7,3 г (выход 86%) 6-хлор-3Н-пиридо[3,4-d] пиримидин-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,73 (1Н, м); 8,90 (1Н, д, J = 0,7 Гц); 8,23 (1Н, с); 7,97 (1Н, д, J=0,7Гц).
4,6-Дихлорпиридо[3,4-d]пиримидин
Кипятят с обратным холодильником при пе-ремешивании суспензию 1,82 г (10 ммолей) 6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидин-4-она в 10 мл хлоро-киси фосфора до полного растворения [примерно 2 часа и еще дополнительно 30 минут]. Избыток реа-гента удаляют в вакууме, остаток обрабатывают смесью метиленхлорида и охлажденным на льду водным раствором карбоната натрия. Полученный в результате органический слой сушат над сульфа-том натрия и выпаривают; получают с количе-ственным выходом сырой нестабильный 4.6-дихлорпиридо[4.3-с1]пиримидин, который исполь-зуют непосредственно в следующей стадии.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,38 (1Н, д, J = 0,5 Гц); 9,19 (1Н, с); 8,09 (1Н, д, J = 0,5 Гц).
4-(3-Броманилино)-6-хлорпиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь полученного выше сырого дихлорпи-римидина и 3,8 г (22 ммоля) 3-броманилина рас-творяют в 100 мл изопропанола. Прибавляют одну каплю концентрированной соляной кислоты, чтобы вызвать реакцию, а затем кипятят смесь с обратным холодильником в течение 30 минут, охлаждают и разбавляют водой для осаждения 1,26 г (выход 38%) 4-(3-броманилино)-6-хлорпиридо[3,4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,12 (1Н, с); 9,03 (1Н, с); 8,77 (1Н, с); 8,63 (1Н, с); 8,21 (1Н, с); 7,89 (1Н, д, J = 8,1 Гц); 7,43-7,32 (2Н, м).
ПРИМЕР 59
4-(3-Броманилино)-6-метоксипиридо[3,4-d]пиримидин
Обработка 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] при 100°С в автоклаве с помощью метоксида натрия в метаноле дает 4-(3-броманилино)-6-метоксипиридо[3.4-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 9,93 (1Н, с); 8,94 (1Н, с); 8,61 (1Н, с); 8,26 (1Н, шир. с); 7,94 (1Н, шир. д. J= 7,6 Гц); 7,88 (1Н, с); 7,43-7,32 (2Н, м); 4,01 (3Н, с).
ПРИМЕР 60
4-0-Броманилино)-6-метиламинопиридо[3.4-d]пиримидин
Обработка 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] при 100°С в автоклаве с помощью метиламина в этаноле с последующей хроматографией на оксиде алюминия [метилен- хлорид/метанол = 99:1] дает 0,07 г (34%) 4-(3-броманилино)-6-метиламинопиридо[3.4-d] пирими-дина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,69 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 8.41 (1Н, с); 8,21 (1Н, шир. с); 7,93 (1Н, шир. д, J = 7,6 Гц); 7,41-7,28 (2Н, м); 7,06 (1Н, с); 6,82 (1Н, к, J = 5,0 Гц); 4,95 ОН, д, J = 5,0 Гц).
ПРИМЕР 61
4-0-Броманилино)-6-диметиламинопиридо[3.4-d]пиримидин
Обработка 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина (см. предыдущий эксперимент) при 100°С в автоклаве с помощью диметиламина в этаноле дает 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,71 (1Н, с); 8,83 (1Н, с); 8,43 (1Н, с); 8,21 (1Н, шир. с); 7,94 (1Н, шир. д, J = 7,5 Гц); 7,42-7,29 (2Н, м), 7,26 (1Н, с); 3,17 (6Н, с).
ПРИМЕР 62
4-(Бензиламино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 74 мг (0,41 ммоля) 4-метилтиопиридо[3,4-d]пиримидина [см. предыду-щий зксперимент] и 1 мл бензиламина нагревают 2 часа при 100°С. Охлажденную смесь концентри-руют при пониженном давлении и очищают сразу препаративной ТСХ на силикагеле, элюируя мети-ленхлоридом; получают 21,2 Mr (20%) 4- (бензи-ламино)пиридо[3,4-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,21 (1Н, т, J = 5,8 Гц); 9,19 (1Н, с); 8,63 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 8,58 (1Н, с); 8,20 (1Н, д, J = 5,1 Гц); 7,41-7,30 (4Н, м); 7,26 (1Н, т, J = 7,1 Гц).
ПРИМЕР 63
4-(3-Броманилино)пирило[2,3-d]пиримидин
3Н-Пиридо[2,3-d]пиримидин-4-он
Нагревают 15 г (108,6 ммоля) 2-аминоникотиновой кислоты в 35 мл формамида при 165-170°С в течение 3,5 часов. При охлаждении осаждается твердый продукт. Его отфильтровыва-ют и промывают водой, сушат в вакуумной печи; получают 7,87 г (49,4%) 3Н-пиридо[2,3-d]пиримидин-4-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,50 (1Н, с); 8,97 (1Н, дд, J = 1,9 и 4,5 Гц); 8,53 (1Н, дд, J = 2,1 и 7,9 Гц), 8,34 (1Н, с); 7,57 (1Н, дд, J = 4,6 и 8,0 Гц).
4-Тиопиридо[2,3-d]пиримидин
Прибавляют 6 г (13,5 ммоля) пятисернистого фосфора к раствору 2 г (13,5 ммоля) 3Н-пиридо[2.3-d]пиримидин-4-она в 50 мл пиридина. Смесь кипя-тят с обратным холодильником в течение 3 часов. При охлаждении образуется твердый осадок и пиридин декантируют. Твердый продукт суспенди-руют в 20 мл воды, затем фильтруют и сушат в вакуумной печи; получают 1,72 г (78%) 4- тиопи-ридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,06 (1Н, дд, J = 1,9 и 4,3 Гц); 8,90 (1Н, дд, J = 1,9 и 8,2 Гц); 8,36 (1Н, с); 7,65 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,2 Гц).
4-Метилтиопиридо[2,3-d]пиримидин
Смесь 100 мг (0,76 ммоля) 4-тиопиридо[2.3-d]пиримидина, 154 мг (1,52 ммоля) триэтиламина, 2 мл диметилсульфоксида и 161 мг (1,14 ммоля) под-метана перемешивают 12 часов при 25°С. Смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Объединенные экстракты промывают водой, рас-солом и сушат над сульфатом магния, раствори-тель отгоняют в вакууме; получают 134 мг (коли-чественный выход) 4-метилтиопиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,25 (1Н, дд. J = 1,8 и 4,2 Гц); 9,17 (1Н, с); 8,59 (1Н, дд, J = 1,9 и 8,2 Гц); 7,75 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,2 Гц); 2,73 (3Н, с).
4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидин
Смесь 157 мг (0,89 ммоля) 4-метилтиопиридо[2,3-d]пиримидина и 1 мл 3-броманилина нагревают при 100°С в течение 2 часов. При охлаждении образуется осадок, кото-рый отфильтровывают, затем промывают этанолом и сушат на воздухе; получают 55,5 мг (20%) 4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,13 (1Н, с); 9,11 (1Н, дд, J = 1,7 и 4,3 Гц), 9,01 (1Н, дд, J = 1,7 и 8,2 Гц); 8,81 (1Н, с); 8,22 (1Н, с); 7,90 (1Н, д, J = 7,7 Гц); 7,71 (1Н, дд, J = 4,3 и 8,0 Гц); 7,40 (2Н, м).
ПРИМЕР 64
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин
2,6-Дифторникотиновая кислота
2,6-Дифторпиридин (7,89 мл, 0,087 ммоля) прибавляют по каплям в атмосфере азота при 78°С к перемешиваемому раствору диизопропиламида лития (59,0 мл 1.5н раствора в циклогексане; 0,089 ммоля) в 250 мл ТГФ. После 2 часов при 78°С через раствор пропускают ток сухого углекислого газа, разбавляют смесь водой и промывают этилацета-том. Водную часть нейтрализуют 3н соляной кис-лотой, экстрагируют этилацетатом и обрабатыва-ют, чтобы получить 13,4 г (97%) 2,6-дифторникотиновой кислоты.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,59 (1Н, дд, J = 9,2 и 8,2 Гц); 7,30 (1Н, дд, J = 8,2 и 2,1 Гц); 4,03 (1Н.шир.с).
2,6-Дифторникотинамид
Раствор 7,4 г (0,046 ммоля) 2,6-дифторникотиновой кислоты и 20 мл тионилхлори-да в 60 мл 1,2-дихлорэтана, содержащего 1 каплю диметилформамида, кипятят с обратным холо-дильником в течение 4 часов, затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Растворяют осадок в 100 мл эфира, охлаждают до 0°С и обра-батывают, добавляя по каплям 10,0 мл (0,17 ммоля) концентрированного аммиака. Через 10 минут рас-твор промывают водным раствором бикарбоната натрия и обрабатывают; получают 5,61 r (76%) 2,6-дифторникотинамида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,70 (1Н, дд, J = 9,6 и 8,3 Гц); 7,00 (1Н, ддд, J = 8,3; 2,9;1,1 Гц); 6,71 и 6,55 (1Н, 1Н, 2 шир. с).
2-Амино-6-фторникотинамид
Раствор 4,68 г (0,029 ммоля) 2,6-дифторникотинамида в 30 мл безводного формами-да насыщают аммиаком и оставляют при комнат-ной температуре на 24 часа. Прибавляют 50 мл воды и отфильтровывают полученный осадок, промывают его водой; получают 1,41 г (31%) 6-амино-2-фторникотинамида; т. пл. 236- 237°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,89 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 7,31 и 7,16 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 6,93 (2Н, шир. с); 6,36 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,4 Гц).
Фильтрат и промывные воды объединяют и исчерпывающе экстрагируют этилацетатом; экс-тракт хроматографируют на силикагеле. Смесью этилацетат/петролейный эфир (1:1) элюируют предварительную фракцию, тогда как смесь этила-цетата с петролейным эфиром (2:1) и затем этила-цетат дают 1,57 г (35%) 2-амино-6-фторникотинамида; т. пл. (из смеси этилацетата с петролейным эфиром) 199-200°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,13 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 7,90, 7,30 (1Н, 1Н, 2 шир. с); 7,65 (2Н, шир. с); 6,23 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,6 Гц).
Суспензию 0,74 г (4,77 ммоля) 2-амино-6-фторникотинамида в 25 мл триэтилортоформиата кипятят с обратным холодильником в течение 8 часов. После охлаждения до комнатной темпера-туры отфильтровывают осадок и тщательно про-мывают петролейным эфиром; получают 0,76 г (96%) 7-фторпиридо[2,3-d] пиримид-4(3Н)-она.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,75 (1Н, шир. с); 8,66 (1Н, дд, J = 10,4 и 8,4 Гц); 8,38 (1Н, с); 7,33 (1Н, дд, J = 8,4 и 2,6 Гц).
4-(3-Броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин
Суспензию 0,20 г (1,21 ммоля) 7-фторпиридо[2,3-d]пиримид-4(3Н)-она в 10 мл хло-рокиси фосфора кипятят с обратным холодильни-ком в течение 2 часов. Затем отгоняют летучие компоненты в вакууме, остаток распределяют меж-ду водным раствором бикарбоната натрия и эти-лацетатом. Органический экстракт обрабатывают, получая сырой 4-хлор-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидин, который используют непосредствен-но на следующей стадии. Раствор 0,20 г этого про-дукта (1,09 ммоля) и 0,23 мл (2,18 ммоля) 3-броманилина в 1,0 мл пропан-2-oлa и 10 мл тетра-гидрофурана, содержащий следовые количества концентрированной соляной кислоты, перемеши-вают 1 час при 20°С, затем концентрируют досуха. Остаток растворяют в этилацетате, промывают водным раствором бикарбоната натрия и обраба-тывают; получают масло, которое хроматографи-руют на силикагеле. Элюирование смесью этила-цетат/петролейный эфир (1:5) дает 3- броманилин, тогда как смесь этилацетат/петролейный эфир (1:1) элюирует 0,18 г (47%) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина; т. пл. (из метанола); 211-213°С.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,18 (1Н, шир. с); 9,17 (1Н, т, J = 8,6 Гц); 8,80 (1Н, с); 8,17 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,85 (1Н, дт, J = 7,6 Гц; J = 1,8 Гц); 7,53 (1Н, дд, J = 8,6 и 2,7 Гц); 7,41-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 65
7-Амино-4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидин
Раствор 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина в 20 мл этанола насыщают аммиаком и нагревают при 100°С в автоклаве в течение 30 часов. Отгоняют раствори-тель при пониженном давлении; получают 0,18 г (90%) 7-амино-4-(3-броманилино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,97 (1Н, шир. с); 8,59 (1Н, с); 8,51 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 8,11 (1Н, шир. с); 7,77 (1Н, шир, д, J = 6,3 Гц); 7,44 (2Н, шир. с); 7,37-7,30 (2Н.м); 6,81 (1Н.д, J =9.3 Гц).
ПРИМЕР 66
4-(3-Броманилино)-7-метиламинопиридо[2,3-d]пиримидин
Раствор 0,20 г (0,63 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент], 0,13 г (1,88 ммоля) солянокислого метиламина и 0,30 мл (2,19 ммоля) триэтиламина в 15 мл этанола нагревают при 100°С в автоклаве в течение 18 часов. Растворитель удаляют при по-ниженном давлении, остаток распределяют между этилацетатом и водой. Обработка органического слоя дает 0,16 г (77%) 4-(3-броманилино)-7-(метиламино)пиридо[2,3-d] пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,53 (1Н, с); 8,54 (1Н, с); 8,41 (1Н, д. J = 8,1 Гц); 8,17 (1Н, т, J = 1,8 Гц); 7,83 (1Н, дд, J = 8,0 Гц и 1,9 Гц); 7,66 (1Н, шир. с); 7,32 (1Н, т, J = 8,0 Гц); 7,24 (1Н, дд, J = 8,0 и 1,8 Гц); 6,77 (1Н, д, J = 8,1 Гц); 2,92 ОН, Д, J = 4,8 Гц).
ПРИМЕР 67
4-(3-Броманилино)-7-диметиламинопиридо[2,3-d]пиримидин
При взаимодействии 0,12 г (0,38 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3- d]пиримидина [см. предыдущий эксперимент] с 92 мг (1,13 ммоля) солянокислого диметиламина и 0,18 мл (1,32 ммо-ля) триэтиламина в 15 мл этанола при 100°С в те-чение 18 часов в автоклаве с последующим выпа-риванием растворителя и обработкой получают 0,11 г (84%) 4-(3-броманилино)-7-(диметиламино)пиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,58 (1Н, шир. с); 8,56 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 8,54 (1Н, с); 8,18 (1Н, т, J = 1,9 Гц); 7,84 (дт, Jd = 8,0 Гц; Jt = 1,9 Гц); 7,33 (1Н, дд, J = 8,1 и 8,0 Гц); 7,25 (1Н, дт, Jd = 9,3 Гц, Jt = 1,9 Гц); 7,10 (1Н, д, J = 9,3 Гц); 3,18 (6Н, с).
ПРИМЕР 68
4-(3-Броманилино)-7-метоксипиридо[2.3-d]пиримидин
Раствор 0,26 г (0,81 ммоля) 4-(3-броманилино)-7-фторпиридо[2,3-d]пиримидина и метоксида натрия (приготовленного из 75 Mr натрия, 3,26 ммоля) в 15 мл безводного метанола нагревают при 90°С в автоклаве в течение 18 часов. Смесь выли-вают в воду и экстрагируют этилацетатом; полу-чают 0,23 г (86%) 4-(3- броманилино)-7-метоксипиридо[2,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,88 (1Н, шир. с); 8,82 (1Н, д, J = 8,9 Гц), 8,71 (1Н, с); 8,18 (1Н, дд, J = 8,0 и 1,9 Гц); 7,36 (1Н, дд, J = 8,1 и 8,0 Гц); 7,29 (1Н, ддд, J = 8,1;1,911,9 Гц); 7,15 (1Н, д, J = 8,9 Гц); 4,01 (3Н. с).
ПРИМЕР 69
4-Бензиламино-7-метиламинопиримидо[4,5-d]пиримидин S-Этилизотиуроний-иодид
Раствор 3,80 г (50 ммолей) тиомочевины и 4 мл (50 ммолей) иодэтана в 100 мл метанола кипятят с обратным холодильником в течение 24 часов. От-гоняют растворитель при пониженном давлении и оставшееся светло-желтое масло сушат в вакууме; оно самопроизвольно затвердевает. Целевое со-единение (13,98 г) получают с количественным выходом.
4-Амино-5-циано-2-этилтиопиримидин
Прибавляют суспензию 2,7 г (50 ммолей) ме-токсида натрия в 200 мл этанола к смеси 11,58 г (50 ммолей) 5-этилизотиомочевино-гидроиодида, 6,1 г (50 ммолей) этоксиметилиденмалононитрила и 250 мл этанола при 25°С. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 2 часов, затем концентрируют раствор на горячей плите до тех пор, пока не появится осадок. После охлаждения отфильтровывают твердый про-дукт и перемешивают в воде при 25°С. После филь-трации и сушки в вакуумной печи получают 4,02 г (45%) 4- амино-5-циано-2-этилтиопиримидина в виде коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,45 (1Н, с); 7,90 (2Н, шир. с); 3,00 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,27 (3H, т, J = 7,3 Гц).
4-Амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамид
Прибавляют 4,0 г (22,3 ммоля) 4-амино-5-циано-2-этилтиопиримидина к 4,3 мл концентриро-ванной серной кислоты, маленькими порциями. Затем смесь перемешивают в атмосфере азота при 40°С в течение 1,5 часов. Реакцию прекращают добавлением льда с водой и используют гидроксид аммония для установления pH=9. Твердый продукт собирают фильтрованием и сушат в вакуумной печи в течение ночи. Получают 4-амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамид (2,58 г, 58%) в виде светло-коричневого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,52 (1Н, с); 7,98 (2Н, шир. с); 7,42 (2Н, шир. с); 3,04 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,27 (3Н, т, J = 7,3 Гц).
4-Оксо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4,5-d]пиримидин
Смесь 4,66 г (23,5 ммоля) 4-амино-2-этилтиопиримидин-5-карбоксамида и 150 мл три-этилортоформиата кипятят с обратным холодиль-ником в атмосфере азота в течение 24 часов, затем охлаждают до 25°С. Отфильтровывают коричне-вый твердый продукт и сушат в вакуумной печи; получают 3,54 г (72%) 4-оксо-7- этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,80 (1Н, с); 9,20 (1Н, с); 8,45 (1Н, с); 3,18 (1Н, к, J = 7,4 Гц); 1,35 (3Н, т, J = 7,4 Гц).
4-Тионо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидин
Смесь 1,33 г (6,7 ммоля) 4-оксо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4.5-d]пиримидина, 1,48 г (6,6 ммоля) пятисернистого фосфора и 15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 3 часов. Затем отгоняют пиридин при по-ниженном давлении и растворяют остаток в 75 мл 0,5 М раствора гидроксида натрия и кипятят с ак-тивированным углем. После фильтрации нейтрали-зуют фильтрат уксусной кислотой; образуется золотисто-коричневый твердый продукт. Фильтру-ют на воронке Бюхнера и сушат в вакуумной печи; получают 1,42 г (95%) 4-тионо-7-этилтио-3Н-пиримидо[4,5-в]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,47 (1Н, с); 8,46 (1Н, с); 3,20 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 1,35 (3Н,т, J = 7,3 Гц).
7-Этилтио-4-метилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин
Работают по методике примера 21, описанной для 7-амино-4-метилтиопиридо [4,3-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,52 (1Н, с); 9,15 (1Н, с); 3,23 (2Н, к, J = 7,3 Гц); 2,72 (3Н, т, J = 7,3 Гц).
4-Бензиламино-7-этилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин. Работают по методике примера 21, описанной для 7-аминоd-4-анилинопиридо [4,3-d]пиримидина.
4-Бензиламино-7-метиламинопиримидо[4,5-d]пиримидин
Нагревают 4-бензиламино-7-этилтиопиримидо[4,5-d]пиримидин в этаноле, со-держащем избыток метиламина, при 150°С в стальном автоклаве в течение 5 часов. Отфильтро-вывают твердый продукт и сушат его, получая 4-бензиламино-7-метиламинопиримидо[4.5-d]пиримидин.
ПРИМЕР 70
4-Бензиламино-7-гидразинопиримидо[4,5-d]пиримидин
Нагревают 4-бензиламино-7-этилтиопиримидо[4.5-d]пиримидин в этаноле, со-держащем избыток гидразина, при 150°С в сталь-ном автоклаве в течение 5 часов. Отфильтровыва-ют твердый продукт и сушат его; получают 4-бензиламино-7-гидразинопиримидо[4,5-d]пиримидин.
ПРИМЕР 71
гидрохлорид 4-(3-Броманилино)тиено[3,2-dпиримидина
3Н-Тиено[3,2-d]пиримип-4-он
Смесь 1 г (6,3 ммоля) метил-3-аминотиофен-2-карбоксилата и 2 г формамида нагревают при 240°С в течение 10 минут. При охлаждении обра-зуется осадок. Его растворяют в этаноле и филь-труют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении и очищают остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 10% метанола в метиленхло-риде; получают 249 мг (26%) 3Н-тиено-[3,2-d]пиримид-4- она в виде твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,61 (1Н, шир. с); 8,20 (1Н, с); 8,17 (1Н, д, J = 5 Гц); 7,42 (1Н, д, J = 5 Гц).
4-Хлортиено[3,2-d]пиримидин
К раствору 170,3 мкл (2,2 ммоля) диметил-формамида и 1,2 мл дихлорэтана при 0°С в атмо-сфере азота медленно и при перемешивании в тече-ние 10 минут прибавляют 279,2 мг (3,2 ммоля) ок-салилхлорида. Прибавляют 152,2 мг (1,0 ммоль) 3Н-тиено[3.2-d]пиримид-4-она и кипятят с обрат-ным холодильником в течение 5 часов. Реакцион-ную смесь выливают в воду и экстрагируют мети-ленхлоридом. Органический слой разгоняют при пониженном давлении, получают 140 мг (82%) 4-хлортиено[3,2-d]пиримидина в виде желтого твер-дого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,05 (1Н, с); 8,62 (1Н, д, J = 5 Гц); 7,79 (1Н, д, J = 5 Гц).
4-(3-Броманилино)тиено[3,2-d]пиримидин-гидрохлорид
Смесь 135 мг (0,79 ммоля) 4-хлортиено[3,2-d]пиримидина и 95 мкл (0,89 ммоля) 3-броманилина в 2 мл 2-метоксиэтанола нагревают при 79°С в течение 30 минут. Отфильтровывают образовавшийся осадок и промывают метиленхло-ридом; получают 195,5 мг (72%) гидрохлорида 4-(3-броманилино)тиено[3,2-d]пиримидина в виде светло-желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,33 (1Н, с); 8,94 (1Н, с); 8,23 (1Н, с); 8,53 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 8,07 (1Н, с); 7,77 (1Н, д, J = 7,9 Гц); 7,6 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 7,48 (3Н, м).
ПРИМЕР 72
4-Бензиламинотиено[3,2-d]пиримидин
По методике предыдущего эксперимента, из 100 мг (0,586 ммоля) 4-хлортиено [3,2-d]пиримидина и 710 мкл (0,645 ммоля) бензилами-на в 2 мл 2-метоксиэтанола получают 37 мг (26%) 4-бензиламинотиено[3,2-d]пиримидина.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 8,42 (1Н, с); 8,12 (1Н, д, J = 5,5 Гц); 7,39 (1Н, д, J = 5,3 Гц); 7,40-7,30 (4Н, м); 7,24 (1Н, т, J = 6,8 Гц).
ПРИМЕР 73
4-(3-Броманилино)тиено[2.3-d]пиримидин
Метил-2-аминотиофен-3-карбоксилат
Смесь 3,25 г (32,3 ммоля) метилцианоацетата, 5 г (32,8 ммоля) 1.4-дитиан-2.5- диола, 1 мл (7,71 ммоля) триэтиламина в 50 мл этанола перемеши-вают при 40°С в течение 1 часа. Охлажденный раствор элюируют через слой двуокиси кремния метиленхлоридом. Фильтрат выпаривают досуха; получают сырой метил-2-аминотиофен-3-карбоксилат, который используют в следующей стадии.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 7,26 (1Н, с); 6,82 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 6,28 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 3,69 (3Н, с).
3Н-Тиено[2,3-d]пиримид-4-он
Нагревают раствор 602,1 мг (3,83 ммоля) ме-тил-2-аминотиофен-3-карбоксилата в 5 мл форма-мида при 200°С в течение 12 часов. Полученную в результате смолу растворяют в 10 мл метиленхло-рида, затем помещают на слой двуокиси кремния и элюируют 10% метанола в метиленхлориде. Филь-трат выпаривают при пониженном давлении и по-лученный твердый продукт промывают этанолом; получают 231,4 мг (40%) 3Н-тиено[2.3-d]пиримид-4-она в виде оранжевого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 12,50 (1Н, шир. с); 7,60 (1Н, д, J = 5,8 Гц); 7,41 (1Н, д, = 6,0 Гц).
4-Хлортиено[2.3-d]пиримидин
К раствору 90 мкл диметилформамида и 2 мл метиленхлорида при 0°С в атмосфере азота мед-ленно прибавляют 148 мг (1,2 ммоля) оксалилхло-рида и перемешивают 10 минут. К раствору при-бавляют 81 Mr (0,52 ммоля) 3Н-тиено[2.3- d]пиримид-4-она в виде твердого продукта и нагре-вают струей теплого воздуха до тех пор, пока твердый продукт не растворится. Реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 12 часов в атмосфере азота. Затем выливают ее в воду и экс-трагируют метиленхлоридом. Разделяют фазы и сушат органический слой над сульфатом натрия, отгоняют растворитель при пониженном давлении, получая 87,6 мг 97%) 4-хлортиено[2.3-d]пиримидина в виде твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) 5: 8,96 (1Н, с); 8,17 (1Н, д, J = 6,0 Гц); 7,62 (1Н, д, J = 6,0 Гц).
4-(3-Броманилино)тиено[2,3-d]пиримидин-гидрохлорид
Смесь 135 мг (0,79 ммоля) 4-хлортиено[2,3-d]пиримидина и 95 мкл (0,89 ммоля) 3-броманилина в 2 мл 2-метоксиэтанола нагревают при 79°С в течение 30 минут при перемешивании. Отфильтровывают полученный твердый продукт и промывают метиленхлоридом; получают 197 мг (73%) 4-(3-броманилино)тиено [2,3-d]пиримидин-гидрохлорида.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,99 (1H, с); 8,60 (1H, с); 8,23 (1H, с); 7,98 (1H, д, J = 6,0 Гц); 7,88 (1H, д, J = 8,0 Гц); 7,79 (1H, д, J = 6,0 Гц), 7,37 (1H, т, J = 8,0 Гц); 7,30 (1Н, д, J = 8,0 Гц).
ПРИМЕР 74
4-Бензиламинопирроло[2,3-d]пиримидин
4-Бензиламинопирроло[2,3-d]пиримидин изве-стен из Chem. Abstr. 1962, 57, 15130с.
ПРИМЕР 75
N6-(3-Бромфенил)аденин
Смесь 1,0 г (6,47 ммоля) 6-хлорпурина, 0,78 мл (7,12 ммоля) 3-броманилина и 4- х капель концен-трированной соляной кислоты в 10 мл изопропано-ла перемешивают при 80°С в течение 5 часов. При охлаждении образуется осадок. Твердый продукт отфильтровывают, промывают изопропанолом и сушат на воздухе; получают 1,93 г (91%) N6-(3-бромфенил)аденина в виде светло-желтого твердо-го продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 11,38 (1Н, с); 8,75 (1Н, с); 7,90 (1Н, д, J = 8,0 Гц); 7,38-7,34 (2Н, м).
ПРИМЕР 76
N6-Бензиладенин
N6-Бензиладенин является коммерческим про-дуктом фирмы Олдрич Кемикал Компани, 1001, West Saint Paul Avenue, Milwaukee, Wisconsin 53233.
ПРИМЕР 77
7-Амино-4-(3-метиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 217 мг (1,13 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 1,50 г (14.0 ммоля) м-толуидина перемешивают при 155°С в течение 30 минут. Полученный продукт хромато-графируют на силикагеле [5% метано-ла/метиленхлорид]; получают 190 Mr (67%) 7-амино-4-(3-метиланилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде светло-желтого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 9,81 (1Н, шир. с); 9,34 (1Н, с); 8,38 (1Н, с); 7,60 (2Н, с); 7,26 (1Н, дд, J = 8,5 Гц, 7,6 Гц); 6,95 (1Н, д, J = 7,4 Гц); 6,63 (2Н, с); 2,33 (3Н, с).
ПРИМЕР 78
7-Амино-4-(4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидин
Смесь 129 мг (0,62 ммоля) 7-амино-4-метилтиопиридо[4.3-d]пиримидина и 0,15 г (1,2 ммоля) 4-метоксианилина в 5 мл этанола нагрева-ют при 40°С в течение 16 часов, затем кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. Реак-ционную смесь охлаждают при 0°С в течение ночи, собирают твердый продукт фильтрацией в вакууме и перекристаллизовывают из изопропанола; полу-чают 42 мг (25%) 7-амино-4-(4-метоксианилино)пиридо[4,3-d]пиримидина в виде желтого твердого продукта.
1Н-ЯМР (диметилсульфоксид) : 10,00 (1Н, шир. с); 9,31 (1Н, с); 8,35 (1Н, с); 7,62 (2Н, д, J = 9,2 Гц); 6,96 (2Н, д, J = 9,2 Гц); 6,70 (2Н, шир. с); 6.41 (1Н, с); 3,77 (3Н, с).
ПРИМЕР 79
4-(3-Броманилино)-6-(пиперидин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин
При обработке 4-(3-броманилино)-6-фторпиридо[3,4-d]пиримидина (см. предыдущий эксперимент) при 100°С в автоклаве с помощью пиперидина в этаноле получают 4-(3-броманилино)-6-диметиламинопиридо[3,4-d]пиримидин.
Предлагаемые способы ингибирования тиро-зинкиназы рецептора эпидермального фактора роста иллюстируются следующими опытами.
Биологические опыты
Материалы и методы
Очистка тирозинкиназы рецептора эпи-дермального фактора роста (далее "рецептор EGF")
Тирозинкиназу рецептора человеческого EGF изолируют из клеток А431 человеческой эпи-дермальной карциномы, которые сверхэкспресси-руют рецептор EGF по обычным методикам. Клет-ки выращивают во вращающихся колбах в пита-тельной среде из 50% среды Дельбукко, модифици-рованной Иглам, и 50% среды НАМ F-12 (Гибко), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки. Примерно 109 клеток лизируют в двух объемах буфера, содержащего 20 мм (4N- [2-гидроксиэтил]пиперазин-1-ил)-этансульфоновой кислоты (Гепес), рН = 7,4, 5 мм этиленгликоль-бис-12-аминоэтиловый простой эфир]-N, N, N', N' - тет-раукусной кислоты (ЭГТК), 1% Тритона Х-100, 10% глицерина, 0,1 мM ортованадата натрия, 5мМ фторида натрия, 4мМ пирофосфата, 4мМ бензами-да, 1мM дитиореитола, 80 мкг/мл апротинина, 40 мкг/мл лейпептина и 1 мм фенилметилсульфонил-фторида. После центрифугирования при 25000 g в течение 10 минут, супернатант (надосадочную жидкость) уравновешивают в течение 2-х часов при 4°С с 10 мл сефарозы агглютинина зародышей пшеницы, которая была предварительно уравно-вешена с раствором, содержащем 50мМ Гепес, 10% глицерина, 0,1% Тритона X-100 и 150 мм хлорида натрия, рН = 7,5 (уравновешивающий буфер). За-грязняющие протеины вымывают из смолы с помо-щью 1 М раствора хлорида натрия в уравновеши-вающем буфере, и фермент элюируют 0,5 М рас-твором N-ацетил-1-0-глюкоз амина в уравновеши-вающем буфере, затем 1 мм раствором мочевины. Фермент элюируют с помощью раствора 0,1 мг/мл EGF. Рецептор по-видимому гомогенный по оценке на полиакриламидных электрофоретических гелях, окрашенных Кумасси-голубым.
Определение концентрации ингибирования (ИK50): анализы ферментов для определения ИК50 проводят в общем объеме 0,1 мл, содержащем 25 мМ Гепес, рН = 7, 4, 5 мМ хлорида магния, 2м, М хлорида марганца, 50 мкМ ванадата натрия, 5-10 нг тирозинкиназы рецептора EGF, 200 мкМ пептида в качестве субстрата, (Ac-Lys-His-Lys-Lys-Leu-Ala-er-Ala-Tyr472Glu-Glu-Val-NH2), происходящего от аминокислоты (было показано, что Туг472 является одним из четырех тирозинов в PLC (фосфолипаза С)-гамма-1, который фосфорилируется тирозинки-назой рецептора EGF [Wahl М.I., Nishibe S., Кип J.W., Rhee S.G., Carpenter G., J. Biol. Chem. (1990), 265, 3944-3948], и пептиды, происходящие из по-следовательности фермента, окружающего этот участок, являются отличными субстратами для фермента), 10 мкМ АТФ, содержащих 1 мкйю [32Р] АТФ, и инкубируют в течение 10 минут при ком-натной температуре. Реакцию заканчивают добав-лением 2 мл 75 мм фосфорной кислоты и пропус-кают через фильтровальный диск диаметром 2,5 см из фосфоцелюлозы для связывания пептида. Фильтр промывают пять раз 75 мМ фосфорной кислотой и помешают в пробирку вместе с 5 мл сцинтиллирующей жидкости (Роди-гель, Бекман).
Таблица 1
Ингиибирование тирозинкиназы рецептора EGF
Соединение примера № ИК50
1 8 мкМ
2 3.6 мкМ
3 1.1 мкМ
4 225 нМ
5 1.9 мкМ
6 7.6 нМ
7 3.1 нМ
8 9.6 нМ
9 405 нМ
10 6.1 мкМ
11 194 нМ
12 13 нМ
13 250 нМ
14 70 нМ
15 134 нМ
16 3.7 мкМ
17 1.55 мкМ
18 173 нМ
19 1.8 мкМ
20 4.9 мкМ
21 1.25 мкМ
22 39 нМ
23 840 нМ
24 123 нМ
25 377 нМ
26 241 нМ
27 10 нМ
28 94 нМ
29 262 нМ
30 10 мкМ
31 15 нМ
32 4.7 мкМ
33 130 пМ
34 91 пМ
35 3.1 нМ
36 29 нМ
37 39 нМ
38 71 нМ
39 590 нМ
40 578 нМ
41 220 нМ
42 226 нМ
43 10 мкМ
44 10 мкМ
45 2.87 мкМ
46 1.42 мкМ
47 1.67 мкМ
48 1.0 мкМ
49 2.5 мкМ
50 10 мкМ
51 1.95 мкМ
Продолжение таблицы
52 8 мкМ
53 1.8 мкМ
54 100 нМ
55 400 нМ
56 110 нМ
57 124 нМ
58 40 нМ
59 2.6 нМ
60 8 пМ
61 6 пМ
62 6.1 мкМ
63 6.1 мкМ
64 11 нМ
65 5.1 мкМ
66 190 нМ
67 6.1 мкМ
68 263 нМ
69 7.0 мкМ
70 473 нМ
71 11 нМ
72 35 нМ
73 36 нМ
74 11.5 мкМ
75 55 нМ
76 10 мкМ
77 670 нМ
78 6.7 нМ
Клетки
Фибробласты мыши Swiss 3Т3, клетки А431 человеческой эпидермальной карциномы и MCF-7 [клетки карциномы человеческой молочной железы из Мичиганского ракового фонда], SK-BR-3 [клетки карциномы человеческой молочной железы], MDA-MB-231- и MDA-MB-468- [клетки карциномы чело-веческой молочной железы] клетки карциномы груди были получены из Коллекции культур аме-риканского типа, Роквилл, Мериленд, и поддержи-вались в виде монослоев в dMEM [среде Дельбукко, модифицированной Иглам] [FI2, 50:50 (Гибко)ВКЦ, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки. Для получения кондиционированной среды, MDA-MB-231 -клетки выращивают до слияния во вра-щающихся колбах емкостью 850 см3 и заменяют среду на 50 мл среды, не содержащей сыворотки. Через 3 дня кондиционированную среду удаляют, замораживают аликвотными порциями и исполь-зуют как источник герегулина для стимуляции еebВ-2, 3, 4.
Антитела
Моноклональные антитела, выведенные к PDGF [фактор роста целевого тромбоцита] рецеп-тору или фосфотирозину, были получены из Upstate Biotechnology, Inc., Lake Placid, NY. Анти-рр39jun [антитело к c-jun фактору транскрипции, который представляет собой фосфопротеин вели-чиной 39 кДальтон] и антитела рецептора анти-EGF были получены из Oncogene Science, Uniondale, NY.
Иммуноосаждение и Вестерн-блоттинг
Клетки выращивают до 100% слияния в чаш-ках Петри диаметром 100мм (Корцинг). После об-работки клеток в течение 5 минут с помощью или EGF [эпидермальный фактор роста], PDGF, или bFGF [основной фактор роста фибробластов] [20 нг/мл] или 1 мл кондиционированной среды от клеток MDA-MB-231, среду удаляют и монослой соскабливают в 1 мл охлажденного льдом лизиру-ющего буфера [50 мм Гепес, рН = 7,5, 150 мм хло-рида натрия, 10% глицерина, 1% Тритона Х-100, 1 мM ЭДТК (этилендиаминтетрауксусная кислота), 1 мм ЭГТК, 10 мм пирофосфата натрия, 30 мм п-нитрофенилфосфата, 1 мм ортованадата, 50 мм фторида натрия, 1 мм фенилметилсульфонилфто-рида, 10 мкг/мл апротинина и 10 мкг/мл лейпепти-на]. Лизат переносят в микроцентрифужную про-бирку [маленькая центрифуга, у которой имеются пластиковые центрифужные пробирки емкостью 1-2 мл], помешают на 15 минут на лед и 5 минут цен-трифу- гируют при 10000 g. Супернатант переносят в чистую микроцентрифужную пробирку и добав-ляют к этим образцам 5 мкг антитела. Пробирки центрифугируют в течение 2 часов при 4°С, после чего прибавляют 25 мкл протеин-А-сефарозы и продолжают центрифугирование еще по крайней мере 2 часа. Протеин-А-сефарозу промывают 5 раз с помощью раствора, содержащего 50 мм Гепеса, рН 7,5, 150 мм хлорида натрия, 10% глицерина и 0,2% азида натрия. Осадки ресуспендируют в 30 мкл буфера Леммли (Laemmli, Nature, т.727, стр. 680-685,1970), нагревают при 100° в течение 5 минут и центрифугируют для получения суперна-танта. Полный клеточный экстракт получают при соскабливании клеток, выросших на стенках пла-стин с шестьюячейками, в 0,2 мл кипящего буфера Леммли. Экстракт переносят в микроцентрифуж-ную пробирку и в течение 5 минут нагревают при 100. Весь супернатант от иммуноосаждения или 35 мкл цельного клеточного экстракта наносят на полиакриламидный гель (4-20%) и проводят элек-трофорез по методу Леммли (Laemmli, 1970). Про-теины в геле электрофоретически переносят на нитроцеллюлозу, и мембрану промывают один раз раствором, содержащим 10 мм Трис-буфера, рН 7,2, 150 мм хлорида натрия, 0,01% Азида (буфер, называемый далее ТНА) и блокируют в течение ночи в ТНА, содержащем 5% бычьего сывороточ-ного альбумина и 1% яичного альбумина (блоки-рующий буфер). Мембрану подвергают блоттингу в течение 2 часов с первичным антителом [1 мкг/мл в блокирующем буфере], а затем промывают по-следова- тельно 2 раза с помощью ТНА, ТНА, со-держащего 0,05% Твин-20 и 0,05% Нонидет П-40 [коммерчески доступный детергент], и ТНА. Затем мембраны инкубируют в течение 2 часов в блоки-рующем буфере, содержащем 0,1 мкКю/мл [125]протеина-А и снова промывают, как указано выше. После сушки блотов их вносят в кассету с пленкой и экспонируют рентгеновскую пленку X-AR в течение 1-7 дней. Протеин А является бакте-риальным протеином, который специфически свя-зывает некоторые lgG подтипы, и полезен при свя-зывании и выделении комплексов антитело-антиген.
Нозерн-блоттинг
Всю клеточную РНК изолируют из необрабо-танного контроля или обработаных Swiss 3Т3 кле-ток, используя RNAzol-B [торговое название Те1 Test Inc. для набора, используемого для изоляции РНК из тканей] и следуют рекомендациям, приве-денным производителем. Загружают в 1%-й ага-розный гель 40-50 мкг РНК и проводят электрофо-рез в течение 3-4 часов при напряжении 65 вольт. РНК в геле переносится под действием капилляр-ных сил на нейлоновую мембрану (Гибонд-N, Амерсхам). 40-mer-с-jun-Зонд метят [32Р]АТФ, ис-пользуя Т4 нуклеотидкиназу (Промега), и очищают на колонке с G25 сефадексом, следуя процедуре, рекомендованной производителем, Онкоген Сай-енс. Гибридизацию проводят в течение ночи при 65°С (c-jun является немедленно-ранним фактором транскрипции; он является одним из компонентов АР-1, тогда как FOS является вторым компонентом АР-1).
Митогенез, опосредованный фактором роста
Выращивают фибробласты Swiss 3Т3 до 90-100% слияния на пластинках с 24 ячейками (1,7 х 1,6 см, плоское дно) и задерживают рост в несо-держащей сыворотки среде в течение 18 часов. Лекарство добавляют в определенные ячейки за 2 часа до введения факторов роста, а затем клетки подвергают действию или 20 нг/мл EGF, PDGF или bFGF, или 10% сыворотки в течение 24 часов. До-бавляют 2 мкКю [метил-3P] тимидина в каждую ячейку и инкубируют 2 часа при 37°С. Клетки трипсинизируют и инжектируют в 2 мл охлажден-ной на льду 15%-й трихлоруксусной кислоты. По-лученный в результате осадок собирают на стек-ловолокнистых фильтрах, промывают пять раз по 2 мл аликвотами охлажденной на льду 15%-й три-хлоруксусной кислоты, сушат и помещают в сцин-тилляционную колбу с 10 мл Рeди-геля (Бекман, Ирвин, СА). Определяют радиоактивность с помо-щью сцинтилляционного счетчика Бекмана ЛС 6800.
Анализ ингибирования роста
Клетки (2 х 104) высевают в пластины с 24 ячейками (1,7 х 1,6 см, плоское дно) в 2 мл среды с добавками или без них различных концентраций лекарства. Пластины инкубируют 3 дня при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% углекисло-го газа в воздухе. Рост клеток определяют подсче-том клеток с помощью электронного счетчика кле-ток Культер Модель AM [Культер Электроник, Инк.]. Результаты по ингибированию вызванного EGF аутофосфорилирования в клетках А431 эпи-дермальной карциномы и аутофосфорилирования, вызванного кондиционированной средой, в клетках опухоли груди SKBR-3 соединениями настоящего изобретения сведены в таблице 2.
Таблица 2
Соединение примера № EGFR; ИК50 нМ А 431; ИК50 нМ SKBR-3; ИК50 нМ
4 225 >1000 >10,000
6 7.6 53 2660
7 3.1 20 100
8 9.6 32 71
22 39 252 -1500
27 10 110 -800
59 2.6 12 <10
60 0.008 13 >1000
61 0.006 21 39
70 11 124 <10
74 55 >1000 >1000
Противопролиферативные свойства ингибито-ров тирозинкиназы [ИК50 (нМ)] сведены в таблице 3
Таблица 3
Cоединение при-мера 60 Соединение при-мера 61
BI04-1-1 2100 1000
SK-BR-3 600 900
MDA-468 3000 12000
BI04-1-1 = NIH-3Т3 фибропласты, зараженные neu-онкогеном, Stem. et. al., Science, 234, стр. 321-324 (1987);
SK-BR-3 = Человеческая карцинома груди, сверх-экспрессирующая еrbВ-2 и erbB-3;
MDA-468 = Человеческая карцинома груди, сверх-экспрессирующая EGF рецептор.
Вышеуказанные гели, более детально описан-ные в экспериментальной части, демонстрируют эффективность соединений настоящего изобрете-ния при блокировании некоторых EGF-стимулированных митогенных сигнальных пре-вращений в целых клетках. Числа слева от гелей указывают положения стандартов молекулярной массы в килоДальтонах. Полоска меченого кон-троля показывает степень экспрессии относящегося к росту сигнала в отсутствие EGF стимуляции, то-гда как полоска меченого EGF [или PDGF или b-FGF) показывает величину стимулированного фак-тором роста сигнала. Другие полоски показывают влияние установленных количеств названного ле-карства на стимулированную фактором роста ак-тивность, измерение которой показывает, что со-единения настоящего изобретения обладают мощ-ным действием на целые клетки, согласованным с их способностью ингибировать тирозинкиназную активность рецептор EGF.
Гель с соединением примера 40 детектирует мРНКдля c-jun путем гибридизации со специфиче-ским радиомеченым РНК зондом для c-jun. Гель показывает, что EGF, PDGF и b-FGF факторы роста стимулируют продуцирование c-jun в клетках Swiss ЗТЗ и что соединение примера 40 блокирует это продуцирование EGF- стимулированными клетка-ми, но не PDGF или b-FGF стимулированными клет-ками.
Влияние соединения примера 40 на экспрес-сию р39c-jun, опосредованную фактором роста
Этот гель показывает количество индуциро-ванных c-jun в Swiss 3Т3 клеток под действием фак-тора роста EGF, PDGF и b-FGF, путем определения с помощью анти-с-jun-специфического монокло-нального антитела. Он показывает способность соединения примера 40 блокировать с-jun-экспрессию в Swiss 3Т3 при стимуляции EGF, но не при стимуляции PDGF или b-FGF.
Следует учитывать, что соединения согласно изобретению могут быть использованы в сочетании с другими компонентами для усиления их активно-сти. Такими дополнительными компонентами яв-ляются антинеопластические материалы, на- при-мер, доксорубицин, таксол, циспластин и т.п.
Было обнаружено, что соедиения согласно изобретению могут ингибировать как Erb-b2, так и Erb-b4 рецепторы и, следовательно, обладают су-щественно высокой клинической активностью, целесообразной для сочетания с вышеупомянуты-ми анти-непластическими агентами.
Для иллюстрации вышеописанных биологиче-ских опытов представляются еще рис. 1 - 17, по которым даются следующие пояснения.
На рис. 1 показано влияние соединений при-меров 6 и 7 на рецептор EGF ауто- фосфорилиро-вания при А431 человеческой эпидермальной кар-циноме;
На рис.2 представлено влияние соединения примера 8 на рецептор аутофосфорилирования при А431 человеческой эпидермальной карциноме;
На рис.3 показано время ингибирования ре-цептора EGF аутофосфорилирования при А431 соединением примера 27;
На рис.4 показано влияние соединения приме-ра 27 на рецептор EGF аутофосфорилирования вА431 клетках;
На рис.5 представлено ингибирование рецеп-тора EGF аутофосфорилирования при А431 чело-веческой эпидермальной карциноме соединением примера 40;
На рис.6 представлено влияние соединения примера 40 на фосфорилирование тирозина, опо-средованное фактором роста, в Swiss 313;
На рис.7 представлено влияние соединения примера 40 на зависящую от фактора роста экс-прессию c-jun мРНК в фибробластах мыши Swiss 3Т3;
На рис.8 представлено влияние соединения примера 40 на экспрессию р39c-jun, опосредованную фактором роста;
На рис.9 представлено влияние соединения примера 59 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.10 представлено влияние соединения примера 60 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.11 представлено влияние соединения примера 61 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.12 представлено влияние соединения примера 70 на аутофосфорилирование рецептора EGF при А431 человеческой эпидермальной карци-номе;
На рис.13 представлен график, показывающий ингибирование рецептора EGF тирозинкиназы со-единением примера 27;
На рис.14 представлен график, показывающий влияние соединения примера на митогенез, опосре-дованный фактором роста в фибробластах мыши Swiss 3Т3;
Рис.15 представляет собой фотографию линии фибробластов мыши НIН 3Т3, трансфицированных человеческим EGFR геном, показывающую нор-мально выравненную морфологию;
Рис.16 представляет собой фотографию той же клеточной линии, обработанной 100 нг/мл EGF, показывающую типичную веретенообразную трансформированную морфологию; и
Рис.17 представляет собой фотографию той же клеточной линии в присутствии одновременно 100 нг/мл EGF и 5 мкмоль соединения примера 27, по-казывающую морфологию, возвращенную обратно от трансформированного типа к нормальному ти-пу.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут выпускаться в виде разнооб-разных дозировочных форм для орального или парентерального применения. Дозировочные фор-мы в качестве активных компонентов содержат вышеуказанный ингибитор.
Для получения фармацевтических композиций используют инертные, фармацевтически приемле-мые носители, которые могут быть либо твердыми, либо жидкими. Твердая форма препаратов включа-ет порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, облатки и суппозитории. Твердый носи-тель может представлять собой одно или более веществ, которые также могут действовать как разбавители, вкусовые вещества, солюбилизаторы, придающие скользкость таблеткам агенты, суспен-дирующие агенты, связующие или дезинтеграторы таблеток; твердый носитель также может быть инкапсулирующим материалом. В порошках носи-тель представляет собой тонко измельченное твер-дое вещество, которое смешано с тонко измельчен-ными активными соединениями. В таблетках ак-тивные соединения смешаны с носителем, облада-ющим необходимыми связывающими свойствами, в соответствующих пропорциях, и спрессованы в виде желательной формы и размера. Предпочти-тельно порошки и таблетки содержат от 5% или 10% до примерно 70% активных ингредиентов. Подходящими твердыми носителями являются кар-бонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лакто-за, пектин, декстрин, крахмал, желатина, трага-кант, метилцеллюлоза, натриевая соль карбокси-метилцеллюлозы, низкоплавкие воски, масло какао, и т.п. Термин “препарат” означает совокупность активных соединений с инкапсулирующими мате-риалами в качестве носителя, обеспечивающими образование капсулы, в которой активные компо-ненты (с другими носителями или без них) окруже-ны носителем, находясь таким образом в ассоциа-ции с ним. То же самое относится к облаткам. Таб-летки, порошки, облатки и капсулы могут быть использованы как твердые дозировочные формы, пригодные для орального введения.
Жидкая форма препаратов включает раство-ры, суспензии и эмульсии. В качестве примера можно указать водные растворы или растворы на основе воды с пропиленгликолем для парентераль-ной инъекции. Жидкие препараты могут также находиться в виде раствора в водном растворе полиэтиленгликоля. Водные растворы, пригодные для орального применения, можно приготовлять путем растворения активного компонента в воде с добавлением подходящих красителей, вкусовых веществ, стабилизаторов и, если желательно, загу-щающих агентов. Водные суспензии, пригодные для орального применения, могут быть получены путем диспергирования тонко измельченных ак-тивных компонентов в воде вместе с вязким мате-риалом, например, природными или синтетически-ми смолами, камедью, метилцеллюлозой, натрие-вой солью карбоксиметилцеллюлозы и другими хорошо известными суспендирующими агентами.
Предпочтительно, фармацевтический препа-рат представляет собой форму единичной дозы. В такой форме препарат может быть разделен на единичные дозы, содержащие соответствующие количества ингибитора или других противорако-вых соединений, индивидуально или в сочетании, например, в смеси. Форма единичной дозы может находится в упаковке, причем упаковка содержит отдельные количества препарата, например, таб-летки, капсулы и порошки, упакованные во флако-ны или ампулы. Форма единичной дозы также мо-жет быть капсулой, облаткой или таблеткой или она может представлять собой соответствующее количество любых из них в упаковке. Кроме того, форма единичной дозы может быть разделенной формой, содержащей в одной части ингибитор, а в другой части - другие противораковые вещества, такой, как, например, разделенная капсула, разде-ленная упаковка или двухкамерная ампула, флакон и т.п.
Количество ингибитора в единичных дозах препарата можно изменять или регулировать при-мерно от 0,01 мг/кгдо 100,0 мг/кг, предпочтительно от 0,03 мг/кгдо менее, чем 1,0 Mr /кг массы тела.
Фармацевтические композиции предпочти-тельно приготовляют так, что их можно вводить парентерально или орально. Растворы активных соединений в виде свободных оснований и свобод-ных кислот или фармацевтически приемлемых солей, могут быть приготовлены в воде, смешанной с подходящим поверхостно- активным агентом, таким, как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также могут быть приготовлены в глицерине, жид-ких полиэтиленгликолях и их смесях или в маслах. При обычных условиях хранения и использования эти препараты содержат консервант для предот-вращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические формы, пригодные для инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приго-товления стерильных растворов или дисперсий для инъекций в момент употребления. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы она могла легко проходить через шприц. Она должна быть ста-бильной в условиях производства и хранения и должна быть предохранена от вредного воздей-ствия микроорганизмов, таких, как бактерии и гри-бы. Носитель может представлять собой раствори-тель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль, и т.п.), их соответствующие смеси, и растительные масла. Соответствующую текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого, как лецитин, пу-тем соблюдения требуемого размера частиц в слу-чае дисперсии и путем использования поверхостно- активных агентов. Предотвращение действия мик-роорганизмов можно осуществлять с помощью различных антибактериальных и противогрибко-вых агентов, например, как парагены, хлорбута-нол, фенол, сорбиновая кислота, тимеросаль, и т.п. Во многих случаях предпочтительно включать изотонические агенты, например, сахара или хло-рид натрия. Пролонгированная абсорбация компо-зиций для инъекций обеспечивается агентами, за-медляющими абсорбацию, например, желатиной.
Стерильные растворы для инъекций готовят путем введения активных соединений в требую-щемся количестве в соответствующий раствори-тель с различными другими ингредиентами, пере-численными выше, по потребности, с последующей стерилизацией путем фильтрования. Обычно дис-персии готовят путем введения различных стерили-зованных активных ингредиентов в стерильный эксципиент, который содержит основную диспер-гирующую среду и необходимые другие ингреди-енты, выбираемые из перечисленных выше. В слу-чае стерильных порошков для приготовления сте-рильных растворов для инъекций, предпочтитель-ными способами получения являются вакуумная сушка и сушка вымораживанием, которые обеспе-чивают получение порошка активных ингредиен-тов плюс дополнительный требуемый ингредиент из их предварительно стерильно профильтрованно-го раствора. Используемое здесь понятие "фарма-цевтически приемлемый носитель" включает любой и все растворители, дисперсионные среды, покры-тия, антибактериальные и противогрибковые аген-ты, изотонические и замедляющие абсорбацию агенты, и т.п. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо из-вестно специалистам в данной области техники. За исключением случаев несовместимости сред или агентов с активным ингредиентом, является воз-можным применение любых обычных сред или агентов в терапевтических композициях. Дополни-тельные активные ингредиенты также могут быть включены в композиции.
Особенно предпочтительно приготовлять па-рентеральные композиции в форме единичной дозы для облегчения введения и однородности дозиро-вания. Термин "форма единичной дозы", использу-емый здесь, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз для подвергаемых лечению млекопитающих; каж-дая единица содержит заранее определенное коли-чество активных материалов, рассчитанное для достижения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требующимся фармацевтическим носителем. Состав новых форм единичных доз согласно изобретению обусловлен и непосред-ственно зависит от (а) индивидуальных характери-стик активных веществ и конкретно ожидаемого терапевтического эффекта, и (б) от ограничения, свойственного технологии смешивания таких ак-тивных веществ, для лечения пациентов, страдаю-щих вышеуказанными заболеваниями.
Основные активные ингредиенты смешивают для удобного и эффективного введения в эффектив-ных количествах с фармацевтически пригодным носителем в форме единичной дозы, как описано выше. Форма единичной дозы для парентерального введения может, например, содержать основное активное соединение, например, ингибитор, в коли-чествах примерно от 0,5 до примерно 100 мг, пред-почтительно в пределах 0,1-50 мг. Суточные дозы для парентерального введения млекопитающим находятся в пределах от 0,01 мг/кг до 10 мг/кг мас-сы тела. Предпочтительная суточная доза состав-ляет 0,1-1 мг/кг.
Для оральных доз, суточное количество может находиться в пределах от 0,01 мг активного соеди-нения /кг массы тела млекопитающего до 100 мг/кг, предпочтительно 0,1-10 мг/кг массы тела.
Соединения согласно изобренению могут об-разовывать хорошо известные фармацевтически приемлемые соли, такие, как соли щелочных ме-таллов и другие обычные основные соли или соли присоединения кислот, и т.п. Указания на основные вещества, следовательно, означают включение этих общеизвестых солей, практически эквива-лентных родственному соединению и его гидратам.
Далее, соединения согласно изобретению, способны образовывать фармацевтически прием-лемые соли присоединения как кислот, так и/или соли присоединения оснований. Все эти формы входят в рамки настоящего изобретения. Фарма-цевтически приемлемые соли присоединения кис-лот активных соединений включают соли, произ-водимые от нетоксичных неорганических кислот, таких, как соляная кислота, азотная кислота, фос-форная кислота, серная кислота, бромоводородная кислота, иодоводородная кислота, фтороводород-ная кислота, фосфоновая кислота и т.п., а также соли, производимые от нетоксичных органических кислот, таких, как алифатические моно- и дикарбо-новые кислоты, фенилз вмещенные алкановые кис-лоты, гидроксиалкановые кислоты, алкандиовые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты, и т.п. Такие соли, следовательно, включают сульфат, пиро-сульфат. бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, бромид, иодид, ацетат, трифторацетат, пропионат, каприлат, изобутират, оксалат, малонат, сукцинат, соль пробковой кислоты, себацинат, фумарат, ма-леат, соль миндальной кислоты, бензоат, хлорбен-зоат, метилбензоат, динитробензоат, фталат, бен-золсульфонат, толуолсульфонат, фенилацетат, Нитрат, лактат, тартрат, метансульфонат, и т.п. Также пригодными являются соли аминокислот, такие, как аргинат и т.п. и глюконат, галактуронат (см., например, Berge S.M. и др., "Pharmaceutical Salts" Journal of Phar- maceutical Science, 66, с. 1-19,1977).
Соли присоединения кислот вышеуказанных основных соединений получают путем контакти-рования формы свободного основания с достаточ-ным количеством желательной кислоты, получая соль обычным образом. Предпочтительно активное соединение можно превращать в кислую соль пу-тем обработки раствором желательной кислоты так, чтобы результирующее значение рН было ниже 4. Раствор можно пропускать через колонку с С\s-фазой, чтобы абсорбировать соединение, про-мывать обильным количеством воды, элюировать соединение полярным органическим растворите-лем, таким, как, например, метанол, ацетонитрил, и т.п., и выделять путем концентрирования при по-ниженном давлении с последующей лиофилизаци-ей. Форма свободного основания может быть реге-нерирована путем введения солевой формы в кон-такт с основанием и выделения свободного основа-ния обычным образом. Формы свободных основа-ний отчасти отличаются от их соответствующих солевых форм некоторыми физическими свойства-ми, такими, как растворимость в полярных раство-рителях, однако в других отношениях, для целей настоящего изобретения, соли эквивалентны соот-ветствующим им свободным основаниям.
Фармацевтически приемлемые соли присо-единения оснований представляют собой соли металлов или аминов, таких, как щелочные и ще-лочноземельные металлы и органические амины. Примерами металлов, используемых в качестве катионов, являются натрий, калий, магний, кальций и т.п. Примерами пригодных аминов являются N.N-дибензилэтилендиамин, этилендиамин, N-метилглюкамин и прокаин (см., например, Berge S.M. и др., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66, с. 1-19,1977).
Основные соли присоединения вышеуказан-ных кислых соединений получают путем введения в контакт свободной кислотной формы с достаточ-ным количеством желательного основания с полу-чением соли обычным образом. Предпочтительно, активное соединение может быть превращено в основную соль путем обработки водным раствором желательного основания, так, чтобы результирую-щее значение рН было выше 9. Раствор можно про-пускать через колонку с C|8-фазой, чтобы абсорби-ровать соединение, промывать обильным количе-ством воды, элюировать соединение полярным органическим растворителем, таким, как, напри-мер, метанол, ацетонитрил и т.п., и выделять путем концентрирования при пониженном давлении с последующей лиофилизацией. Свободная кислот-ная форма может быть регенерирована путем кон-тактирования солевой формы с кислотой и выделе-ния свободной кислоты обычным образом. Сво-бодные кислотные формы отчасти отличаются от их соответствующей солевой формы некоторыми физическими свойствами, такими, как раствори-мость в полярных растворителях, однако в других отношениях, для целей настоящего изобретения, соли являются эквивалентными соответствующим им свободным кислотам.
Некоторые из соединений настоящего изобре-тения могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратированные формы. Обычно сольва-тированные формы, включая гидратированные формы, являются эквивалентными несольватиро-ванным формам и, следовательно, входят в рамки настоящего изобретения.
Некоторые из соединений настоящего изобре-тения содержат один или несколько хиральных центров и такой центр может существовать в R(D)- или S(L)- конфигурации. Настоящее изобретение включает все энантиомерные и эпимерные формы, а также их соответствующие смеси.
Предлагаемые фармацевтические композиции иллюстрируются следующими примерами.
Пример 80
Таблетки следующего состава:
60 мг активного вещества, например, целевого продукта примера 1,
45 мг крахмала,
35 мг микрокристаллической целлюлозы,
4 мг поливинилпирролидона в виде 10%-ного раствора в воде,
4,5 мг натриевой соли карбоксиметилового крахмала,
0,5 мг стеарата магния,
1,0 мг талька
приготовляют следующим образом.
Активное вещество, крахмал и целлюлозу пропускают через сито с размером отверстий 45 меш, после чего тщательно перемешивают. Полу-чаемый порошок смешивают с раствором поливи-нилпирролидона, и получаемую смесь пропускают через сито с размером отверстий 14 меш. Получае-мые гранулы сушат при 50 - 60°С, после чего про-пускают через сито с размером отверстий 18 меш и смешивают со смесью натриевой соли карбоксиме-тилового крахмала, стеарата магния и талька, предварительно пропущенной через сито с разме-ром отверстий 60 меш. Получаемую смесь перера-батывают в таблетки весом 150 мг.
Пример 81
Парентеральный препарат состава:
100 мг активного вещества, например, целево-го продукта примера 17,
250 мл 0,9 %-ного водного хлористого натрия приготовляют путем интенсивного перемешивания. рН препарата: 7,0.
Пример 82
Инъекционный раствор состава
20,0 г активного вещества, например, целевого продукта примера 28,
700 мл пропиленгликоля,
200 мл воды для инъекций
смешивают, стерилизуют, наполняют в ампулы емкостью 50 мл, которые герметично закрывают в атмосфере азота.
(56) Документы, цитированные в отчёте
SU 1493109 A, 07.07.1989.
WO 92/20642 A1, 26.11.1992.
EP 0414386 A1, 27.02.1996.
EP 0520722 A1, 30.12.1992.
EP 0566226 A1, 25.11.1993.
EP 0496617 A1, 29.12.1992.
DE 3824669 A, 25.11.1990
WO 92/20642 A1, 26.11.1992.
EP 0414386 A1, 27.02.1996.
EP 0520722 A1, 30.12.1992.
EP 0566226 A1, 25.11.1993.
EP 0496617 A1, 29.12.1992.
DE 3824669 A, 25.11.1990
📎 Прикреплённые файлы
-
381.pdf⬇ Скачать